糖尿病模型大鼠海马区星形胶质细胞活化与凋亡的观察

目的:探讨糖尿病高血糖状态对于大鼠海马星形胶质细胞的影响。方法:应用链脲佐菌素(STZ)诱导Ⅰ型糖尿病SD大鼠模型,分为糖尿病模型1、2、3、4周和5周组(DM1,DM2,DM3,DM4,DM5),同周龄SD大鼠作为对照组。采用免疫荧光、免疫组化和Western Blot等技术,对比观察糖尿病大鼠海马区星形胶质细胞的形态、caspase-3和GFAP的表达情况。结果:免疫荧光和免疫组化检测结果显示:DM1和DM2大鼠海马区星形胶质细胞的胞体增大,突起增粗;DM3和DM4大鼠海马内星形胶质细胞的突起增粗、变长,其数量明显多于正常对照组(P0.05);而DM5大鼠海马内星形胶质细胞的突起僵硬,细胞数量有所减少,但仍高于正常对照组(P0.05)。Western Blot结果显示:DM3,DM4,DM5大鼠海马区GFAP含量明显高于对照组和DM1,DM2(P0.05)。caspase-3/GFAP免疫组化双标结果显示:DM1和DM2大鼠海马区偶见caspase-3阳性标记的星形胶质细胞;而DM3,DM4,DM5大鼠海马区caspase-3/GFAP双标细胞数明显多于正常对照组(P0.05);其中DM5双标阳性细胞数明显多于DM3和DM4(P0.05)。结论:糖尿病高血糖早期可激活星形胶质细胞,持续性糖尿病高血糖可诱导海马区星形胶质细胞活化的抑制,并引起星形胶质细胞凋亡。     

大鼠大脑中动脉缺血后海马星形胶质细胞反应的研究

目的:观察大鼠大脑中动脉缺血后皮层损伤侧海马星形胶质细胞反应的变化。方法:采用大鼠大脑中动脉阻塞再灌流模型,应用免疫印迹和免疫组织化学方法测定脑缺血后3 d、7 d以及30 d皮层损伤侧海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达,观察星形胶质细胞增殖的变化。结果: GFAP免疫组化结果显示,脑缺血后7d皮层损伤侧海马CA1、CA2区星形胶质细胞数量较假手术组增加且胞体增大;脑缺血后30 d皮层损伤侧海马CA1、CA2区呈胶质疤痕样改变。同时,免疫印迹法显示脑缺血后7 d皮层损伤侧海马GFAP表达增强;脑缺血后30 d皮层损伤侧海马GFAP表达增高更加明显。此外,免疫印迹法显示脑缺血后3 d皮层损伤侧海马PCNA蛋白表达水平升高;脑缺血后7 d PCNA蛋白表达水平达到峰值;脑缺血后30 d,PCNA蛋白表达水平降低,但仍高于假手术组。结论: 大鼠大脑中动脉缺血后可引起其皮层损伤侧海马星形胶质细胞过度反应和增殖。     

电针对脑梗塞大鼠缺血半影区星形胶质细胞形态的影响

目的： 观察电针对脑梗塞大鼠缺血半影区星形胶质细胞形态学的影响，为探讨针刺治病疗效和机制提供实验依据。方法： 线栓法建立大鼠脑梗塞动物模型，用免疫组织化学方法显示胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫阳性细胞，对比观察电针对模型大鼠脑皮质缺血半影区星形胶质细胞的形态影响。结果： 免疫组织化学方法显示电针对脑梗塞缺血半影区星形胶质细胞的数量、细胞面积比与对照组相比差异无显著意义。结论： 频率5-10 Hz和强度2 mA的电针穴位刺激没有影响缺血半影区内星形胶质细胞的形态,但是对GFAP的表达有上调的影响。     

活化小胶质细胞致星形胶质细胞激活

目的探讨活化小胶质细胞培养液对星形胶质细胞的影响。方法 LPS激活原代培养小胶质细胞,采用活化的小胶质细胞条件培养液刺激星形胶质细胞,观察星形胶质细胞GFAP及IL-1β和TNFα的表达。结果 LPS刺激后,小胶质细胞OX42表达量上升,IL-1β和TNFα的表达量增高;小胶质细胞条件培养液可致星形胶质细胞激活,GFAP表达量上升,IL-1β和TNFα的表达量增加。结论活化小胶质细胞的条件培养液可致星形胶质细胞激活,激活的小胶质细胞和星形胶质细胞表达前炎症介质IL-1β和TNFα。     

脑缺血时的星形胶质细胞反应

星形胶质细胞(Astroglia)是中枢神经系统中数量最多的细胞。具有多方面的功能：构成神经组织的网架而起支持作用；与神经元的解剖位置关系紧密，包围除少；具有抗原呈递作用，参与中枢神经系统的免疫反应；参与构成血脑屏障(Blood-Brain Barrier，BBB)。研究发现。脑缺血时星形胶质细胞异常活跃，通过合成多种蛋白质、细胞因子和神经营养因子等对神经元起保护或毒性作用，对缺血性脑损伤的发展和转归具有重要意义。     

缺血后适应对树鼩海马CA1区脑血流及星形胶质细胞活化的影响及可能机制

目的：研究缺血后适应（PC）对树鼩局部脑缺血海马CA1区脑血流（rCBF）与星形胶质细胞（AS）活化的影响，探讨缺血PC影响AS表达胶质纤维酸蛋白（GFAP)的可能机制。方法：建立树鼩血栓性局部脑缺血及缺血PC模型，通过激光多普勒（LD）血流计测量脑缺血后4 h、8 h、12 h、24 h及72 h海马CA1区rCBF的改变；用免疫组化法测定脑缺血上述时间海马GFAP的表达，并用图像分析系统测定其平均灰度值。于脑缺血后4 h重复3次夹闭缺血侧颈总动脉实施缺血PC，并观察其对海马CA1区rCBF和AS活化以及GFAP表达的影响。结果：树鼩脑缺血后4h海马CA1区GFAP阳性细胞数增多，AS表达GFAP增强，24h可见AS胀亡；72h海马CA1区AS表达GFAP达高峰（120.0±2.1，P＜0.01）。脑缺血时海马CA1区rCBF逐渐降低，以24 h的改变最显著,为(2.55±0.28) PU，P＜0.01；72 h时海马CA1区rCBF略有增加，为(9.84±1.22) PU。实施缺血PC后，海马CA1区rCBF逐渐增加，72 h最显著,为(18.74±1.60) PU，P＜0.01；此时海马GFAP表达进一步增强（111.0±1.3),P＜0.01。但AS胀亡的病理改变基本消失。结论：多次短暂的闭塞动物的颈动脉可延长树鼩脑缺血治疗的“时间窗”；缺血PC的脑保护机制可能与增加海马rCBF、调控AS活化及改善海马微环境有关。     

局灶性脑缺血大鼠脑组织皮质运动区和海马星形胶质细胞的动态变化

目的 观察大鼠局灶性脑缺血后皮质运动区和海马星形胶质细胞的变化。方法 雄性SD大鼠144只,按随机数字法分成正常组、假手术组和手术组,每组48只。手术组用大脑中动脉电凝术(MCAO)建立局灶性脑缺血模型;假手术组的操作步骤和手术组相同,只是不将暴露的大脑中动脉凝闭;正常组不做任何处理。应用免疫组化检测正常组、假手术组以及手术组术后1、2、3、5、7、14、28、56 d皮质运动区和海马星形胶质细胞神经胶质酸性蛋白(GFAP)表达的变化。结果与正常组和假手术组比较,手术组大鼠缺血侧和健侧MCAO术后皮质运动区GFAP阳性细胞计数术后第1天明显降低,第3天开始升高,缺血侧和健侧分别于术后第7天、第5天升至最高(85.6±3.3、75.3±2.9),随后逐渐下降并均在术后第14天出现第2个低谷,其后又开始逐渐上升接近正常。与正常组和假手术组比较,手术组海马CA1区GFAP阳性细胞计数缺血侧和健侧自术后第1天即开始升高,术后第7天升至最高( 106.5±3.6、108.4±3.0),其后进入平台期;CA2区、CA3区缺血侧和健侧术后第3天开始明显升高,CA2区缺血及健侧最高值则分别出现在术后第5天(106.9±4.4)、第7天(107.5±3.8);CA3区为第5天(130.9±3.7)、第5天(129.2±4.0),术后第14天开始下降,但仍然高于正常组和假手术组。结论 大鼠局灶性脑缺血后,不同脑区星形胶质细胞的表达随时间变化的模式不同,在皮质运动区存在两谷一峰的现象,在海马表达逐渐增强,并维持在一个较高的水平,这种差别可能与不同脑区神经的可塑性有关。     

TNFα刺激的星形胶质细胞条件培养液对海马神经元的兴奋作用

目的:探讨肿瘤坏死因子-α刺激的星形胶质细胞对神经元的作用。材料和方法:体外纯化培养大鼠海马星形胶质细胞,采用反相高效液相法测定TNFα刺激后细胞培养液内谷氨酸的含量;将TNFα刺激后的星形胶质细胞条件培养液（Astrocytic Conditioned Medium,ACM）作用于培养的海马神经元,运用免疫细胞化学方法和图像分析技术研究神经元NF-κBp65和谷氨酸的表达。结果:（1）TNFα可明显促进星形胶质细胞释放谷氨酸;（2）ACM作用15min即可诱导神经元NF-κBp65的核表达,30min达高峰,180min恢复至对照水平;（3）ACM作用60min可使谷氨酸免疫反应阳性神经元平均光密度明显升高,持续至240min。结论:TNFα刺激的星形胶质细胞可通过释放谷氨酸等可溶性物质使神经元快速激活、兴奋性升高。     

L-NAME对沙土鼠脑缺血再灌流后海马区星形胶质细胞活化的作用机制研究

目的 探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)对沙土鼠脑缺血再灌注后海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)合成的影响。方法 钳夹沙土鼠的双侧颈总动脉制造脑缺血模型，应用免疫荧光法染色，观察GFAP密度的变化及分布。结果 脑缺血再灌流后海马区GFAP合成增加，GFAP阳性细胞主要分布在放射层及分子层，L-NAME能减少海马区GFAP的合成。结论 L-NAME是NOS强有力的抑制剂，L-NAME可能通过抑制NO的产生抑制了GFAP的合成。     

地塞米松对苯丙胺致小鼠海马CA3区星形胶质细胞激活及结构损伤的影响

目的观察地塞米松对苯丙胺致小鼠海马CA3区星形胶质细胞激活及结构损伤的影响。方法清洁级雄性C57BL/6小鼠随机分对照组、生理盐水组、苯丙胺组和地塞米松+苯丙胺组。用行为学方法观察动物行为,用免疫组织化学和电镜方法对小鼠海马结构星形胶质细胞的形态和亚细胞形态进行观察。结果 1.正常组和生理盐水组小鼠未出现行为活动异常。苯丙胺组和地塞米松+苯丙胺组小鼠与正常对照组小鼠相比出现明显异常行为活动。2.苯丙胺组小鼠海马结构内GFAP免疫阳性细胞的形态与对照组相比,突起变长、增粗和分支增多(P0.05),但细胞的数量无明显增多(P0.05)。地塞米松+苯丙胺组小鼠海马结构内GFAP免疫阳性细胞的形态与苯丙胺组组相比突起变长、增粗和分支增多(P0.05),但细胞的数量相比无增多(P0.05)。3.苯丙胺14d和地塞米松+苯丙胺14d组小鼠海马CA3区超微影像结构示星形胶质细胞增生肥大,线粒体肿胀,髓鞘出现松散分离样变。结论苯丙胺导致小鼠出现神经毒性行为学反应,并导致海马结构星形胶质细胞激活以及细胞和亚细胞结构的损伤;地塞米松没有减轻或抑制苯丙胺致星形胶质细胞的激活和损伤。     

亚低温对短暂脑缺血海马区cGMP的合成影响

目的：观察脑缺血常温线与亚低温组对海马区ｃＧＭＰ合成的影响。方法：钳夹沙土鼠的双侧颈总动脉制造脑缺血模型,应用免疫荧光法染色,观察海马ＣＡ１区ｃＧＭＰ的变化。结果：脑缺血常温组海马本部有许多ｃＧＭＰ强阳性及中等强度细胞,脑缺血亚低温海马本部予性细胞较常温组减少,且ＣＧＭＰ阳性细胞的显色较弱。结论：脑缺血亚低温减少了海马本部ｃＧＭＰ的合成。     

缺血性脑损伤海马神经元磷酸肌醇系统的变化及其机制的探讨

采用四动脉闭塞全脑缺血模型，观察大鼠缺血３０ｍｉｎ再灌注２１ｄ不同时间中，外源性谷氨酸对海马脑片磷脂酰肌醇代谢的影响和偶联该系统的Ｇ蛋白功能变化。。结果显示，Ｇｌｕ对正常和缺血再灌注海马脑片肌醇磷酸生成均具有明显的促进作用，其中以缺血再灌注后ＩＰ的升高为显著。     

Neural grafting to ischemic lesions of the adult rat hippocampus

Summary The purpose of this study was to examine the structural and connective integration of developing hippocampal neurons grafted to ischemic lesions of the adult rat hippocampus. The 4-vessel occlusion model was used to cause transient cerebral ischemia which damages CA1 pyramidal cells in the dorsal hippocampus, but spares nonpyramidal neurons and afferents in the area. One week later, cell suspensions were made from the CA1 region of fetal (E18-20) rats and injected stereotaxically into the lesion. The recipient brains were examined 6 weeks to 6 months later for survival, morphology, and intrinsic and extrinsic connections of the grafts. The methods used included cell stains, histochemical staining for acetylcholinesterease (AChE), immunocytochemical staining for neuropeptides (cholelecystokinin (CCK), somatostatin (SS), enkephalin (Enk) and an astrocytic marker, glial fibrillary acidic protein (GFAP), as well as tracing by retrograde axonal transport of fluorochromes and light and electron microscopy of anterograde axonal degeneration. The grafts survived well (80%) and were often quite large. They were well integrated in the lesioned host brain area, contained both pyramidal cells and neuropeptidergic neurons and displayed a near normal GFAP immunoreactivity for astrocytes. The latter contrasted the dense gliosis of the host ischemic lesion. Judged by the AChE staining the grafts were innervated by cholinergic host septohippocampal fibers. Ingrowth of host hippocampal commissural fibers was demonstrated by Fink-Heimer staining for degenerating nerve terminals following acute lesions of the hippocampal commissures. At the ultrastructural level degenerating, electron dense terminals of host commissural origin were found even deep inside the graft neuropil in synaptic contact with mainly dendritic spines. A transplant efferent connection to the host brain was demonstrated by retrograde fluorochrome tracing and consisted of a homotypic projection to more posterior levels of the ipsilateral host CA1 and subiculum. Minor abnormal, efferent projections to the host dentate molecular layer were shown in Timm staining. We conclude that fetal CA1 neurons grafted to one week old ischemic lesions of the dorsal CA1 in adult rats become structurally well incorporated and can establish nerve connections with the host brain.     

钙离子对沙土鼠海马区cGMP作用的研究

目的：探讨脑缺血再灌流后钙离子对沙土鼠海马区cGMP合成的影响。方法：钳夹沙土鼠的双侧颈总动脉复制脑缺血模型，应用免疫荧光法染色，以便观察cGMP浓度的变化及分布。结果：实验组海马区分布着许多cGMP强阳性细胞，主要分布于CA₁区放射层及腔隙分子层。对照组海马区分布着一些中等强度的cGMP阳性细胞，cGMP阳性细胞分布同实验组。结论：钙离子与cGMP的合成有关。     

磷酸二酯酶抑制剂IBMX对海马区cGMP合成的影响

目的：探讨伊菠丁基甲基黄嘌呤对海马区环磷酸鸟苷(cGMP)合成的影响。 方法： 嵌夹沙土鼠的双侧颈总动脉复制的脑缺血模型，应用免疫荧光组织化学染色方法。 结果： 脑缺血再灌注后，海马区cGMP合成增加。使用磷酸二酯酶（PDE）抑制剂IBMX, cGMP合成增加，cGMP阳性细胞主要分布于海马本部放射层及腔隙分子层。cGMP阳性细胞的数量与IBMX的剂量有关。 结论： 伊菠丁基甲基黄嘌呤增加cGMP的合成。     

实验性缺血大鼠的海马病理损害和磁共振波谱的对照研究

目的:应用磁共振波谱(MRS)观察大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌流后海马迟发性神经元死亡和伴随的反应性星形胶质细胞增生,为评价血管性认知功能损害提供无创性观察指标。方法:W istar大鼠16只MCAO 1 h后再灌流及假手术对照组10只,6周后分别进行MRS和病理学对比观察,根据海马的形态、细胞密度变化及免疫组化结果分析磁共振波谱中N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、胆碱复合物(Cho)、肌酸和磷酸肌酸(Cr PCr)、肌醇(m I)的对应性改变。结果:MCAO再灌流组大鼠缺血同侧海马的NAA、Cr及NAA/Cr的比值显著低于对侧和对照组,平均为2.05±0.33、2.42±0.41和0.86±0.10(对侧3.45±0.58、3.10±0.93、1.18±0.32,对照组3.42±0.43、3.57±0.47、0.98±0.14),m I和m I/Cr在缺血同侧海马(1.47、1.30)明显高于对照组(0.15、0.15)。结论:通过磁共振波谱的NAA和m I可以同时显示MCAO再灌流后海马的迟发性神经元死亡及伴随的反应性星形胶质细胞增生。但神经元的丢失程度与NAA存在不完全对应性,这种变化可能与反应性星形胶质细胞增生密切相关。     

脑缺血时海马细胞外液中兴奋性氨基酸的变化

近几年脑内微量透析技术在国外已广泛应用于研究脑细胞间隙液中神经递质的变化，国内尚未见方面的报道。本文用此技术，观察大鼠在不同程度缺血情况下，海马细胞外液中兴奋性氨基酸（ＥＡＡ）（谷氨酸Ｇｌｕ，天门冬氨酸Ａｓｐ）的变化。用０．３ｍｍ直径的透析管横穿大鼠双侧海马，随后用人工脑脊液以１μｇ／ｍｉｎ的速度灌注。脑缺血模型用电解式氢清除法测定脑血流的变化。短暂性不完全性脑缺血，Ｇｌｕ和Ａｓｐ分别升高到８．９