双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜VEGF和VEGFR蛋白表达的影响

目的 观察双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VFGFR)蛋白表达的影响.方法 将40只SD大鼠随机分为正常组10只,模型组30只.采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)法建立DR大鼠模型,再随机分为模型对照组、双丹明目组、阳性对照组,每组10只.各组大鼠分别连续给药8周后用蛋白质印迹法(Western Blot)检测视网膜组织VEGF和VEGFR表达.结果 (1)与正常组相比,模型对照组VEGF和VEGFR蛋白表达量升高(P＜0.01);(2)与模型对照组相比,双丹明目组和阳性对照组VEGF和VEGFR蛋白表达量降低(P＜0.01);(3)双丹明目组和阳性对照组相比,VEGF和VEGFR蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 双丹明目胶囊能够降低糖尿病视网膜病变大鼠视网膜VEGF蛋白和VEGFR蛋白的表达,从而可能抑制视网膜血管新生.     

博莱霉素诱发大鼠肺间质纤维化VEGF及其受体的表达及意义

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (Flt ,Flk)在博莱霉素致大鼠肺纤维化肺组织中的表达及意义。方法 :采用免疫组化方法结合图像分析处理系统 ,研究VEGF及其受体在博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织中的免疫反应。结果 :VEGF在正常对照组大鼠肺组织中呈弱表达 ,在肺纤维化大鼠肺组织中呈高表达。Flt及Flk在正常对照组大鼠肺组织中呈弱表达 ,在肺纤维化大鼠肺组织中呈较高表达。结论 :VEGF及其受体在博莱霉素致大鼠肺纤维化肺组织中的高表达与肺纤维化的发生发展有     

血管内皮生长因子诱发早期糖尿病的血-视网膜屏障破坏

目的血管内皮生长因子(VEGF)可以导致强烈的血管渗漏。越来越多的文献报道在糖尿病视网膜病变时VEGF升高。早期糖尿病性视网膜病变的一个特点是血管渗漏增加。本文的目的是探讨应用可溶性Flt阻断VEGF的作用能否抑制视网膜血管渗漏。方法重约200g的S-D大鼠通过注射链左霉素制备糖尿病模型。1周后通过静脉注射5%的PBS加甘油,或白介素-6受体单克隆抗体,或可溶性Flt,24h后应用伊凡思蓝法测定血管渗漏。用枸橼酸钠缓冲液处理的大鼠作为对照组。结果糖尿病大鼠的血管渗漏较对照组显著升高(P<0.05)。PBS加甘油和白介素-6受体单克隆抗体处理后的糖尿病大鼠的视网膜血管渗漏无变化(P>0.05),但用可溶性Flt处理糖尿病大鼠的血管渗漏显著降低(P<0.0001)。结论VEGF在糖尿病性视网膜病变的发生过程中起着十分重要的作用。通过抑制VEGF可以降低早期糖尿病性视网膜病变的血管渗漏。     

血管内皮生长因子及其受体Flt-1在乳腺癌中的表达及意义

目的　试图揭示血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (Flt 1)在乳腺癌组织中的表达规律 ,探讨其与血管生成和肿瘤浸润、转移等生物学行为的关系。方法　应用原位杂交和免疫组织化学技术 ,检测 4 8例乳腺癌组织中VEGF和Flt 1的mRNA和蛋白表达特性。结果　乳腺癌细胞高表达VEGFmRNA和蛋白 ,阳性率分别为 75 %、70 8% ,而血管内皮细胞几乎不表达 ;血管内皮细胞主要表达受体Flt 1mRNA和蛋白 ,阳性血管数分别为 2 6个 / 0 72mm2 ± 12个 / 0 72mm2 、2 4个 / 0 72mm2 ± 12个 / 0 72mm2 ,而少数癌细胞有少量表达 ;VEGF和Flt 1高表达组血管密度明显高于低表达组 ;VEGF和Flt 1表达与组织学分级和淋巴结转移密切相关。结论　VEGF以旁分泌途径促进乳腺癌血管形成 ,并参与肿瘤浸润和淋巴道转移过程 ,检测VEGF和Flt 1表达可做为判定乳腺癌血管生成、恶性度以及浸润转移等生物学行为的可靠指标。     

芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子表达的影响

目的:观察芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)及其mRNA表达的影响.方法:70只SD大鼠以链脲佐菌素(65mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,成模后随机分成模型组、对照组和芪参益气滴丸组.设正常组12只.10个月后用免疫组织化学方法检测各组视网膜VEGF和PEDF表达水平,逆转录-聚合酶链式反应检测VEGFmRNA和PEDFmRNA表达水平.结果:糖尿病大鼠视网膜VEGF及其mRNA表达较正常组显著增强(P＜0.01),PEDF及其mRNA表达较正常组显著降低(P＜0.01).对照组和芪参益气滴丸组视网膜VEGF及其mRNA表达较模型组降低,PEDF及其mRNA表达较模型组显著增加(P＜0.01).结论:芪参益气滴丸可通过降低视网膜VEGF及其mRNA的表达、增加PEDF及其mRNA表达延缓糖尿病视网膜病变进展.     

血中VEGF,IGF-1与2型糖尿病视网膜病变关系的研究

目的探讨血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、胰岛素样生长因子-1(insulin-likegrowthfactor-1)与2型糖尿病视网膜病变发生发展的关系。方法用酶联免疫吸附分析双抗体夹心法、放射免疫分析法分别测定32例正常对照组、29例无视网膜病变的2型糖尿病组(non-diabeticretinopa-thy,NDR)、30例单纯糖尿病视网膜病变组(backgrounddiabeticretinopathy,BDR)和28例增殖性糖尿病视网膜病变组(proliferativediabeticretinopathy,PDR)血浆中VEGF与血清中IGF-1的含量。用t检验、直线相关分析进行组间差异性比较。结果VEGF与IGF-1在NDR组明显高于正常对照组(P<0.01);BDR组和PDR组明显高于NDR组(P<0.05);NDR和BDR两组VEGF与IGF-1之间呈显著正相关(r =0.371;r =0.364,P<0.05)。结论VEGF和IGF-1是促进糖尿病性视网膜病变发病和视网膜新生血管形成的重要因素。     

血管内皮细胞生长因子及其受体在大鼠肺气肿模型中的表达

目的　探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)及其受体 2 (VEGFR 2 )在大鼠肺气肿模型中的表达及意义。方法　经气管内注入脂多糖及熏香烟法建立大鼠肺气肿模型。免疫组化法检测VEGF在肺组织的表达部位 ,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中VEGF的含量 ,Westernblot检测VEGFR 2蛋白的表达。结果　VEGF在肺泡上皮细胞、支气管粘膜上皮细胞及血管内皮细胞表达 ,模型组BALF的VEGF含量 (110 2± 4 6 0 .1)pg/mL较对照组 (2 0 17± 84 0 .6 ) pg/mL明显降低 (P <0 .0 5 ) ;模型组VEGFR 2蛋白的表达低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　VEGF及VEGFR 2的减少可能参与了肺气肿的发生     

血管内皮生长因子与早期糖尿病大鼠视网膜屏障破坏的相关性

 目的 探讨VEGF是否与早期糖尿病大鼠视网膜屏障的破坏有相关性，并定位其破坏位置。方法　雄性Wister大鼠144只，随机分为实验性糖尿病组和正常对照组（各72只）。用RT-PCR技术定量第3、7、10、14天时两组大鼠视网膜中VEGFmRNA的表达水平。同时使用红色荧光微球来空间定位早期糖尿病大鼠视网膜屏障的破坏情况。结果　实验性糖尿病大鼠视网膜VEGF mRNA表达水平随时间呈现升高趋势。其视网膜屏障的破坏位于浅层视网膜的静脉及毛细血管。结论　早期糖尿病大鼠视网膜屏障的破坏与VEGFmRNA水平的升高相一致，其破坏位置在浅层视网膜的静脉及毛细血管。     

血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子与糖尿病大鼠视网膜早期血管病变的关系

目的　观察糖尿病大鼠视网膜病变与血管内皮生长因子 (VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)作用的关系 ,在理论上指导临床工作。方法　将 55只大鼠建立糖尿病大鼠模型 ,随机分为正常对照组 (M ) 1 0只 ,糖尿病 1个月组 (M1 )、3个月组 (M3)、5个月组 (M5)各 1 5只。标本制成视网膜血管铺片 ,行bFGF、VEGF原位杂交、免疫组织化学 ,并分别对视网膜血管进行透射电镜观察。结果　 (1 )视网膜消化铺片 :见周细胞数量 :M1 组与M组相比差异无显著意义 (P >0 0 5) ,而M3组及M5组与M组相比明显减少 (均P <0 0 1 )。毛细血管形态以M5组病变最重 ,可见毛细血管栓塞 ,无细胞毛细血管。 (2 )VEGF原位杂交 :仅M5组表达为 34 %。 (3)VEGF免疫组织化学 :M5组有表达 ,为 56 %。bFGF原位杂交从M3组开始有表达 ,为 78% ;M5组增至 89% ,bFGF免疫组织化学也从M3组开始 ,为 56 % ;M5组增至 89%。 (4)血管的透射电镜观察 :M组未见异常改变 ,从M1 组开始出现异常改变 ,以M5最明显。表现为基底膜节段性增厚、断裂缺失 ,内皮细胞肿胀变形 ,向管腔内指状突起 ,异染色质浓集居边 ,周细胞核异染色质浓集居边 ,线粒体肿胀变性 ,甚至呈空泡状。结论　糖尿病大鼠视网膜病变时血管器质性改变在先 ,而生长因子表达在后 ,VEGF作用在bFGF     

血管内皮生长因子在肿瘤免疫中的抑制作用

众所周知,血管内皮生长因子(vascularendothelialcellgrowthfactor,VEGF)是内皮细胞生长和血管生成的缺氧诱导刺激因子[1],在生理和病理过程中能增加血管的通透性,促进血管形成。目前,VEGF在肿瘤的生长和转移过程中的重要作用已得到广泛研究。然而其在肿瘤免疫中的作用谈之较少,这主要是通过VEGF抑制抗原呈递细胞树突状细胞(dendriticcell,DC)的分化成熟而实现的[2]。1VEGF分类及主要生理作用VEGF属于血小板源生长因子(PDEF)家族,是两个酪氨酸激酶受体VEGFR -1(Flt -1)和VEGFR -2(KDR/Flk -1)的配体,前者主要表达于单核细胞而后者主要在内皮细胞表达[3]。VEGFR -3也是酪氨酸激酶的受体,结构同前两个相似但不结合VEGF ,它最初表达于胚胎内皮,在发育过程中血管内皮的表达逐渐减少而主要表达于成人组织的淋巴管内皮。VEGFR -3的两个配体,是蛋白分解过程中形成的多肽组成二硫化物连接的二聚物,与VEGF有高度的同源性,因而分别命名为VEGF -C和VEGF -D[4]。尽管VEGF -C能与表达于血管内皮的VEGFR -2...     

内皮素受体拮抗剂对糖尿病大鼠视网膜VEGF的作用

目的观察内皮素受体拮抗剂对糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(VEGF)升高的抑制作用。方法31只成年雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病非治疗组和糖尿病治疗组(予内皮素受体拮抗剂)。分组饲养24周后取材,ELISA法检测视网膜组织内VEGF水平。结果糖尿病治疗组VEGF水平明显低于糖尿病非治疗组组,经统计学分析,具有非常显著性差异(P<0.01)。结论一定浓度的内皮素受体拮抗剂能降低糖尿病大鼠视网膜内VEGF水平,对糖尿病视网膜病变的发生可能有一定的预防作用。     

2型糖尿病患者房水中VEGF及PEDF水平的研究

目的探讨2型糖尿病患者与健康人房水中血管内皮生长因子及视网膜色素上皮源性因子水平是否存在差异。方法糖尿病患者组39例39只眼,存在糖尿病性视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）患者18例18只眼,无DR患者21例21只眼,老年性白内障患者20例20只眼作为对照组。用酶联免疫吸附法检测房水中VEGF及PEDF的水平。结果在2型糖尿病组中存在DR及无DR患者房水中VEGF浓度分别为（1241．39±274．71）pg／ml及（1183．31±231．12）pg／ml,与对照组[（951．47±280．39）pg／m1]相比,差异有统计学意义（P=0．004,P=0．013）。对照组、DR组及无DR组患者PEDF浓度分别为（40．11±15．87）ng／ml、（50．13±46．73）ng／ml、（34．68±4．77）ng／ml,与对照组相比,无DR患者房水中PEDF浓度明显降低（P=0．042）。对照组、DR组及无DR组患者房水中VEGF／PEDF分别为26．15±11．92、32．41±12．11、34．58±7．97,与对照组相比,其余两组患者房水中VEGF／PEDF明显升高（P=0．038;P=0．002）。结论糖尿病患者房水中VEGF水平及VEGF／PEDF升高,提示2型糖尿病患者房水中VEGF与PEDF的失衡可能与糖尿病性视网膜病变的发生、发展有关。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子及其受体Flk1的影响

目的探讨补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Fetal liver kinase1,Flk1)的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、补阳还五汤组,大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,采用免疫组织化学法和酶联免疫法检测各组动物脑内VEGF、Flk1的表达和蛋白水平,同时评价动物神经功能。结果在正常大鼠脑内有少量VEGF和Flk1阳性细胞,脑缺血后VEGF和Flk1阳性细胞增加;与模型组比较,尼莫地平、补阳还五汤均能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,增强VEGF和Flk1的表达,提高VEGF蛋白水平(P<0.05);于7、14d补阳还五汤作用强于尼莫地平(P<0.05)。结论补阳还五汤增强大鼠局灶性脑缺血后VEGF及Flk1的表达和提高VEGF蛋白水平,是其抗脑缺血的可能作用机制之一。     

血管内皮生长因子小干扰RNA有效抑制小鼠视网膜新生血管

Background The mechanism of retinal neovascularization is not understood completely.Many growth factors are involved in the process of retinal neovascularization,such as vascular endothelial growth fac...     

链脲佐菌素构建糖尿病小鼠视网膜病变模型及评价

目的 建立链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠视网膜病变模型,研究早期糖尿病小鼠视网膜的病理改变及其发展过程中血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR1、VEGFR2）在动物模型中的表达情况。方法 6～8周龄C57BL/6J小鼠腹腔连续注射STZ（55 mg/kg）5 d,注射后1周时测量空腹血糖浓度,将糖尿病模型建立成功的小鼠与对照组小鼠均喂养5个月。注射后5个月时,通过石蜡切片H-E染色、伊文思蓝灌注造影、视网膜血管网铺片等方法分析糖尿病小鼠视网膜组织形态变化。通过实时定量PCR、蛋白质印迹法分析糖尿病视网膜病变过程中VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2的表达情况。结果 与对照组相比,注射后1周、1～5个月时模型组小鼠血糖水平均升高（均高于16.5 mmol/L）,差异均有统计学意义（P均<0.01）。注射后5个月时模型组小鼠视网膜全层变薄,感光细胞层、内核层及外核层细胞数量减少,排列紊乱;血管走行迂曲,出现渗漏及渗漏斑;血管内皮细胞数量增加,形态改变,周细胞数量减少,可见无细胞毛细血管、管腔闭塞;VEGF、VEGFR1、VEGFR2的蛋白质和mRNA表达均增加,与对照组相比差异均有统计学意义（P均<0.01）。结论 成功构建糖尿病小鼠视网膜病变模型,该模型表明在糖尿病发展5个月后出现增殖性糖尿病视网膜病变,且糖尿病小鼠视网膜中VEGF、VEGFR1和VEGFR2表达水平均上升。     

Vascular endothelial growth factor up-regulates the expression of intracellular adhesion molecule-1 in retinal endothelial cells via reactive oxygen species, but not nitric oxide

Background The vascular endothelial growth factor （VEGF） is involved in the initiation of retinal vascular leakage and nonperfusion in diabetes. The intracellular adhesion molecule-1 （ICAM-1） is the key mediator of the effect of VEGFs on retinal leukostasis. Although the VEGF is expressed in an early-stage diabetic retina, whether it directly up-regulates ICAM-1 in retinal endothelial cells （ECs） is unknown. In this study, we provided a new mechanism to explain that VEGF does up-regulate the expression of ICAM-1 in retinal ECs. Methods Bovine retinal ECs （BRECs） were isolated and cultured. Immunohistochemical staining was performed to identify BRECs. The cultured cells were divided into corresponding groups. Then, VEGF （100 ng/ml） and other inhibitors were used to treat the cells. Cell lysate and the cultured supernatant were collected, and then, the protein level of ICAM-1 and phosphorylation of the endothelial nitric oxide synthase （eNOS） were detected using Western blotting. Griess reaction was used to detect nitric oxide （NO）. Results Western blotting showed that the VEGF up-regulated the expression of ICAM-1 protein and increased phosphorylation of the eNOS in retinal ECs. Neither the block of NO nor protein kinase C （PKC） altered the expression of ICAM-1 or the phosphorylation of eNOS. The result of the Western blotting also showed that inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K） or reactive oxygen species （ROS） significantly reduced the expression of ICAM-1. Inhibition of PI3K also reduced phosphorylation of eNOS. Griess reaction showed that VEGF significantly increased during NO production. When eNOS was blocked by L-NAME or PI3K was blocked by LY294002, the basal level of NO production and the increment of NO caused by VEGF could be significantly decreased. Conclusion ROS-NO coupling in the retinal endothelium may be a new mechanism that could help to explain why VEGF induces ICAM-1 expression and the resulting leukostasis in diabetic retinopathy.     

血管内皮生长因子在STZ糖尿病大鼠视网膜的表达

目的 观察血管内皮生长因子（VEGF）在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠视网膜的表达，以探讨其在早期糖尿病视网膜病变（DR）中的作用。方法 选择健康成年Wistar大鼠40只，随机分成正常对照组（CON）、糖尿病1个月（DM1）、3个月（DM3）及6个月（DM6）组。大鼠腹腔内注射STZ诱发大鼠糖尿病，制备大鼠视网膜石蜡切片行免疫组化ABC法染色，光镜观察。结果 VEGF于CON和DM1组只表达于内核层及节细胞层部分细胞；病程3月时，尚可见视网膜血管的阳性反应。6月时，阳性反应范围又扩大致视杆内节和色素上皮细胞，结论 随病程进展，VEGF在视网膜的表达呈逐渐增强的趋势，提示它在早期DR的发生，发展中起重要作用。     

缺氧条件下视网膜微血管内皮细胞中缺氧诱导因子1和血管内皮生长因子m RNA表达的研究

目的 探讨视网膜微血管细胞在缺氧过程中缺氧诱导因子1(HIF1）和血管内皮生长因子(VEGF)基因mRNA水平表达的变化。方法视网膜微血管细胞(RECs)分别在正常氧、缺氧3h不同条件下培养后，应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量测定HIF1a和VEGF基因的mRNA水平的表达。结果缺氧组RECs HIF1基因的mRNA水平表达为对照组的4．6倍。同时缺氧组RECs细胞的VEGF基因的mRNA水平表达为对照组的3倍。结论缺氧能引起视网膜微血管细胞的HIF-1及VEGF基因mRNA水平高表达，提示缺氧可能通过HIF1基因的转录途径来诱发VEGF基因的高表达导致视网膜新生血管形成。     

Annexin A2 promotes choroidal neovascularization by increasing vascular endothelial growth factor expression in a rat model of argon laser coagulation-induced choroidal neovascularization

Background Choroidal neovascularization （CNV） is a common cause of visual loss in the elderly patients with age-related macular degeneration and represents the growth of subretinal new vessels in the macular region. This study aimed to investigate the relationship between annexin A2 （ANXA2） and vascular endothelial growth factor （VEGF） in CNV.Methods In a rat model of argon laser coagulation-induced CNV, the mRNA expressions of the annexins and VEGF protein expression in the retina were detected using fluorescent real-time polymerase chain reaction （PCR） and immunohistochemistry, respectively. The interactions between ANXA2 and VEGF in both a retinal pigment epithelial cell line RPE-J and the rat model of CNV were examined by means of RNA interference, real-time PCR, Western blotting, enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and histopathological examinations. Results Fundus fluorescein angiography （FFA） showed that argon laser coagulation of the retina induced stable CNV models in the rats. Two to three weeks after the coagulation, ANXA2. and VEGF expressions in the coagulated area in the retina and choroid increased to the peak level, while the other annexin members （ANXA4, ANXA5, ANXA7 and ANXA11） showed no obvious changes. In RPE-J cells and the CNV model, RNA interference of ANXA2 gene significantly lowered the VEGF protein and mRNA expressions, and application of an adenoviral vector containing ANXA2 gene markedly increased VEGF expressions in the rat model of CNV, but produced no significant effects on the expressions of the kinase insert domain-containing receptor （KDR） or the fms-like tyrosine kinase （Fit-l）. The expression of KDR inhibited the increment in ANXA2 expression, but VEGF and Rt-1 did not directly affect ANXA2 expression. Conclusion Besides the role as a plasminogen and the receptor of tissue plasminogen activator, ANXA2, which is under regulation of KDR via a negative feedback mechanism, also participates in neovascularization by regulating VEGF expression through a positive feedback mechanism.