石斛多糖增强脐带血和肿瘤病人外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究

目的：探讨石斛多糖（ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＤＣＰ）与ｒＩＬ－２联合应用对脐带血ＬＡＫ细胞（ＣＢ－ＬＡＫ）和肿瘤病人外周血ＬＡＫ细胞（ＰＢ－ＬＡＫ）体外杀伤肿瘤细胞作用的影响。方法：应用＾３Ｈ－ＴｄＲ释放法测定ＣＢ－ＬＡＫ和ＰＢ－ＬＡＫ细胞的杀伤活性。结果：①ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）能明显提高ＣＢ－ＬＡＫ对Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性，０ｈ的ＣＢ－ＬＡＫ活性为１３．６３％，ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）诱导４８、７２、９６、１２０ｈ后，ＣＢ－ＬＡＫ活性分别提高至２２．２８％、２６．２３％、２８．５５％和２５．７６％（Ｐ〈０．０１）；②ＤＣＰ（１００ｍｇ／Ｌ或４００ｍｇ／Ｌ）与ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）联合诱导ＣＢ－ＬＡＫ的活性，比单纯ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）的作用     

低剂量IL-2诱导的人胚胎脾脏CD_3AK细胞治疗晚期恶性肿瘤效果及实验研究

用ＣＤ３ＭｃＡｂ和低剂量ＩＬ－２（５００Ｕ／ｍｌ）诱导的人胎脾ＣＤ３ＡＫ细胞治疗４３例晚期恶性肿瘤患者，取得疗效。经２～８疗程治疗，多数患者症状缓解，生活质量改善，ＰＲ＋ＭＲ１８例（４１．９％），Ｓ＋Ｐ２５例（５８．１％），死亡９例（２０．９％）。全组无严重毒副反应发生。同时比较ＣＤ３ＡＫ细胞和常规ＬＡＫ细胞体外增殖及其杀伤活性，表明前者１４４ｈ增殖力高于后者（Ｐ＜０．０１），靶细胞抑制率二者无显著差异（Ｐ＞０．０５）。初步表明ＣＤ３ＡＫ／ＩＬ－２疗法效果肯定，毒副作用小，可能成为继ＬＡＫ／ＩＬ－２之后更为有效的肿瘤辅助治疗。     

抗人胰腺癌单克隆抗体介导LAK细胞体外体内抗胰腺癌作用的研究

体外４小时５１Ｃｒ释放试验表明，抗人胰腺癌单克隆抗体（ＹＰＣ３ＭｃＡｂ）能增强ＬＡＫ细胞对Ｃａｐａｎ－２人胰腺癌细胞的杀伤作用，这种ＬＡＫ细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ），随ＹＰＣ３ＭｃＡｂ的浓度增加而加强，５０μｇ／ｍｌ的ＹＰＣ３ＭｃＡｂ增加ＬＡＫ细胞的杀伤率约６０％。而对照抗体无此作用。裸鼠体内实验表明，ＹＰＣ３ＭｃＡｂ和ＬＡＫ细胞同时使用，能完全阻止Ｃａｐａｎ－２细胞的生长，优于ＬＡＫ细胞、脾细胞和ＹＰＣ３ＭｃＡｂ的分别作用。结果提示，ＹＰＣ３ＭｃＡｂ和ＬＡＫ细胞的联合应用，对胰腺癌治疗有一定价值。     

CD_3单克隆抗体活化的杀伤细胞对人胃癌细胞株MNK_（45）体外杀伤及裸鼠体

用人的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与抗ＣＤ３单克隆抗体和基因重组的人ＩＬ－２，共同培养制备ＣＤ３ＡＫ细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂＡｃｔｉｖａｔｅｄＫｉｌｌｅｒＣｅｌｌｓ），ＰＢＭＣ与ｒＩＬ－２共同培养制备ＬＡＫ细胞，用单纯ＰＢＭＣ作为对照细胞。对这三种细胞的增殖及在体外和裸鼠体内的抗人胃癌细胞株ＭＮＫ４５作用进行了实验研究。体外试验结果表明，ＣＤ３ＡＫ对ＭＮＫ４５有明显杀伤作用，而ＬＡＫ细胞杀伤率较低，二者差异有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）；用的ＭＴＴ法和台盼蓝活细胞计数法测定这三种细胞的增殖能力和细胞数量的增加，表明ＣＤ３ＡＫ的增殖能力和扩增数量均明显高于ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。裸鼠体内试验结果显示，对照组及ＬＡＫ组全部长出瘤结节，而ＣＤ３ＡＫ组无一例长出皮下结节，且生存期明显长于前者。     

CD3单克隆抗体活化的杀伤细胞对人胃癌细胞株MNK45体外杀伤及…

用人的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与抗ＣＤ３单克隆抗体和基因重组的人ＩＬ－２，共同培养制备ＣＤ３ＡＫ细胞，ＰＢＭＣ与ｒＩＬ－２共同培养制备ＬＡＫ细胞，用单纯ＰＢＭＣ作为对照细胞。对这三种细胞的增殖及在体外和裸鼠体内的抗人胃癌细胞株ＭＮＫ４５作用进行了实验研究。体外试验结果表明，ＣＤ３ＡＫ对ＭＮＫ４５有明显杀伤作用，而ＬＡＫ细胞杀伤率较低，二者差异有非常显著性意义（Ｐ＜０．０１）；用ＭＴＴ法和台盼蓝     

甲氰咪呱对鼠体内IL—2／LAK抗肿瘤作用的影响

为探讨甲氰咪呱（ＣＩＭ）对鼠体内ＩＬ２／ＬＡＫ抗肿瘤作用的影响,将Ｂ１６细胞经尾静脉接种于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,第３ｄ分别应用ＤＨａｎｋｓ液、ＣＩＭ（１０ｍｇ／ｍｌ）＋ＣＩＭ（１μｇ／ｍｌ）诱导的脾细胞,ＩＬ２＋ＩＬ２（５００Ｕ／ｍｌ）诱导的ＬＡＫ细胞,ＣＩＭ（１０ｍｇ／ｍｌ）＋ＩＬ２＋ＣＩＭ（１μｇ／ｍｌ）和ＩＬ２（５００Ｕ／ｍｌ）共同诱导的ＬＡＫ细胞,观察鼠肺转移结节和生存期。结果显示,单用ＣＩＭ并不能减少肺转移结节和延长生存期;ＣＩＭ＋ＩＬ２／ＬＡＫ治疗组与ＩＬ２／ＬＡＫ治疗组相比,可减少肺转移结节（Ｐ＜０．０５）和显著延长生存期（Ｐ＜０．０１）。结果表明,ＣＩＭ能够增强ＩＬ２／ＬＡＫ抗肿瘤作用,可用于治疗肿瘤。     

黄芪成分F3增强肿瘤和艾滋病患者LAK细胞细胞毒效应的研究

黄芪有效成分Ｆ３在癌症和艾滋病患者的体外实验研究结果表明：（１）Ｆ３加入５０ｕ／ｍｌ白介素Ⅱ（ｒＩＬ－２），其所诱导的ＬＡＫ细胞对人类黑色素瘤Ｈｓ２９４Ｔ的杀伤率可达的６４％，与单独使用５００ｕ／ｍｌ白介素Ⅱ时的效果（６０％）相似。（２）使用Ｆ３后，患者所需的ＬＡＫ细胞数量可减少一倍。一些对ｒＩＬ－２诱导不敏感患者的ＬＡＫ细胞变得异常敏感。提示：运用生物反应调节剂（ＢＲＭＳ）Ｆ３增强ｒＩＬ－２所诱导的ＬＡＫ细胞杀伤活性达到减毒目的是一个值得探索的方向。     

LICC细胞和LAK细胞治疗晚期恶性肿瘤的疗效观察

采用淋巴因子诱导的细胞毒细胞（ＬＩＣＣ）和ＩＬ—２／ＬＡＫ细胞治疗３２例晚期恶性肿瘤患者，ＬＩＣＣ治疗２０例，ＩＬ—２／ＬＡＫ治疗１２例，结果发现６８．８％（２２／３２）卡氏得分上升，多数患者癌性症状减轻，生活质量提高，以ＬＩＣＣ组优于ＬＡＫ组，ＣＲ＋ＰＲ＋ＭＲ率，ＬＩＣＣ为４０．０％（１２／２０），ＬＡＫ组为１６．７％（２／１２）。作者认为过继免疫作为一种癌症辅助治疗方法应予肯定；ＬＩＣＣ治疗安全、副反应小，抗瘤谱广，费用低，疗效优于ＩＬ—２／ＬＡＫ，值得扩大应用性研究。     

粘附性淋巴因子活化的杀伤细胞抗自体白血病细胞作用的研究

建立了一套培养和处理粘附ＬＡＫ细胞（Ａ－ＬＡＫ）的系统，将１２例缓解期急性髓系白血病（ＡＭＬ）患者（ＲＰＳ）的Ａ－ＬＡＫ细胞与常规制备ＬＡＫ细胞（ＲＴ－ＬＡＫ）进行了对照研究，结果显示ＲＰＳ－Ａ－ＬＡＫ细胞于培养第１０天时其扩增指数（２０．１±１３．９）较ＲＴ－ＬＡＫ细胞的扩增指数（７．５±２．１）明显提高（Ｐ＜０．０５）。形态学研究显示Ａ－ＬＡＫ细胞主要由大颗粒淋巴细胞组成，免疫表型分析显示其主要由ＣＤ１６＋的ＮＫ细胞组成，ＲＴ－ＬＡＫ细胞主要由ＣＤ３＋的Ｔ细胞组成。其杀伤活性与ＣＤ１６＋ＮＫ细胞之间有很好的相关性（ｒ＝０．８２，Ｐ＜０．０５）。这提示ＣＤ１６＋ＮＫ细胞是Ａ－ＬＡＫ细胞的主要组成细胞，代表了杀伤功能最强的亚群。     

双特异抗体介导的CD3AK对人小细胞肺癌细胞株的细胞毒作用

目的：研究在双特异性抗体的介导下ＣＤ３ＡＫ细胞（ＣＤ３单克隆栓激活的杀伤细胞）对人小细胞肺癌细胞株ＬＴＥＰ－ｓｍｌ的细胞毒作用。方法：用＾３１Ｃｒ－Ｎａ２ＣｒＯ４释放试验检测单抗（２Ｄ６、ＵＣＨＴ１）和双特异性抗体（ＷＳＴ－Ｈ７）与ＣＤ３ＡＫ共同对人小细胞肺癌细胞株的杀伤活性。持异性抗体体外能明显增强ＣＤ３ＡＫ细胞对人小细胞肺细胞株ＬＴＥＰ－ｓｍｌ的杀伤活性结论：与单纯ＣＤ３ＡＫ相比,加入双特异性     

肝动脉化疗栓塞结合LAK／IL—2治疗肝癌

用IL—2和胸腺因子D(TFD)联合诱导的自体LAK 4～8×10~(6～7)和同种异体LAK4～8×10~(8～9)对40例肝癌采用肝动脉化疗栓塞结合LAK/IL—2·TFD治疗.肝动脉灌注顺铂、阿霉素、丝裂霉素和部分病人用40%碘化油栓塞,LAK细胞10次为1疗程,包括静脉滴注8次～9次,肝动脉灌注1次～2次(肝动脉灌注包括LAK、IL—2和TFD),治疗期间每日肌注IL—2 500Ou～10000u和TFD10mg.疗效达到PR:52.5%、MR:30%、SD PD:17.5%.AFP下降占94.1%,半年生存率占80%.多数病人症状改善,免疫力增强,肝功能好转,生活质量提高.少数病人使用LAK细胞出现一过性寒战、发热.     

CD3和CD28单克隆抗体联合作用对CIK细胞及其亚群增殖及功能的影响

目的:探讨CD3和CD28单克隆抗体联合作用对细胞因子诱导的杀伤(cytokine-indueed killer,CIK)细胞及其亚群增殖及功能的影响.方法:采集2014年6月至2015年6月在郑州大学第一附属医院接受生物细胞治疗的20例肿瘤患者(肾癌6例,肺癌5例,肝癌、乳腺癌和恶性黑素瘤各2例,胆囊癌、淋巴瘤和卵巢癌各1例)的外周血,每例外周血均分为4组(对照组,单用CD3单抗组,单用CD28单抗组,CD3和CD28单抗联合作用组)进行CIK细胞的诱导培养.用CFSE染色检测CIK细胞的增殖能力;ELISA检测CIK细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平;磁珠分选CIK细胞亚群CD4+、CD8+和CD56+细胞,然后用ELISA检测对CIK细胞亚群分泌IFN-γ、TNF-α和IL-2能力的影响.结果:CD3/CD28单抗联合作用(PI =59.35)对CIK细胞的增殖能力的影响与单独使用CD3单抗(PI =64.4)相比效果并不明显,但是可以刺激CIK细胞分泌较高水平的IFN-γ和TNF-α[IFN-γ:(384.6 ±263.1)vs(201.5 ±271.5) pg/ml,P=0.0361;TNF-α:(4.795±1.251) vs(2.835±0.443) pg/ml,P=0.0265];进一步分析发现,两单抗的联合作用可增强亚群细胞CD8+分泌IFN-γ、CD56+分泌IL-2和TNF-α的活性,从而起到对淋巴细胞功能的增强作用.结论:CD3与CD28单抗联合作用不能增强CIK的增殖能力,但可以在一定程度上增强CIK细胞的功能,在肿瘤的细胞免疫治疗应用中具有一定的潜力.     

Cell Cycle Assessment of Adoptive Transferred Lymphokine Activated Killer Cells

The use of lymphokine activated killer (LAK) cells for adoptivetransfer therapy has been reported from number of clinical trials.To our knowledge, however, there has been no report concerningthe cell cycle progression of LAK cells. Thus, for the presentstudy we have attempted to examine the LAK cell cycle eitherbefore or after transfer. In vitro and in vivo analyses of LAKcells labeled with bromodeoxyuridine (BrdU) were carried outusing two-parameter flow cytometries of their nuclear stainingusing fluorescein isothiocyanate(FITC)- conjugated anti-BrdUantibody and propidium iodide (PI). The in vitro growth of BrdU-positivecells showed the cells to divide once in the S phase, continueto the G₂-M phase and return to the G₀-G₁ phase with a similarpattern after 48 or 72 h culture. They formed a definite subpopulationand were of phenotypes, thy-1.2 (+), Lyt-1.1 ( – ), Lyt-2.1(+), L3T4 ( – ) and AGM1 (+). The percentage of BrdU-positivecells decreased significantly (P< 0.05) when treated withcomplement plus anti-thy-1.2, anti-Lyt-2.1 or anti-AGM1 anti-bodies, demonstrating BrdU-labeled LAK cells to have the samephenotype as control LAK cells. As in vitro, the in vito cellcycle of LAK cells 48 and 72 h after transfer had a similarpattern, and the LAK cells also continued on to the S phaseafter the first division. The in vivo growth of the LAK cellstreated with interleukin-2 (IL-2) was promoted 24 and 48 h aftertransfer. In conclusion, the present study showed LAK cellsto be capable of dividing following transfer and to keep theirown phenotypic characteristics; also, that treatment with IL-2may promote their division. Adoptive transfer therapy seemsto be a viable therapeutic method.     

PHA-CD3AK细胞的制备及其对恶性肿瘤的疗效

目的： 探讨植物血凝素（PHA）、抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb）和rhIL-2共同诱导的PHA-CD3AK(PHA-CD3McAb actinated killer cell)细胞的临床应用质量控制,及其对恶性肿瘤的疗效。 方法： 选取陕西省友谊医院肿瘤生物诊疗科 53例中晚期肿瘤患者(宫颈癌9例,肺癌6例,肾癌6例,非霍奇金淋巴瘤5例,肝癌5例,胃癌7例,食道癌5例,恶性黑素瘤5例,直肠癌5例),分离患者外周血单个核细胞,加入PHA、anti-CD3McAb、rhIL-2体外诱导制备自体 PHA-CD3AK细胞。质量控制检测细胞数量和活细胞比例、细胞毒活性、内毒素和感染源,流式细胞术检测免疫表型。将检测合格的自体PHA-CD3AK细胞静脉回输至患者体内,每 2 d 回输 1 次,每疗程6 次,共2个疗程,观察治疗效果和不良反应。 结果: 制备的 PHA-CD3AK细胞符合预期免疫活性细胞质控的各项要求。治疗后患者外周血CD3+、CD4+、CD8+ T 细胞和 CD16+56+细胞（NK 细胞）比例分别为（49.36 ± 9.21）%、（34.85 ± 4.35）%、（29.20± 5.12）%和（21.15± 6.50）%,较治疗前均显著升高（均 P<0.05）。大部分患者治疗后全身症状明显改善（43/53）,其中完全缓解 6 例、部分缓解14 例、微效10 例、稳定14 例、进展9例,总有效率达566%,临床受益率达83.0%。所有患者治疗后相关化验指标均未出现异常变化,也未出现明显的全身毒性反应。 结论： PHA-CD3AK细胞制剂质量控制指标切实可行,其对恶性肿瘤的疗效确切,并能有效提高患者的免疫功能。     

原发性肝癌肝动脉留置导管灌注LAK细胞与化疗栓塞联合应用的疗效观察

对原发性肝癌肝动脉留置导管灌注同种异体ＬＡＫ细胞与化疗栓塞联合应用的临床疗效进行观察。结果表明：联合治疗组总有效率８４％，明显高于单纯化疗栓塞组（７０％），大多数病人一般症状明显改善，免疫状态增强。治疗副反应为一过性发热。     

Natural killer cell neoplasms

Natural killer (NK) cell tumors are an uncommon and heterogeneous group of disorders. The World Health Organization (WHO) classified mature NK cell neoplasms into 2 types: 1) extranodal NK cell lymphoma, nasal type and 2) aggressive NK cell leukemia. The mature NK cell tumors are prevalent in Asia and Central and South America. These tumors show polymorphic neoplastic infiltrate with angioinvasion and/or angiodestruction, cytoplasmic azurophilic granules, CD2-positive (CD2+)/CD3-negative (CD3-)/cCD3epsilon+/CD56+ phenotype, and strong association with Epstein-Barr virus (EBV). Loss of chromosomes 6q, 11q, 13q, and 17p are recurrent aberrations. Although blastic NK cell lymphoma, currently referred to as CD4+/CD56+ hematodermic neoplasm, also was included in the NK cell lymphoma category in the WHO classification scheme, existing evidence indicates a plasmacytoid dendritic cell derivation as opposed to an NK cell origin. Recently, rare cases of CD56+ immature lymphoid tumors have been reported in the literature. These tumors are characterized by blastic appearance, CD3-/CD4-/CD56+/CD13-/CD33- phenotype, T-cell receptor and immunoglobulin genes in germline configuration, and no evidence of EBV, suggesting a true immature NK cell derivation. For this article, the authors reviewed the recent concepts and progress in clinicopathologic features, pathogenesis, genetic characteristics, diagnosis, differential diagnosis, treatment approaches, and outcomes of all subtypes of NK cell neoplasms.     

Adhesion Molecules on Murine Lymphokine-activated Killer Cells Responsible for Target Cell Killing: A Role of CD2

Lymphokine-activated killer (LAK) cells were induced from C57BL/6 mouse spleen cells and the effects of culture time on the expression of cell surface phenotypes and cytotoxic activity of LAK cells were determined. The expression of CD2 remarkably decreased after culture of LAK cells for 30 days, while LFA-1, a principal adhesion molecule in LAK cells, and CD3 were not changed by the culture. LAK cells cultured for 90 days completely lost CD2. In accordance with the decrease of CD2, the cytotoxic activity of LAK cells declined but a certain leven was retained even after the complete loss of CD2. The established LAK cell clones were also strongly positive for the expression of LFA-1 but negative for CD2. When the LAK cell clones were transfected with the CD2 cDNA, they started to express CD2 on their cell surface and to show greater binding ability and stronger cytotoxicity to target tumor cells. These results indicated that CD2 plays a role as an adhesion molecule responsible for target cell killing in murine LAK cells.     

树突状细胞诱导的LAK细胞对肺癌的生长抑制作用

目的　研究肺癌细胞裂解物负载的树突状细胞 (DC)诱导的淋巴因子激活杀伤细胞 (LAK )对肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法　肺腺癌患者手术切除标本接种裸鼠皮下建立肺腺癌移植瘤模型 ,同时将手术切除标本用反复冻融的方法制备肿瘤细胞裂解物 ;同一患者外周血分离得到的单个核细胞中 ,贴壁的细胞加入DC生长因子 (DCGF)培养得DC ,未贴壁的细胞加入rhIL 2培养得LAK细胞。用肿瘤细胞裂解物负载自体DC ,诱导LAK细胞生成DC LAK细胞 ,注射荷瘤裸鼠腋下以观察DC LAK细胞对肺癌移植瘤的生长抑制作用。结果　用肺癌手术标本能成功建立裸鼠移植瘤模型。DC LAK组、LAK组、DC组和生理盐水对照组肿瘤瘤重平均值分别为 0 .47、1.0 5、1.3 0和 1.5 8g ,DC LAK组、LAK组和DC组肿瘤生长抑制率分别为 70 .3 %、3 3 .5 %和 17.9% ,DC LAK细胞具有抑制裸鼠肺癌移植瘤生长的作用而且强于LAK细胞 (P <0 .0 5 )。结论　通过荷瘤裸鼠体内抗瘤实验证实了DC LAK细胞的抗肺癌作用明显高于LAK细胞 ,提示DC LAK细胞治疗是更为有效的抗肺癌生物治疗方法 ,为DC疫苗用于肺癌的临床治疗提供依据     

COS/TPC同源重组法高效制备人B7(CD80)重组腺病毒

本研究探讨了FN对LAK细胞活性的影响.Extracellular Matrix Protein(ECM)中的一种成分FN是基底膜、细胞间质及细胞表面的重要组成成分.本文发现FN能调节LAK细胞的功能.首先、LAK细胞和FN的粘付能力被增强.第二、经过与FN共同培养的LAK细胞活性比正常要高15～20%左右.FN对LAK细胞活性增强机理是通过激活LAK细胞表面的LFA-1的活性(不是LFA-1数量的增加)来增强LAK细胞和肿瘤细胞的结合功能、提高LAK细胞的杀伤肿瘤细胞的能力.本文的结果表明FN-LAK可能会改善肿瘤治疗效果、并间接提示肿瘤细胞表面及肿瘤组织中的FN成分的多少可直接影响LAK细胞的治疗效果.