SELDI技术筛选胃癌相关血清蛋白质指纹图谱的临床研究

目的 应用SELDI-TOF-MS技术筛选胃癌相关血清蛋白质多肽谱指纹并建立辅助诊断胃癌模型.方法 采用CMIO弱阳离子芯片,结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测50例首次就诊且病理诊断为胃癌患者和16例健康人血清样本并记录其蛋白质多肽谱指纹,利用Biomarker Wizard软件比较两组间的血清蛋白质指纹图谱.Biomark-er Patterns软件进行分析,建立胃癌的特异指纹模型.结果 胃癌患者血清蛋白质多肽谱与健康人相比,有34个蛋白质差异有统计学意义,其中m/z为6016,6744,2822,4474,7892和3242的六个蛋白质组成的诊断模型能达到鉴别胃癌患者和健康人的最佳诊断效果,在测试模式下,灵敏度和特异度分别为96.0%和93.8%,准确度为95.5%.结论 SELDI-TOF-MS技术用于胃癌患者血清蛋白质多肽谱分析可筛选出有意义的差异表达蛋白组多肽谱指纹,可用此方法建立胃癌的辅助诊断模型.     

建立胃癌高发区胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型的探讨

目的 应用表面加强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术分析胃癌血清蛋白质指纹图谱,筛选胃癌特异性血清蛋白组合,建立胃癌诊断模型.方法 利用强阴离子交换芯片(Q10)分别对山东省临朐县胃癌高发区36例胃癌患者和46例浅表性胃炎患者的血清蛋白指纹图谱进行检测,采用ZUCIPDAS蛋白芯片数据分析系统,建立高发区胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型,并利用盲筛法验证模型的正确性.结果 通过对26例胃癌患者及37例浅表性胃炎患者血清蛋白指纹图谱进行检测,筛选出差异具有统计学意义的6个蛋白质峰,质荷比分别为8587、6945、8243、3899、7035和9943,并建立胃癌蛋白指纹图谱诊断模型,该模型诊断胃癌的灵敏度达88.5%,特异度达97.3%.在完成建模后,选择19例患者血清进行盲筛,其中胃癌患者10例,浅表性胃炎患者9例.通过盲筛验证,该模型诊断胃癌的灵敏度为80.0%,特异度为88.9%.结论 初步建立了胃癌高发区胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型,该模型诊断胃癌的灵敏度和特异度均达到80%以上,该方法为胃癌的诊断提供了新的思路.     

新疆维吾尔族宫颈癌蛋白质组图谱分析

目的:探讨筛选并建立新疆维吾尔族子宫颈癌血清蛋白质组图谱诊断模型可能的临床价值。方法:采用CM10蛋白芯片和SELDI-TOF-MS技术检测40例子宫颈鳞癌、30例宫颈上皮内瘤变Ⅲ级和15例健康人的血清蛋白质组图谱,ZUCI-蛋白芯片数据分析系统分析并建立维吾尔族子宫颈癌蛋白质组图谱诊断模型。结果:宫颈癌与宫颈上皮内瘤变Ⅲ级患者和健康人存在139种差异蛋白质质谱峰,有分类意义的蛋白质7种。其中质荷比为6 467.26、6 993.199在正常对照组、上皮内瘤变组和宫颈癌组中表达逐渐降低;1 081.275、1 083.193、1 122.849、8 929.189、15 939.86在正常对照组、上皮内瘤变组和宫颈癌组中表达逐渐增高。这7个质荷比峰建立了维吾尔族宫颈癌蛋白质组图谱诊断模型,其准确度85.00%,敏感度72.73%。结论:该组建立的诊断模型可以有效区分维吾尔族宫颈癌患者和正常妇女,为新疆维吾尔族宫颈癌癌的诊断与筛查提供了一条崭新途径。     

不明原因流产与正常早孕妇女血清蛋白质谱

目的研究不明原因流产患者血清蛋白质谱特征,探讨不明原因自发性流产的可能病因。方法采用表面增强激光解离飞行时间质谱技术(SELDI-TOFMS),运用WCX2蛋白质芯片检测39例不明原因流产患者和30例正常早孕血清蛋白质谱,获得的蛋白质谱用Biomarker Wizard软件分析,初步筛选蛋白质峰,结合生物信息学的支持向量机方法建立并测试不明原因流产患者血清蛋白质指纹图谱模型。结果在芯片上捕获到251种蛋白质,经蛋白质质谱仪分析发现不明原因流产患者与正常对照组有29种差异蛋白,从中筛出差异显著的5种蛋白质组成原发不孕患者血清的蛋白质谱最佳优化模型,其中质荷比(m／z)分别为8 350,6 954,8 634,8 826的4种蛋白质表达下降,质荷比为(m／z)6 628的蛋白质表达上调。模型经三倍交叉验证实验测定,其敏感性为83．9％,特异性为83.7％。阳性预测值为81．1％。结论不明原因流产患者与正常早孕者血清蛋白质谱存在明显差异,深入研究可能为不明原因流产的病因学提供基础,同时有助于自发性流产血清生物标记物的筛查和发现。     

血清蛋白指纹图谱筛选乳腺癌血清标记物的意义

目的 探讨利用血清蛋白指纹图谱筛选乳腺癌血清标记物对乳腺癌临床诊断的价值和意义.方法利用美国蛋白芯片系统PBS II/C型 包括蛋白指纹图谱仪和蛋白质芯片检测42例乳腺癌患者血清蛋白质的相对含量,同时以42例正常人血清作对照.结果 在乳腺癌患者和正常人患者中共发现三个表达峰有统计学差异的蛋白质,其质荷比分别为4800Da、6410Da和9300Da,其灵敏性89.3%、特异性92.7%,显示这三个血清标记物对乳腺癌诊断诊断效果明显.结论 血清蛋白指纹图谱技术在筛选乳腺癌血清标记物的数据可靠,能够应用于乳腺癌的生物学诊断中来,应该加以推广.     

维吾尔族宫颈癌患者放疗前后蛋白质组表达差异的比较

目的:观察维吾尔族宫颈癌患者放疗前、后血清蛋白质组表达的变化。方法:收集维吾尔族宫颈癌患者60例,单纯放射治疗后由完全缓解的42例中随机抽取7例并留取其放疗前、后的血清样本作为放疗前组及放疗后组,同时由60例健康维吾尔族妇女血清样本中随机抽取7例做为正常组,采用蛋白质二维液相色谱系统(Proteome LabTM PF-2D)分别将放疗前组、放疗后组、正常组血清标本相比较,观察血清蛋白质组表达的变化。结果:放疗前组与正常组血清蛋白质组差异表达图谱鉴别13个位点的峰值差异有统计学意义(P<0.05);放疗前组与放疗后组鉴别出11个蛋白峰值差异有统计学意义(P<0.05);放疗后组与正常组仅2个蛋白峰值差异有统计学意义(P<0.05)。结论:维吾尔族宫颈癌患者经放疗后完全缓解者的蛋白质表达接近正常水平;通过对维吾尔族宫颈癌患者放疗前、后蛋白质组的测定,有可能对治疗效果的判断及早期复发的预测等方面提供有用的信息。     

矽尘接触人群血清蛋白质指纹与接尘量的相关性分析

目的 筛选矽尘接触人群血清蛋白质指纹并分析其与接尘量的相关性.方法 应用液体芯片飞行时间质谱技术检测Ⅰ期矽肺组(25例)、正常对照组(30例)、矽尘接触组(30例)及可疑矽肺组(30例)血清蛋白质指纹并筛选出差异显著的蛋白,对每个样品差异蛋白的峰强度与其对应的接尘量进行相关性分析.结果 4组间共筛选出5个差异显著蛋白,其中5081 Da、5066 Da为表达上调蛋白,3954 Da、2021 Da、1777 Da为表达下调蛋白,将这些蛋白峰强度分别与其相应的接尘量进行相关分析,未发现蛋白峰程度与接尘量有相关关系(r1=0.039,r2=0.104,r3=-0.047,r4=-0.028,r5=-0.016,P＞0.05).结论 本次研究中矽尘接触人群血清蛋白质指纹与接尘量不存在相关关系.     

裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内差异表达蛋白的检测

[目的]分析裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内血清中的蛋白指纹图谱,并与正常对照裸鼠比较,筛选差异表达蛋白,为鼻烟癌的早期诊断提供特有的血清蛋白标志物. [方法]采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白芯片技术检测12只正常裸鼠和45只裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内血清中的蛋白指纹图谱,用Ciphergen ProteinChip 3.0 软件进行数据的校正与分析,采用Ciphergen Biomaker Wizard 3.1版软件分析筛选对照与试验组间的差导表达蛋白. [结果]对照组与试验组间检出17个差异表达的蛋白质(P<0.0001),其质荷比(M/Z)分别为13447、14586、8948、8017、5553、6742、14743、11586、15675、9178、6423、14940、15492、11528、8615、6738、8102.分子量主要集中在20 000 D以内.大多数标志蛋白在试验组中表达明显增高,少数为低表达.在裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内随时间的推移而出现一些规律性表达的蛋白质、质荷化(M/Z)为6738、8017、8102、8615的4个蛋白质在接种癌细胞后表达逐渐增强,质荷比(M/Z)为14740、15484的两个蛋白质表达逐渐域弱. [结论]在正常裸鼠和裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型之间发现具有一定价值的差异表达蛋白,对鼻咽早期诊断的微量蛋白标志物的研究具有极其重要的意义.     

SELDI检测结核血清蛋白指纹图谱及与同类研究比较

目的利用SELDI技术筛选肺结核患者血清差异表达蛋白并与同类研究的结果进行比较。方法采用SELDI-TOF-MS筛选30例肺结核患者和30例正常对照血清的差异表达蛋白,建立诊断模型;对105例样本进行盲法验证;与同类研究比较寻找共同差异表达蛋白。结果 SELDI筛选出86个差异有统计学意义的蛋白(P﹤0.05)。从中筛选出了6个最具有诊断价值的潜在标志蛋白建立诊断模型,该诊断模型的ROC曲线下面积为0.983;盲法验证ROC曲线下面积为0.837。与同类研究比较发现,11个差异有统计学意义(P﹤0.001)的差异表达蛋白在本研究中重现。结论肺结核病人与对照的血清蛋白图谱存在差异,两个独立实验共同得到的11个差异表达蛋白与结核病的关系值得深入研究。     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选肝癌血清标志物的研究

[目的]分析肝癌患者与慢性肝病患者血清蛋白指纹图谱的差异,建立肝癌和慢性肝病血清标志物诊断模型。[方法]采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,应用弱阳离子结合芯片(weak cation exchange,WCX2)以及配套软件,对肝癌患者和慢性肝病患者的血清差异蛋白质进行检测分析,构建诊断模型。[结果]通过对肝癌患者术前血清与慢性肝病患者血清蛋白质谱分析发现共有38个蛋白质表达量有明显差异。并获得相对分子质量为M3815,M4678,M4703,M4881,M5304,M5716,M6203,M7789,M7988,M8168,M9312这11个蛋白质组成的模型,可将肝癌患者与慢性肝病患者正确分组,其准确率81.5%(53/65),灵敏度81.3%(39/48),特异度82.4%(14/17)。[结论]有分类意义的11个差异蛋白可能与肝癌发生发展密切相关。     

SELDI—TOF—MS技术筛选Paget病患者血清特异性蛋白质的研究

目的探讨表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术在Paget病的诊断价值。方法用弱阳离子蛋白芯片（WCx2）及表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术（SELDI—TOF—MS）检测15例健康者、15例慢性湿疹和20例Paget病患者血清中蛋白的相对含量。结果Paget病患者与健康人相比,质荷比为3868Da和8876Da的2个蛋白峰差异有统计学意义（P〈0．01）;与慢性湿疹相比,质荷比为2911、3868、5097Da的3个蛋白质峰差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SELDI—TOS—MS的特异性肿瘤标记物对Paget病的早期诊断和鉴别慢性湿疹具有诊断价值,无创安全。     

不同分类技术联合肿瘤标志在诊断和预测肺癌方面的研究

目的 探讨何种统计分类模型适于建立多肿瘤标志肺癌预测诊断模型.方法 采用放射免疫分析法(RIA)、双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA)、分光光度法(SP)、高效液相色谱法(HPLC)及原子吸收分光光度法(AAS)分别测定肺癌患者、肺良性疾病患者和健康对照者血清中的癌胚抗原(CEA)、糖链抗原.125(CAl25)、胃泌素(gastrin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、β2-微球蛋白(β2-MG)、可溶性白细胞介素-6受体(sIL-6R)、唾液酸(sialic acid,SA)、一氧化氮(NO)、Cu、Zn、Ca及尿样中的伪尿核苷/肌苷(pseud/trop)含量,并分别建立logistic回归分析、决策树分析以及人工神经网络的数据挖掘分类预测模型.结果 logistic回归分析、决策树分析和人工神经网络模型联合12项肿瘤标志诊断肺癌的总敏感性分别为94.00%、100.00%、100.00%;特异度分别为100.00%、98.89%、100.00%;总准确性分别为94.29%、95.00%、90.00%.结论 12项肿瘤标志的3种分类模型对肺癌分类预测和诊断结果 均比较理想,尤其是C5.0决策树模型和人工神经网络模型更适于解决职业性肺癌的预测和辅助诊断.     

单纯性室间隔缺损血清标志蛋白的筛选

目的应用蛋白质组学表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱技术筛选单纯性室间隔缺损血清标志蛋白,为从蛋白质分子水平研究其致病机理奠定基础。方法用CM10芯片检测56例单纯性室间隔缺损患儿、85例儿科常见病患儿及23例其它先天性心脏病患儿血清,分析血清蛋白质谱,筛选室间隔缺损血清标志蛋白。结果有25个蛋白成分在三组之间具有统计学差异,其中,与儿科常见病对照组相比,11个蛋白成分在VSD血清中高表达,14个下调;与其它先天性心脏病组相比,14个蛋白成分在VSD血清中高表达,11个下调。结论表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱技术可能是发现与筛选室间隔缺损血清标志蛋白的快速、有效的蛋白质组学工具。     

门诊患者宫颈癌现患率及危险因素Logistic回归分析

目的:探讨宫颈癌的现患率并分析其相关危险因素。方法:回顾分析确诊为宫颈癌的患者65例和随机选取的114例确诊未发生宫颈鳞状上皮内瘤变的健康妇女的相关资料,并对其进行问卷调查及相关检查,对各指标行单因素和多因素非条件Logistic回归分析。结果:宫颈癌现患率为240/10万。单因素分析发现,与宫颈癌发生有关的是人乳头瘤病毒(HPV)感染(P<0.01)、血清硒(Se)含量<1.06μg/ml(P<0.01),患宫颈炎年限>2年(P<0.01)、性伴侣>3个(P<0.05)、避孕套防护(P<0.01),多因素非条件Logistic分析发现宫颈癌发病主要危险因素依次是HPV感染(P<0.01)、血清Se含量<1.06μg/ml(P<0.01)。结论:宫颈癌现患率处在相对较高的水平,HPV感染、血清Se含量低与宫颈癌的发生有很大关联,因此预防HPV感染,补充微量元素Se对控制女性宫颈癌会起到积极作用。     

飞行时间质谱技术筛查卵巢癌患者血清特异性蛋白的研究

目的:应用飞行时间质谱技术筛选卵巢癌患者与正常人血清中差异性蛋白,为卵巢癌的早期诊断提供理论依据。方法:应用弱阳离子芯片(WCX2)及表面增强激光解析电离飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测30例正常人(对照组)和30例卵巢癌患者(实验组)血清中蛋白质的含量,并作比较。结果:对照组与实验组在2 000～30 000 Da间质荷比为3 812.556 Da与7 237.904 Da的2个蛋白峰差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SELDI-TOF-MS技术对卵巢癌早期诊断和特异性肿瘤标记物的筛选等方面具有一定价值。     

涂阴肺结核病人血清蛋白组学研究及SHBG蛋白验证

目的 利用蛋白质组学方法发现和验证涂阴肺结核的候选血清标志物。方法 采用iTRAQ标记结合MALDI-TOF/MS筛选30例健康对照者和30例涂阴肺结核患者血清的差异表达蛋白,通过生物信息学分析差异蛋白之间的相互作用;对差异蛋白SHBG进一步ELISA验证,应用SPSS 20.0统计软件绘制ROC曲线。结果 三次独立重复实验一共筛选和鉴定置信度在95%以上蛋白283种;以正常人血清为对照,涂阴肺结核患者血清中有差异表达蛋白31种（P<0.05）,其中17个蛋白表达上调,14个蛋白表达下调;蛋白相互作用发现SHBG等12种蛋白处于相互作用网络关键节点;ELISA验证结果显示涂阴肺结核组血清SHBG蛋白浓度高于正常对照组和肺炎组（P<0.001）,与蛋白组学筛选和鉴定的结果一致;以SHBG检测值绘制的ROC曲线下的面积是0.92（P<0.001）,其诊断涂阴结核病的灵敏度和特异度分别是87.14%和85.11%。结论 iTRAQ标记结合MALDI-TOF/MS技术筛选和鉴定到的12种关键节点蛋白可能是涂阴结核病潜在标志物,SHBG是值得进一步研究的肺结核候选血清标志物。     

阴道镜下宫颈活检联合EGFR、P16、P53蛋白检测诊断宫颈病变价值

目的:探讨宫颈新柏氏技术(TCT)异常者行阴道镜下宫颈活检联合表皮细胞生长因子(EGFR)、P16、P53蛋白检测对宫颈上皮内瘤样病变(CIN)分期及宫颈癌的诊断价值。方法:选取2016年3月-2019年6月本院妇科门诊收治的TCT异常患者450例,通过阴道镜检查及病理活检最终确定112例为宫颈病变患者(病例组),另取同期正常宫颈组织标本60例为对照组。对比两组阴道镜与病理结果,检测两组EGFR、P16、P53蛋白水平。结果:病例组病理结果显示慢性宫颈炎8例(7.1%),CINⅠ36例(32.1%),CINⅡ32例(28.6%),CINⅢ20例(17.9%),宫颈鳞癌16例(14.3%),阴道镜结果与之符合率分别为100.0%、94.4%、90.6%、85.0%、100.0%。随着宫颈病变程度的升级,EGFR、P16、P53蛋白表达率逐渐升高,在正常宫颈上皮中不表达(P<0.05);宫颈癌Ⅰ期11例(68.8%)、宫颈癌Ⅱ期5例(31.3%),EGFR、P16、P53蛋白在不同宫颈癌分期中表达有差异(P<0.05)。结论:TCT异常者行阴道镜下宫颈活检可提高宫颈病变诊断率,联合EGFR、P16、P53蛋白的检测对区别低级别与高级别宫颈上皮内瘤变有临床意义。