治疗2型糖尿病药物葡萄糖激酶激活剂的研究进展

葡萄糖激酶是己糖激酶家族成员,在细胞内司职葡萄糖磷酸化生成6-磷酸葡萄糖,对体内葡萄糖稳态起关键性作用。肝脏中,在葡萄糖激酶作用下葡萄糖磷酸化以促进糖原合成;而在β细胞中,其刺激诱导胰岛素释放。葡萄糖激酶激活剂可增加该酶对葡萄糖的敏感性及胰岛素分泌和肝脏糖原的合成,减少肝脏葡萄糖输出。在2型糖尿病动物模型中,一些小分子葡萄糖激酶激活剂已证实是有效的降糖剂,有的已经进入临床试验。     

以葡萄糖激酶为靶点治疗2型糖尿病的实验研究进展

目的探讨以葡萄糖激酶为靶点治疗2型糖尿病药物的研究现状。方法参阅国内外发表的相关文献,综述葡萄糖激酶激活剂、葡萄糖激酶调节蛋白以及突变的葡萄糖激酶基因对2型糖尿病治疗的效果及影响。结果3种方法均能不同程度地调节2型糖尿病动物的血糖水平,但其具体作用机制及其副作用有待进一步研究。结论以葡萄糖激酶为靶点来调控血糖水平可能是一种安全有效的措施。     

葡萄糖激酶和NIDDM的候选基因

非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的发病涉及多种基因和多种环境因素,属多基因病。葡萄糖激酶(GCK)又称己糖激酶D,是己糖激酶的同工酶,仅在肝细胞和胰岛β细胞中表达。GCK催化葡萄糖磷酸化为葡萄糖-6-磷酸(G6P),即葡萄糖代谢的第一步,并对β细胞释放胰岛素起葡萄糖感受器作用。它对葡萄糖的Km值很高(5～15mM),且不被其产物G6P抑制。近年来研究表明,GCK基因在NIDDM遗传易感性中起着重要作用。本文就GCK基因的结构和表达,及GCK基因突变与NIDDM的关系作一介绍。     

葡萄糖激酶基因启动子区-30位G/A变异与2型糖尿病的相关性研究

目的探讨葡萄糖激酶基因-30位启动子G/A变异与中国云南人2型糖尿病是否存在关联.方法运用PCR-RFLP分析方法在389例无亲缘关系之中国云南汉族人中对GCK基因变异进行检测.结果在2型糖尿病患者组中GG、GA和AA基因型频率分别为63.1%、31.9%和5.0%;健康对照者组中分别为66.4%、31.8%和1.8%,A等位基因频率在2型糖尿病患者组中和健康对照组中分别为21.0%和17.7%,基因型频率以及等位基因频率在2型糖尿病患者与健康对照者两组之间无显著性差异.结论在中国云南昆明地区的汉族人中存在胰岛β细胞GCK基因启动子-30位G/A变异的多态性,此G/A变异虽然可能对胰岛β细胞功能降低起促进作用,但在无其它相关基因变异以及糖尿病易感因素的存在下,对2型糖尿病的发生不起主要作用,也可以说此多态性与2型糖尿病不存在关联.     

中国迟发型2型糖尿病患者葡萄糖激酶基因突变研究

目的：探讨中国迟发型2型糖尿病患者葡萄糖激酶(glucokinase，GCK)基因的突变情况。方法：收集了中国汉族47个迟发型2型糖尿病(1ate-onset Type 2 diabetes)家系，应用多聚酶链反应-单链构像多态性(polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism，PCR-SSCP)的分析方法，对先证者GCK基因12个外显子进行突变检测。结果：6，9号外显于SSCP电泳时，出现异常电泳条带。测序证实在6号内合子38bp处发生C→T的单个碱基改变，变异基因频率为35．1％；9号内合于8bp处发生C→T的单个碱基改变，变异基因颠率为57．5％。结论：发现了中国人两个单核苷酸多态位点：IVS6—38C→T；IVS9—8C→T。GCK基因突变不是中国汉族迟发型2型糖尿病的主要致病原因。     

葡萄糖激酶基因启动子区-30位点多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的 探讨葡萄糖激酶(glucokinase,GCK)基因启动子区-30位点多态性与2型糖尿病及其各项指标之间的关系.方法 运用PCR-RFLP分析方法在389例无亲缘关系的个体中对GCK基因多态性进行检测.结果 在2型糖尿病患者组中GG、GA和AA基因型频率分别为63.1%、31.9%和5.0%;健康对照者组中分别为66.4%、31.8%和1.8%.结论 GCK基因启动子区-30位点多态性对2型糖尿病的发生不起主要作用,但两个变异等位基因同时存在时,发生2型糖尿病的年龄有所提前,而且可不伴有肥胖.     

葡萄糖激酶调节蛋白的研究进展

葡萄糖激酶调节蛋白(glucokinase regulatory protein，GKRP)是一种主要存在于肝细胞内分子量68kDa的蛋白质，能与葡萄糖激酶(glucokinase，GK)结合而抑制其活性。由于葡萄糖激酶在糖代谢中的重要作用：GK基因突变与青年发病型糖尿病(maturity—onset diabetes of theyoung，MODY)发病的关系，尤其是最近发现的GKRP对糖尿病的治疗作用，使GKRP的研究价值得到了进一步的肯定。GKRP基因治疗可能会成为2型糖尿病治疗史上的新突破。     

胃旁路术对2型糖尿病大鼠肝脏葡萄糖转运体-2及葡萄糖激酶表达的影响

目的：观察胃旁路术（GBP）对自发性2型糖尿病（T2DM）大鼠（GK大鼠）肝细胞葡萄糖转运体-2（GLUT-2）及葡萄糖激酶（GCK）表达的影响,探讨其改善胰岛素抵抗的机制。方法30只8周龄雄性GK大鼠按照随机数字法分为手术组（10只）、假手术组（10只）、饮食配对组（10只）,另8周龄雄性SD作为空白对照组（10只）。检测和比较术前及术后1、2、4周各组大鼠空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）水平,应用蛋白印迹（Western blot）及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测各组术后4周肝脏组织GLUT-2、GCK mRNA及其蛋白的表达情况。结果 GK手术组术后1、2、4周FPG （（11.06±0.52） mmol／L、（7.49±0.34）mmol／L、（5.20±0.08）mmol／L）均低于术前水平（17.53±0.57）mmol／L）（均P＜0.05）;术后4周FINS由术前（11.90±0.75）mmol／L升至（14.20±1.23）mmol／L（P＜0.05）;术后4周GLUT-2、GCK mRNA及其蛋白表达明显增加（P＜0.01）。结论 GBP能上调T2DM大鼠肝细胞胰岛素信号转导通路中GLUT-2及GCK的表达,增强胰岛素受体后的信号转导,提高胰岛素的敏感性。     

葡萄糖激酶基因多态性与中国人非胰岛素依赖型糖尿病相关 …

目的：探讨葡萄糖激酶基因与中国北方汉族人非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）的关系。     

2型糖尿病小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1表达

目的探讨2型糖尿病动物模型KKAy小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和组织纤溶酶原激活物(tPA)mRNA表达与肾脏细胞外基质蓄积的关系.方法选取8周龄雄性KKAy小鼠和C57BL-J小鼠,分别于16、20和24周处死.采用发色底物法检测不同周龄的KKAy小鼠及参照组C57BL/J小鼠的血浆PAI-1活性,RT-PCR法检测小鼠肾皮质tPA mRNA表达,原位杂交法检测肾皮质PAI-1 mRNA水平,免疫组织化学和免疫印迹法检测肾皮质层粘连蛋白表达.结果不同周龄KKAy小鼠肾皮质层粘连蛋白表达均高于同龄对照组(P＜0.05).2型糖尿病KKAy小鼠与C57BL/J小鼠血浆PAI-1活性的差异没有显著性(P＞0.05);但肾皮质tPA mRNA水平却显著降低,以16周时最为显著,仅为C57BL/J小鼠的47%,随周龄的增加,其差异逐渐减小.原位杂交显示KKAy小鼠PAI-1mRNA可在肾脏多部位表达,并以近端小管上皮细胞内的表达为主,且明显高于同龄C57BL小鼠.结论2型糖尿病KKAy小鼠早期肾病时,细胞外基质蛋白的蓄积可能和tPA mRNA表达下调及PAI-1 mRNA表达上调所致的纤溶酶降解细胞外基质作用降低有关.     

纤溶酶原激活物抑制剂-1与糖尿病足发病关系的研究

目的: 探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)与糖尿病足(DF)发病的关系,为DF的防治提供依据。方法: 42例DF患者为DF组,38例糖尿病(DM)无DF患者为DMNDF组,45名体检健康者为对照组,比较3组间PAI-1、糖基化血红蛋白(HbA1c)、C反应蛋白(CRP)等指标水平的变化。结果: 对照组、DMNDF组、DF组PAI-1、HbA1c、CRP依次升高,且差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01)。结论: DF患者PAI-1水平较高;对2型DM患者进行积极干预治疗,降低PAI-1水平,提高纤溶活性,可能延缓动脉硬化、狭窄,减少DF的发生。     

Study on effect of different dosages of ligustrazine on level of plasminogen activator inhibitor-1 activity in type 2 diabetes mellitus patients

Objective: To observe the effect of different dosages of ligustrazine (LG) on the level of plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) activity in patients with type 2 diabetes mellitus.Methods: Ninety cases of type 2 diabetes mellitus inpatients were selected, and randomly divided into LG small dosage group (SDG), LG large dosage group (LDG) and control group. The 120 mg LG, 400 mg LG and normal saline 250 ml were given through intravenous dripping respectively, once daily, 20 days as one treatment course. Before and after treatment, all the patients had their fasting blood taken for PAI-1 and tissue plasminogen activator (t-PA) assessment test to perform the comparative study.Results: Seventythree out of the 90 patients completed the observation course, the PAI-1 activity of three groups after treatment all lowered compared with that before treatment, and the difference between groups was also significant (allP < 0.01). After treatment the PAI-1 level of SDG and LDG of LG were all markedly lowered (allP < 0.01), the LDG’s lowering was more evident than that of SDG, and comparison between these two groups of patients showed significant difference (P < 0.01). Although in the control group there was some difference between before and after treatment, it was not so significant like the above-mentioned two groups (P = 0. 0140). No adverse reaction occurred in the 3 groups during the observation period.Conclusion: LG could safely and effectively lower type 2 diabetes mellitus patient’s plasma PAI-1 activity level, and LDG of LG proved to be particularly effective.     

PAI-1基因多态与中国人2型糖尿病肾病的相关性

目的探讨纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)基因多态与上海地区中国人2型糖尿病肾病的相关性。方法选取2型糖尿病(T2DM)患者247例组成T2DM组,其进一步分为糖尿病无肾病组(n=80)和糖尿病肾病组(n=167),后者又分为微量蛋白尿肾病组(n=129)和显著蛋白尿肾病组(n=38);同时设立非糖尿病对照组(n=87)。应用等位基因特异性PCR法(ASP法)检测PAI-1基因启动子区——675 bp处的4G/5G多态,确定各组PAI-1基因的基因型。采用χ2检验对组间各基因型频率及等位基因频率进行比较,并比较组间携带纯合子风险等位基因4G/4G的基因型频率差异。结果T2DM组与非糖尿病对照组相比,4G/4G基因型及4G等位基因频率无统计学差异(P>0.05)。与糖尿病无肾病组相比,糖尿病肾病组4G/4G基因型频率显著增加(P<0.01,OR=2.4,95%C I=1.3～4.4),4G等位基因频率亦显著增加(P<0.05,OR=1.6,95%C I=1.1～2.3)。结论PAI-1基因多态与中国人T2DM无肾病患者进展为糖尿病肾病显著相关;携带PAI-1基因的4G/4G纯合子基因型的糖尿病患者,其进展为糖尿病蛋白尿肾病的风险增加2.4倍。     

重组尿激酶型纤溶酶原激活物对实验性肺血栓栓塞症内源性纤溶的影响

目的探讨重组尿激酶型纤溶酶原激活物（ru-PA,又称外源性u-PA）不同用药方案对实验性肺血栓栓塞症内源性纤溶的影响。方法通过颈外静脉注入^125碘（^125I）-标记人纤维蛋白原的大鼠加热血凝块,建立大鼠肺血栓栓塞症（PTE）模型。按随机原则将70只大鼠分成三大组：①假手术组;②PTE溶栓治疗对照组,含4个亚组：PTE 2 h组,PTE 1 d组,PTE 3 d组和PTE 5 d组;③PTE后3 d溶栓组,含2个亚组：多次用药组和单次用药组。用药后2 h处死大鼠,取血、肺及心脏,测量每分钟γ放射性。以10%甲醛固定肺组织,制成组织切片,行苏木精-伊红（HE）染色、Masson染色及原位杂交。结果PTE 2 h、1 d、3 d及5 d组血管栓塞部位内皮细胞u-PA、u-PAR、PAI-1 mRNA及t-PAmRNA的表达均阳性,假手术组均为阴性。定量分析示：①PTE 2 hu-PA及u-PAR mRNA表达最低,3 d最高（P均=0.000）,5 d与1 d比较,差异无统计学意义（P=0.745及0.642）。②PTE 2 h PAI-1的mRNA表达最低（P均=0.000）,PTE 1 d与3 d、5 d组比较,差异无统计学意义（P=0.579及0.757）。③各组间t-PA mRNA表达差异无统计学意义（F=2.0,P=0.127）。④经相关分析,PTE 2 h、1 d、3 d及5 d组u-PAR mRNA与u-PA mRNA表达呈正相关（r=0.700,P=0.024;r=0.658,P=0.039;r=0.666,P=0.035;r=0.774,P=0.009）。多次用药组血管栓塞部位u-PA mRNA表达及溶栓率明显高于单次用药组及对照组（P均〈0.001）,单次用药组明显高于对照组（P均=0.000）。多次用药组u-PAR mRNA表达明显高于对照组（P=0.001）,但与单次用药组比较,差异无统计学意义（P=0.063）。结论外源性u-PA的溶栓效果及对PTE内源性纤溶的影响与不同的用药方案有关。外源性u-PA可作用于u-PA系统,促进内源性u-PA及u-PAR的合成,加强纤溶作用。     

纤溶酶原激活物抑制物-1与糖尿病肾病关系的研究

目的探讨2型糖尿病患者血浆中的纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)活性水平与2型糖尿病肾病(DN)的关系.方法选取2型糖尿病患者94例,按24 h尿白蛋白排泄率(UAER)分为无DN组(UAER<20 μg/min)、DN微量蛋白尿组(20 μg/min 200 μg/min),选正常对照组26例.分别测定PAI-1活性、血糖、血脂、胰岛素水平.结果①2型糖尿病患者血浆PAI-1的活性显著高于正常对照组.②血浆PAI-1活性在DN患者中升高,且随着DN的加重而呈递增趋势.③DN患者血浆PAI-1活性与UAER、胰岛素抵抗指数(HOME-IRI)、空腹胰岛素(FI)、三酰甘油(TG)、体质量指数(BMI)正相关.结论 PAI-1升高是DN的危险因素之一.胰岛素抵抗、高三酰甘油血症、肥胖可能是影响PAI-1活性的重要因素.     

Study on Effect of Different Dosages of Ligustrazine on Level of Plasminogen Activator Inhibitor-1 Activity in Type 2 Diabetes Mellitus Patients

Objective:To observe the effect of different dosages of ligustrazine(LG)on the level ofplasminogen activator inhibitor-1(PAI-1)activity in patients with type 2 diabetes mellitus.Methods:Ninety cases of type 2 diabetes mellitus inpatients were selected,and randomly divided into LG small dos-age group(SDG),LG large dosage group(LDG)and control group.The 120 mg LG,400 mg LG andnormal saline 250 ml were given through intravenous dripping respectively,once daily,20 days as onetreatment course. Before and after treatment,all the patients had their fasting blood taken for PAI-1 andtissue plasminogen activator(t-PA)assessment test to perform the comparative study.Results:Seventy-three out of the 90 patients completed the observation course,the PAI-1 activity of three groups aftertreatment all lowered compared with that before treatment,and the difference between groups was alsosignificant(all P<0.01).After treatment the PAI-1 level of SDG and LDG of LG were all markedly low-ered(all P<0.01),the LDG’s lowering     

特异性环氧合酶-2抑制剂对肾大部切除大鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制剂-1表达的影响

目的　探讨特异性环氧合酶 2 (COX 2 )抑制剂 (Rofecoxib)对肾大部切除 (SNX)大鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)表达的影响。方法　大鼠随机分为 5组 :Ⅰ组为假手术组 ;Ⅱ组为SNX组 ;Ⅲ组为SNX Rofecoxib组 ;Ⅳ组为SNX 吲哚美辛组 ;Ⅴ组为SNX 氯沙坦组。 6周后检测大鼠血压、肾功能、尿蛋白及尿血栓烷素B2 (TXB2 ) ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测肾皮质内PAI 1mRNA的表达 ;采用免疫组织化学及WesternBlot法检测PAI 1蛋白质的表达。结果　Rofecoxib组大鼠尿蛋白水平较SNX组显著降低 (P<0 .0 5 ) ,肾小球硬化及肾小球基底膜增生程度较SNX组明显减轻 ,与氯沙坦组相近。Rofecoxib组肾皮质PAI 1mRNA及蛋白质表达水平分别较SNX组下调 40 .2 4%和 31.16 % (P <0 .0 1)。结论　特异性COX 2抑制剂可能通过部分抑制PAI 1基因的表达 ,减少细胞外基质的分泌并促进其降解 ,从而减轻进行性肾小球硬化     

PAI-1基因多态性与包头地区汉族2型糖尿病并发肾病的相关性研究

目的：探讨血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）基因多态性与2型糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的相关性,并初步研究其可能机制。方法：50例正常对照组,120例2型糖尿病,测定任意尿白蛋白与肌酐比值（Ua/c）,根据比值将糖尿病组分为50例糖尿病非肾病组、70例糖尿病肾病组。提取DNA,聚合酶链反应扩增,产物以琼脂糖凝胶电泳分离确定PAI-1基因型。并收集体重、身高、血压、血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、胆固醇等资料。结果：（1）正常人、糖尿病非肾病与糖尿病肾病组相比,PAI-14G/4G基因型的分布有明显的差别,糖尿病肾病组PAI-1基因中4G等位基因频率明显高于糖尿病非肾病组（0.550∶0.149,χ^2=35.685,P〈0.05）。（2）Logistic回归分析表明PAI-1基因是2型糖尿病肾病的独立患病危险因素。PAI-14G/4G基因型比其他基因型具有更高的糖尿病肾病发病危险。结论：2型糖尿病肾病组PAI-1基因4G/4G型和4G等位基因频率明显高于正常人、2型糖尿病非肾病组。PAI-1基因4G/4G型是2型糖尿病肾病发病的独立患病危险因素。PAI-14G/4G型为糖尿病肾病发病的易感性基因。     

尿激酶型纤溶酶原激活物在毛囊中的表达

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator,uPA)在毛囊发育过程中的原位表达及在体外培养的毛囊细胞中的表达。方法 用免疫细胞化学（immunocytochemistry,ICC)和原位杂交（in situ hybridization,ISH)技术研究了人及小鼠在毛囊生长周期的不同时期uPA的表达；体外培养小鼠毛囊外根鞘（outer root sheath,ORS)细胞并用ICC方法研究了ORS细胞uPA的表达。结果 在毛囊生长期的早期（即毛囊形成期），毛囊角质形成细胞（keratinocyte,Kc)表达uPA，而其它时期均不表达；体外培养的ORS有uPA表达。结论 uPA与Kc的快速增殖和迁移相关，在毛囊的发育中起重要作用。