反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞的抑制作用

目的:探讨反义bcl-2寡核苷酸(bcl-2 ASODN)对半乳糖诱导的兔晶体上皮细胞(LEC)生长的影响. 方法:人工合成与bcl-2基因翻译起始区序列互补的寡核苷酸,用半乳糖和反义寡核苷酸处理培养的晶体上皮细胞,应用细胞计数法和MTT法观察反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞增殖的影响. 结果:2.5～10.0 μmol/L反义bcl-2寡核苷酸能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞的增殖,10.0 μmol/L时作用较显著. 结论:反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的白内障晶体上皮细胞的生长增殖有抑制作用.     

脂质体介导Bcl-2反义脱氧寡核苷酸对人卵巢癌细胞作用的研究

目的 探讨bcl-2反义脱氧寡核苷酸体外转染卵巢癌细胞后,对癌细胞bcl-2基因表达调控作用、诱导其凋亡的作用以及对顺铂敏感性的影响.方法 体外培养顺铂耐药的人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3,以阳离子脂质体为载体,将bcl-2反义脱氧寡核苷酸片断作用于CAOV3细胞.应用逆转录聚合酶链反应(BT-PCR)技术检测bcl-2基因的表达;流式细胞仪(FACS)检测转染后CAOV3细胞调亡的变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色试验检测转染后CAOV3细胞对顺铂敏感性的影响.结果 脂质体介导的bcl-2反义脱氧寡核苷酸作用于CAOV3细胞后,bcl-2基因mRNA 表达水平显著低于对照组(P<0.01),并可诱导卵巢癌细胞凋亡,增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性.结论 脂质体介导的bcl-2反义脱氧寡核苷酸作用于CAOV3细胞,可下调bcl-2基因的表达,诱导卵巢癌细胞凋亡,并增强CAOV3细胞对顺铂的敏感性.     

bcl-2反义寡核苷酸增强NCI-H460细胞对紫杉特尔和放射线的敏感性

目的:研究bcl-2反义寡核苷酸作用于非小细胞肺癌细胞株NCI-H460后,细胞对紫杉特尔、放射线敏感性的变化.方法:紫杉特尔与bcl-2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸联合作用NCI-H460细胞后,MTT法测紫杉特尔半数抑制率(IC50);NCI-H460经bcl-2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸作用后,再用放射线照射,MTT法测定细胞生长抑制率;免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平.结果:靶向bcl-2 mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸与紫杉特尔联合作用于NCI-H460细胞后紫杉特尔的IC50值为(0.101±0.009) μmol/L,与不加寡核苷酸组紫杉特尔的IC50值[(0.183±0.018) μmol/L]或无义寡核苷酸联用紫杉特尔的IC50值[(0.179±0.016) μmol/L]相比,统计学上具有显著性差异(P＜0.05).bcl-2反义寡核苷酸与放射线联合作用NCI-H460细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,分别与单用放射线及bcl-2无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P＜0.05).bcl-2反义寡核苷酸分别与紫杉特尔、放射线作用于NCI-H460细胞后显著抑制Bcl-2蛋白表达,分别与单用紫杉特尔、放射线或无义寡核苷酸联用紫杉特尔、放射线相比,统计学上具有显著性差异(P＜0.05).结论:靶向bcl-2 mRNA的反义寡核苷酸能增强NCI-H460细胞对紫杉特尔、放射线的敏感性.     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对鼻咽癌细胞癌基因表达的影响

目的：检测针对端粒酶的反义寡核苷酸（AS-ODN）对鼻咽癌HNE-1细胞株bcl-2及c-myc基因表达的影响。方法：用PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性。用免疫细胞化学法检测bcl-2和c-myc基因的表达。结果：鼻咽癌细胞株HNE-1与20μmol/L反义寡核苷酸共同孵育1天，对其端粒酶活性抑制率为61.6%。而同浓度正义寡核苷酸（S-ODN）对细胞端粒酶活性无抑制作用。20μmol/L反义寡核酸作用2天后鼻咽癌细胞c-myc基因表达HSCORE评分由3.65下降为1.98，而bcl-2基因表达HSCORE评分无明显变化。结论：该反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性。此作用有序列特异性。该反义寡核苷酸抑制了鼻咽癌细胞c-myc基因的表达，而对bcl-2基因表达无明显影响。     

一种新的修饰型反义寡核苷酸抑制肿瘤细胞表达bcl-2的初步研究

目的：用新的修饰型吗呆代反义寡核苷酸（M－ODN）抑制肿瘤细胞bcl-2的表达，探讨发展新的抗肿瘤药物的可能性。方法：用吗啉代bcl-2反义寡核苷酸作用于K－562细胞，并与全硫代修饰的bcl-2反义寡核酸（S－ODN）为对比，MTT法观察细胞生长抑制率，流式细胞术观察细胞凋亡率。结果：吗啉代修饰型的bcl-2反义寡核苷酸在作用效率、持久性及低细胞毒性等方面均优于硫代修饰。结论：反义吗啉代寡核有望成为新的肿瘤基因治疗手段。     

PCNA的反义寡聚核苷酸抑制子宫颈癌HeLa细胞的研究

目的　检测脂质体介导增殖细胞核抗原 (PCNA)反义寡聚核苷酸抑制子宫颈癌细胞体外增殖活性效果。方法　应用细胞生长曲线和MTT比色法检测细胞增殖活性 ,并采用免疫组织化学方法 (SABC法 )检测PCNA蛋白的表达。结果　反义寡聚核苷酸处理组细胞与对照组比较生长曲线差异有显著性 ,增殖显著受抑 (P <0 0 5 ) ,PCNA蛋白表达完全抑制。而正义寡聚核苷酸组则无此作用 (P >0 0 5 )。结论　提示PCNA反义寡聚核苷酸可以显著抑制子宫颈癌细胞体外增殖活性 ,其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现     

125I偶联反义寡核苷酸抑制人肾癌细胞系生长及Ki-67基因表达

目的　探讨Ki- 6 7基因翻译起始区反义寡核苷酸偶联12 5I对人肾癌细胞Ki- 6 7基因表达和细胞生长的影响。方法　人工合成反义寡核苷酸 ,氯胺 -T法偶联12 5I,脂质体包装后转染肾癌 786 - 0系细胞 ,采用免疫组化法、MTT法和原位末端标记法 (TUNEL)研究肾癌细胞Ki- 6 7抗原的表达、细胞增殖抑制和凋亡情况。结果　经免疫组化检测发现Ki- 6 7抗原表达下降至 ( 19.3± 1.0 ) % ,MTT法表明细胞抑制率达 ( 33.3± 3.5 ) % ,TUNEL法显示细胞凋亡达 ( 2 9.1± 0 .6 ) %。结论　12 5I偶联反义寡核苷酸能阻止人肾癌Ki- 6 7基因的表达 ,抑制细胞生长 ,并诱导细胞凋亡     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌细胞表达的影响

目的 探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响。方法 用PCR－ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性，用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达。结果 该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特性性和浓度依赖性。40μM反义核苷酸抑制了喉癌细胞PC－NA的表达，而对P53表达无明显影响。结论 靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌基因表达的影响

目的探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响.方法用PCR-ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性.用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达.结果该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性,此作用有序列特异性和浓度依赖性.40μM反义寡核苷酸抑制了喉癌细胞PCNA的表达,而对P53表达无明显影响.结论靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达.     

脂质体介导转染bcl-2反义核酸进入HL60细胞的动力学模式和生物学效应

bcl- 2基因是重要的抗凋亡和耐药基因 ,在造血系统恶性肿瘤细胞中普遍高表达。利用 bcl- 2反义核酸有望抑制bcl- 2基因的表达 ,促进细胞凋亡 ,提高肿瘤对化疗的敏感性。　目的　应用阳离子脂质体介导或寡核苷酸直接转染技术 ,建立 HL6 0细胞摄入荧光素标记的 bcl- 2寡核苷酸的动力学模式 ,研究脂质体介导下 bcl- 2反义核酸对 HL6 0细胞的生物学效应 ,初步探讨脂质体的生物学作用。　方法　应用荧光素标记的寡核苷酸 ,凝胶电泳观察脂质体寡核苷酸复合物的形成 ,流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度和 bcl-2蛋白的表达 ,荧光显微镜观察细胞内荧光物质的分布 ,3H-Td R掺入法和 MTT法检测 HL6 0细胞的生长 ,RT- PCR法检测细胞内 bcl- 2 m RNA的表达水平。　结果　 (1)当脂质体与寡核苷酸的质量比合适时 ,两者可形成复合物。(2 )脂质体介导转染法显著提高 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入 ,当脂质体与寡核苷酸的质量比 (μg/ μg)为 2 .0 / 1时 ,细胞内相对平均荧光强度可达寡核苷酸直接转染时的 40倍 ,而且 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入与其浓度和作用时间有关 ,未标记的寡核苷酸竞争性抑制细胞对标记寡核苷酸的摄取。 (2 )细胞内的寡核苷酸可向胞外转运 ,脂质体介导转染后 ,胞内荧光强度衰减缓慢 ,t1 /2 约为 4h,     

放射性核素反义治疗的应用前景

随着<自然>和<科学>两家杂志同时首次刊登人类染色体基因组全图,人类对基因的研究已取得了突破性进展,这使作用于基因水平的药物合理设计成为可能,现在医学科学已找到不少致病基因,以基因药物为代表的新的医疗时代对我们来说已不是遥远的梦想,核医学与反义基因治疗技术相结合既能阻断病变基因功能又可通过放射线攻击病变细胞,具有双效作用,在临床应用上有着诱人的发展前景.     

抗HBV反义寡核苷酸的筛选

目的 筛选出对HBV有抑制作用的反义寡核苷酸(AS-ONs),为HBV的预防和治疗提供基础.方法 合成5条与HBV互补的反义寡核苷酸,转染HepG2.2.15细胞,运用荧光定量PCR和酶联免疫法测定反义寡核昔酸对细胞培养液中HBVDNA和HBsAg、HBeAg的抑制作用.结果 寡核苷酸序列Ⅰ(TAC CTC TYG T...     

mrp反义mRNA真核表达载体pcDNA-Amrp的构建

0 引言 肿瘤多药耐药(MDR)是目前临床化疗的主要障碍和失败的根本原因,是亟待解决的问题之一[1]. MDR相关蛋白(MRP)是1992年Cole等[2]在耐阿霉素的小细胞肺癌细胞系H69AR中发现的一种新的肿瘤耐药相关分子,经研究证实,这种蛋白参与体内多种肿瘤耐药的发生,在某些肿瘤组织如胃癌,食管癌和乳腺癌等中呈强阳性表达. 为进一步探讨mrp在人类肿瘤MDR中发生的意义及反义mrp逆转耐药的可能性,我们构建了反义mrp真核表达载体,以了解用其转染耐药细胞后降低细胞MRP的表达对MDR功能的影响.     

反义RNA在细菌、病毒研究中的进展

反义RNA（asRNA）不仅可以调节真核生物基因表达，而且在细菌和病毒中也有沉默基因作用。耐药细菌不断增加，而发现具备新作用机制的抗生素已经非常困难，asRNA可以增敏细菌对潜在抗生素的作用，在发现新抗生素方面有应用价值。目前缺乏对人类1型免疫缺陷病毒（HIV-1）和人类乳头瘤病毒16型（HPV-16）感染的有效治疗措施，asRNA对这两种病毒有多个作用靶点，有希望发展成治疗病毒感染的有效药物。     

保护薇乔缝线携载反义寡聚核苷酸的实验研究

目的：探讨手术缝线携载反义基因片断的可能性及可行性,为术中血管吻合口局部转染反义基因提供新的途径。方法：保护薇乔缝线反复浸于反义核酸溶液中７２h,溴化乙锭（ＥＢ ）标记,紫外灯下观察其吸附反义基因的情况。将吸附反义基因的缝线置于生理盐水中分别于不同时间点测其释放的Ｄ值,绘出体外控释曲线。同时取释放液进行泳分析。以在荧光标记的核酸溶液中浸过的缝线直接行兔颈总动脉吻合,２４h取材制片荧光显微镜下观察。结     

反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒基因表达的影响

将乙肝病毒（ＨＢＶ）的反义或正义寡核苷酸，加入能复制ＨＢＶ的肝癌细胞模型ＨｅｐＧ２．２．１５中，通过检测其上清中ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的含量，初步分析了反义寡核苷酸潜在的抗ＨＢＶ能力。针对Ｃ基因区１９７４─１９５５的反义链（ＣＳＰ）在１５μｍｏｌ／Ｌ浓度下可抑制８４．８％的ＨＢｓＡｇ表达和４０．０％的ＨＢｅＡｇ表达，停药２日时抑制率仍分别为９３．５％和３９．０％。实验期间未发现反义链对上述细胞形态或细胞生长状况有明显影响。结果提示反义寡核苷酸ＣＳＰ在实验条件下具有一定的抑制细胞ＨＢＶ表达的能力。     

反义寡核苷酸药代动力学研究中的定量分析技术

反义寡核苷酸药物的药代动力学研究要求具备相应的生物定量方法。本文就近年来在临床前和临床药代动力学评价中常用的几种定量方法,包括放射性同位素法、毛细管凝胶电泳法、高效液相色谱法、液质联用和基于杂交技术的酶联免疫法,对其各自的特性、应用前景、操作方法及局限性等方面进行了综述。     

反义波形蛋白逆转录病毒对损伤的星形胶质细胞的作用

目的探讨重组反义波形蛋白cDNA逆转录病毒重组质粒对体外培养损伤的星形胶质细胞(astrocyte,AST)波形蛋白(vimentin)表达的影响.方法采用体外培养AST划伤模型,设实验组及对照组,通过免疫荧光、RT-PCR、Western blot等方法,研究反义波形蛋白逆转录病毒感染对损伤AST波形蛋白表达的影响.结果反义波形蛋白逆转录病毒使损伤AST生长抑制,突起回缩,波形蛋白mRNA及蛋白水平表达降低.结论反义波形蛋白可有效抑制体外培养损伤AST的生长及其波形蛋白的表达.     

反义端粒酶RNA抑制肝癌细胞生长的机制

目的：观察反义端粒酶RNA对SMMC－7721肝癌细胞系的作用,探讨抗端粒端治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法：采用脂质体介导的方式将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTP转入SMMC7721细胞中,经潮霉素筛选,克隆细胞株扩增鉴定后,采用TRAP－PCR－ELISA,FCM及电镜检测反义端粒酶RNA对转染细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响;同时进行裸鼠荷瘤生长实验观察。结果：TRAP－PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性的结果为：实验组吸光度值为0．980,对照组吸光度值为2．861;FCM检测细胞凋亡结果为：实验组13．8％,对照组未见有凋亡峰形成,电镜观察发现转染细胞表现出典型的凋亡细胞形态。裸鼠移植瘤生长实验发现,转染细胞生长明显受到抑制作用,说明反义端粒酶RNA显抑制SMMC7721细胞的端粒酶活性,并且对其有显的促凋亡作用。结论：反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性,同时显促进癌细胞凋亡。     

反义VEGF165真核载体的构建

以质粒pcDNA3.1为载体，将血管内皮基因（VEGF）165cDNA片段反向插入得到反义VEGF165真核表达载体，经过酶切电泳和基因测序证实获得的载体插入方向正确，可以进一步用于反义基因表达的实验研究。