实验性肺癌中蛋白激酶C的表达及意义

[目的]建立肺癌动物模型基础上研究蛋白激酶C(PKC)α在肺鳞癌组织中表达,探讨其在肺鳞癌发生发展中的可能作用.[方法]用肺叶支气管内灌注致癌物碘油溶液诱发大白鼠肺癌的方法建立大鼠肺鳞癌模型,以免疫组化方法研究PKCα在肿瘤组织、肿瘤周围组织及正常组织的表达.[结果]诱发的肺部肿瘤均为肺鳞癌,诱癌率达77.8%;肺鳞癌组织中PKCα表达明显增高,在诱癌组对侧肺组织表达也明显高于正常肺组织,分别为(24.08±2.93)%,(5.00±2.10)%,(1.96±0.29)%,差异有显著性(P＜0.05).[结论]肺癌组织中PKCα的异常高表达提示致癌剂可能通过活化PKCα介导的多个环节的信号转导而参与了肺鳞癌的发生、发展.     

甘油二酯激酶α、蛋白激酶C在肝癌组织中的表达及临床意义

 目的 研究肝癌组织中甘油二酯激酶α (Diacylglycerol Kinase α, DGKα)和蛋白激酶C（PKC）的表达及临床意义。方法 应用免疫组化检测DGKα在60例肝癌、癌周组织及10例正常肝组织中的表达,统计分析DGKα的表达与临床病理因素的关系。 结果 DGKα和PKC蛋白在正常肝组织、癌周组织和肝癌组织的阳性表达率逐渐降低,但在肝细胞的表达部位却逐渐从胞浆移至胞膜。DGKα阳性表达率的差异与原发性肝癌的分化类型、是否有门静脉癌栓和TNM分期有统计学意义(P <0.05)。结论 在越晚期、分化越差的肝癌中DGKα的活性越强,DGKα促进了原发性肝癌的病理进程。     

肝癌中蛋白激酶CK2α亚基的克隆及其功能初步研究

目的 克隆肝癌中CK2α基因，并研究其功能。方法 通过逆转录PCR从肝癌组织中获得CK2α亚基基因编码区cDNA。将NdeI／BamHI双酶切PCR产物连接到同样双酶切并经牛小肠碱性磷酸酶去磷酸化的表达载体pT7—7进行定向克隆。转化感受态大肠杆菌DH5获得转化子，琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子，将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选4个阳性克隆进行DNA测序，将序列完全正确的重组质粒转化表达菌BL21(DE3)，挑单克隆小量培养，IPTG诱导表达，Western blot鉴定。结果 转化子的阳性筛选率为l00％，限制性酶分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符。DNA正反向测序结果表明：从4个阳性克隆中筛选到1个PCR过程不产生突变的重组质粒，并将其质粒命名为pTMCKA。重组质粒转化表达菌经TPTG诱导后出现一个分子量42Kdα蛋白过度表达，Westen blot结果证明过度表达产物能与抗人CK2α亚基抗体发生特异性免疫反应。结论 蛋白激酶CK2α亚基在肝癌中表达，并产生一定的功能。     

蛋白激酶C及其抑制物在肺癌中的活性表达及临床意义

目的　对肺癌及相应的肺癌旁组织标本中蛋白激酶C(PKC)及其抑制物 (PKCI)的活性表达规律进行对照研究。方法　收集 2 6例肺癌及癌旁组织标本 ,通过检测同位素放射来测定标本胞浆和胞膜中PKC的比活性和PKCI对PKC活性抑制百分数。结果　 2 6例肺癌组织细胞胞浆中PKC比活性显著高于癌旁组织 (P <0 .0 1) ;而非小细胞癌胸膜中PCK比活性明显低于癌旁组织 (P <0 .0 5 ) ,小细胞癌胞膜中PKC比活性与癌旁组织无明显差异 (P <0 ,0 5 )。另外 ,2 6例肺癌组织胞浆中PKCI的抑制活性明显低于癌旁组织 (P <0 .0 5 ) ,而胞膜中PKCI的抑制活性则与癌旁组织无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　肺癌组织中PKC被激活而活性增高 ,同时PKCI表达降低说明其对PKC的调控能力下降 ,以上表明PKC和PKCI可能在肺癌的发生及发展中起重要作用。     

大鼠实验性肝癌发生过程中整联蛋白表达的变化

目的研究３′ＭｅＤＡＢ诱发大鼠肝癌过程中整联蛋白的表达变化。方法利用免疫组织化学ＰＡＰ方法检测整联蛋白α１、α２、α３、α５的表达。结果正常大鼠肝细胞表达α１、α５;肝硬化时,肝细胞α１,α５表达增强外,还表达α２、α３,增生胆管细胞表达α１、α５;在癌前期增生结节及癌时,整联蛋白α１、α２、α３、α５都明显表达减弱;肺脏、膈肌等转移灶整联蛋白表达与原发灶相比,α１、α５表达增强。结论整联蛋白α１、α５的表达变化与肿瘤发生及浸润转移有密切关系。     

肝癌发生中RTN4C基因突变研究

为研究肝癌发生过程中RTN4C基因突变，利用直接序列分析、PCR—SSCP等研究了肝癌(HCC)中RTN4C突变与杂合性缺失(LOH)。HCC中，RTN4CP突变为62．9％，LOH为68．4％。90％LOH的肝癌中RTN4C发生突变。RTN4C突变相关的肝癌发生中LOH起重要作用。     

蛋白激酶C同工酶在乳腺癌中表达的研究

目的观察蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）同工酶PKC-α、PKC-ι在乳腺癌组织中的表达状况,探讨癌细胞信息传递的分子生物学机制.方法应用半定量RT-PCR检测31例乳腺癌组织与12例癌旁正常乳腺组织中PKC-α、PKC-ι mRNA的表达;应用Western blot检测以上组织中PKC -α、PKC-ι蛋白表达.结果乳腺癌组织PKC-α mRNA与蛋白表达均高于癌旁正常乳腺组织（P〈0.01）;乳腺癌组织PKC-ι mRNA及蛋白表达与癌旁正常乳腺组织比较差异均无显著性（P〉0.05）.结论乳腺癌组织细胞增殖可能与PKC-α同工酶过表达所介导的信号转导有关,与PKC-ι同工酶无明显关系.     

蛋白激酶C与结肠直肠癌发生的相关性初探

检测３１例结直肠癌临床术后标本的癌、癌周及相邻正常粘膜组织蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性，结果显示：正常粘膜、癌周及癌组织细胞质、细胞膜ＰＫＣ比活性和总活性依次降低，癌周及癌组织细胞膜／细胞质比率较正常粘膜组织显著增高，表明结直肠癌ＰＫＣ处于激活状态，且呈下降调节，另外，癌组织细胞膜比率（细胞膜／正常粘膜）与肿瘤大小呈负相关，高分化结直肠癌细胞膜比率较低分化显著增高，由此可见，ＰＫＣ活性在结直肠癌发生过     

TEC酪氨酸蛋白激酶在肝癌组织中高表达并参与肝癌耐药

目的 研究TEC酪氨酸蛋白激酶在肝癌组织中的表达及其与肝癌耐药之间的关系,为肝癌临床治疗提供线索。方法 Real-time PCR、Western blot及免疫组织化学法检测癌旁、肝癌组织及肝癌细胞系中TEC mRNA、TEC蛋白表达水平;狭线杂交法检测肝癌组织中TEC mRNA表达水平;MTT检测细胞存活率。构建TEC真核表达载体,经脂质体介导法转染肝癌细胞;RNA干扰技术敲低肝癌细胞中TEC。免疫共沉淀技术检测TEC磷酸化活化水平。结果 18例肝癌组织中,TEC mRNA和蛋白水平显著高于癌旁组织（P<0.001）;48例肝癌组织中,TEC高表达组对化疗药物的耐受能力明显高于TEC低表达组;上调TEC表达水平后,HepG2细胞对化疗药物的耐受性增加;用化疗药物处理肝癌细胞株HepG2,其TEC表达水平增加,并伴随有ERK磷酸化水平升高。 结论 TEC在肝癌组织中的高表达促进了肝癌的耐药,且可能与ERK磷酸化水平升高有关。     

喉癌与蛋白激酶C及其抑制物的关系

为了探讨喉癌与蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）及其抑制物（ＰＫＣＩ）的关系。应用Ｔａｋａｉ蛋白浓度梯度，通过同位素放射性活性测定ＰＫＣ活性及测定ＰＫＣＩ对ＰＫＣ活性抑制的百分数。结果为癌组织胞浆中ＰＫＣ比活性（６６３±０６４ｐｍｏｌ·ｍｇ－１·ｍｉｎ－１）显著高于正常组织胞浆中ＰＫＣ比活性（４．７３±０．５４ｐｍｏｌ·ｍｇ－１·ｍｉｎ－１），癌组织胞浆中ＰＫＣ抑制活性（３３．６％±７．６４％）显著低于正常组织胞浆中ＰＫＣＩ抑制活性（６１．３％±７．９１％）。结果提示癌组织中ＰＫＣ活性升高很可能是被癌基因激活，而ＰＫＣＩ活性降低导致对ＰＫＣ调控能力下降     

实验性肝癌的组织发生

原发性肝癌的组织发生目前尚未明确。比较实验性和人类肝癌的代谢变化及发生方式,有许多相似的地方。本综述旨在通过对癌前期病变的研究,探讨肝癌组织发生的几种可能性。 一、肝细胞与肝癌的组织发生 (一)肝细胞的中毒反应及癌前期细胞对致癌物毒性效应的抵抗和增生。 Haddow A最早提出,细胞对致癌物敏感性的改变是恶性转化的一个重要因素,认为细胞增殖的抑制是致癌物的早期效应,对这种抑制的反应是形     

卵圆细胞在实验性肝癌发生过程中的演变特征

背景与目的:卵圆细胞在肝癌发生过程中的作用至今还不十分明了.本研究拟通过动态的方法观察卵圆细胞在肝癌发生过程中的演变规律,揭示卵圆细胞与肝癌发生之间的关系.方法:构建实验性肝癌的大鼠诱癌模型,运用常规HE染色、免疫组织化学和爱新蓝特殊染色等方法,动态观察卵圆细胞在肝癌发生过程中的演变规律.结果:HE和免疫组化结果显示,在诱癌的第4周即可见散在的卵圆细胞在门管区附近出现.卵圆细胞OV-6免疫染色呈阳性.在诱癌的第8周和第14周,OV-6阳性细胞逐渐增多,并向肝小叶实质内深入,将肝组织分割成假小叶状.到诱癌的第17周和第24周,多个癌灶出现,同时OV-6阳性细胞的总体数量下降,癌灶内可观察到OV-6阳性细胞.爱新蓝特殊染色显示,诱发的肿瘤属混合性肝癌,其中胆管上皮细胞癌爱新蓝染色呈阳性,肝细胞癌染色呈阴性.结论:卵圆细胞在肝癌的发生过程中可能扮演重要的角色.     

蛋白激酶C亚型在胃癌中的表达及其意义

目的:研究蛋白激酶C的四种亚型(PKCα、PKCβⅡ、PKCε、PKCζ)在胃癌中的表达及其对胃癌发生发展的影响。方法:采用免疫组织化学方法(S-P法)检测PKCα、PKCβⅡ、PKCε、PKCζ在胃癌中的表达情况,分析其在不同病理类型、不同分化程度和原发灶与转移灶之间的相关性及意义。结果:(1)PKCα在胃癌不同组织类型之间表达依次为管状腺癌92.5%,粘液腺癌57.1%,两者之间比较差异有显著性(P<0.05)。(2)PKCβⅡ在胃癌不同组织类型之间表达依次为管状腺癌82.5%,粘液腺癌64.2%,两者比较差异有显著性(P<0.05)。在有淋巴结转移的胃癌中,淋巴结转移灶中PKCβⅡ的阳性率为77.8%,低于原发灶96.0%的阳性表达率,两者之间比较差异有显著性(P<0.05)。(3)PKCε、PKCζ在胃癌不同组织类型之间及淋巴结转移灶与原发灶之间的表达差异无显著性。结论:PKCβⅡ可能在胃癌的浸润、转移中起重要作用;PKCα、PKCβⅡ表达与肿瘤细胞的类型和组织来源不同有关。     

大鼠实验性肝癌发生过程中存活素基因表达的动态观察

目的动态观察大鼠实验性肝细胞肝癌(HCC)不同发生发展阶段中存活素(survivin)基因的表达状态。方法采用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测大鼠HCC不同时期survivin的表达。结果黄曲霉毒素(AFB1)诱发大鼠HCC形成的最早时间在第46周,46周后,实验组存活的大鼠HCC发生率为54.9%(28/51),58周存活的大鼠HCC发生率为64.9%(24/37)。实验组HCC、癌旁肝组织survivin蛋白阳性率分别为41.7%和54.2%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。而相应的大鼠,在46周之前及无肿瘤形成的大鼠和正常对照组无survivin蛋白表达。58周时,大鼠HCC中survivin mRNA的表达水平明显高于同期无肿瘤形成大鼠和正常对照肝组织(P均<0.01);相应癌旁肝组织亦明显高于同期无肿瘤形成大鼠和对照肝组织(P均<0.01);HCC与癌前活检肝组织比较,差异有统计学意义(P<0.01)。12、20、36和46周时,有肿瘤形成大鼠活检肝组织与正常对照组大鼠同期活检肝组织比较,survivin mRNA表达差异均有统计学意义(P均< 0.01)。结论survivin基因在HCC组织中高表达,提示该基因对HCC的发生发展起重要作用,检测HCC组织中survivin基因的表达,可能对HCC诊断有参考价值。     

肝癌细胞中Connexin32蛋白可调控表达亚克隆的建立

目的:利用Tet-off基因表达体系建立人间隙连接蛋白Connexin32基因可调控表达的肝癌细胞系,为探讨Connexin32蛋白表达与肝癌细胞的增殖、运动和侵袭能力的相关性奠定基础.方法:利用基因重组方法建立人Connexin32 cDNA的逆病毒表达载体pRevTRE-Cx32;利用逆病毒感染法将Connexin32表达载体和调控质粒pRevTet-off转入人肝癌细胞系HuH7中,筛选出稳定整合了两种载体的细胞克隆;western-blot法检测Connexin32蛋白表达的诱导率.结果:建立了可以通过向细胞培养液中添加或去除Doxycycline调控Connexin32蛋白表达的肝癌细胞HuH7亚克隆,western-blot结果显示当从细胞培养液中去除Doxycycline后,Connexin32表达明显升高,呈现4倍左右的诱导率.结论:成功建立了Connexin32蛋白可诱导表达的肝癌细胞HuH7 Tet-off Cx32亚克隆.     

肝癌细胞中Connexin32蛋白可调控表达亚克隆的建立

目的：利用Tet—off基因表达体系建立人间隙连接蛋白Connexin32基因可调控表达的肝癌细胞系，为探讨Connexin32蛋白表达与肝癌细胞的增殖、运动和侵袭能力的相关性奠定基础。方法：利用基因重组方法建立人Connexin32cDNA的逆病毒表达载体pRevTRE-Cx32；利用逆病毒感染法将Connexin32表达载体和调控质粒pRevTet—off转入人肝癌细胞系HuH7中，筛选出稳定整合了两种载体的细胞克隆；western—blot法检测Connexin32蛋白表达的诱导率。结果：建立了可以通过向细胞培养液中添加或去除Doxycycline调控Connexin32蛋白表达的肝癌细胞HuH7亚克隆，western-blot结果显示当从细胞培养液中去除Doxycycline后，Connexin32表达明显升高，呈现4倍左右的诱导率。结论：成功建立了Connexin32蛋白可诱导表达的肝癌细胞HuH7 Tet—off Cx32亚克隆。     

EGFR-STAT3信号通路在大鼠实验性肝癌发生中的作用

背景与目的：许多研究表明，EGFR-STAT3信号传导通路参与肿瘤的形成。本璇验目的在于探讨EG-FR-STAT3信号通路在大鼠实验性肝癌发生中的作用。方法：3’-甲基4-二甲基偶氮苯（3’Me-DAB）诱发大鼠肝癌，免疫组化法检测EGFR、TGFa、STAT3、p-STAT3在诱癌各阶段的表达，分别用蛋白印记方法检测TGFa、STAT3、P-STAT3，原位杂交法检测STAT3在肝癌及正常肝组织中的表达，进行图像定量分析。结果：EGFR、TGFα、STA33在肝细胞坏死和修复期表达有升高趋势。EGFR、TGFα、STAT3、p-STAT3在肝癌中100％表达，与正常组织比较，肝癌中EGFR、TGF仪表达明显升高（P〈0．05）。肝癌中STAT3在mRNA、蛋白水平的表达都较正常肝组织明显升高（P〈0．05）。且其活化形式（p-STAT3）也显苦增高（P〈0．05）。肝癌中TGFα、p-STAT3表达具有相关性。结论：EG-FR-STA33信号转导通路参与大鼠肝癌的发生，高表达的TGFα可激活EGFR信号转导通路形成自分泌环，并导致STA33的持续活化。     

蛋白激酶C与肿瘤的多药耐药性

蛋白激酶C是一种Ca~(2+)、磷脂依赖性蛋白激酶,目前已发现有10个亚型,它是细胞内信号传递的重要介质,具有多种功能。近年发现在某些多药耐药细胞中其活性增加,而且当用蛋白激酶激活剂或抑制剂时,耐药性被进一步增加或逆转;此外用耐药基因转染敏感细胞时出现耐药性,用反义技术抑制蛋白激酶C表达时耐药性被逆转,说明蛋白激酶C确与多药耐药有关,而且表现出组织特异性。蛋白激酶C可能是通过磷酸化耐药基因编码的膜糖蛋白而发挥作用。     

蛋白激酶C抑制剂CJ9111抑制小鼠黑色素瘤B16细胞粘附和实验性转移

体外培养小鼠黑色素瘤Ｂ１６细胞，用不同剂量的ＣＪ９１１１分别作用不同时间，将处理后的细胞经尾静脉注入Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内，结果显示ＣＪ９１１１对Ｂ１６小鼠黑色素瘤细胞肺结节转移的抑制具有剂量和时间依赖性。药物作用２４小时对肺转移抑制作用的半数抑制浓度为８μｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０１），该值近似于ＣＪ９１１１对Ｂ１６细胞膜结合ＰＫＣ活力抑制作用的半数抑制浓度（ＩＣ５０６．３μｇ／ｍｌＰ＜０．０１）。药物作用后的Ｂ１６细胞与血管内皮细胞的粘附力下降，呈剂量依赖性。这表明ＰＫＣ可能是调节肿瘤细胞的转移重要因素，ＰＫＣ抑制剂有可能成为抗肿瘤转移的药物。     

实验性肝癌雄激素受体表达的病理意义

目的探讨肝癌癌变过程中雄激素受体(AR)表达的动态变化和病理意义.方法以二甲氨基偶氮苯(3′-Me-DAB)建立大鼠诱发性肝癌模型,将60只雄鼠分为2组诱癌组(n=35),以3′-Me-DAB诱癌,对照组(n=25),以精制大米喂服.放射配基结合技术检测各实验期大鼠肝脏AR的定量表达.结果诱癌组大鼠肝重/体重比值在第4、5个月时大幅度上升(P＜0.05).诱癌组雄激素受体定量以癌变启动期(第1个月)和成癌期(第5个月)最高,第2个月最低,细胞核AR分别为(56.28±9.48),(59.49±4.42)和(33.52±3.24)fmol/mg蛋白质.对照组大鼠的生理性AR表达与年龄依赖的性活动能力一致.诱发癌瘤受体定量以肝细胞型肝癌最高(P＜0.05),且癌瘤组织高于癌周组织(P＜0.05).结论实验性肝癌癌变特定阶段雄激素受体表达活跃,提示其可能有介导雄激素的促肝细胞异常增殖作用.