miR-200b通过靶向PROM1抑制胶质瘤细胞侵袭

目的 探讨miR-200b靶向调控PROM1的表达对胶质瘤细胞侵袭能力的影响以及miR-200b抑瘤的分子机制.方法 构建PROM1 3’端非翻译区(3'UTR)荧光素酶报告载体,荧光素酶报告检测miR-200b对PROM1 3'UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-200b模拟物转染胶质瘤U87细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测PROM1 mRNA和蛋白的表达水平.将PROM1 siRNA转染U87细胞,Transwell侵袭实验检测PROM1下调对U87细胞侵袭能力的影响.结果 双荧光素酶报告检测显示,miR-200b能特异性地与PROM1 3'UTR结合,抑制其荧光素酶活性,其荧光素酶活性强度下降了57.0％,差异有统计学意义(P＜0.01).过表达miR-200b的U87细胞中PROM1蛋白和mRNA表达水平均降低,转染miR-200b组和对照组中PROM1 mRNA的表达水平分别为0.64 ±0.05和0.95 ±0.09,差异有统计学意义(P＜0.05).siRNA于扰PROM1表达能抑制U87细胞的生长和侵袭能力.转染PROM1siRNA组和对照组中穿膜细胞数分别为(85±9)个和(155±16)个,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-200b可通过靶向调控PROM1的表达而抑制胶质瘤细胞的侵袭力.     

miR-22通过靶向MTDH抑制胶质瘤细胞的生长

背景与目的：miR-22在胃癌、肺癌、结肠癌以及乳腺癌中表达下调,然而其在胶质瘤中的表达情况尚未明确。本研究旨在探讨miR-22是否通过靶向调控MTDH表达抑制胶质瘤细胞生长,从而进一步揭示miR-22的抑瘤机制。方法：运用实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测75例胶质瘤及17例正常大脑组织中miR-22的表达改变以及与胶质瘤患者预后关系;构建MTDH 3’UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-22对MTDH 3’UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-22 mimics转染胶质瘤细胞U251,以MTDH siRNA为阳性对照,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-22对U251细胞生长的影响。结果：qRT-PCR检测结果显示,miR-22在75例胶质瘤组织中表达下调;Kaplan-Meier生存分析发现,miR-22表达越高,患者生存率越高(P<0.05);在双荧光素酶报告检测显示,miR-22能特异性地与MTDH 3’UTR结合,抑制其荧光素酶活性。Western blot检测结果显示,miR-22过表达或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,miR-22过表达或干扰MTDH可抑制人U251细胞的生长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：miR-22通过靶向调控MTDH的表达而抑制胶质瘤细胞的生长。     

miR-124通过靶向调控AURKA抑制胶质瘤细胞的增殖

目的:探索miR-124及AURKA对胶质瘤细胞增殖能力的影响并探索其机制.方法:通过PCR测定胶质瘤组织及非肿瘤组织中miR-124、AURKA的表达水平;将携带miR-124的脂质体miR-124 mimic、空载体miR-124转染入胶质瘤细胞系LN-229和T98G中,吸光度观察miR-124对胶质瘤细胞系LN...     

miR-149通过靶向FOXM1基因抑制前列腺癌细胞的生长和侵袭

  目的  探讨miR-149对前列腺癌细胞生长和侵袭的影响,并研究miR-149的靶基因及其功能。  方法  利用实时荧光定量PCR检测前列腺癌和癌旁组织miR-149和FOXM1 mRNA表达水平。在人前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞中瞬时转染miR-149模拟物和阴性对照miRNA,运用平板克隆形成和Transwell侵袭实验检测细胞生长和侵袭。在细胞中分别转染miR-149靶基因FOXM1的siRNA和siRNA阴性对照,利用Western blot检测FOXM1蛋白表达情况,并检测细胞的克隆形成和侵袭能力。  结果  在前列腺癌中miR-149低表达（P < 0.01）,FOXM1 mRNA高表达（P < 0.01）。与对照组细胞相比,转染miR-149模拟物的PC3和DU145细胞克隆数目减少（P < 0.01）,发生侵袭的细胞减少（P < 0.01）;FOXM1蛋白水平在转染miR-149模拟物的PC3（P < 0.01）和DU145细胞（P < 0.05）中较对照组细胞降低。转染FOXM1 siRNA的PC3和DU145细胞中FOXM1蛋白水平较对照组降低,且克隆形成和侵袭能力较对照组明显降低（P < 0.01）。  结论  miR-149通过靶向FOXM1抑制前列腺癌细胞生长和侵袭,发挥着抑癌基因的作用,可作为前列腺癌分子治疗的有效靶点。      

CD133与肿瘤干细胞靶向治疗

CD133是肿瘤干细胞的表面标记物,在多种实体肿瘤中都有表达,且与肿瘤的化疗抵抗和放疗抵抗有关.CD133作为一种跨膜糖蛋白,其潜在的肿瘤干细胞靶向治疗的分子靶点作用备受关注,有望为肿瘤治疗提供新希望.     

miR-133b靶向HER-2对结肠癌细胞放射敏感性影响

目的 研究miR-133b对结肠癌细胞(SW620细胞)凋亡及放射敏感性影响并探讨其机制。方法 采用脂质体法转染miR-con组(转染miR-con)、miR-133b组(转染miR-133b mimics)、si-con组(转染si-con)和si-HER-2组(转染si-HER-2) SW620细胞,然后进行0、2、4、6、8 Gy照射。使用qRT-PCR、Western blot、流式细胞术、克隆形成实验和双荧光素酶报告基因实验分别检测各组细胞中miR-133b表达、HER-2蛋白表达、细胞凋亡、细胞存活分数和细胞荧光活性。结果 与照射前相比,照后SW620细胞中miR-133b表达降低(P<0.05),HER-2表达升高(P<0.05)。过表达miR-133b、敲减HER-2均可降低SW620细胞存活分数(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-133b可抑制野生型HER-2细胞荧光活性(P<0.05),且可负向调控HER-2蛋白表达。结论 miR-133b可抑制SW620细胞存活,促进细胞凋亡,增强放射敏感性,其机制可能与靶向HER-2有关。     

miR-216b通过靶向调控Beclin-1的表达抑制宫颈癌细胞自噬

目的 研究miR-216b影响宫颈癌HeLa细胞自噬的作用机制。方法 转染miR-216b及应用其抑制剂后,利用GFP-LC3 shRNA转染等方法检测HeLa细胞的自噬水平,Western blot检测自噬相关基因Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达变化。 结果 HeLa细胞转染miR-216b后, HeLa细胞中自噬相关基因Beclin-1受到抑制,LC3-Ⅱ的表达增加,细胞自噬受抑,而抑制miR-216b的表达,自噬水平升高。进一步研究发现,miR-216b能够通过靶结合Beclin-1 3’UTR抑制Beclin-1表达从而抑制细胞自噬的发生。结论 miR-216b能够抑制宫颈癌HeLa细胞发生自噬,为宫颈癌的临床治疗提供了的理论基础。     

丙戊酸钠通过EGFR下调CD44表达抑制胶质瘤细胞生长

目的:探讨丙戊酸钠通过抑制A172胶质瘤细胞表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的活化,下调CD44表达,进而调节细胞生长的机制。方法:实时荧光定量PCR和Western blot检测A172胶质瘤细胞中CD44以及siRNA下调CD44表达的情况,MTT检测CD44和丙戊酸钠对细胞生长的影响,Western blot检测丙戊酸钠对细胞中p-EGFR、EGFR和CD44表达影响。结果:丙戊酸钠抑制A172胶质瘤细胞生长,并具有浓度依赖性。A172胶质瘤细胞表达CD44,siRNA下调CD44表达后,细胞生长较正常组显著减缓。活化EGFR促进A172胶质瘤CD44蛋白表达,而EGFR的抑制剂Lapatinib可显著抑制上述效应。丙戊酸钠抑制EGFR磷酸化,下调CD44蛋白表达。结论:丙戊酸钠抑制A172胶质瘤细胞的生长。抑制A172胶质瘤细胞中EGFR的活化,下调CD44的表达,是丙戊酸钠抑制胶质瘤细胞生长的其中一个机制。     

CD133作为胶质瘤干细胞标志物应用的局限性

胶质瘤是神经外科最常见的恶性肿瘤,临床尚缺乏有效的治疗手段。肿瘤干细胞被认为是胶质瘤发生、发展的源头而受到越来越多的关注。干细胞标志物CD133广泛表达于人体多种肿瘤中,同时,它也是研究得最多且应用最广的胶质瘤干细胞表面标志物。然而,利用CD133进行胶质瘤干细胞的鉴定和筛选正逐渐受到质疑。本文将对近年来人们发现的CD133作为胶质瘤干细胞标志物应用的局限性进行综述。     

下调miR-93表达抑制人脑胶质瘤细胞生长和侵袭的研究

目的 验证下调miR-93表达对人脑胶质瘤细胞株的生长和侵袭抑制作用.方法 合成miR-93抑制物,应用脂质体转染人脑胶质瘤细胞以抑制其表达,实时定量PCR检测转染后miR-93表达情况,流式细胞术检测、四甲基偶氮噻唑法(MTT)试验和软琼脂克隆形成实验评价细胞生长变化,tran-swell实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 转染miR-93抑制物后,细胞中miR-93高表达被明显抑制,细胞周期进展迟滞,S期细胞减少,生长速度减慢,克隆形成能力减弱,穿过matrigel胶的细胞数减少,侵袭能力被抑制.结论 下调miR-93表达可抑制胶质瘤细胞的生长和侵袭.     

miR-4319通过靶向调控USP2抑制乳腺癌细胞侵袭

目的 探讨miR-4319与泛素特异性蛋白酶2(USP2)表达的相关性以及miR-4319靶向USP2通过核转录因子κB(NF-κB)信号通路对乳腺癌细胞侵袭的影响.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-4319在正常乳腺癌上皮细胞(MCF10A)、低侵袭性乳腺癌细胞(MCF7)和高侵袭性乳腺癌细胞(M...     

miR-122通过靶向RUNX2诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA122（miR-122）对神经胶质瘤细胞凋亡的影响及可能分子机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常星形胶质细胞系HA1800和胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44、MO59K中miR-122的表达情况。双荧光素酶报告实验评价miR-122对RUNX2的靶向调控作用。向U251细胞转染miR-122 mimics（miR-122组）和阴性对照NC（NC组），流式细胞术检测细胞凋亡，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。向U251细胞同时转染miR-122 mimics和siRUNX2（miR-122+siRUNX2组），流式细胞术检测细胞凋亡。结果 U251、U87、SHG44、MO59K细胞系中miR-122表达水平分别为0.34±0.052、0.65±0.061、0.59±0.071和0.69±0.098，显著低于正常星形胶质细胞系HA1800的1.17±0.173，差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-122可抑制野生型RUNX2 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性，而对突变型RUNX2 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。miR-122组U251细胞凋亡率为（23.77±0.83）％，高于NC组的（6.17±0.12）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）；低于miR-122+siRUNX2组的（70.85±0.35）％（P＜0.05）。Western blotting检测结果显示，miR-122组RUNX2蛋白表达量为0.57±0.048，低于NC组的1.21±0.19（P＜0.05）。与NC组比较，miR-122组Bax（3.47±0.077）、 cleaved caspase-3（4.38±0.121）表达均明显上调，而Bcl-2（0.39±0.104）明显下调（P＜0.05）。结论 miR-122可以通过靶向RUNX2促进线粒体凋亡通路的激活，促进神经胶质瘤细胞凋亡。     

miR-125b抑制胶质瘤细胞增殖作用机制研究

目的 探讨 miR-125b抑制胶质瘤细胞增殖的分子作用机制。方法 选取2016年12月至2017年12月宁夏医科大学总医院收治的胶质瘤患者32例（男18例、女14例）,选择同期行脑内血肿清除术的脑出血或因颅脑损伤行颅内减压术的但脑组织正常患者31例为对照组（男15 例、女 16 例）。利用qPCR法检测miR-125b在胶质瘤组织和人胶质瘤细胞系 LN229的表达,通过转染miR-125b 模拟物,检测miR-125b对胶质瘤细胞LN229增殖的抑制作用,采用Targetscan、miRanda等预测软件对miR-125b的作用靶点进行预测,以双荧光素酶报告基因系统分析miR-125b与STAT3的相互作用,运用Western blot法检测miR-125b对胶质瘤细胞LN229中STAT3表达的影响。结果 与正常癌旁脑组织相比较,胶质瘤组织中miR-125b的表达水平明显降低,胶质瘤细胞系LN229中miR-125b的表达与正常星形胶质细胞明显降低,相比于NC 模拟物,转染miR-125b 模拟物之后LN229细胞的增殖显著抑制,双荧光素酶报告基因系统检测显示,miR-125b 可直接调控STAT3 转录活性,而且miR-125b显著抑制LN229细胞STAT3表达。结论 miR-125b可靶向STAT3的表达从而调控胶质瘤细胞的增殖。     

miR-214通过靶向MCL-1抑制骨髓瘤细胞的迁移侵袭

目的:明确miR-214与MCL-1之间的靶向调控关系及其对骨髓瘤细胞侵袭迁移能力的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测miR-214和MCL-1在骨髓瘤细胞中的表达情况并做相关性分析;Transwell小室法检测上调miR-214或沉默MCL-1对骨髓瘤细胞株H929和U266迁移侵袭能力的影响;荧光素酶报告基因实验验证miR-214与MCL-1的靶向关系;Western blot检测上调或下调miR-214对MCL-1表达的影响。结果:miR-214在骨髓瘤细胞中表达下调,MCL-1则显上调,二者呈负相关;上调miR-214或敲低MCL-1可显著抑制骨髓瘤细胞H929和U266的侵袭迁移能力;荧光素酶报告基因实验证实MCL-1是miR-214的靶基因,Westerm blot结果发现miR-214负调控MCL-1表达;MCL-1的额外补充可逆转miR-214对骨髓瘤细胞H929和U266迁移侵袭能力的抑制作用。结论:miR-214通过负调控MCL-1表达抑制骨髓瘤细胞的迁移侵袭。     

可溶性重组人CD40配体抑制人胶质瘤细胞生长

背景和目的：CD40是存在于B细胞,单核细胞,树突状细胞,内皮细胞和多种肿瘤细胞上的肿瘤坏死因子受体超家族成员,已有研究证明用CD40抗体或CD40配体激活CD40可引起人卵巢癌,结肠癌,乳腺癌和肺癌细胞凋亡或死亡,并抑制鼠体内移植瘤生长,本研究拟了解可溶性重组人CD40配体（srhCD40L)对人胶质瘤细胞增殖的影响。方法：用免疫组化法检测胶质瘤标本中CD40的表达,用流式细胞仪检测人胶质瘤细胞中CD40的表达,然后在其培养基中加入srhCD40L孵育,在分别培养72h和24h后检测细胞增殖和凋亡指标。结果：23个胶质瘤标本中有7个和3个胶质瘤细胞系有1个具有CD40表达。有CD40表达的胶质瘤细胞系与srhCD40L共孵育后发现细胞活力从98%降至87%;凋亡和坏死升高了17.4%。结论：在体外用CD40配体激活CD40可抑制有CD40表达的人胶质瘤细胞的生长,提示CD40配体在治疗胶质瘤上有潜在的临床应用价值。     

miR-338通过靶向GPX4抑制非小细胞肺癌细胞增殖

目的:探讨miRNA-338（miR-338）通过靶向调控谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)增殖中的作用及机制研究。方法:通过实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测非小细胞肺癌组织、癌旁、细胞系及对照细胞系中miR-338及GPX4 mRNA的表达水平;通过Western Blot检测非小细胞肺癌组织、癌旁、细胞系及对照细胞系中GPX4蛋白水平;通过荧光素酶报告基因时间验证miR-338直接靶向调节GPX4的表达;通过CCK-8探索miR-338是否通过调节铁死亡影响肿瘤细胞增殖;通过试剂盒检测细胞脂质氧化和活性氧水平。结果:NSCLC组织和细胞系中miR-338表达水平低于癌旁组织和对照细胞系;NSCLC组织和细胞系中GPX4 mRNA及蛋白表达水平高于癌旁组织和对照细胞系;Starbase软件分析发现GPX4 mRNA序列中含有miR-338特异作用位点,荧光素酶报告基因实验结果证实miR-338直接靶向调节GPX4表达;过表达miR-338提高肿瘤细胞中脂质氧化及活性氧水平,并抑制肿瘤细胞增殖;而铁死亡抑制剂预处理可以逆转miR-338的抑癌作用。结论:miR-338通过负向调控GPX4表达进而促进肿瘤细胞铁死亡,最终抑制NSCLC细胞增殖。     

miR-122-5p通过靶向CREB1抑制食管癌细胞及移植瘤的生长

背景与目的:miR-122在多种肿瘤中表达异常,参与肿瘤细胞增殖、凋亡等,而cAMP反应元件结合蛋白1(cAMP response element-binding protein 1,CREB1)参与食管癌发展过程,研究miR-122-5p通过靶向CREB1对食管癌细胞及移植瘤生长的作用及机制.方法:选取2017年11...     

miR-20a通过靶向抑制PTEN诱导肝癌细胞放射抵抗

目的 探讨miR-20a在肝癌放射敏感性中的作用及机制。方法 荧光定量PCR检测肝癌细胞系和组织标本中miR-20a的表达;构建稳定过表达miR-20a肝癌细胞系,通过克隆实验探讨miR-20a对肝癌细胞放射敏感性影响;蛋白印记法检测Bcl-2、Caspase-3以及γ-H2AX的表达;生物信息学预测miR-20a下游调控的靶基因,双荧光素酶报告系统、荧光定量PCR及蛋白印记法进一步验证;在稳定过表达miR-20a的肝癌细胞系中转染pCDNA3.0-PTEN探讨细胞放射敏感性的变化,明确PTEN是否为miR-20a诱导肝癌放射抵抗的一个功能性靶基因。结果 miR-20a在肝癌细胞系和组织标本中表达上调(P<0.05);经过同等条件的放射处理后,与空白及对照组(WT组、LV-con组)相比,过表达miR-20a组(LV-miR-20a组)细胞存活分数升高,放射抵抗增强(P<0.05),Bcl-2表达上调,Caspase-3及γ-H2AX表达下调;过表达PTEN能够逆转miR-20a引起的放射抵抗。结论 miR-20a在肝癌细胞系及组织标本中表达上调;过表达miR-20a可以促进肝癌细胞放射抵抗,PTEN是miR-20a诱导肝癌放射抵抗的一个功能性靶基因,预示着miR-20a/PTEN位点可能是是肝癌临床放疗相关的有效分子靶点。     

miR-101通过靶向FGF2抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的：探究microRNA-101 (miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2,FGF2）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞迁移和侵袭的分子机制。方法：采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系A549、H661和SK-MES-1,以及转染后A549细胞miR-101和FGF2的表达水平。分别将miR-NC、miR-101 mimics、miR-IN-NC、miR-101 inhibitor或pcDNA-3.1空质粒、pcDNA-FGF2转染至A549细胞,运用划痕愈合实验和Transwell小室实验,检测A549细胞中过表达miR-101和FGF2对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blotting（WB）法检测各组A549细胞中FGF2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果：miR-101在NSCLC细胞系中的表达水平明显低于正常肺上皮细胞（均P<0.05）,而以A549细胞中表达水平为最低。过表达miR-101可明显抑制A549细胞的迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.01）,且使细胞中E-cadherin的表达增多（P<0.05）而Vimentin（P<0.05）、N-cadherin（P<0.01）和p-ERK1/2（P<0.05）的表达水平降低。抑制miR-101表达后,可以显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.05）,引起细胞中E-cadherin表达明显降低而 Vimentin、N-cadherin 和 p-ERK1/2 表达水平增高（均 P<0.05）。采用 WB 法和双荧光素酶报告基因实验验证了 FGF2 是miR-101的直接靶基因,且过表达FGF2后显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01）,以及减少细胞中E-cadherin的表达（P<0.01）而增加Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2（P<0.05）表达水平。与单独过表达FGF2组相比,共同过表达miR-101和FGF2组A549细胞迁移和侵袭能力明显减弱（均P<0.01）,其E-cadherin的表达增多（P<0.01）而Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2表达水平下降（P<0.01）。结论：miR-101通过调控靶基因FGF2抑制NSCLC A549细胞的上皮间质转化（EMT）过程及ERK信号通路,进而抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。