滋补肝肾法对大脑中动脉闭塞大鼠皮质脊髓束重塑作用研究

目的:探讨滋补肝肾方药"复健片"对大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠皮质脊髓束重塑作用。方法:Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和药物组,各组根据观测时间点再分为术后4周末、术后5周末两个亚组。采用电凝法闭塞大鼠右侧大脑中动脉,药物组术后1周末按9 g生药/kg给予复健片水溶液灌胃,于术后3周末注射BDA,采用走横木实验(BWT)对各组大鼠运动功能进行评分;采用免疫组织化学方法观测大鼠左侧颈髓BDA和GAP-43的表达。结果 :模型组和药物组BWT评分随着术后时间的延长而升高(P<0.01),其中药物组的评分升高更显著,至术后5周末,与假手术组已无明显差异(P>0.05);而术后4周末,药物组和模型组的左侧颈髓GAP-43平均灰度值较假手术组显著降低(分别为P<0.05、P<0.01),至术后5周末,模型组GAP-43平均灰度值较之同期假手术组,已无显著差异(P>0.05),药物组GAP-43平均灰度值则明显低于其余两组(P<0.01);与同期假手术组相比,模型组和药物组左侧颈髓BDA平均灰度值均明显降低(P<0.01),其中药物组BDA平均灰度值降低更为明显(与同期模型组相比,P<0.05)。结论 :复健片既可以延长MCAO大鼠皮质脊髓束的重塑时间,又可以促进更多的皮质脊髓纤维束越过中线,支配同侧颈髓运动神经元。这可能是复健片促进缺血性脑卒中后期运动神经功能恢复的又一重要机制。     

复健片对大鼠脑梗死不同时间点OMgp表达的影响

目的:观察复健片在不同时间点对脑梗死大鼠脑组织少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMgp)表达的影响,探讨其促进神经发生的作用机制。方法:240只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和药物组四个大组,并根据脑梗死病程每组又分为3d、1周、2周、4周、6周5个亚组,每个亚组动物数为12只。用改良的LongaEZ法制备大脑中动脉阻塞大鼠模型,药物组灌胃给予复健片水溶液,余各组分别灌胃给予同剂量的蒸馏水。用免疫组织化学法观察各组大鼠梗死周边区脑组织OMgp的表达。结果:模型组大鼠脑内的OMgp在梗死后即开始表达,逐渐增高,2周时达到高峰,第6周时还处于高表达状态,明显高于正常对照组(P<0.01)。药物组中OMgp表达与模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:复健片可抑制OMgp的表达,从而促进神经发生。     

中药复健片对大脑中动脉闭塞大鼠脑巢蛋白表达的影响

目的研究中药复健片对大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠脑内巢蛋白的影响,探讨其促进神经发生的作用。方法30只大鼠随机分为3组:药物组、模型组、假手术组。用Tamura法造成MCAO大鼠模型,于造模成功后6d,药物组采用中药复方复健片10g/kg灌胃,余2组分别采用同等量0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d,共2周。用免疫组化法观察MCAO大鼠脑内巢蛋白的表达。结果药物组大鼠脑内巢蛋白表达灰度明显增强,与同期模型组比较差异有显著性(P<0.05)。结论中药复方复健片可显著增强MCAO大鼠脑内巢蛋白的表达,从而促进缺血性卒中大鼠脑神经发生。     

复健片对脑梗死大鼠运动功能和脑组织勿动蛋白-A表达的影响

目的观察中药复健片对脑梗死大鼠运动功能和脑组织勿动蛋白-A(Nogo-A)表达的影响,探讨其促进神经发生的作用机制。方法60只Wistar大鼠随机分为药物组、模型组、假手术组,每组20只。用电凝法制备大脑中动脉闭塞大鼠模型,于造模成功后6h药物组灌胃给予复健片水溶液9g/kg,余2组分别灌胃给予同等量0.9%氯化钠溶液,1次/d,共2周。用横木行走实验评定运动功能;用原位杂交法观察模型大鼠梗死周边区脑组织Nogo-A的表达,并对切片进行图像分析,测定染色平均灰度。结果给药2周后3组大鼠神经功能评分两两比较,差异有统计学意义(P<0.01);药物组大鼠脑组织Nogo-A表达与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论复健片可抑制Nogo-A的表达,从而促进神经发生,改善脑梗死大鼠运动功能。     

从环磷酸腺苷-蛋白激酶A信号通路探讨复健片对脑梗死大鼠颈髓水平皮质脊髓束重塑的作用机制

目的:通过观测大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠颈髓水平cAMP-PKA通路分子表达变化,探讨MCAO模型大鼠颈髓水平皮质脊髓束重塑内源性启动机制及复健片可能的作用机制。方法:制备大脑中动脉闭塞(MACO)大鼠模型。通过横木行走实验(BWT)评定各组大鼠运动功能;ELISA法检测大鼠颈髓水平cAMP的表达变化;RT-qPCR检测复健片干预下模型大鼠颈髓不同时间点PKA-C mRNA的表达变化。结果:大鼠术后1 w、2 w末,与假手术相比,模型组和药物组均可高表达cAMP、PKA-C水平,且药物组表达高于模型组。同时,模型组和药物组BWT评分也有显著改善,药物组改善更为明显。结论:复健片可增加脑梗死大鼠颈髓水平cAMP、PKA-C表达水平,以更大限度地促进受损神经再生,这可能是其对脑梗死后神经功能恢复有促进作用的机制之一。     

天麻素对脑缺血大鼠缺血侧额叶皮质中RhoA和ROCK-2蛋白表达的影响

目的 研究天麻素对脑缺血大鼠缺血侧额叶皮质Ras同源基因家族成员A(RhoA)和Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK-2)表达的影响。方法 大脑中动脉阻塞法(MCAO)造模后,天麻素组腹腔注射天麻素制剂治疗,其他组不加干预。采用Nissl染色观察缺血侧额叶皮质神经细胞变化情况;免疫组化和Westernblot检测缺血侧额叶皮质中RhoA、ROCK-2蛋白的表达情况。结果 与假手术组相比,模型组缺血侧额叶皮质区细胞胞体明显萎缩,胞质减少,部分胞核固缩;Nissl染色细胞数减少(P<0.001);RhoA和ROCK-2蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组相比,天麻素组缺血侧额叶皮质细胞萎缩程度减轻;Nissl染色细胞数增加(P<0.05);RhoA和ROCK-2蛋白表达减少(P<0.05)。结论天麻素可对脑缺血后缺血侧额叶皮质发挥保护作用,其机制可能与抑制RhoA、ROCK-2蛋白表达有关。     

复健片对MCAO大鼠脑梗死周围组织RhoA表达的影响

[目的] 观察复健片对脑梗死大鼠脑组织RhoA表达的影响,探讨其促进神经发生的作用机制。[方法] 60只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和药物组共4个组。用改良的Longa EZ法制备大脑中动脉阻塞大鼠模型,药物组灌胃给予复健片水溶液,余各组分别灌胃给予同剂量的蒸馏水。用免疫组织化学法观察模型大鼠梗死周边区脑组织RhoA的表达。[结果] 药物组与模型组比较显示,药物组大鼠脑组织中RhoA表达虽然较正常对照组增多,但较模型组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).[结论] 复健片可抑制RhoA在脑梗死后的表达,从而促进神经发生。     

氯氮平对地卓西平马来酸盐诱导的精神分裂症大鼠前额叶皮质神经调节蛋白1基因表达的影响

目的观察地卓西平马来酸盐(MK-801)诱导的精神分裂症模型大鼠前额叶皮质神经调节蛋白1(NRG-1)的表达及氯氮平干预后的变化,分析NRG-1基因mRNA的表达水平和动物行为之间的关系。方法 79只大鼠分为对照组(n=31)、模型组(n=36)和干预组(n=12)。对照组腹腔注射生理盐水,模型组和干预组大鼠腹腔注射MK-801,干预组大鼠在注射MK-801 5 min后给予氯氮平进行干预。采用自发活动、共济失调、刻板行为、前脉冲抑制(PPI)测试评定大鼠的精神分裂样行为。应用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠前额叶皮质NRG-1mRNA基因各亚型(Hrg、Ggf、Smdf)的表达水平。结果 3组大鼠自发活动90 min总路程、总共济失调评分、总刻板行为评分两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);3组72、74、78 dB下PPI结果两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在药物作用90 min时,模型组大鼠前额叶皮质Hrg mRNA的表达高于对照组和干预组(P<0.05),模型组Smdf mRNA的表达高于干预组(P<0.05)。模型组大鼠前额叶皮质Hrg mRNA在末次药物注射120 min时的表达低于其在0、30、60、90 min的表达(P<0.05)。大鼠前额叶皮质总NRG-1、Hrg和Smdf mRNA表达水平与自发活动的移动路程存在显著相关(P<0.05);Hrg mRNA的表达与刻板行为评分存在相关性(P<0.05)。结论 MK-801和氯氮平可影响大鼠前额叶皮质总NRG-1、Hrg、Smdf mRNA的表达,大鼠前额皮质NRG-1、Hrg、Smdf mRNA的表达水平与精神分裂样行为之间存在相关性;总NRG-1、Hrg、Smdf mRNA可能参与精神分裂症的发病。     

大鼠局灶性脑缺血后远隔区域rCBF改变

目的 观察大鼠一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)后急性期两侧额叶、丘脑、小脑、下丘脑血流星(regional cerebral blood flow，rCBF)的动态变化。方法 采用线栓法建立大鼠一侧大脑中动脉闭塞模型，按实验需要将实验动物分成正常、单纯缺血二组；用氢清除法测定两侧额叶、丘脑、小脑、下丘脑脑在MCAO后1h、3h、6h、24h rCBF。结果 正常对照组各相应部位rCBF无显著差异(P＞0．05)；一侧MCAO后，两侧额叶皮层、丘脑、下丘脑、对侧小脑半球rCBF下降，MCAO后1h达最低水平(P＜0．05或P＜0．01)，随时间延长，rCBF逐渐增加，除对侧小脑、下丘脑外，其余部位rCBF至MCAO后24h基本恢复正常。结论 一侧MCAO后，可引起两侧额叶、上脑、下丘脑、对侧小脑rCBF改变。     

线栓法制作大鼠脑缺血模型不同类型神经功能缺损特点的研究

目的分析线栓法大脑中动脉阻塞(MCAO)制作大鼠脑缺血模型的类型及不同类型的神经功能缺损情况。方法 150只雄性SD大鼠参照Zea-Longa线栓法造模,术后24 h行MR扫描,根据扫描结果将大鼠分成皮质梗死组(CIG)、皮质下梗死组(SIG)及无梗死组(NIG)3组,分析造模术后1 h及24 h的行为学表现。结果 CIG组与SIG组的神经功能缺损在MCAO1h后均与NIG组有统计学差异(P<0.01),而在24 h后CIG组的神经功能缺陷程度明显大于SIG组(P<0.01),但是SIG组大鼠的神经功能缺陷程度与NIG组无明显统计学差异(P>0.05),而在SIG组中1h后与24h后比较神经功能缺损差异有统计学意义(P<0.01)。结论线栓法MCAO制作大鼠脑缺血模型的不同类型所表现的神经功能缺损特点不一样,皮层下梗死在24h内可自行恢复。     

青藤碱对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用及机制

目的 探讨青藤碱(Sin)对脑缺血再灌注损伤保护作用及机制.方法 将80只Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、Sin低剂量治疗组和Sin高剂量治疗组.用线栓法建立大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型.于术前30 min分别给予治疗组动物Sin 30、60 mg/kg腹腔注射.各组动物于脑缺血90 min再灌注24 h,取脑标本采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,干湿质量法检测脑含水量,HE染色观察脑组织病理改变,分光光度法检测髓过氧化物酶(MPO)活性,羟胺法和硫巴比妥酸盐反应法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)变化.结果 (1)与假手术组比较,脑缺血再灌注组凋亡细胞和脑含水量明显增加(P<0.05);与脑缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组凋亡细胞均明显减少,脑含水量降低,Sin高剂量治疗组凋亡细胞减少,脑含水量降低较Sin低剂量治疗组更明显(P<0.05).(2)与假手术组比较,脑缺血再灌注组MPO活性和MDA含量明显增加,SOD活性下降;与脑缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组MPO及MDA含量均明显减少,SOD活性提高;Sin高剂量治疗组MPO及MDA含量减少、SOD活性提高较Sin低剂量治疗组更明显(P<0.05).(3)Sin高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于脑缺血再灌注组,Sin高剂量治疗组缺血改变亦轻于Sin低剂量治疗组.结论 Sin对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与抗凋亡、抑制炎症反应和自由基生成有关.     

大鼠大脑中动脉永久性缺血和缺血再灌注模型的比较

目的:比较大鼠大脑中动脉永久性阻塞模型和缺血再灌注模型的差异,寻找一种制作简单,成功率高的脑缺血模型。方法:将150只SD雄性大鼠随机分为:永久性大脑中动脉阻塞60只,线栓阻塞大脑中动脉4h、8h、24h后生理盐水灌注后取脑;大脑中动脉缺血再灌注60只,线栓阻塞大脑中动脉100min后,拔出线栓形成再灌注,分别在再灌注4h、8h、24h后灌注取脑;对照组30只。比较模型制作的成功率、术后存活率、神经功能缺失评分、脑梗死体积及模型稳定性。结果:脑缺血再灌注组模型成功率高于永久性脑缺血组,差异有统计学意义(P<0.05);永久性脑缺血模型组死亡率较脑缺血再灌注模型组死亡率有升高趋势,但无统计学意义;TTC染色:永久性大脑中动脉阻塞梗死灶随着缺血时间的延长逐渐扩大,大脑中动脉缺血再灌注梗死灶随再灌注时间的延长无明显变化;结论:大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型手术方式简单、结果稳定、缺血时间可控,是一种较理想的模拟脑梗死的动物模型。     

原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织神经生长因子表达的影响。方法SD大鼠48只随机分4组：假手术组、缺血再灌注模型组、GSP大剂量组、GSP小剂量组，每组12只，应用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型，术后观察动物神经行为学变化并进行神经病学评分，采用免疫组织化学染色检测各组半暗带区颞顶部脑皮质神经生长因子的表达。结果神经功能评分显示模型组有明显的神经功能缺损症状，GSP用药组神经功能评分明显低于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）；与模型组比较，各GSP组神经生长因子的表达明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论原花青素可上调脑缺血再灌注后缺血脑组织内源性神经生长因子的表达，而起到脑保护作用。     

EphB2-Fc融合蛋白促进实验性大脑皮层梗死后内源性神经干细胞的活化

目的探讨脑室内注入EphB2-Fc融合蛋白对大脑皮层梗死后内源性神经干细胞活化的影响。方法采用易卒中型肾血管性高血压大鼠,建立大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,并将其随机分成：（1）假手术组,（2）脑梗死组,（3）梗死＋IgG—Fc组,（4）梗死＋EphB2-Fc组,每组24只。MCAO术后第4天,EphB2-Fc组大鼠经侧脑室注入20μl浓度为200μg／ml的EphB2-Fc融合蛋白,IgG—Fc组大鼠注入等量等浓度的IgG—Fc。MCAO术后第1和第4周,将各组大鼠处死取脑,用免疫组化和原位杂交检测各组大鼠不同时点梗死侧EphB2及其mRNA、巢蛋白（nestin）和多聚唾液酸-神经细胞黏附分子（PSA—NCAM）表达,Western蛋白印迹检测各组大鼠不同时点梗死侧EphB2和nestin蛋白量的变化。结果MCAO术后1周,脑梗死组梗死侧大脑皮层和侧脑室下区EphB2及其mRNA的表达低于假手术组,梗死＋EphB2-Fc组高于梗死＋IgG—Fc组（均P〈0．05）,脑梗死组与梗死＋IgG—Fc组间差异无统计学意义（P〉0．05）;脑梗死组梗死侧侧脑室下区nestin、PSA—NCAM的表达高于假手术组,梗死＋EphB2一Fc组高于梗死＋IgG—Fc组（均P〈0．05）,并可见PSA—NCAM阳性细胞沿胼胝体向梗死灶迁移。MCAO术后4周,各组间梗死侧EphB2及其mRNA表达水平差异无统计学意义（均P〉0．05）,各组脑梗死大鼠梗死侧nestin、PSA—NCAM表达水平下降,各组间nestin表达水平差异无统计学意义,但脑梗死组PSA—NCAM表达水平仍高于假手术组。结论阻断内源性EphB2的活化可促进实验性大脑皮层梗死后脑室下区神经干细胞的增殖和迁移。     

大鼠大脑中动脉栓塞模型的建立

目的:建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,以便今后进一步进行缺血性脑梗死方面的研究。方法:将大鼠随机分成模型组和假手术组,采用线栓法建立大鼠左侧MCAO模型,术后观察体征,进行神经功能缺损评分、脑组织病理学检查、磁共振成像(MRI)检查、血清抗氧化指标测定。结果:假手术组大鼠全部存活,模型组除2只因麻醉过度死亡、1只插线未成功外,其余7只均出现左侧Horner征,神经功能缺损评分在1～3分之间。模型组大鼠脑组织可见显著病理改变,MRI检查脑组织缺血病变明显。模型组血清SOD和GSH-Px活性高于假手术组,MDA含量低于假手术组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:成功建立了大脑中动脉栓塞模型。     

糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注海马区Tau蛋白的表达及意义

目的 观察Tau蛋白在糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马区神经元的表达,探讨Tau蛋白异常磷酸化神经元毒性作用与神经元损伤的关系.方法 健康雄性Wister大鼠60只,随机分为4组:①正常对照组;②假手术组;③脑缺血再灌注组(NIR组);④糖尿病脑缺血再灌注组(DIR组).采用STZ诱导糖尿病和线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,HE法观察海马CA1神经元缺失,用免疫组化方法检测Tau蛋白在糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马区神经元的表达.结果 HE染色:正常对照与假手术组未见神经元缺失,即未发生神经细胞凋亡;DIR组与NIR组均见神经元缺失,即发生了神经细胞凋亡,而且DIR组发生神经元缺失严重,与NIR组比较有明显差异(P<0.05).Tau蛋白染色:正常对照与假手术组极少见Tau免疫染色阳性细胞,DIR组与NIR可明显见到Tau免疫染色阳性细胞,而且DIR组Tau免疫染色阳性细胞数比NIR组更多,比较有明显差异(P<0.05).结论 Tau异常磷酸化神经元毒性作用与糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤有关.     

黄芪注射液加红花注射液对脑缺血再灌注大鼠BDNF的影响

目的:通过观察中药黄芪加红花注射液对局灶性脑缺血再灌注模型脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响来探讨黄芪加红花注射液治疗脑缺血性中风的作用机理.方法:将SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪组、红花组、黄芪注射液加红花注射液组,各组术前12 h与30 min分别腹腔注射相应药物.假手术组和模型组同时注射生理盐水.术后每隔12 h注射等量药物或生理盐水直到最后一批大鼠被处死为止;采用线栓法阻断SD大鼠大脑中动脉复制局灶性脑缺血再灌注模型.分别在缺血再灌注6 h,12 h,24 h,48 h对其神经系统体征进行客观评分后断头处死.行HE染色观察各时间点脑组织病理学形态的改变;并运用免疫组化的方法检测BDNF缺血再灌注6 h,12 h,24 h,48 h蛋白的表达,在光镜下分别计数其阳性细胞数.结果:与模型组比较,各治法组均有显著改善脑缺血再灌注模型鼠神经损伤症状的作用(P＜0.05);能够减轻脑缺血再灌注时的病理损伤;能够促进BDNF阳性细胞在各时间点的表达(P＜0.05);各治法组间比较,以黄芪加红花剂量组的治疗效果更显著(P＜0.05).结论:黄芪注射液加红花注射液促进脑缺血再灌注模型鼠BDNF的上调可能是其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制之一;黄芪注射液加红花注射液组对脑缺血再灌注损伤的治疗作用优于红花治疗组与黄芪治疗组.