骨碎补有效成分柚皮甙对人骨髓间充质干细胞的影响

目的探讨骨碎补的有效成分柚皮甙对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖、分化的影响。方法将骨碎补的有效成分柚皮甙以及成骨诱导液(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠)与hMSCs共同体外培养,用倒置显微镜观察细胞生长情况、CCK-8法检测细胞的毒性和增殖作用、碱性磷酸酶(ALP)活性测定、von kossa钙结节染色。结果50μg/L柚皮甙对细胞无毒性、能促进hMSCs增殖,碱性磷酸酶(ALP)活性、von kossa钙结节染色与空白对照组比较有明显差异(P<0.05)。结论柚皮甙对hMSCs有保护作用并能促进其增殖、分化。     

GM-1对培养的人胚神经干细胞增殖和分化的影响

目的：观察不同剂量神经节苷脂（GM－1）对神经干细胞增殖和分化的影响。方法：从人胚胎脑组织分离出神经干细胞，培养于含bFGF（阳性对照组）和B27（阴性对照组）的DMEM／F12细胞培养液中，实验组培养液中分别加入0．335μg/L，3．35μg/L及33．5μg/L的GM－1，用MTT比色分析法测定细胞增殖能力，用含体积分数3％血清的DMEM／F12培养液诱导细胞分化，每间隔6h于倒置显微镜下观察细胞分化情况，结果：5d,10dMTT比色显示，GM－1（33．5μg/L）组与阳性对照组比较，P均＞0．05，与阴性对照组比较，P均＜0．05，GM－1（0．335μg/L）组，GM－1（3．35μg/L）组与阴性对照组比较，P均＞0．05。分化实验发现，接种6h后，体积分数3％血清＋DMEM／F12组神球周边可见明显的细胞突起，呈放射状向周围伸出，而3个实验组和阴性对照组的细胞突起短且细小，随着培养时间的延长，各组的细胞突起逐渐伸长，3个实验组分化能力低于对照组，与阴性对照组之间无明显差异，结论：GM－1能够维持神经干细胞的原始神经状态，促进神经干细胞的增殖，对神经干细胞无明显的诱导分化作用。     

重组人促红细胞生成素对骨髓间充质干细胞增殖及分泌功能的影响

目的观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对人骨髓间充质干细胞（hMSCs）增殖及分泌功能的影响。方法体外扩增培养hMSCs,将rhEPO对hMscs进行处理,MTT比色法检测细胞活性,ELISA法测定细胞VEGF的分泌,流式细胞仪检测细胞表面抗原表达。结果hMscs增殖变化的A。值在不同浓度rhEPO作用后明显高于对照组（P〈0．01）,hMscs分泌的VEGF水平在高浓度（10U／mL）rhEPO作用后明显高于对照组及低浓度组（0．2U／mL）（P〈0．01）,而低浓度组VEGF水平亦高于对照组（P〈0．05）,细胞表面抗原CD34、CD105、CD106在rhEPO作用后与对照组相比无明显差异。结论rhEPO对hMscs有明显的促进增殖作用,rhEPO有促进hMscs分泌VEGF的作用,且与rhEP0浓度存在正相关趋势;rhEPO对hMscs的分化影响不明显。     

白藜三醇对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞增殖及HIF—1α表达的影响

摘要：目的研究白藜三醇（resveratrol,Res）对缺氧状态下人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC）增殖及低氧诱导因子（hypoxia-induciblefactor1,HIF-1μ）表达的影响。方法自藜三醇预孵育HUVEC2h后,采用氯化钴（CoCl2）化学方法制作缺氧模型,实验分为3组进行：正常组（NC）、缺氧组（HY）、药物组（0．1、1、5、10、50μmoL／LRes）。应用CCK-8法检测各组HUVEC增殖情况,免疫细胞化学法和Westernblot检测各组细胞内HIF-1α的表达。结果①缺氧组及药物组（0．1、1、5、10μmol/L）与正常组相比细胞增殖增加（P〈0．01）;1、5μmoL／L药物组与缺氧组比较细胞增殖增加（P〈0．01）,5μm0L／L药物组与其他各浓度组比较细胞增殖增加（P〈0．01）。②正常组HUVEC胞质内HIF-1α 仅微量表达;缺氧组胞质内HIF-1α阳性表达,较正常组增多,显色呈黄褐色;药物组（5μmol／L）胞质内HIF-1α强阳性表达,显色呈深黄褐色。③缺氧组与正常组相比HIF-1α 蛋白表达增加（P〈0．05）,药物组（1、5μmol／L）与正常组相比HIF-1α蛋白表达增加（P〈0．01）;1μmol／L药物组与缺氧组相比HIF-1α蛋白表达增加（P〈0．05）,5μmol／L药物组明显增加（P〈0．01）。结论白藜三醇可能通过促进HIF-1α 的表达而促进血管内皮细胞增殖,从而对新生血管的形成起到一定促进作用。     

白藜三醇对人脐静脉内皮细胞增殖及NO表达的影响

目的观察白藜三醇对正常状态下人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HU—VECs）磷酸化蛋白激酶B（P—Akt）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（P-NOS）及一氧化氮（NO）表达的调节作用,探讨白藜三醇对HUVECs增殖的影响及可能机制。方法实验分组：DMEM高糖（〈4．5mg／L）培养基培养组（正常组）、白藜三醇组（分为0．2、1、5、10、20μmol／L5个剂量亚组）、白藜三醇＋LY294002组、LY294002组（阻断剂组）。其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,P13-K）抑制剂。应用CCK-8法检测细胞增殖情况;Westernblot检测各组细胞内蛋白激酶B（Akt）、P—Akt、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、P-eNOS蛋白的表达;硝酸还原酶法检测细胞培养液中NO的浓度。结果①白藜三醇组1、5μmol／L2个剂量亚组与正常组相比细胞增殖增加（P〈0．01）,5μmol／L亚组与0．2、10、20μmol／L亚组相比细胞增殖增加（P〈0．01）;白藜三醇20μmol／L对细胞增殖有抑制作用（P〈0．01）。②与对照组比较,白藜三醇组P-Akt（P〈0．01）、P-eNOS（P〈0．05）蛋白表达增加;与白藜三醇组比较,白藜三醇＋LY294002组P-Akt、P-eNOS蛋白表达降低（P〈0．01）。③与对照组比较,白藜三醇组NO表达增加（P〈0．05）;与白藜三醇组比较,白藜三醇＋LY294002组NO表达降低（P〈0．01）。结论白藜三醇可能通过P13-K／Akt／eNOS信号通路诱导正常状态下内皮细胞NO表达的增加,从而促进内皮细胞增殖。     

中药单体成分大黄素对胰岛β细胞NIT-1的影响

目的研究中药提取的单体成分大黄素对胰岛β细胞NIT-1增殖、凋亡及胰岛素分泌作用的影响。方法不同浓度的大黄素分别作用于NIT-1细胞不同时间。以MTT法检测细胞的增殖活性；收集细胞，以Annexin V／PI染色，经流式细胞术检测细胞凋亡发生率；收集细胞培养上清液测定基础和高糖刺激后胰岛素分泌量。结果2．5μg／mL大黄素作用于NIT-1细胞时对其增殖无明显影响，5．0μg／mL以上对NIT-1细胞增殖的影响呈时间和剂量依赖性降低（P〈0．01）；0～25．0μg／mL大黄素分别作用于NIT-1细胞24h后，细胞凋亡率呈浓度依赖性增加（P〈0．05）；0～5．0μg／mL大黄素分别作用于NIT-1细胞24h后，基础胰岛素分泌量呈浓度依赖性降低（P〈0．05）；高糖刺激后胰岛素分泌量在大黄素0和2.5μg／mL组间无差别，而在5．0μg／mL组则明显降低（P〈0．05）。结论大黄素可诱导胰岛细胞凋亡，并抑制胰岛素分泌。     

大黄酸-雌酮对大鼠成骨细胞增殖和分化的作用

【目的】研究大黄酸-雌酮（LC-1）对原代培养大鼠成骨细胞增殖和分化的作用。【方法】酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞；采取MTT法测定细胞增殖，磷酸苯二钠法（pNPP）测定细胞内外碱性磷酸酶（ALP）活性，研究不同浓度LC-1对成骨细胞增殖和分化能力的影响，并与雌酚酮和大黄酸的作用进行比较。【结果】给药3d后，与空白对照组相比：10^-6mol／L LC-1组、10^-7mol／L LC-1组和10^-7mol／L雌酚酮组明显促进成骨细胞增殖和增加细胞内外ALP活性（P〈0．05）；大黄酸抑制成骨细胞增殖，其中10^-6mol／L组有明显差异（P〈0．05），同时有增加细胞ALP活性的趋势，但无统计学差异。【结论】大黄酸-雌酮在体外可以促进成骨细胞增殖和分化。     

4种异黄酮改构化合物对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖活性的比较

目的观察4种异黄酮改构化合物（F8、F11、ZF3和ZF7）对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。方法采用胶原酶消化十二次筛网过滤法原代培养人子宫内膜腺上皮细胞。MTT法检测并比较4种化合物对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。结果成功培养原代人离体子宫内膜腺上皮细胞并稳定传代。4种异黄酮化合物作用于人子宫内膜腺上皮细胞24h后，低剂量（25μmol／L）F8显著促进细胞增殖（P〈0．05），中高剂量（50、100μmol／L）F11显著抑制细胞增殖（P〈0．05）；作用48h后，中剂量（50μmol／L）F11和ZF3显著抑制细胞增殖（P〈0．05），高剂量（100μmol／L）化合物均显著抑制细胞增殖（P〈0．05）；作用72h后，除低剂量（25μmol／L）F8、ZF3和ZF7未明显抑制细胞增殖外（P〉0．05），各化合物在不同剂量下均抑制细胞增殖效应（P〈0．05）；该生物学效应具有时间和剂量依赖性。结论4种异黄酮化合物在一定剂量下作用一段时间后可抑制人离体子宫内膜腺上皮增殖。F11抑制细胞增殖活性最强。     

Sysmex F-820血细胞分析仪血红蛋白实验评价

目的 评价F-820全自动血细胞分析仪血红蛋自检测结果的准确性。方法 以50g／L，100g／L，150g／L，200g／L 4种不同浓度血红蛋白标准液分别校准仪器，检测40例健康体检者血红蛋白含量所得结果与ICSH推荐的氰化高铁血红蛋白法进行比较。结果 以50g／L，100g／L血红蛋白标准液校准仪器，所得结果与国际参考法比较差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．05）。以150g／L，200g／L血红蛋白标准液校准仪器，所得结果与国际参考法比较差异无统计学意义（P〉0．05，P〉0．05）。结论 血细胞分析仪使用一定时期，其结果的准确性会发生改变，应定期校准仪器，以保证仪器测定的准确度。     

胰岛素样生长因子-1诱导新生小鼠海马源性神经干细胞增殖分化的研究

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对新生小鼠海马源性神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法通过取新生C57BL／6J小鼠海马组织,机械分离,体外培养NSCs,特异性标志蛋白Nestin免疫荧光鉴定。在细胞培养液中加入100μg／L的IGF-1记为IGF-1组,同时设立正常细胞对照组。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,GFAP、133Tubulin细胞免疫化学检测细胞分化情况。结果体外成功培养NSCs,特异性蛋白Nes-tin具有表达。IGF-1组NSCs较对照组增殖显著,且IGF-1组细胞具有显著的迁移和分化能力。细胞免疫荧光鉴定,IGF-1可促进细胞分化为星形胶质细胞和神经元（P〈0．05）。结论IGF-1能够促进体外培养的新生小鼠海马源性NSCs增殖,并诱导NSCs向星形胶质细胞和神经元分化。     

骨碎补总黄酮在肿瘤坏死因子α介导下对成骨细胞凋亡的影响

目的：通过观察骨碎补总黄酮在肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）介导下对成骨细胞增殖和凋亡的影响,探讨其防治类风湿关节炎骨质疏松症的作用机制。方法：20只雌性Wistar大鼠,随机分为空白对照组（蒸馏水灌胃）和骨碎补总黄酮组（强骨胶囊灌胃）制备血清。骨碎补总黄酮组大鼠每日强骨胶囊给药剂量为75mg,每日给药2次,2mL/次,连续给药3d,末次给药1h后,心脏采血收集血清备用。细胞实验分为4组：空白血清组、骨碎补总黄酮含药血清组、空白血清＋TNF-α组和骨碎补总黄酮含药血清＋TNF-α组。应用噻唑基四唑法测定成骨细胞的增殖,流式细胞仪测定成骨细胞的凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应法测定Bcl-2和Bax mRNA表达量。结果：与对照血清相比,骨碎补总黄酮含药血清在TNF-α介导下能够促进成骨细胞增殖（P〈0.05）;减少成骨细胞的凋亡（P〈0.05）,增加Bcl-2/Bax比值。结论：骨碎补总黄酮含药血清在TNF-α介导的炎症环境下能够促进成骨细胞增殖,减少成骨细胞凋亡,可能是通过调节Bcl-2/Bax mRNA比例来实现的。     

柚皮苷抑制腰5脊神经结扎引起的神经病理性疼痛

【目的】 观察不同剂量柚皮苷对腰5脊神经结扎加切断(L5 SNL)引起的神经病理性疼痛的抑制作用&#65377; 【方法】 利用行为学测试的方法,我们检测了口服柚皮苷对L5 SNL大鼠50%机械刺激撤足阈值的影响&#65377;【结果】 30, 90,100 mg/kg柚皮苷可显著提高L5 SNL大鼠的50% 机械刺激撤足阈值,10 mg/kg无效&#65377;单次给药(30或90 mg/kg)对大鼠50%机械刺激撤足阈值缓解作用可达6 h左右,连续7天给予柚皮苷(30 mg/kg,每天1次)其作用可持续至停药后4 d&#65377;【结论】 口服柚皮苷可缓解外周神经损伤引起的神经病理性疼痛&#65377;     

红曲有效成分对体外培养成骨细胞增殖分化及矿化功能的影响

[目的]通过红曲有效成分对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能影响的研究,对有效成分抗骨质疏松症的作用机理进行初步探讨。[方法]取成年SD大鼠40只,随机分为空白组、倍美力组、-αD3组、红曲有效成分组4组,每组10只,分别予以生理盐水、倍美力水溶液、-αD3水溶液及红曲有效成分水溶液灌胃,10d后,制备含药血清;将从出生24h内的新生大鼠颅骨取材的成骨细胞培养于上述含药血清培养基中,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、BMP-2免疫组化染色及茜素红染色方法观察红曲有效成分对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶表达、BMP-2表达及矿化结节形成的影响。[结果]红曲有效成分组的成骨细胞数量、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成明显增加,而且发现BMP-2阳性率高于空白组。[结论]红曲有效成分能治疗骨质疏松症,其机制可能是通过促进成骨细胞增殖、分化、矿化及BMP-2表达来实现的。     

单细胞电泳观察双氢青蒿素对K562细胞DNA的损伤作用

【目的】研究双氢青蒿素对人红白血病K562细胞DNA的损伤作用。【方法】体外培养人红白血病K562细胞,加不同浓度双氢青蒿素处理24 h后,MTT法测定IC50;用单细胞凝胶电泳技术观察双氢青蒿素对K562细胞DNA的损伤情况。【结果】双氢青蒿素处理细胞后,MTT检测IC50为8×10^-5mol/L;单细胞凝胶电泳显示双氢青蒿素作用24 h后可见明显的彗星状拖尾,而对照组细胞呈现明亮圆点。【结论】双氢青蒿素可抑制K562细胞的生长,对其DNA有致损效应。     

阿托伐他汀对骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化的影响

目的比较不同浓度的阿托伐他汀对小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化、矿化成骨的影响。方法分别将10^-8、10^-7、10^-6mol／L的阿托伐他汀和空白药物加入传代培养的小鼠骨髓基质细胞，通过细胞形态学观察、细胞增殖率检测、碱性磷酸酶（ALP）检测和钙结节染色，比较药物在成骨细胞分化过程中对细胞增殖和分化的影响。结果阿托伐他汀可以剂量依赖性方式抑制骨髓基质细胞的增殖，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组较明显（均P〈0．05）。阿托伐他汀可以提高骨髓基质细胞ALP活性，培养10～22d，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组ALP活性高于对照组和10^-8mol／L组（均P〈0．05）。矿化成骨染色显示在培养26d后，10^-6mol／L组染色明显深于其它各组。结论阿托伐他汀可促进骨髓基质细胞来源的成骨细胞的分化，抑制了细胞增殖，促进骨结节钙化。     

骨碎补柚皮苷对人牙周韧带细胞增殖和成骨分化潜能的影响

目的:探讨骨碎补柚皮苷对人牙周韧带细胞的增殖能力以及成骨分化潜能的影响.方法:MTT法检测在含有不同浓度骨碎补柚皮苷的细胞培养液中人牙周韧带细胞的增殖特性;检测不同浓度骨碎补柚皮苷作用后人牙周韧带细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性的改变.结果:骨碎补柚皮苷≥0.01 μmol/L时能增进人牙周韧带细胞增殖(P<0.05),并能增加其ALP活性(P<0.05).结论:骨碎补柚皮苷可提高人牙周韧带细胞的增殖能力及成骨分化的潜能.     

总姜黄素在大鼠体内的药动学研究

【目的】建立大鼠灌胃总姜黄素溶液后血浆中姜黄素的高效液相色谱（HPLC）测定方法，进行大鼠体内药动学研究。【方法】大鼠灌胃总姜黄素溶液后，不同时间眼底静脉丛取血，制备血浆，血浆样品经液-液萃取以后，以大黄素为内标，进行HPLC检测。色谱条件Hypersil C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈-2．0％醋酸水溶液（46：54），检测波长为UV420nm。【结果】姜黄素的线性范围为2-300mg／L，最低定量限为2mg／L，日内、日间峰面积（RSD）分别≤5．08％和≤7．93％。【结论】此法灵敏、快速、准确，可用于大鼠血浆中姜黄素浓度的测定和临床前药代动力学研究。     

骨碎补总黄酮对大鼠成骨细胞VEGF和FGF-2表达的影响

目的：观察骨碎补总黄酮对体外培养大鼠成骨细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2,FGF-2）表达以及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性和矿化结节的影响。方法：在大鼠成骨细胞体系中加入不同浓度的骨碎补总黄酮作用24 h和48 h。采用ELISA和RT-PCR法检测VEGF和FGF-2表达变化,PNPP法检测ALP活性以及von Kossa染色检测矿化结节形成。结果：骨碎补总黄酮可刺激VEGF和FGF-2,使其在蛋白和mRNA水平表达均明显升高,显著提高成骨细胞ALP的活性和促进矿化结节的形成。结论：骨碎补总黄酮可提高成骨细胞VEGF和FGF-2的表达,促进其成骨作用。     

三棱提取物抑制糖酵解限速酶抗黑色素瘤机制研究

目的 探究三棱抗黑色素瘤的分子作用机制及其有效物质基础.方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCM-SP)检索三棱的活性成分及对应的靶点,利用GeneCards数据库检索黑色素瘤疾病靶点,借助Cytoscape3.7.2软件绘制药物-疾病靶点蛋白互作(PPI)网络,并筛选出核心靶点,再根据DAVID数据库平台进行...