hTERT mRNA和survivin mRNA在女性尖锐湿疣中的表达及其相互关系

目的:探讨hTERT mRNA和survivin mRNA在尖锐湿疣中的表达及其相互关系。方法:采用原位杂交方法检测80例尖锐湿疣和正常皮肤组织中的hTERT mRNA和survivin mRNA的表达情况。结果:尖锐湿疣中hTERT mRNA阳性表达率(66.25%)明显高于正常皮肤(20%)(P<0.05);survivin mRNA阳性表达率(55%)明显高于正常皮肤(5.0%)(P<0.05);hTERT mRNA和survivin mRNA两者的表达密切相关(P<0.01)。结论:hTERT和Survivin的过表达在CA中起着重要的作用。Survivin可导致端粒酶活化,但端粒酶激活可能不完全依赖于Survivin的调控。     

hTERT mRNA在食管癌组织中的表达及意义

目的 研究凋亡调控基因hTERT mRNA在食管癌癌组织中的表达及意义.方法 采用RT-PCR检测52例食管癌组织、30例癌旁食管组织（距离肿瘤至少5 cm）和7例非食管癌黏膜组织中hTERT mRNA的表达情况.结果 hTERT mRNA在食管癌组织和癌旁食管组织中表达的阳性率明显高于非食管癌组织（P＜0.05）,食管癌组织中的表达阳性率与癌旁食管组织的表达阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）;hTERT mRNA在食管癌组织中的表达与患者年龄、病理类型、分化程度、浸润程度、淋巴转移和临床分期无相关性（P＞0.05）.结论 hTERT mRNA在食管癌组织中的表达可能是早期事件,检测hTERT mRNA的表达可能对食管癌的早期诊断及治疗具有指导意义.     

高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡与人端粒酶逆转录酶及端粒酶的关系

目的 研究高三尖杉酯碱(HHT)诱导白血病细胞调亡与细胞端粒酶和端粒酶逆转录酶(hTERT)水平的关系。方法 在体外，以HL60细胞株细胞为对象，采用半定量RT—PCR法检测hTERT mRNA表达量；采用端粒重复序列扩增法(TRAP)—酶联免疫吸附试验(ELISA)检测端粒酶活性；采用TUNEL法检测凋亡细胞。结果 与空白对照相比，HHT能够下调hTERT mRNA的表达。HHT浓度为0．005—0．030μg／m1时，HL60细胞hTERT mRNA表达无明显变化；当浓度增至0．040—0．050μg／m1，hTERT mRNA表达量下降至检测不出。0．020μg／m1 HHT作用18h后，hTERT mRNA表达呈下降趋势，24h后端粒酶活性明显下降，两者的下降趋势基本相似，但hTERT mRNA表达下降幅度较端粒酶活性下降幅度更大。在HHT作用下，HL60细胞凋亡率增加，而端粒酶活性及hTERT mRNA水平下降，且与HHT浓度或作用时间相关。结论 HHT下调端粒酶活性可能与hTERT mRNA转录水平下降有关。通过下降hTERT mRNA转录和端粒酶活性可能是HHT诱导HL60细胞凋亡的原因之一。     

hTERT mRNA在非小细胞肺癌的定量表达及意义

目的:探讨端粒酶逆转录酶(hTERT mRNA)定量表达在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的意义及其在NSCLC诊断中的价值.方法:用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测45例NSCLC组织和21例正常肺组织hTERT mRNA的定量表达情况.结果:[1]hTERT mRNA在NSCLC组织的表达量为2.854±0.728,正常肺组织为2.042±0.378,两者比较差异有统计学意义(t=-4.807,P<0.01);[2]hTERT mRNA表达与NSCLC的病理类型密切相关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期等无关(P>0.05).结论:hTERT mRNA过表达可能在NSCLC组织发生中起关键作用.hTERT mRNA的实时定量检测很可能有助于NSCLC的早期诊断.     

人端粒酶逆转录酶在喉鳞状细胞癌中表达与c-myc的相关性

目的研究人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA在喉鳞状细胞癌中和病理分级、临床参数的关系以及和c-myc的相关性。方法用原位杂交法检测40例喉鳞状细胞癌中hTERT mRNA的表达，用免疫组织化学法检测c—myc蛋白。结果喉正常组织、不典型增生、鳞癌组织中hTERT mRNA的阳性率分别为0％（0／10）、10％（1／10）、80％（32／40），喉鳞癌中hTERT mRNA的阳性率明显高于正常组织（P〈0．05）和不典型增生（P〈0．05），hTERT mRNA水平与c—myc的表达呈显著相关（r=0．5422，P〈0．01）。喉鳞癌中hTERT mRNA表达水平与病理分级不相关（P〉0．05），与年龄、性别、TNM分期和淋巴结转移情况不相关（P〉0．05）。结论喉鳞癌中hTERT mRNA的阳性率明显高于正常组织和不典型增生，有助于喉部良恶性病变的鉴别，c-myc的过度表达可能是喉鳞癌端粒酶活性升高的一个重要机制。     

甲状腺癌中端粒酶逆转录酶mRNA和Survivin的表达及意义

目的: 探讨甲状腺癌(TC)中端粒酶逆转录酶(TERT)mRNA和survivin蛋白的表达与细胞增殖和凋亡的关系.方法:采用原位杂交法、末端脱氧核苷酸酶标记法及免疫组化技术检测46例TC中TERT mRNA、细胞凋亡、增殖细胞核抗原(PCNA)和survivin蛋白的表达,20例良性病变作为对照.结果: TC的TERT mRNA和survivin的表达阳性率,增殖指数(PI),凋亡指数(AI)均显著高于对照组;TC中TERT mRNA和survivin的表达均与临床分期有关,survivin还与淋巴结转移有关;二者的表达呈显著正相关;TERT mRNA和survivin阳性表达的TC组织AI明显低于阴性组,而PI均显著高于阴性组(P＜0.05).结论: TERT和survivin特异性的表达于TC组织中,可能通过促细胞增殖和抗凋亡途径,参与TC的发生发展.     

食管癌中环氧化酶-2和人端粒酶逆转录酶mRNA的表达

目的 研究环氧化酶-2(COX-2)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在食管癌组织中的表达及意义.方法 采用RT-PCR检测46例食管癌组织及其对应的癌旁食管组织(距离肿瘤至少5 cm)和65例正常食管黏膜组织中COX-2和hTERT mRNA的表达.结果 COX-2和hTERT mRNA在食管癌组织和癌旁组织中表达的阳性率明显高于正常食管黏膜组织(P<0.05),而在食管癌组织中表达的阳性率与癌旁组织差异无统计学意义(P>0.05);COX-2和hTERT mRNA在食管癌组织中的表达与患者年龄、分化程度、浸润程度、淋巴转移和临床分期无关(P>0.05),而两者表达具有关联性(P=0.015).结论 COX-2和hTERT mRNA在食管癌组织中的表达可能均是早期事件,联合检测这两个基因可能对食管癌的早期诊断及相关治疗具有重要的意义.     

时间因素对电离辐射后AT细胞hTERT mRNA表达的影响

目的研究时间因素对电离辐射后共济失调性毛细血管扩张（ataxia telangiectasia，AT）综合征患者皮肤的成纤维细胞系AT细胞（AT5BIVA）hTERT mRNA表达的影响。方法以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞（GM0639）为对照，细胞经5Gy（剂量率1．0Gy／min）^60 Coγ射线照射后继续培养2、24、48、72h。应用RT-PCR法，观察AT细胞、ATM^＋-AT细胞和GM细胞的hTERT mRNA表达的变化。结果照射后细胞hTERT mRNA的表达随培养时间的增加而增加；AT细胞hTERTmRNA的相对表达量高于ATM^＋-AT细胞和GM细胞（P〈0．05），后两者无显著性差异（P〉0．05）。结论电离辐射能诱导细胞hTERT mRNA的持续表达；ATM能下调AT细胞hTERT mRNA的表达。     

三氧化二砷诱导T淋巴细胞白血病细胞株凋亡研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对T淋巴细胞白血病细胞株的作用及其机制.方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对细胞株的生长抑作用,流式细胞仪测定细胞凋亡峰,端粒重复扩增法检测端粒酶活性,实时RT-PCR测定端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达.结果2～6μmol/L As2O3可抑制Molt-4细胞生长,且随着时间的延长和药物剂量的增大,这种抑制作用更为明显(P<0.05).药物作用72h,As2O3对Molt-4细胞生长抑制半数致死量为4.68μmol/L.2～6μmol/L浓度范围内,As2O3诱导Molt-4细胞的凋亡率随时间的延长和药物剂量的增大而升高(P<0.05).6μmol/L药物作用96h,K562细胞和Molt-4细胞的凋亡率分别为83.44%±18.04%和77.93%±6.00%.As2O3能显著抑制Molt-4细胞株端粒酶活性,下调hTERT mRNA表达.结论As2O3有明显抑制T淋巴细胞白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用.通过下调hTERT mRNA表达,从而抑制端粒酶活性可能是As2O3的主要作用机制之一.     

口腔颌面肉瘤组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的：探讨口腔颌面部肉瘤组织中端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达.方法：应用原位杂交技术检测37例口腔颌面部肉瘤和14例良性间叶肿瘤组织中hTERT mRNA的表达,并探讨了肉瘤组织中hTERT表达与瘤细胞分化、临床复发或转移的关系.结果：肉瘤组织中hTERT mRNA的阳性表达率明显高于良性肿瘤（62.2% vs 14.3%,P＜0.05）.在高、中、低分化肉瘤组织中,hTERT mRNA阳性表达率分别为41.7%、50.0%和86.7%,其中高、低分化组差异有统计学意义（P＜0.05）;hTERT mRNA表达与肉瘤复发密切相关（P＜0.05）;发生淋巴结转移和（或）远处转移肉瘤组织中hTERT mRNA的阳性表达有升高的趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：在口腔颌面部肉瘤发生发展过程中hTERT基因可能起作用.检测hTERT mRNA表达对于评估口腔颌面部肉瘤的临床侵袭潜能及预后可能有参考价值.     

短发夹RNA沉默hTERT基因抑制裸鼠皮下人脑胶质瘤生长的实验研究

目的研究靶向人端粒酶逆转录酶（hTERT）的短发夹RNA（shRNA）对裸鼠人脑胶质瘤中hTERT基因表达的抑制作用,以及影响肿瘤增殖并诱导细胞凋亡的作用,为脑胶质瘤的基因治疗探讨新的依据。方法体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型。将成功造模的36只裸鼠随机分为3组（每组12只）。hTERT shRNA组肿瘤体内原位注射hTERT质粒shRNA（pshRNA）20μg＋脂质体60μl＋PBS;PBS组肿瘤体内原位注射PBS 150μl;空质粒组肿瘤体内原位注射空质粒20μg＋脂质体60μl＋PBS。观察肿瘤生长情况。苏木精-伊红染色观察肿瘤组织的病理改变,Western blot检测hTERT蛋白的表达,钙依赖性磷脂结合蛋白V＋碘化丙啶双染流式细胞仪测凋亡率。结果成功建立稳定的裸鼠U251细胞皮下移植瘤模型。治疗5周后hTERT shRNA组肿瘤体积较PBS组和空质粒组明显缩小,抑瘤率为58.2%;病理学检查hTERT shRNA组肿瘤生长受到抑制,肿瘤细胞散在稀疏,可见大量肿瘤细胞坏死及凋亡;Western blot示hTERT shRNA组hTERT蛋白表达受抑制;流式细胞仪检测hTERT shRNA组肿瘤细胞凋亡率明显高于PBS组和空质粒组（P〈0.01）。结论hTERT shRNA可在裸鼠移植瘤体内有效发挥作用,抑制人端粒酶逆转录酶蛋白在体内表达,从而能有效抑制裸鼠胶质瘤增殖生长,促进肿瘤细胞凋亡。     

RNAi靶向人端粒酶逆转录酶对人肝癌细胞的生长抑制作用

目的 利用RNAi技术降低人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,抑制其活性,研究其对人肝癌细胞的增殖和凋亡影响.方法 构建针对hTERT基因的siRNA真核表达载体pLXSN-EGFP-U6-siTERT,制备靶向hTERT的重组逆转录病毒;用重组逆转录病毒感染HepG2人肝癌细胞,以TRAP法检测端粒酶活性变化;流式细胞仅检测细胞凋亡率;MTT法检测肿瘤细胞生长抑制情况.结果 成功制备出hTERT siRNA逆转录病毒表达载体;重组病毒感染HepG2细胞24、48、72 h后端粒酶活性分别下降了23.84%、58.03%和85.01%(P＜0.05);感染后24 h细胞凋亡率29.05%;MTT实验结果显示肿瘤生长受到抑制,并存在一定量效和时效关系.结论 hTERT siRNA能特异性使hTERT基因表达抑制,端粒酶活性下降,肝癌细胞增殖受到抑制.     

端粒酶逆转录酶、RNA成分和相关蛋白1基因在肺癌组织中的表达及其临床意义

用逆转录PCR（RT－PCR）法对手术切除的40例肺癌组织，9例肺部良性实质性病变和22例癌旁正常组织的端粒酶逆转录酶（hTERT)、RNA成分（hTR)和相关蛋白1（hTEP1)mRNA表达进行了检测，并与肺癌的病理分型、TNM分期进行了比较。发现肺癌组织、肺部良性实质性病变、癌旁正常组织的hTR、hTEP1普遍呈阳性表达，3组间阳性率比较差异无显著性（P＞0.05)，而hTERT基因表达肺癌组织（32/40,80%)高于良性实质性病变（5／9，56％），也高于癌旁正常组织（3/22,13%)，3组间差异有极显著性（P＜0.001)。hTERT在肺癌组织中的表达率Ⅲ期（14／14，100％）高于Ⅱ期（11／14，78％）,Ⅱ期高于Ⅰ期（7／12，58％）。鳞、腺癌间hTERT mRNA表达无显著差异。结果表明：端粒酶基因表达上调在肺癌发生发展中起重要作用，端粒酶也参与部分肺说良性实质性病变发病机制；用RT－PCR检测hTERT mRNA表达有助于肺癌恶性程度的判断和肺部良、恶性病变的鉴别。     

端粒酶逆转录酶mRNA在胃癌中的表达及其意义

目的研究人类端粒酶逆转录酶(hTERT)在胃癌组织中的表达及其在胃癌发生发展中的作用.方法应用实时荧光定量PCR技术检测22例胃癌组织及癌旁正常黏膜组织中hTERT mRNA的表达水平,分析其与肿瘤恶性程度的关系.结果胃癌组织hTERT mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(P＜0.01),但不同胃癌TNM分期、组织分化程度之间的hTERT mRNA表达水平差别均无显著性意义(均P＞0.05).结论在胃癌组织中hTERT mRNA表达明显高于正常组织,可作为胃癌诊断的特异性指标之一.     

非小细胞肺癌hTERT mRNA的定量表达及与COX-2基因的相关性

目的:探讨端粒酶hTERT mRNA定量表达在非小细胞肺癌发生中的意义,及其与COX-2基因的相关性,并探讨hTERT激活的可能调节机制。方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测45例非小细胞肺癌组织及21例正常对照组的hTERT mRNA的定量表达水平,并用免疫组化方法检测其COX-2蛋白表达。结果:hTERT mRNA在非小细胞肺癌组织的表达量为2.854±0.728,显著高于正常肺组织2.042±0.378(t=-4.807,P<0.01)。相关分析显示,45例非小细胞肺癌中hTERT mRNA与COX-2蛋白表达水平呈正相关,相关系数(r=0.495,P<0.01)。结论:hTERT mRNA表达对非小细胞肺癌诊断具有潜在临床价值,hTERT的表达与COX-2表达存在显著相关性,支持COX-2的过度表达可能是端粒酶激活和调节的机制之一,选择性的应用COX-2抑制剂可能抑制非小细胞肺癌患者的端粒酶活性。     

端粒酶逆转录酶（hTERT）的分子调节机制

人端粒酶逆转录酶（hTERT）是端粒酶成分中的限速亚单位,是端粒酶活性调节的主要部分,细胞通过调节c-Myc、SP1、Mad、锌指蛋白2（MZF－2）、甲基化等调节hTERT的转录水平,或通过hTERT mRNA的不同剪切方式、分子之间相互作用、磷酸化和脱磷酸化等转录后途径调节hTERT。