对HBsAg抗原决定簇a和d单克隆抗体性质的研究

用小鼠骨髓瘤细胞(Sp 2/0) 与HBsAg免疫过的BALB/C小鼠脾细胞融合,获得11株产生抗-HBs的杂交瘤细胞系,其中10株分泌抗-a决定簇的MCA (单克隆抗体),用ID法测得对adr、adw和ayw亚型滴度可达1/100～1/3,200。另一株分泌抗-d决定簇的MCA,对adr和adw亚型ID法滴度为1:1,6004～1:3,200,而对ayw则不起反应。对其中的5株细胞分泌的MCA免疫球蛋白进行亚类分析,证明一株为IgG2a,4株为IgG1。     

小鼠肝炎病毒(MHV-1)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和鉴定

用小鼠肝炎病毒(MHV-1)接种DBT细胞,收获病毒经反复冻融、超声波处理、逐级差速离心提纯和浓缩。用该病毒提取液经腹腔免疫SPF级BALB/c系小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP_(2/0)融合,通过间接ELISA试验,筛选出5株分泌MHV-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株(C_(10)H_8、A_(11)C_(10)、F_2G_2、F_3D_(11)、F_7B_9)。5株单抗与流行性出血热病毒(EHFV)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、痘苗病毒、仙台病毒、小鼠肝炎病毒(MHV-2、-3、-JHM、-A_(59))均无反应。抗MHV-1的阳性血清能阻断5株单抗与MHV-1的反应。5株单抗均无沉淀特性和中和特性。液氮保存6个月后复苏,仍可分泌特异性抗体。用MHV-1单抗鉴定上海分离到的1株小鼠肝炎病毒(MHV-Hu_(79)),证实MHV-Hu_(79)株不是MHV-1。     

分泌抗尿激酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

以医用尿激酶免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Fo和Ns-1骨髓瘤细胞进行3次融合,筛选到6株分泌抗尿激酶单克隆抗体的杂立瘤细胞系,分别为IUB_5、IUD_2、3UA_2、3UD_12、3UG_2和3UH_7细胞株,对其中IUB和IUD_2两个细胞株进行克隆化培养、冷冻、储存、复苏传代和染色体分析等处理,结果显示IUB_5和IUD_2确系BALB/C鼠脾细胞与FO骨髓瘤细胞融合后获得的单个细胞的克隆。根据免疫双扩散法和ELISA方法鉴定,它属IgG_1和IgG_(2(?));其培养上清液的ELISA效价为10~(-2)～10~(-3),注入BALB/C×C_(57)第一代杂交鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-6)～10~(-7)。经高纯度的低分子量尿激酶检测后,确定是抗高分子量尿激酶的单克隆抗体。     

抗A组轮状病毒单克隆抗体特性鉴定及临床初步应用

本文报道了A组RV McAb的特性鉴定及临床初步应用。用从河南省腹泻犊牛粪便中分离的HN-7毒株(RV)免疫BALB/C小鼠,用杂交瘤技术获得2株分泌A组RV特异性McAb的杂交瘤细胞。所获2个McAb(2C_7、3C_9)与A组RV第1血清型Wa株、第3血清型SA-11株、第6血清型NCDV株,以及从国内猪、牛粪便中分离的4株未分型毒株的间接ELISA效价达1:10~5～1:10~6,但与这7个毒株的血凝抑制滴度≤1:8,中和效价≤1:100,表明这2个McAb是针对A组RV共同抗原的。用此McAb建立的单夹心ELISA技术,测定162人、牛腹泻粪样,与常规ELISA总符合率为98.8％。     

分泌抗巨细胞病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

用CMV-AD_(169)病毒株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP_(2/0)细胞融合,获得5株分泌抗CMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清液效价(ELISA)为1∶32～1∶128,腹水效价为10~4～10~5,经证实McAb为IgG2a或IgM,均具有HCMV种特异性,可作为特异、敏感的免疫试剂,用于巨细胞病毒感染的早期快速诊断。     

miRNA-10a对小鼠肝纤维化细胞增殖及TGFβ1/Smads信号转导通路表达的影响

目的 通过观察肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)小鼠肝组织TGFβ1/Smads信号转导通路的表达与HF进展的关系,探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-10a对于HF的作用机制.方法 选用9周龄健康雄性小鼠(C57 BL6/J) 40只,按照数字表法随机分为对照组和HF模型组(观察组),对照组生理盐水5μl/g腹腔注射,每周2次,注射8周;观察组10％ CCL4橄榄油5 μl/g腹腔注射,每周2次,注射8周,制作小鼠HF模型.RT-PCR法检测HF细胞中miRNA-10a表达后,将观察组HF细胞进行培养及miRNA-10a模拟物转染(转染组),CCK-8法检测HF细胞增殖能力,Western blotting检测HF细胞中TGFβ1、Smad7的表达水平.结果 与对照组比较,观察组miRNA-10a表达水平明显增加(P＜0.05);与对照组比较,转染组肝细胞miRNA-10a表达水平明显降低(P＜0.05);与对照组相比,低表达miRNA-10a明显降低观察组TGFβ1的表达水平,提高Smad7的表达水平(均P＜0.05).结论 小鼠HF细胞中低表达miRNA-10a,转染miRNA-10a模拟物可明显促进小鼠HF细胞增殖,其作用机制是通过miRNA-10a调控TGFβ1/Smads信号转导通路促进小鼠HF.     

鼻腔结构异常导致通气障碍患者手术前后鼻通气功能的变化及其临床意义

目的 评估鼻腔结构异常所致通气障碍的患者手术前后的鼻通气功能,分析其相关性.方法 选择2014年9月至2016年9月于该院住院患者,分为3组.A组为结构性鼻炎组76例,B组为慢性鼻-鼻窦炎(CRS)不伴有鼻息肉(CRSsNP)组70例,C组为对照组72例.记录3组患者术前视觉模拟量表(V A S)评分,术前、术后鼻声反射和鼻阻力测量结果 ,并对相关性进行分析.结果A组患者手术前后鼻塞VAS评分差异有统计学意义(P<0.01),B组患者差异无统计学意义(P>0.05).术前3组患者MCA1、MCA2、MD1、MD2、NV5和RT比较,差异无统计学意义(P>0.05);MCA1a/MCA1b、MCA2a/MCA2b、MD2a/MD2b、NV5a/NV5b及Rlr比较,差异有统计学意义(P<0.05).术前A组、B组患者VAS评分与MCA1、MCA2、MD1、MD2、NV5和RT无相关性(P>0.05),与MCA1a/MCA1b、MCA2a/MCA2b、MD1a/MD1b、MD2a/MD2b、NV5a/NV5b和Rlr呈正相关(P<0.05).术后A组、B组患者上皮化均良好,上皮化时间3~10周,无鼻腔粘连、鼻甲萎缩及鼻中隔穿孔等并发症.术后3组患者MCAla/MCA1b、MD1a/MD1b、NV5a/NV5b、Rlr比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而在MCA2a/MCA2b、MD2a/MD2b方面差异有统计学意义(P<0.05).结论 双侧鼻腔结构的对称程度与鼻塞严重程度有一定相关性,结构性鼻炎手术侧重点是恢复对称的鼻腔结构,且术后患者鼻塞症状明显改善.     

抗人hER单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备抗人hER单克隆抗体。方法:用原核表达的人雌激素受体(hER)重组蛋白为抗原,免疫BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,进行细胞融合。结果:通过ELISA和免疫组织化学法筛选,有限稀释克隆化,得到一株分泌抗hER单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2B8/1C5/2C3),经鉴定2B8/1C5/2C3分泌的单克隆抗体为IgG2a,利用Western Blot分析,显示在23kU处针对hER重组蛋白位置有一特异性条带;利用乳腺癌组织进行的免疫组织化学染色结果显示该株细胞产生的单克隆抗体与细胞核呈强阳性反应。结论:该单克隆抗体适于乳腺癌组织hER的免疫组化检测。     

间日疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其鉴定

目的研制间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)单克隆抗体,并对抗体特性进行了初步鉴定。方法用纯化的重组PvLDH蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,测定其免疫球蛋白亚类及效价,结合ELISA、Western blot试验分析其特异性。结果共获得5株稳定分泌抗PvLDH重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别为6D1、6D2、5A10、5C7、4A8。5株单抗培养上清的ELISA效价为1∶512～1∶1024,腹水效价为1∶12800～1∶25600,其中5C7、6D1经Western-blot鉴定能与天然的恶性疟原虫和间日疟原虫的LDH发生特异性反应。结论本研究方法成功制备并获得了针对PvLDH的单克隆抗体,为进一步研究疟疾诊断试剂奠定了基础。     

抗幽门螺旋菌单克隆抗体的制备和临床应用

用幽门螺旋菌(HP)109免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,得到3株分泌高效价抗HP单克隆抗体(HP-MAbs)的杂交瘤细胞SOH_7、SCH_(10)和SCH_(10)。3株HP-MAbs主要与HP58000菌体蛋白条带反应。HF-MAbs SCH_9免疫过氧化物酶染色,与18株HP反应均阳性,与空肠弯曲菌、结     

鼠抗人C_3McAb的制备及其特性

C_3成分是补体系统活化的枢纽,深入研究C_3是免疫病理学中的重要课题。但因纯化C_3难度较大,不易得到高纯度的抗C_3抗体,给研究工作带来许多不便。制备高度专一性的抗C_3McAb实属必需。我们将纯C_3免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,共获4孔稳定的杂交瘤,经抗C_3ELISA和CH_(50)抑制鉴定,有3个阳性孔,经有限稀释,有7株分泌较多抗体的克隆。来源于C_3孔的5个克隆分泌的Ig属IgG_1,用ELISA法检测     

抗胰岛素的单克隆抗体

用猪胰岛素免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞 NS-1融合,获得两株分泌抗猪胰岛素单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为4B9和3B2。其中,以4B9细胞的抗体分泌能力最强。其培液抗体的 ELISA 效价为10~(-2)～10~(-3);注入同系小鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-6)～10~(-7)。其分泌抗体属 IgG_1亚类;对猪胰岛素的亲和常数(Ka)为5.86×10~9L/mole;与用 DNA 重组技术制备的人胰岛素,呈交叉反应。     

抗人胰岛素McAb的制备及初步应用(简报)

对BALB/C小鼠而言,人胰岛素(hI)的免疫原性很弱,因此目前尚未见有成功制备出抗hI McAb的报道。我们用20～50μg hI对BALB/C小鼠进行多次的基础和融合前的加强注射,取其脾细胞与SP2/O小鼠骨髓瘤细胞用分子量为4000的PEG进行融合,获得了2个稳定分泌抗hI McAb的杂交瘤株(2B和2C)。在液氮冻存16个月,历经多次复苏、传代、再克隆化及小鼠腹腔内接种,其McAb的特性未见有明显改变。RIA及类和亚类的分析结果表明,2种McAb均属IgGza,腹水液中McAb的滴度均为3×10~5,k值分别高     

抗猴逆转病毒Ⅰ型(SRV-1)杂交瘤细胞株的建立及应用

以SRV-1蔗糖梯度离心纯化抗原免疫SPF级的BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠脾细胞融合。应用间接免疫荧光法(IFA)检测抗体,抗原为感染SRV-110d的Raji细胞。筛选出两株SRV-1小鼠杂交瘤细胞株及单克隆抗体(McAb)C_4和C_(15)。两株杂交瘤细胞经3次克隆后分别注入同品系的小鼠腹腔,所产生的腹水经IFA和ELISA法测定其滴度为1:800～1:1600。经琼脂免疫双扩散法鉴定,C_4McAb     

分泌本周氏蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

本文报告了以人的本周氏蛋白(BJK)免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/o—Ag14小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)MW400作用下融合,并经7次克隆后获得二株抗人的BJK杂交瘤细胞系(E_6,H_4)。经染色体核型分析证实为杂交瘤细胞。本单克隆抗体经标准兔抗小鼠IgG亚类血清鉴定,属小鼠IgG_2a,IgG_2b。两株细胞经液氮冻存、复苏仍能正常分泌抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定植瘤小鼠的腹水及其血清的抗体滴度分别为10~4—10~5,10~3—10~4。     

一株IgG3抗异麦芽四糖—硬脂酰胺单克隆抗体的制备及免疫化学研究

以异麦芽四糖—硬脂酰胺(S-IM_4)免疫C_(57)BL/6J小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,从4次细胞融合中,筛选出1株分泌IgG_3K抗S-IM_4杂交瘤。用定量沉淀试验和ELISA定量抑制试验测定此单克隆抗体结合部位的特异性与大小,发现其互补于异麦芽七糖(IM_7)。用亲和电泳法测得此单克隆抗体对葡聚糖B_(512)和IM_7的亲和常数分别为1.4×10~5ml/g和3.1×10~4M~(-1)。     

分泌抗人C反应蛋白单克隆抗体杂交瘤的建立

应用C反应蛋白免疫的Balb/c小鼠脾细胞与P_3V_1C_2小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇4000作用下融合,并经克隆后获得了3株抗人CRPMcAbs的杂交瘤细胞抗CRPI—2—3—1、2—3—4、2—6—1.用ELISA法测定培养的其杂交瘤细胞上清,及腹水,含有较高滴度的抗体含量,用琼脂免疫双扩散法证明它仅与人CRP及CRP阳性血清出现透明沉淀反应.用山羊抗鼠Ig亚类血清鉴定,其McAbs均属小鼠1gG.     

不同品系的小鼠对杜氏利什曼原虫感染的敏感性观察

本实验观察了8株近交小鼠及1株远交小鼠对杜氏利什曼原虫急性感染的敏感性。结果表明,615、C_(57)BL及SMMC/C×615三株小鼠在每鼠腹腔接种利杜体3×10~6、9×10~6及2×10~7后均可达到全部或接近全部感染成功,而且感染度也较高,接种量加大感染度亦加重,属于敏感株小鼠。其余6株小鼠则不易感染成功(SMMC/B、SMMC/C、ICR/JCI及昆明株)或仅有低度的感染(SMMC/A、SMMC/D),故属于不敏感株小鼠。鼠株对杜氏利什曼原虫的敏感性似与宿主的基因控制关系密切。     

BABL/c小鼠腹腔B-1a细胞对抗原刺激的增殖和凋亡反应

 目的 研究Babl/C小鼠腹腔B-1a细胞对抗原F(ab’)2GαMIgM刺激的增殖和凋亡反应。方法 腹腔灌洗获得Babl/C小鼠腹腔细胞，CD90免疫磁珠阴性选择继以CD5免疫磁珠阳性选择纯化B-1a细胞，以不同浓度的F(ab’)2GαMIgM（0，5，10，20，40μg/mL）处理，分别培养24h,48h,72h后，用噻唑蓝测定其增殖反应，Annexin－Ⅴ法测定其凋亡。结果 与空白对照组相比，接受抗原刺激的B-1a细胞的增殖反应明显减弱，同时凋亡增加，抗原F(ab’)2GαMIgM浓度20μg/mL时的效应趋向最大，并且在24h，48h，72h各个时间段无明显区别。结论Babl/C小鼠腹腔 B-1a细胞接受抗原刺激后，不表现出增殖反应，反而启动凋亡。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的研究——12株杂交瘤细胞的建立及其分泌抗体的分析

本文报道12株分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体(HBsAg McAb)杂交瘤细胞的建株及其 McAb 性质的分析结果,用 ID、CEP、PHA 和 ELISA 等四种方法均测得较高水平的McAb。杂交瘤细胞培养液中 McAb 的 PHA 效价为1:80～1:320,由杂交瘤诱生的小鼠腹水 McAb的 ID 和 CEP 效价可高达1:3,200～6,400,PHA 和 ELISA 滴度分别为10~(-4)～10~(-5)和10~(-5)～5×10~(-7)。将这些腹水以 PBS 稀释到 10~(-5),分别与~(125)I-HBsAg(2×10~4cpm)结合,其结合率为52.8～68.4%.12个 McAb 的特异性均良好,其中1个为抗“HBs/d”亚型抗体,其余的均为抗“HBs/a”型特异性抗体。这些 McAb 均属小鼠 IgG_1亚类。选出其中3个 McAb 用于制备 HBsAg 诊断试剂,获得良好结果。