人外周血造血干细胞低温保存方法的实验研究

目的：观察－196℃程控降温冻存方法和－80℃直接冻存方法中单用二甲基亚砜（DMSO）与DMSO加羟乙基淀粉（HES)两种浆存保护剂对人外周血造血干细胞体外冻存的效果。方法：对5例经Cs-3000Plus血细胞分离机分离所得的外周血单个核细胞分别加入10％DMSO和5％DMSO加6％HES冻存保护剂。并分别以－196℃程控降温冻存方法和－80℃直接冻存方法保存15d，以快速复温法复苏细胞，检测冻存前后细胞活率及有核细胞、CD34^ 细胞、粒单系集落形成单位（CFU－GM）、红系集落形成单位（CFU－E）回收率。结果：在－196℃程控降温冻存方法时，单用DMSO和DMSO加HES两组在细胞活率、有核细胞回收率、CD34^ 细胞回收率、CFU－E回收率方面差别无显著性意义；在－80℃直接冻存方法时，MDSO加HES组有核细胞回收率、CFU－E回收率高于单用DMSO组。结论：－196℃程控降温冻存时10％DMSO和5％DMSO加6％HES两种冻存保护剂均可有效应用于外周血造血干细胞保存；一80℃直接冻存方法适合5％DMSO加6％HES冻存保护剂，也可有效用于外周血造血干细胞保存。     

造血干细胞移植临床应用

造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)是近 30年来血液学的重大进展 ,不仅成为治疗乃至治愈恶性血液病最有效的方法 ,也是治疗某些遗传疾病、代谢疾病、免疫异常疾病及某些实体瘤的根本途径〔1〕。造血干细胞移植可分为骨髓移植 ,外周血干细胞移植和脐带血干细胞移植。根据移植物的来源分为异体移植和自体移植。 1970年同种异体骨髓移植开始用于临床 ,在白血病 ,重型再生障碍性贫血等难治性血液病的治疗中具有确切的疗效 ;1980年开展了自体骨髓移植 ,标志着自体骨髓中肿瘤细胞体外净化技术的开展 ;1986年首例应用自体外周血干细胞移植成功地治疗恶性淋…     

造血干细胞移植的临床应用进展

造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)是指将供者的造血干细胞 (ＨＳＣ)移植到受者体内 ,以重建受者的造血和免疫功能 ,从而达到治愈某些疾病的一种方法。近年来 ,随着医学科学的发展 ,特别是对造血干细胞的特性、造血的发生和调控、干细胞的动员、采集、分离纯化、移植免疫学的深入认识 ,ＨＬＡ配型技术的进展及各种支持治疗的加强 (如成分输血、强有力的抗生素和造血细胞因子等的广泛使用 ) ,使ＨＳＣＴ的技术逐渐发展和成熟 ,其临床应用范围也日趋广泛。既往ＨＳＣＴ主要用于恶性血液病 ,现还应用于一些实体瘤、遗传性疾病和难治性免疫性疾病的治疗…     

造血干细胞研究进展

近年来,造血干细胞在起源、造血原理、细胞分型、形态学特点、生物学特性、临床应用等几个方面的研究取得了较大的进展.本文围绕以上几个方面进行综述.     

造血干细胞移植的临床应用

造血于细胞移植(hematopoietic steam cell transplanta-lion.HSCT)由Thomas等于1957年最先采用骨髓中干细胞移植治疗白血病,并于1971年首次报告HSCT使白血病患者长期存活.其成果于1 990年获得诺贝尔生理医学奖.     

外周血造血干细胞移植的基础与临床

中图法分类号Ｒ４５７根据量效关系的基本原则，某些化疗药物加大剂量或协同放射治疗可以提高疗效，使常规剂量化疗无效的患者延长缓解或得到治愈的机会。骨髓扫荡性或摧毁性治疗（ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｙ）需赖自身骨髓移植（ＡＢＭＴ）或自体外周血干...     

重视造血干细胞移植中的造血微环境问题

造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)是治疗血液肿瘤、非恶性血液病、遗传性疾病、代谢性疾病、急性放射病的有效手段之一,已在临床应用35年.造血干细胞移植的成败主要取决于供者造血干细胞能否在宿主的造血微环境中正常地增殖和分化,且尽量避免和降低移植并发症所带来的风险.既往对造血干细胞配型、移植物抗宿主病、移植失败和移植后疾病复发等问题的研究多侧重在造血干细胞方面,而对造血干细胞赖以生存的微环境缺乏足够的重视和研究[1-2].本研究主要阐述造血微环境功能在造血干细胞移植过程中的主要变化和作用,以期引起对该问题足够的重视和关注.     

脐带血造血干细胞移植临床应用研究进展

198 8年Ｇｌｕｃｋｍａｎ等进行了世界首例Ｆａｎｃｏｎｉ’ｓ贫血脐带血移植 ,临床应用获得成功 ,进一步从临床上验证了脐血可以作为一种造血干细胞的来源。由此 ,世界各地兴起了对脐血及其临床应用的研究热潮。随着对脐血生物学特性的深入研究 ,脐血采集、检测、分离和保存技术的改进以及一系列脐血库的建立与合作 ,近十年脐血移植 (ＵＣＢＴ)在临床上得到了迅速的推广。迄今为止全世界已进行了约15 0 0多例脐血移植。从目前的临床结果来看 ,脐血移植具有广阔的临床应用前景。1　脐血移植临床应用适应症脐血移植已经成功地用于治疗许多良…     

-80℃条件下自体造血干细胞保存时间的探讨

目的 观察在-80℃条件下长期保存自体造血干细胞，对细胞数量及活性的影响，确定一个合适的保存期限。方法 采用常规计数法计数单个核细胞，台盼蓝拒染法计数存活细胞，甲基纤维素法观察CFU—GM集落生长情况。结果 -80℃低温冰箱中保存造血干细胞1—4年，单个核细胞的回收率分别为85％、79％、64％、58％。台盼蓝拒染细胞的回收率分别为89％、78％、71％、35％。CFU—GM集落生长的回收率分别为65％、50％、0％、0％。结论 -80℃条件下保存自体造血干细胞的时间最好不超过2年。     

非清髓异基因造血干细胞移植造血细胞嵌合体形成及演变的临床意义

目的：探讨非清髓异基因造血干细胞移植（NAST）造血细胞嵌合体的形成及演变的临床意义。方法：采用非清髓性预处理方案治疗了42例组织相容性抗原相合的血液病患者。男26例,女16例,中位数年龄37岁（18－59岁）。非清髓预处理：白血病患者采用环磷酰胺（CTX）、阿糖胞苷及CD3单克隆抗体,6周患者在此基础上加用氟达拉滨。再生障碍性贫血和骨髓增生异常综合征患者采用CTX和抗淋巴细胞球蛋白。结果：42例患者均顺利渡过造血抑制期并形成造血细胞嵌合体。18例形成稳定的完全供者造血细胞嵌合体（FDC）,24例形成混合造血细胞嵌合体（MC）。其中15例逐渐转为FDC,5例保持稳定嵌合状态,4例发生移植排斥。42例中10例（23．8％）发生急性移植物抗宿主病（aGVHD).其中FDC者8／18（44．4％）,MC组2／24,FDC者的aGVHD发生率明显高于MC患者（P＜0．05）。42例中8例发生慢性移植物抗宿主病（cGVHD).FDC者4／18,MC者4／24,FDC患者的cGVHD发生率高于MC组但差异无显著意义（P＞0．05）。FDC患者和MC患者的中性粒细胞和血小板最低值及恢复时间,存活时间差异无显著意义（P＞0．05）。随访2－43个月,仍存活31例（73．8％）。结论：NAST早期先形成高比例MC再逐渐转化为FDC即可显著减轻GVHD又不降低和影响疗效,可能是造血干细胞移植更理想的植入模式。     

Identification and isolation of hematopoietic stem cells

Hematopoietic stem cells (HSCs) are defined by their ability to repopulate all of the hematopoietic lineages in vivo and sustain the production of these cells for the life span of the individual. In the absence of reliable direct markers for HSCs, their identification and enumeration depends on functional long-term, multilineage, in vivo repopulation assays. The extremely low frequency of HSCs in any tissue and the absence of a specific HSC phenotype have made their purification and characterization a highly challenging goal. HSCs and primitive hematopoietic cells can be distinguished from mature blood cells by their lack of lineage-specific markers and presence of certain other cell-surface antigens, such as CD133 (for human cells) and c-kit and Sca-1 (for murine cells). Functional analyses of purified subpopulations of primitive hematopoietic cells have led to the development of several procedures for isolating cell populations that are highly enriched in cells with in vivo stem cell activity. Simplified methods for obtaining these cells at high yield have been important to the practical exploitation of such advances. This article reviews recent progress in identifying human and mouse HSCs and current techniques for their purification.     

环孢素峰浓度（C2）监测在异基因干细胞移植术中的意义

目的：观察我院2003年3月～2006年12月进行的异基因干细胞移植患者，探讨环孢素A峰浓度（C2）监测在异基因干细胞移植术中的意义。方法：采用荧光偏振免疫法（FPIA）分别对9例和12例异基因干细胞移植患者进行C0和C2监测。结果：当C0组浓度维持200～400μg，L、C2组浓度维持500～700μg／L时，可以提高CsA的效果并降低CsA的肝肾毒副作用。C2比C0更能有效预测排斥反应的发生。结论：CsA血药浓度受多种因素的影响，对异基因干细胞患者进行C2监测比C0监测更有效。     

人参多糖动员的造血干/祖细胞移植重建造血衰竭小鼠造血功能的研究

目的:探讨经人参多糖动员的外周血造血干/祖细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法:建立小鼠造血衰竭模型,移植经人参多糖动员的外周血单个核细胞,检测受体小鼠生存时间,外周血WBC,脾湿重及脾集落数,进行染色体嵌合实验。结果:经人参多糖动员的雄性小鼠外周血MNC1×105个输注给致死剂量照射的雌性小鼠,可明显延长小鼠存活时间;提高受体小鼠外周血WBC数;亦能增加脾湿重,提高脾集落(CFU-S)数;经Y染色体检测(PCR法)受体小鼠外周血单个核细胞可检出581bpY染色体序列。结论:经人参多糖动员小鼠的外周血中存在数量较多的造血干/祖细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建小鼠造血功能。     

脐带血造血干细胞的采集、浓缩与低温冷冻保存

目的 :探讨脐带血造血干细胞库建立中的脐带血采集、分离、低温冻存的方法。方法 :自 1997年 7月至2 0 0 0年 7月已冻存经过HLA配型的脐带血 (cordblood ,CB) 3 74 4份。CB采自经检查符合要求的足月顺产或剖宫产新生儿 ,经 (citratephosphateadeninedextnse ,CPD A)抗凝 ,用密闭式血袋采集法采集。采集后置于室温保存 ,18h内处理。用羟乙基淀粉 (hydroxythylstarch ,HES)沉降后一次分离方法去除绝大多数红细胞及大部分血浆。采用以二甲亚砜 (dimethylsulfoxide ,DMSO)为主的冷冻保剂 ,冷冻保存CB。DMSO的终质量分数为 10 %。经序控降温后 ,置于 - 196℃液氮中保存。结果 :分析了 3 74 4份冻存CB ,平均采集量为 (93± 2 2 )ml(45～ 198ml)。浓缩后平均体积为 (3 8± 8)ml(3 0～ 60ml) ;浓缩前后有核细胞数 .浓缩前平均有核细胞数为 11.2× 10 8± 5 .3× 10 8(4.5× 10 8～ 4 5 .1× 10 8) ;采用HES沉降一次离心浓缩去除红细胞后的平均有核细胞数为 9.7× 10 8± 4 .6× 10 8(3 .1× 10 8～ 3 0 .5× 10 8) ;平均有核细胞回收率为 79%。质控检测 4 0份标本细胞活率为 88.2 % ,CFU GM回收率和CD3 4 +细胞计数分别为 97.6%和 86.4 %。结论 :本研究采用的CB采集、冻存及造血干细胞和病原生物检测的方法是安     

不同强度预处理方案用于系列不明急性白血病异基因造血干细胞移植的疗效比较

目的 分析两种不同强度预处理方案对系列不明急性白血病(ALAL)异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的疗效.方法 回顾性分析南方医科大学附属南方医院血液内科2002年3月至2010年8月38例ALAL患者临床资料.标准清髓性预处理方案为全身放疗+环磷酰胺或白消安+环磷酰胺;超强预处理方案为氟达拉滨+阿糖胞苷+全身放疗+环磷酰胺.移植物抗宿主病(GVHD)预防在人白细胞抗原(HLA)全相合相关移植患者用环孢素A(CsA)+甲氨蝶呤(MTX),HLA不相合相关移植及无关移植患者采用CsA+MTX+抗胸腺细胞球蛋白和(或)霉酚酸酯.COX模型分析影响长生存的因素.结果 19例患者接受标准预处理方案;19例接受超强预处理方案.移植后38例患者均获造血重建,5年累计总体总生存(OS)和无病生存(DFS)率分别为35.5%和25.7%;标准预处理组和超强预处理组5年0s率分别为20.2%与48.1%(P=0.233)、DFS为6.5%与43.1%(P:0.031).38例患者移植后5年白血病累计复发率为58.9%,标准预处理组和超强预处理组分别为87.6%和30.4%(P=0.003).COX单因素分析显示:超强预处理及慢性GVHD为DFS的保护因素(P=0.001、0.031).结论 在allo-HSCT中应用超强预处理能改善ALAL患者的生存及减少复发,移植物抗白血病效应对ALAL患者具有一定疗效.

Abstract：

objective To evaluate the efficacy of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT)in the conditionings of different intensities for acute leukemias of ambiguous lineage(ALJAL). Methods A total of 38 ALAL patients were treated with two conditionings of different intensities in our hospital from March 2002 to August 2010. The standard conditioning included TBI+Cy or Bu+Cy,intensified conditioning included Fludarabine+Ara-C+TBI+Cy. Cyelosporine A(CsA)and methotrexate (MTX) were administered in patients with human leukocyte antigen-matched sibling donor. And CsA, MTXplus antihuman thymocyte globulin and/or mycophenolate were used in all patients with HLA-A-mismatched related donor and unrelated donors transplants for graft-versus-host disease(GVHD)prophylaxis. COX regression was used to evaluate the prognostic factors of ALAL Results Among 38 ALAL patients,19received the standard conditioning while another 19 the intensified conditioning. All patients achieved hematopoietic reconstitution. The 5-year overall survival(OS)and the disease-free survival(DFS)were 35. 5%and25. 7%respectivelv. The 5-year OS rates were 20. 2%and48. 1%(P=0. 233)and DFS 6. 5%and 43. 1%(P=0. 031)in the standard and intensified conditioning groups respectively. The 5-year cumulative relapsing incidence was 58. 9%in all patients and 87. 6% vs 30. 4% in the standard and intensifted conditioning groups respectively(P=0. 003). Through a COX regression model for univariate analysis, the intensified conditioning and chronic GVHD were protective factors for DFS (P = 0. 001,0. 031 ). Conclusions The intensified conditioning in ALAL patients undergoing allo-HSCT may improve the long-term patient survival and decrease the relapse of leukemia. The graft versus leukemic effect has some efficacy in ALAL patients undergoing allo-HSCT.     

体外扩增造血细胞重建小鼠造血功能的实验研究

目的 探讨体外扩增造血祖儿定向诱导功能血红细胞生成的条件及扩增细胞重建长期造血能力的维持。方法 应用免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）分离纯化脐带血ＣＤ３４＾＋造血干或祖细胞,在体外液体培养体系中经不同细胞因子的组合进行扩增和定向诱导,并将扩增细胞移植经亚致死剂量照射的ＳＣＩＤ小鼠。结果 ＦＬ、干细胞因子血小板生成素（ＴＰＯ）等细胞因子的不同组合可分别扩增细胞总数、粒系及巨核系造血祖细胞、ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８     

巨细胞病毒检测及在异基因造血干细胞移植中应用研究

目的:探讨检测巨细胞病毒(CMV)的方法学及在异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)中临床应用的价值.方法:以45例Allo-HSCT为研究对象,采集移植前供者、移植前后及恢复期受者的抗凝血标本,分别采用CMV-pp65单克隆抗体免疫组化法和ELISA法,检测CMV早期抗原和IgG、IgM抗体,并进行多点动态观察.结果:45例患者163份系列标本,CMV早期抗原阳性75份,是在移植后6～242天首次检出,平均70天;其中≤45天出现阳性者26例,占58%.术前供、受者CMV-IgG抗体均阳性,CMV-IgM抗体供、受者各1例阳性,其中受者持续阳性.术后45例中21例出现CMV-IgM抗体阳性,首次检出时间在14～234天,平均127天,比早期抗原检出时间推迟近2个月.45例中因CMV感染而致间质性肺炎25例,占55%.结论:异基因造血干细胞移植采用CMVpp55单克隆抗体免疫组化法检测巨细胞病毒感染,快捷、准确、灵敏,对患者的诊断、治疗和预后判断有重要意义,值得推广.     

罗汉果和熟地增加小鼠造血干细胞的数量和功能

目的罗汉果和熟地具有增强机体免疫力,延年益寿的作用。本文研究罗汉果和熟地对造血干细胞的影响。方法各组小鼠连续喂养罗汉果或熟地3个月,流式细胞仪测量小鼠的外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞和造血干细胞的变化;小鼠用半致死剂量的放射线照射后,连续喂养罗汉果或熟地1个月后,流式细胞仪测量罗汉果或熟地对于免疫细胞和造血干细胞损伤修复的作用。结果分析检测结果发现,与对照组相比,长期喂养罗汉果或熟地的小鼠骨髓和外周血中B细胞的比例降低,粒细胞的比例增加,T细胞没有明显变化;骨髓中造血干细胞的数量增加,尤其是长期造血干细胞数量增加显著。半致死剂量的放射线照射后,罗汉果或熟地喂养1个月,小鼠的粒细胞和T细胞都有明显的改善,造血干细胞的数量明显增加。结论罗汉果或熟地长期服用会增加小鼠造血干细胞的数量和功能,促进了辐射所致的骨髓抑制小鼠的造血干细胞的恢复。     

bcl-2基因转染小鼠造血干细胞重建造血的生物学特性

目的 观察ｂｃｌ－２基因转染小鼠造血干细胞重建造血的小鼠对放化疗的抵抗作用。方法 （１）含ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体质粒,经脂质体介导转染ＰＡ３１７包装细胞,通过Ｇ４１８筛选和克隆,获得高病毒滴度的细胞株（Ｄ３）;（２）用Ｄ３细胞株的病毒上清转染小鼠胚胎肝造血干细胞;（３）经致死剂量照射小全注ｂｃｌ－２转 造血干细胞重建造血;（５）采用脾集落形成和再增殖能力观察ｂｃｌ－２转因干细胞重建造血