L—焦谷氨酸对抗从氨酸钠诱发的大鼠皮层神经元损伤

目的：在大鼠皮层神经元研究Ｌ－吡咯烷酮羧酸（Ｌ－ＰＧＡ）对谷氨酸钠（Ｇｌｕ）诱发神经毒性的拮抗作用。方法：原代培养的皮层神经元取自１６ｄ龄的胎鼠,与Ｇｌｕ作用３０分钟,２４后测定神经元的存活及增益昌质中亚硝酸盐的浓度;以Ｆｕｒａ ２－ＡＭｏ ｘｌｅｑｍｗ 〖Ｃａ＾２＋〗;荧光探针,,ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统测定〖Ｃａ＾２＋〗ｉ。结果：Ｌ－ＰＧＡ１０－８０βｍｏｌ．Ｌ＾－１浓度依赖地抑制Ｇ     

谷氨酸钠免疫抑制效应的研究

本文研究谷氨酸钠对小鼠免疫功能的抑制作用。结果表明该药对抗体形成细胞(AFC)、特异玫瑰花形成细胞(SRFC)及淋巴细胞转化均有明显抑制效应。实验组与对照组相比,差异有高度显著性(p<0.01),故认为谷氨酸钠是一种新的低毒良效的免疫抑制剂.     

新鲜分离的新生大鼠皮层神经元的钙振荡

目的:研究新鲜分离的新生大鼠皮层神经元胞内钙离子浓度([Ca~(2 )]_i)发生振荡的机制。方法:采用酶解结合机械分离法从6—7日龄大鼠分离皮层神经元,用M40钙离子测量系统(PTI)测量细胞内钙离子浓度的变化。用Fura-2作为钙离子指示剂。结果:在观察到的82个神经元细胞中,47个产生了自发钙振荡。自发钙振荡依赖于胞外钙离子浓度。去除外钙后自发钙振荡立即停止。四乙铵1mmol/L引起钙振荡振幅增大,频率变快。CsCl 1mmol/L主要引起频率增加。BaCl_2 1mmol/L可使振幅、频率增高,并有明显的高台样基线增加。结论:皮层神经元在无突触联系的情况下具有产生自发[Ca~(2 )]_i振荡的特性,K~ 通道在决定钙振荡的幅值和频率方面起重要作用。     

谷氨酸钠诱导雄性肥胖大鼠下丘脑弓状核胃动素的表达研究

目的研究谷氨酸钠诱导雄性肥胖大鼠下丘脑弓状核胃动素阳性细胞的表达情况。方法取90只刚出生的雄性Wistar大鼠随机平均分为对照组和实验组,各45只。从第2天开始每隔1 d就分别皮下注射等量的谷氨酸钠和生理盐水,连续注射5次,每天记录体质量和身长,建立肥胖动物模型。90日龄时,用4%多聚甲醛灌注固定,断头取下丘脑,行冰冻切片免疫组化染色,观察下丘脑弓状核胃动素阳性细胞的表达情况。结果根据Lee指数计算显示实验组Wistar大鼠有86.7%(39只)因能量失衡而呈肥胖状态;免疫组化显示下丘脑弓状核胃动素阳性细胞的表达较对照组增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论谷氨酸钠诱导的雄性Wistar大鼠肥胖的机制可能与其下丘脑弓状核胃动素阳性细胞的表达增强有关。     

谷氨酸钠对小鼠吗啡依赖及戒断时血浆、脑内一氧化氮的影响

目的 :探讨兴奋性氨基酸的钠盐谷氨酸钠( Glu-Na)对小鼠吗啡依赖及吗啡戒断小鼠血浆、脑内一氧化氮的影响。方法 :皮下注射定量吗啡 ,建立小鼠吗啡依赖模型 ,腹腔注射纳洛酮催瘾。在注射吗啡同时每天早 8点用不同剂量 Glu-Na给小鼠灌胃 ( ig) ,观察小鼠戒断反应中出现的跳跃反应的潜伏期、跳跃次数和体重丢失 ,评定戒断反应的强度。用硝酸还原法检测血浆和脑内NO含量。结果 :三种不同剂量 ( 1 0 0、2 0 0、4 0 0 mg/ kg)的Glu-Na对小鼠吗啡戒断有加强作用 ,并呈量效关系。吗啡戒断小鼠脑内和血浆中 NO的含量明显高于正常小鼠 ,中剂量 ( 2 0 0 mg/ kg)的 Glu-Na可进一步提高吗啡戒断小鼠脑内和血浆中 NO的含量。结论 :Glu-Na可加强小鼠吗啡依赖 ,并提高吗啡戒断小鼠血浆和脑内一氧化氮含量     

以蛤蜊壳为钙源的L-焦谷氨酸钙制备工艺

目的 为了高值化利用海洋生物资源,以蛤蜊加工产生的大量废弃物——蛤蜊壳为钙源制备L-焦谷氨酸钙。方法 蛤蜊壳经去除附着物、粉碎、水飞法处理等预处理步骤制成粉末状钙源蛤蜊壳粉,使之与L-焦谷氨酸直接进行合成反应合成L-焦谷氨酸钙。为了获得最佳工艺条件,在蛤蜊壳粉过量的前提下,采用正交设计法考察了反应温度、反应时间对L-焦谷氨酸钙产量的影响,筛选了L-焦谷氨酸钙分离方法。结果 在反应温度为60 ℃,反应时间为3 h,采用真空浓缩到一定程度后再用95%乙醇使其结晶和重结晶,焦谷氨酸钙的产率最大可达88.82%。结论 该工艺具有工艺简便、耗能少、产率高等特点,既可以将蛤蜊壳高值化利用制得性能优良的补钙健脑食品,又能解决蛤蜊壳对环境的污染问题。     

Ebselen对自由基诱发的皮层神经元和皮层线粒体脂质过氧化损伤的保护作用

观察了ｅｂｓｅｌｅｎ对超氧阴离子Ｏ·－２和羟自由基·ＯＨ诱发的体外培养大鼠皮层神经元乳酸脱氢酶（ｌａｃｔｉｃｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＬＤＨ）释放，和ＴＢＡＲＳ（ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃａｃｉｄｒｅａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅ）含量升高及制备的皮层线粒体ＴＢＡＲＳ含量升高的影响。结果表明：超氧阴离子和羟自由基引起了培养神经元和线粒体明显的损伤。浓度在５～５０μｍｏｌ·Ｌ－１之间，ｅｂｓｅｌｅｎ能剂量依赖性地抑制ＬＤＨ释放和ＴＢＡＲＳ含量的增加，对线粒体的ＴＢＡＲＳ含量升高也有显著的抑制作用。但浓度为０．２～５０μｍｏｌ·Ｌ－１时，药物无直接清除超氧阴离子和羟自由基的活性。因此，ｅｂｓｅｌｅｎ对氧自由基诱发的神经元脂质过氧化损伤有拮抗作用，这种作用与直接清除自由基无关。     

Ebselen对自由基诱发的皮层神经元和皮层线粒体脂质过氧化损伤的保护作用

观察了ebselen对超氧阴离子O^·-₂和羟自由基·OH诱发的体外培养大鼠皮层神经元乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放,和TBARS(thiobarbituric acid reactive substance)含量升高及制备的皮层线粒体TBARS含量升高的影响。结果表明:超氧阴离子和羟自由基引起了培养神经元和线粒体明显的损伤。浓度在5～50μmol·L^-1之间,ebselen能剂量依赖性地抑制LDH释放和TBARS含量的增加,对线粒体的TBARS含量升高也有显著的抑制作用。但浓度为0.2～50μmol·L^-1时,药物无直接清除超氧阴离子和羟自由基的活性。因此,ebselen对氧自由基诱发的神经元脂质过氧化损伤有拮抗作用,这种作用与直接清除自由基无关。     

人参二醇组皂甙对大鼠皮层神经元钙通道的影响

目的研究人参二醇组皂甙（ＰＤＳ）对大鼠大脑皮层神经元膜Ｌ－型钙通道单通道电活动的影响。方法急性分离大鼠皮层神经元和细胞贴附膜片钳技术。结果ＰＤＳ（１．５ｇＬ－１）可明显缩短大鼠皮层神经元Ｌ－型钙通道的平均开放时间，延长其平均关闭时间，降低其开放概率，而对该通道的电流幅值无明显影响，其作用与经典钙通道阻断剂ｖｅｒａ－ｐａｍｉｌ相似但较弱。结论ＰＤＳ对大鼠皮层神经元Ｌ－型通道有明显阻滞作用。     

硝普钠对离体视上核神经元谷氨酸反应的影响

目的观察一氧化氮(NO)供体硝普钠(sodiumnitroprusside,SNP)对视上核(supraopticnucleus,SON)神经元谷氨酸反应的影响,以了解NO对SON细胞活动的调制作用。方法对成年大鼠下丘脑冠状切片SON神经元进行细胞内生物电记录,测定其细胞电生理参数。结果对12个SON细胞局部压力喷射微量谷氨酸,均诱发伴有膜电阻减小的去极化反应,并呈剂量和膜电位依赖性特征。SNP在67%的细胞使谷氨酸反应幅度降低(P<0.05,n=8),时程缩短(P<0.01),而在33%的细胞延长谷氨酸反应时程(P<0.05,n=4)。结论SNP对SON神经元谷氨酸反应具有抑制和增强两种不同的调制作用,提示NO对SON神经元的兴奋性突触传递可能有双向性影响。     

四氢吖啶类衍生物EDT抑制脑缺血及保护大鼠皮层神经元抗谷氨酸诱发的细胞毒性

目的：考察9—(4—乙氧羰基苯氧基)—6,7—二甲氧基—1,2,3,4—四氢吖啶盐酸盐(EDT)对大鼠局灶性脑缺血及谷氨酸(Glu)和硝普钠(SNP)致鼠皮层神经元损伤的作用．方法：灼断小鼠一侧大脑中动脉形成局灶性脑缺血模型,用氯化三苯基四氮唑（TTC)染色法测定脑梗塞率同时对神经症状进行评分．在原代培养的大鼠皮层神经细胞,采用MTT比色法,测定培养质内LDH及NO释放量．结果：EDT2．5、5和10mg／kg及尼莫地平2mg／kg灌胃5d显著改善局灶性脑缺血小鼠的神经运动功能,缩小脑梗塞范围．在原代培养的鼠皮层神经细胞,EDT 0．01—3μmol/L浓度依赖地对抗Glu诱发的NO过量形成,并提高MTT微量比色值,同时,减少SNP引起的LDH过量释放,提高细胞存活率．结论：EDT能有效对抗脑缺血损伤,其神经保护作用可能是通过阻断Glu受体及抑制NO生成而实现的．     

Amiloride blocks glutamate-operated cationic channels and protects neurons in culture from glutamate-induced death

The diuretic amiloride has been suggested as a specific inhibitor of T-type neuronal Ca²⁺ channels. The effects of amiloride on glutamate receptor-gated cationic channels and glutamate-induced, Ca²⁺-dependent neuronal death were investigated in primary neuronal cultures from neonatal rats. In primary cultures of cerebellar granule neurons of the rat, receiving 50 μM glutamate for 15 min, at 22°C, in the absence of Mg²⁺, about 80% of neurons were killed in about 24 hr. Exposure of neurons to such a pulse of glutamate, in the presence of various concentrations of amiloride, resulted in a dose-dependent protection from neurotoxicity (EC₅₀ 300 μM, complete protection 1 mM). In voltage-clamped cortical and cerebellar neurons of neonatal rats in primary culture, 100 μM amiloride diminished (by about 25%) glutamate- and/or NMDA-evoked cationic currents, recorded in the whole-cell mode. About 80% of the NMDA- (20 μM) stimulated current was inhibited by 700 μM amiloride. The inhibitory effect of amiloride was not voltage-dependent. In outside-out membrane patches, excised from granule cells and held at −50 mV, 100 μM amiloride changed the NMDA-elicited single channel activity into a fast flickering between the open and closed states. The noise analysis of the data revealed that, although resembling the Mg²⁺-induced flickering, the amiloride-induced channel block was more similar to the effects described for the action of local anaesthetics on the nicotinic cholinergic channel. The pharmacological relevance of this action of amiloride requires further characterization; the data point out the necessity of a cautious use of amiloride in studying neuronal function.     

阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用的影响

目的探讨MEK/ERK信号转导通路是否参与了阿魏酸钠(SF)对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用。方法以谷氨酸诱导大鼠皮层神经元凋亡为模型。采用Westernblot观察Bcl-2、caspase-3、磷酸化ERK1/2表达的改变。结果阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞caspase-3的表达,提高Bcl-2、磷酸化ERK1/2的表达。PD98059可以减弱SF的保护作用。结论 MEK/ERK1/2通路参与阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡。     

知母皂苷元对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用研究

目的观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用。方法大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长发育情况;用MTT法测定细胞活力;Ho-echst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测神经元SYP、caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果形态学观察结果显示谷氨酸可明显抑制神经元树突的生长发育,表现为神经元树突总长度明显降低、一级树突数目明显减少、最大分支级数明显减少及胞体面积缩小。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显抑制谷氨酸对神经元树突生长发育的抑制作用,并呈明显浓度依赖。MTT和Ho-echst33258核染色结果显示谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比。SAR(10、30、100μmol.L-1)能明显对抗谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加。Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP蛋白表达水平及增加活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗谷氨酸引起SYP蛋白表达降低及活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。结论知母皂苷元能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用。     

Effects of puerarin against glutamate excitotoxicity on cultured mouse cerebral cortical neurons

ＥｆｅｃｔｓｏｆｐｕｅｒａｒｉｎａｇａｉｎｓｔｇｌｕｔａｍａｔｅｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｎｃｕｌｔｕｒｅｄｍｏｕｓｅｃｅｒｅｂｒａｌｃｏｒｔｉｃａｌｎｅｕｒｏｎｓＤＯＮＧＬｉＰｉｎｇ１，ＷＡＮＧＴｉａｎＹｏｕ（ＢｅｉｊｉｎｇＮｅｕｒｏｓｕｒ...     

KN-62拮抗谷氨酸对神经细胞的兴奋毒作用(英文)

目的:研究钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-62对谷氨酸介导皮质神经元损伤及CCDPK Ⅱ活性下降的影响。方法:LDH释放代表神经元损伤,~(32)P掺入法测CCDPK Ⅱ活性,放射自显影显示后磷酸化水平变化。结果:只有在谷氨酸(100μmol·L~(-1),10min)作用前加KN-62可部分保护神经元损伤,明显拮抗CCDPK Ⅱ活性下降,活性由48.0％恢复到90.6％,显著抑制内源蛋白后磷酸化水平下降。结论:KN-62对CCDPK Ⅱ活性的保护作用是通过抑制CCDPK Ⅱ的自身磷酸化而实现的。     

Glutamate protects against Ca2+ paradox‐induced injury and inhibits calpain activity in isolated rat hearts

This study determined the effects of glutamate on the Ca²⁺ paradoxical heart, which is a model for Ca²⁺ overload‐induced injury during myocardial ischaemia and reperfusion, and evaluated its effect on a known mediator of injury, calpain. An isolated rat heart was retrogradely perfused in a Langendorff apparatus. Ca²⁺ paradox was elicited via perfusion with a Ca²⁺‐free Krebs‐Henseleit (KH) solution for 3 minutes followed by Ca²⁺‐containing normal KH solution for 30 minutes. The Ca²⁺ paradoxical heart exhibited almost no viable tissue on triphenyltetrazolium chloride staining and markedly increased LDH release, caspase‐3 activity, cytosolic cytochrome c content, and apoptotic index. These hearts also displayed significantly increased LVEDP and a disappearance of LVDP. Glutamate (5 and 20 mmol/L) significantly alleviated Ca²⁺ paradox‐induced injury. In contrast, 20 mmol/L mannitol had no effect on Ca²⁺ paradox. Ca²⁺ paradox significantly increased the extent of the translocation of μ‐calpain to the sarcolemmal membrane and the proteolysis of α‐fodrin, which suggests calpain activation. Glutamate also blocked these effects. A non‐selective inhibitor of glutamate transporters, dl ‐TBOA (10 μmol/L), had no effect on control hearts, but it reversed glutamate‐induced cardioprotection and reduction in calpain activity. Glutamate treatment significantly increased intracellular glutamate content in the Ca²⁺ paradoxical heart, which was also blocked by dl ‐TBOA. We conclude that glutamate protects the heart against Ca²⁺ overload‐induced injury via glutamate transporters, and the inhibition of calpain activity is involved in this process.     

羟丁酸钠在大鼠海马脑片缺氧/复氧损伤中的保护作用机制

目的：研究羟丁酸钠（SO）在大鼠海马脑片缺氧/复氧（H/R）损伤中的保护作用,揭示SO在缺血性脑损伤中的保护作用机制。方法：采用大鼠海马脑片H/R损伤模型。设正常对照组,H/R组,SO1、10、100μmol/L组,NCS-382100μmol/L＋SO100μmol/L（NCS-382＋SO）组、NCS-356100μmol/L（NCS-356）组。测定脑片孵育液中乳酸脱氢酶（LDH）释放率,γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸（Glu）含量;脑片进行TTC染色计算组织损伤百分率;HE染色观察组织病理形态学变化,流式细胞仪测定细胞内钙;酶组织化学法检测一氧化氮合酶（NOS）的表达。结果：SO明显降低H/R海马脑片LDH释放率（P〈0.01）,提高TTC染色的A490值,降低组织损伤百分率（P〈0.01）,升高GABA/Glu比值（P〈0.01）,减轻H/R所致的组织病理损伤。H/R组脑片细胞内钙荧光强度和NOS阳性神经元明显高于正常对照组（P〈0.01）;SO100μmol/L组、NCS-356组细胞内钙荧光强度较H/R组显著减弱（P〈0.01）,NOS阳性神经元的数目明显减少（P〈0.01）。用γ-羟基丁酸（GHB）受体选择性阻断剂NCS-382后再使用SO,细胞内钙荧光强度、NOS阳性神经元的数目均接近H/R组。结论：SO对大鼠海马脑片H/R损伤有明显的保护作用,其机制可能与升高GABA/Glu比值,激动GHB受体抑制细胞内钙的增高及NOS的表达有关。