rhG—CSF动员正常供者与恶性血液病患者外周血造血干细胞质量的比较

目的探讨正常供者与恶性血液病患者使用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员后,用血细胞分离机采集的外周血造血干细胞,通过形态学观察PBSC中淋巴细胞比例及单个核细胞活力。方法分别对15例正常供者和14例恶性血液病患者使用rhG—CSF动员剂,用血细胞分离机采集外周血中单核细胞（MNC）,观察有核细胞数、有核细胞分类、MNC计数及细胞活力。结果（1）正常供者组采集的PBSC有核细胞总数为（4．31±1．41）×10^8／kg,恶性血液病患者组有核细胞总数MNC数为（6．21±4．37）×10^8／kg。（2）恶性血液病组采集的PBSC有核细胞数高于供者组（P〈0．01）。（3）用淋巴细胞比值乘以有核细胞总数计算单个核细胞,正常供者组（2．82±1．03）×10^8／kg、恶性血液病患者组（2．58±1．79）×10^8／kg,正常供者组与恶性血液病组单个核细胞数比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）正常供者组MNC计数为（96．7±5．1）％,其中淋巴细胞占（65．9±9．4）％、粒细胞占（16．3±8．7）％、单核细胞占（16．5±4．0）％;恶性血液病组MNC计数为（92．7±15．6）％,其中淋巴细胞占（55．3±16．7）％、粒细胞占（24．3±16．5）％、单核细胞占（14．9±9．1）％。（5）正常供者组冻存前后细胞活力分别为（91．5±4．3）％、（67．4±9．1）％,恶性血液病组冻存前后细胞活力分别为（82．9±11．1）％、（56．5±20．1）％;两组冻存前后细胞活力差异均有显著性（P〈0．01）。（6）rhG—CSF动员前后正常供者组及恶性血液病组T细胞在CD3单克隆抗体＋rhIL-2刺激下,外周血T淋巴细胞的增生能力在应用rhG—CSF后下降[（68．5±15．1）％vs（52．3±12．5）％（P〈0．05）。结论单用rhG—CSF或化疗联合rhG—CSF动员均可采集到足够数量的外周血造血干细胞,应用淋巴细胞乘以有核     

-80℃冻存外周血干细胞21例分析

目的：探索一种操作简单、干细胞回收率和存活率高、成本低廉的外周血浆存方法。方法：采用终浓度为5％二甲基亚砜（DMSO），3％羟乙基淀粉（HES）和4％人血白蛋白（HSA）的干细胞保护剂直接－80℃冰箱冰存外周血干细胞，并检测不同时相点（1、3、6、9、12个月）外周血干细胞的细胞活性，单个核细胞（MNC）和CFU－GM、CD34^ 细胞的回收率。结果：随着保存时间的延长，观察到12个月时，冻存干细胞的细胞活性、MNC回收率和CD34^ 细胞回收率分别为86．46％、88．58％、87．65％，与冻存1个月相比无统计学差异（P＞0．05），足以保障干细胞移植后造血重建的成功。结论：5％DMSO，3％HES和4％HAS作为干细胞冷冻保护剂直接－80℃冰箱冻存外周血干细胞是一种简便、实用、安全、可靠、成本低的外周血干细胞冻存方法，具有广泛的临床推广价值。     

rhG-CSF动员正常供者与恶性血液病患者外周血造血干细胞质量的比较

目的探讨正常供者与恶性血液病患者使用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员后,用血细胞分离机采集的外周血造血干细胞,通过形态学观察PBSC中淋巴细胞比例及单个核细胞活力。方法分别对15例正常供者和14例恶性血液病患者使用rhG—CSF动员剂,用血细胞分离机采集外周血中单核细胞（MNC）,观察有核细胞数、有核细胞分类、MNC计数及细胞活力。结果（1）正常供者组采集的PBSC有核细胞总数为（4．31±1．41）×10^8／kg,恶性血液病患者组有核细胞总数MNC数为（6．21±4．37）×10^8／kg。（2）恶性血液病组采集的PBSC有核细胞数高于供者组（P〈0．01）。（3）用淋巴细胞比值乘以有核细胞总数计算单个核细胞,正常供者组（2．82±1．03）×10^8／kg、恶性血液病患者组（2．58±1．79）×10^8／kg,正常供者组与恶性血液病组单个核细胞数比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）正常供者组MNC计数为（96．7±5．1）％,其中淋巴细胞占（65．9±9．4）％、粒细胞占（16．3±8．7）％、单核细胞占（16．5±4．0）％;恶性血液病组MNC计数为（92．7±15．6）％,其中淋巴细胞占（55．3±16．7）％、粒细胞占（24．3±16．5）％、单核细胞占（14．9±9．1）％。（5）正常供者组冻存前后细胞活力分别为（91．5±4．3）％、（67．4±9．1）％,恶性血液病组冻存前后细胞活力分别为（82．9±11．1）％、（56．5±20．1）％;两组冻存前后细胞活力差异均有显著性（P〈0．01）。（6）rhG—CSF动员前后正常供者组及恶性血液病组T细胞在CD3单克隆抗体＋rhIL-2刺激下,外周血T淋巴细胞的增生能力在应用rhG—CSF后下降[（68．5±15．1）％vs（52．3±12．5）％（P〈0．05）。结论单用rhG—CSF或化疗联合rhG—CSF动员均可采集到足够数量的外周血造血干细胞,应用淋巴细胞乘以有核细胞数作为外周血造血于细胞移植时计算输入外周血造血干细胞数量的指标时简便、快捷,不失为一良好的临床检测方法。     

抗人T淋巴细胞兔免疫球蛋白预防异基因造血干细胞移植中急性移植物抗宿主病的临床研究

目的探讨异基因造血干细胞移植中抗人T淋巴细胞兔免疫球蛋白（ATG）联合环孢霉素A（CsA）、霉酚酸酯（MMF）、甲氨蝶呤（MTX）对促进移植植入和预防急性移植物抗宿主病（aGVHD）的作用。方法15例恶性血液病及5例重型再生障碍性贫血（SAA）患者实施血缘相关供者异基因造血干细胞移植,其中8例为人类白细胞抗原（HLA）配型全相合,12例HLA配型为单倍体相合。在移植前5d至前2d应用ATG 10．0mg／kg。供者应用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）5μg／（kg·d）,连续应用5d后采集外周血干细胞,单个核细胞（MNC）计数中位数为5．3×10^8／kg,CD34^＋细胞计数中位数为6．0×10^6／kg。结果移植后所有受者均获得造血重建,中性粒细胞（ANC）≥0．5×10^9／L和血小板（Plt）≥20×10^9／L中位时间分别为12d和14d。出现aGVHD7例,其中Ⅰ度皮肤aGVHD 3例;Ⅱ度肠道aGVHD 2例;Ⅲ度及Ⅳ度肠道aGVHD各1例。结论ATG在促进造血干细胞的植入,预防aGVHD的发生和降低其严重程度方面具有明显的效果。     

异基因造血干细胞移植治疗重症再生障碍性贫血的评价

目的评价以环磷酰胺（CTX）为预处理方案行异基因造血干细胞移植（Allo—HSCT）治疗重症再生障碍性贫血（SAA）的疗效。方法对1例SAA患者行同胞供者Allo—HSCT治疗。预处理方案为CTX 50mg／kg^-1·d^-1×4d;干细胞来源采用外周血＋骨髓;输注单个核细胞数（MNC）为10．41×10^8／kg,CD34^＋细胞计数为6．86×10^6／kg。预防移植物抗宿主病（GVHD）采用环孢素A（CsA）加短程甲氨蝶呤（MTX）加霉酚酸酯（MMF）。结果患者获得造血重建,第14天中性粒细胞数（ANC）≥0．5×10^9／L、血小板计数（PLT）≥20×10^9／L,第96天血型转变为供者型（B→O）。患者出现Ⅳ度急性GVHD（aGVHD）,经积极治疗后控制。150d内患者出现急性化脓性扁桃体炎、口腔溃疡、急性支气管炎、带状疱疹病毒感染、巨细胞病毒血症、肺炎,经积极治疗后均好转。随访24个月,患者无病存活。结论以CTX为预处理方案allo-HSCT是治愈SAA的一种有效方法。     

人外周血造血干细胞低温保存方法的实验研究

目的：观察－196℃程控降温冻存方法和－80℃直接冻存方法中单用二甲基亚砜（DMSO）与DMSO加羟乙基淀粉（HES)两种浆存保护剂对人外周血造血干细胞体外冻存的效果。方法：对5例经Cs-3000Plus血细胞分离机分离所得的外周血单个核细胞分别加入10％DMSO和5％DMSO加6％HES冻存保护剂。并分别以－196℃程控降温冻存方法和－80℃直接冻存方法保存15d，以快速复温法复苏细胞，检测冻存前后细胞活率及有核细胞、CD34^ 细胞、粒单系集落形成单位（CFU－GM）、红系集落形成单位（CFU－E）回收率。结果：在－196℃程控降温冻存方法时，单用DMSO和DMSO加HES两组在细胞活率、有核细胞回收率、CD34^ 细胞回收率、CFU－E回收率方面差别无显著性意义；在－80℃直接冻存方法时，MDSO加HES组有核细胞回收率、CFU－E回收率高于单用DMSO组。结论：－196℃程控降温冻存时10％DMSO和5％DMSO加6％HES两种冻存保护剂均可有效应用于外周血造血干细胞保存；一80℃直接冻存方法适合5％DMSO加6％HES冻存保护剂，也可有效用于外周血造血干细胞保存。     

﹣80°C冰箱长期冻存外周血造血干细胞研究

目的对外周血造血干细胞活性在深低温（-80℃）下保存3年的效果进行评价。方法对30例经MCS＋血细胞分离机采集所得的外周血造血干细胞加入细胞冻存保护剂分别予以-196℃液氮冻存和-80℃冰箱深低温冻存,并检测和比较冻存前后单个核细胞（mononuclear cells,MNC）、CD34＋细胞的计数及细胞回收率,细胞活性。结果 -80℃冰箱冻存组MNC、CD34＋细胞冻存3年与冻存前比较差异均无统计学意义冻存3年后MNC回收率与冻存1年后比较差异无统计学意义。3年后-80℃冰箱冻存组干细胞与-196℃液氮冻存组比较,差异无统计学意义。结论 -80℃冰箱深低温保存法快速、简便、安全、费用低廉,可有效用于外周血造血干细胞长期保存。     

急性白血病化疗后不同时期应用粒细胞集落刺激因子的疗效对照研究

目的：研究急性白血病化疗后不同时期应用粒细胞集落刺激因子（G—CSF）的疗效。方法：选取2010年9月～2013年7月本院收治的80例急性白血病化疗患者为研究对象,将其根据G—CSF应用时间分为A组（化疗后48h应用组,20例）、B组EANC值（1．0～1．4）×10^9／L时应用组,20例、C组ANC值（0．5～0．9）×10^9／L时应用组,20例和D组（ANC值〈0．5×10^9／L时应用组,20例,比较4组患者ANC值达到≥1．5×10^9／L的时间、G—CSF应用时间及口腔溃疡发生率。结果：A组ANC值达到≥1．5×10^9／L时间、G—CSF应用时间均短于B组、C组及D组,B组则短于C组及D组,C组则短于D组;A组总的1：7腔溃疡发生率低于B组、C组及D组,B组则低于C组及D组,C组则低于D组,差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论：急性白血病化疗后应及早应用G—CSF,化疗后48h的应用效果相对更好。     

动脉支架放置术前白细胞计数与锁骨下动脉支架远期通畅率的观察

目的探讨动脉支架放置术前外周血白细胞计数与锁骨下动脉支架远期通畅率的相关性。方法用独立样本g检验回顾性分析因动脉硬化行锁骨下动脉支架置入术后支架通畅者（102例）与非通畅者（11例）术前白细胞计数的差异。用x^2检验分析术前白细胞计数较高（〉7．195×10^9／L）组（36例）与白细胞计数较低（≤7．195×10^9／L）组（77例）锁骨下动脉支架观察结束时支架通畅率的差异。结果113例患者术后随访1—3年,锁骨下动脉支架1年通畅率为96．5％（109／113）,3年通畅率为89．6％（60／67）。11例非通畅患者的术前白细胞计数明显高于102例通畅患者（t=-5．051,P〈0．001）,分另4为（8．3±1．1）×10^9／L（5．40×10^9／L～10．611×10^9／L）及（6．1±1．3）×10^9／L（4．10×10^9／L～8．00×10^9／L）。术前白细胞计数较高组及白细胞计数较低组观察结束时通畅率分别为75．0％（27／36）及97．4％（75／77）[P=0．001,OR值为12．500（95％CI为2．539～61．547）]。结论排除其他影响锁骨下动脉支架远期通畅率的传统因素之外,白细胞的增多与锁骨下动脉支架狭窄或阻塞的形成有关。     

非程控降温,—80℃冻存自体外周血干细胞的研究

目的：观察非程控降温、－80℃冻存的方法对自体外周血十细胞（APBSC）的保存效果。方法：以6％羟乙基淀粉（HES）、5％二甲基亚砜（DMSO）及4％人血白蛋白（ALB）的混合物为冷冻防护剂，将APBSC直接置于－80℃下保存，冻存前反复苏后测定APBSC的CFU－GM、BFU－E；观察移植后造血功能重建情况。结果：13例患者白细胞在十3～＋7天下降至（0．0～0．1）×10／L，白细胞（0．0～0．2）×109／L持续时间3～6天，于＋9～＋11天恢复至1．0X109／L以上．中性粒细胞绝对值（ANC）于＋9～＋11天达到0．5X109／L。血小板在＋3～＋7天下降至（2．0～21）×109／L，于＋8～＋15天恢复至20×109／L以上。CFU－GM、BFU－E回大率分别为76．5％、78．4％。结论：非程控降温、－80℃冻存是一简便、经济、有效的自体外周血于细胞保存方法。     

自体外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病20例临床分析

目的观察自体外周血造血干细胞移植（APBSCT）治疗恶性血液病的初期疗效。方法恶性血液病患者20例,其中急性白血病3例,浆细胞白血病1例,非霍奇金淋巴瘤8例,霍奇金淋巴瘤3例,多发性骨髓瘤5例。动员方案为米托蒽醌＋长春新碱＋激素＋依托波苷方案化疗（MOEP方案）＋粒细胞集落刺激因子。经3-6d采集,获得单个核细胞（MNC）中位数为（7.23±2.27）×108/kg,CD34＋细胞（4.37±2.72）×106/kg。结果所有患者移植后均重建造血。WBC〉2.0×109/L,PLT〉20×109/L,分别为（12.04±1.76）d,（16.55±2.31）d。4例在移植6个月内死于复发,其余16例均无病存活6-55个月。结论 APBSCT对恶性血液病是一种安全有效的治疗方法。     

重组人血小板生成素治疗恶性血液病化疗后血小板减少简

目的 评价重组人血小板生成素（rhTPO）对恶性血液病化疗后血小板减少的疗效和安全性.方法 化疗后血小板计数≤20×10^9/L的25例急性白血病和恶性淋巴瘤患者,接受方案和剂量相同的两周期化疗,采用病例自身对照研究方法,第一周期（对照组）化疗后出现血小板计数≤20×10^9/L时给予输注血小板悬液;第二个周期（治疗组）化疗结束后,在前述治疗基础上,当血小板计数≤50×10^9/L时给予皮下注射rhTP0 15 000 u,每日1次,连续7d,若未见效,最多延长至14 d;血小板计数≥75×10^9/L或血小板绝对数升高50×10^9/L时停药.监测血常规、肝肾功能、凝血功能、心电图.结果 治疗组和对照组血小板最低平均值为12.4±6.7×10^9/L和（10.8±9.0）×10^9/L,两组差异无统计学意义（P＞0.05）.血小板计数≤20×10^9/L的持续时间治疗组和对照组分别为4.8±1.3 d和6.5±1.7d（P＜0.05）.血小板恢复至≥50×10^9/L、≥75×10^9/L、≥100×10^9/L所需的天数治疗组分别为7.4±1.4 d、9.5±1.5d、11.7±1.8 d,短于对照组的10.3±1.6 d、12.4 ±2.0 d、15.4±2.8 d,两组差异有统计学意义（P＜0.05）.治疗组血小板输注量为13.0±6.8u,对照组血小板输注量为18.5 ±7.6 u,差异有统计学意义（P＜0.05）.治疗组未见严重不良反应.结论 rhTPO能有效促进血小板的恢复,减轻化疗引起的血小板减少程度和持续时间,减少血小板的输注量.     

低温对人脐血内皮祖细胞的影响

目的将人脐血中分离培养出的内皮祖细胞进行低温保存和快速复苏,建立EPC细胞系,比较冻存前后细胞形态及生物学功能是否改变。方法采集人脐血,分离出单核细胞,对细胞进行冻存和复苏,测定内皮祖细胞增殖能力及黏附能力。结果内皮祖细胞经冻存和复苏后测得细胞的存活率为（84.17±4.02）%,细胞的形态学未见明显改变;与未冻存的细胞相比,刚复苏后即行增殖和黏附能力的检测,细胞的增殖和黏附能力有显著变化,P〈0.05;细胞复苏后继续培养48h行增殖和黏附能力检测,两者未见明显差异,P〉0.05。结论对低温保存后复苏的EPC,立即行增殖和黏附能力检测其能力均降低,复苏后继续培养48h再次检测未见明显差异。     

-80℃简易冻存外周造血干细胞临床应用观察

目的:探索一种简便易行、安全有效、成本低的干细胞的冻存方法。方法:6份外周造血干细胞以1640培养液和二甲基亚砜、10%白蛋白作保护剂在-80℃条件下直接冻存,检测冻存前后外周血干细胞的活性、单个核细胞(MNC)数和CD34+细胞数及回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性、MNC和CD34+细胞的数量及回收率满足移植要求,输注后造血均重建。结论:1640培养液和二甲基亚砜、10%白蛋白作保护剂在-80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法。     

亲缘半相合造血干细胞移植中第三方脐血辅助输注的作用分析

目的 探讨第三方脐血辅助输注在亲缘半相合造血干细胞移植中的作用.方法 回顾性分析2010年1月至2013年5月收治的确诊为恶性血液病,并已完成亲缘半相合造血干细胞移植的66例患者的临床资料,以是否回输第三方脐血细胞将患者分为两组：25例辅助性回输脐血者为试验组,41例未回输脐血者为对照组.对患者移植后造血恢复情况、移植物抗宿主病（GVHD）发生情况、其他并发症及预后等情况进行比较.结果 两组患者的年龄、性别、供者来源、疾病种类以及移植前疾病状况比较差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）.两组采用预处理方案比较有差异（P=0.00）,但此差异无临床意义.试验组回输单个核细胞数（MNC）为（9.94±2.88）×10^8/kg、CD34＋（5.46±3.54）×10^6/kg,对照组回输MNC （7.80±0.82）×10^8/kg、CD34＋ （3.54±1.60）×10^6/kg,试验组回输的MNC数多于对照组（P=0.00）,而两组回输的CD34＋细胞比较差异无统计学意义（P=0.16）.试验组较对照组WBC计数恢复快（P=0.023）,试验组与对照组WBC植活时间分别为（13.7±2.9）、（16.6±2.9）d;试验组Ⅲ～Ⅳ度GVHD发生率低（P =0.036）、早期细菌感染率（P=0.001）、真菌感染率（P =0.009）及出血性膀胱炎发生率低（P=0.00）均低于对照组,而两组PLT恢复情况（P=0.43）、Ⅰ～Ⅱ度GVHD发生率（P=0.27）以及植入综合征发生率（P=0.24）、肝窦阻塞综合征发生率（P=0.57）、病毒血症（P=0.31）发生率均差异无统计学意义.结论 使用脐血作为第三方辅助输注后可促进供者细胞植入,减轻GVHD的发生,但长期预后有待观察.     

Cryopreservation and engraftment potential of peripheral blood stem cells: pediatric experience

Peripheral blood stem cells (PBSC) harvests were performed from children with various types of cancer in our institution. The PBSC was cryopreserved using the simplified method at -80 degrees C with 6% hydroxyethyl starch (HES) and 5% dimethyl sulfoxide (DMSO) without a programmed freezer. To determine the optimum cryo-storage time in this method, 33 samples harvested from 33 patients were investigated. While there was no correlation between the time of cryopreservation and the nucleated cell recovery rates, the CFU-GM recovery rate was negatively correlated with the cryopreservation times (p < 0.01). The CFU-GM recovery rate after 2, 3, and 5 years cryopreservation was 74%, 56%, and 21%, respectively. To date, 22 of the 33 children have subsequently received PBSCT using their cryopreserved cells. The number of infused CFU-GM of PBSCs was 6.9-114.6 (median 20.5) x 10(4)/kg. The cryopreservation time of infused PBSCs was 1-35 (median 4) months. After PBSCT, the absolute neutrophils count (ANC) achieved 500/mm3 between 8-16 (median 10.5) days, and the platelet count achieved 5.0 x 10(4)/mm3 between 13-200 (median 29) days. We have experienced PBSCT using PBSCs after 35 months cryopreservation as the maximum and successful engraftment. It has been clarified in this study that PBSCs could be clinically used successfully after 3 years cryopreservation.