华蟾素联合丝裂霉素诱导人宫颈癌细胞株Hela细胞发生凋亡的实验研究

目的 探讨抗癌药物华蟾素与丝裂霉素的联合作用诱导Hela细胞发生凋亡的机制.方法 体外培养人宫颈癌Hela细胞,以不同浓度的华蟾素与丝裂霉素刺激Hela细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞的增殖,凝胶电泳检测细胞DNA片段化,FITC-Annexin V检测细胞凋亡的发生,RT-PCR检测TNF-α的表达.结果 经药物作用后的细胞在倒置显微镜下观察,6 h后开始出现明显的凋亡现象;电泳结果呈200 bp大小的典型梯状带;FITC-Annexin V检测到凋亡早期细胞膜呈强绿色荧光,12 h后胞核逐渐被碘化丙啶染成红色,24 h后大部分细胞被染成红色;RT-PCR产物大小为299 bp.结论 华蟾素和丝裂霉素能使细胞生长受到明显的抑制,能诱导Hela细胞发生凋亡,能诱导DNA片段化和TNF-α的表达.     

枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响

目的观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长及其细胞凋亡的影响。方法不同剂量的枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞，用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法及流式细胞仪检测人宫颈癌Hela细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标。结果枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，抑制率司达96．85％，并呈剂量效应关系，细胞凋亡率可达36．8％。结论枸杞多糖对人宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用，其抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

甘草提取物（Gly34）对Hela细胞体外促凋亡作用研究

目的观察甘草提取物（Gly34）对Hela细胞的体外促凋亡作用,为Gly34在抗肿瘤方面的机制研究及应用提供理论依据。方法应用MTT法测定Gly34对Hela细胞增殖的抑制作用;采用AO-EB染色、透射电镜、DNA Ladder实验、流式细胞仪检测其促凋亡作用及对细胞周期的影响。结果 Gly34对Hela细胞体外增殖有明显抑制作用;AO染色表明药物组细胞有明显凋亡迹象,并伴少量细胞坏死现象,而在阴性对照组中细胞形态完好;透射电镜表明Hela细胞在Gly34处理后出现典型凋亡细胞形态改变;DNA Ladder实验发现Hela细胞在Gly34处理后发生DNA片段化断裂,表现为＂梯形＂DNA条带;流式细胞仪（FCM）分析Hela细胞在Gly34处理前后细胞周期均呈现明显的差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期阻滞,其中溶媒对照组G0/G1期峰面积为（44.62±0.6）%,1.56μg·mL-1、3.125μg·mL-1、6.25μg·mL^-1药物组G0/G1期峰面积为（53.18±0.7）%、（55.40±0.8）%、（58.67±0.6）%,各组间差异有统计学意义（P〈0.05）;FCM分析Hela细胞在Gly34处理前后细胞凋亡率发生改变,其中溶媒对照组为（0.51±0.6）%,1.56μg·mL^-1、3.125μg·mL^-1、6.25μg·mL^-1药物组分别为（1.25±0.7）%、（21.38±0.8）%、（62.08±0.7）%,各组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论甘草提取物（Gly34）能明显抑制Hela细胞增殖并诱导其发生凋亡,具有抗肿瘤作用。     

大蒜素对子宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的:探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化;采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,采用流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果:MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度的大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论:大蒜素对人宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

菹草类胡萝卜素对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的研究菹草类胡萝卜素提取物(carotenoids extracts from Potamogeton crispus L.,CEPC)对人宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法、流式细胞术(FCM)、荧光倒置显微镜和激光共聚焦显微镜(LSCM)观察等手段,研究不同浓度受试物对Hela细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞形态学变化及胞内Ca2+浓度变化的影响。结果CEPC对Hela细胞增殖有明显的抑制作用;呈现G2/M期阻滞。荧光显微镜和LSCM观察到细胞核浓缩等典型的细胞凋亡形态特征。处理组细胞内Ca2+浓度显著升高。结论CEPC对Hela细胞有生长抑制作用,诱导细胞凋亡是这种作用的主要形式,胞内Ca2+浓度升高可能是细胞凋亡的作用机制之一。     

家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白对Hela肿瘤细胞抑制作用的形态学观察

目的 研究家蝇幼虫血淋巴纯化蛋白(anticancer protein from Musca domestica larva hemolymph,MAC-1)对体外培养的人官颈癌Hela细胞抑制作用引起的形态学改变.方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法、光学显微镜、HE和吖啶橙(AO)染色、透射电镜(SEM)的方法检测MAC-1对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的抑制作用及形态学改变.结果 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性,同时呈时间依赖性.MAC-1 12.5 μg/ml作用12h后在倒置显微镜、HE及AO染色和透射电镜均观察到典型细胞凋亡形态变化.结论 MAC-1对人宫颈癌Hela细胞株具有抑制增殖及诱导凋亡作用.     

小蘗碱诱导人宫颈癌Hela细胞株凋亡的作用

目的:探讨中药黄连素对子宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:以不同浓度的黄连素(10、20、40、80μmol/L),分12、24、48、72h四个时间点处理Hela细胞,光镜观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;用透射电子显微镜及琼脂糖凝胶电泳检测凋亡发生情况。结果:黄连素可抑制Hela细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,差异有统计学意义(P<0.01);黄连素可诱导Hela细胞凋亡,透射电子显微镜下可见凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡典型的DNA"梯状"条带。结论:黄连素体外对Hela细胞具有增殖抑制作用和促进凋亡作用。     

内质网应激途径在天花粉蛋白诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激在天花粉蛋白诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡过程中的作用,进一步分析天花粉蛋白诱导凋亡的作用机制。方法:以不同浓度天花粉蛋白分别处理Hela细胞24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡,并用RT-PCR及实时荧光定量PCR分析天花粉蛋白对内质网应激标志分子GRP78和CALPAIN基因表达的影响。结果:天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用,对照组Hela细胞体外生长活跃,实验组分别经20、40、80μg/ml TCS处理24、48、72 h后,细胞生长均不同程度地受到抑制,呈时间-浓度依赖性。流式细胞直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰(sub-G1 peak),随着天花粉蛋白浓度的增加,内质网应激分子GRP78和CALPAIN的表达逐渐增强。结论:天花粉蛋白可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,内质网应激作为细胞凋亡的重要途径参与了天花粉蛋白诱导的HeLa细胞凋亡。     

宫颈鳞癌患者外周血单个核细胞Th1/Th2平衡状态的研究

目的探讨宫颈癌患者外周血辅助T细胞1(Th1)和辅助T细胞2(Th2)型细胞因子的表达状况。方法 30例宫颈癌患者采集外周血,采用流式细胞分析法,检测患者外周血CD4+细胞胞内细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)的表达。应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测培养上清IFN-γ、IL-4的水平,并与10例健康对照组进行比较。结果宫颈癌患者IFN-γ染色阳性(Th1)的细胞比例及培养上清IFN-γ浓度明显低于健康对照组,IL-4染色阳性(Th2)细胞比例及培养上清IL-4浓度在两组间差异无统计学意义。结论宫颈癌患者存在Th1/Th2细胞功能失衡,呈Th2优势应答模式,机体免疫抑制,导致肿瘤发生,同时为宫颈鳞癌的生物治疗提供靶点。     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

越橘总黄酮对人宫颈癌细胞中TRAIL及其受体表达的影响

目的研究越橘总黄酮对人宫颈癌细胞株Hela细胞中TRAIL及其受体表达的影响。方法用浓度为0、0．025、0．25、2．5、和25μg／ml的越橘总黄酮处理Hela细胞24h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测越橘总黄酮对Hela细胞增殖的抑制作用,采用Hoechst33342／PI染色观察越橘总黄酮对Hela细胞凋亡的诱导作用,采用RT—PCR法检测不同浓度越橘总黄酮处理后的Hela细胞中TRAIL及其受体mRNA基因表达变化。结果0．025、0．25、2．5、和25μg／ml的越橘总黄酮对Hela细胞增殖的抑制率分别为22．08％、36．04％、42．10％和44．70％;0．25～25μg/ml的越橘总黄酮处理组细胞呈现明显的凋亡形态学改变;TRAIL和TRAIL—R2表达量明显高于空白对照组（P〈0．05）,TRAIL—R3和TRAIL—R4表达量明显低于空白对照组（P〈0．05）,而TRAIL—R1在各处理组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论越橘总黄酮诱导Hela细胞凋亡的机制可能与上调TRAIL及其受体TRAIL—R2基因的表达有关。     

RNA干扰技术沉默Livin基因联合顺铂对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

目的:采用RNA干扰技术阻断Livin基因的表达,并加入不同浓度的顺铂,研究其抑制Hela细胞Livin基因的效果及增强顺铂诱导宫颈癌细胞凋亡的效应。方法:采用脂质体转染法将pGenesil-1-BIRC71、pGenesil-1-BIRC72、pGenesil-1-HK转染宫颈癌Hela细胞,采用荧光定量RT-PCR、Western-blot检测转染前后宫颈癌Hela细胞Livin基因mRNA和蛋白表达的变化,并加入不同浓度的顺铂(3μg/ml、6μg/ml、9.9μg/ml),采用流式细胞术检测不同时间(24 h、48 h)的细胞凋亡率。结果:转染pGenesil-1-BIRC71、pGenesil-1-BIRC72后Hela细胞中Livin mRNA拷贝数明显减少,蛋白质表达水平显著降低;流式细胞术检测24h、48h凋亡率,干扰组细胞显著高于对照组,并随时间延长凋亡率增加;加入顺铂(3μg/ml、6μg/ml、9.9μg/ml)后流式细胞术检测24 h、48 h凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05),呈时间及剂量依赖性。结论:以Livin基因为靶向的RNA干扰技术可有效地抑制宫颈癌Hela细胞的Livin基因表达,并可增强顺铂诱导凋亡的效应,且具有时间和剂量依赖性。     

鹦鹉热衣原体巨噬细胞感染增强因子对宿主细胞产生前炎症细胞因子和凋亡的影响

目的 研究鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)巨噬细胞感染增强因子(microphage infectivity potentiator,Mip)在诱导人单核细胞THP-1产生前炎症细胞因子和对HeLa细胞凋亡的作用。 方法 用不同浓度的Cps Mip重组蛋白作用 THP-1 细胞,ELISA检测前炎症细胞因子IL-8和TNF-α的表达量;用荧光染色法和流式细胞术分析重组Cps Mip对HeLa细胞凋亡的作用。 结果 重组Cps Mip能以时间、剂量依赖方式诱导THP-1细胞分泌前炎症细胞因子IL-8和TNF-α;不同Cps Mip蛋白浓度实验组刺激THP-1细胞产生的前炎症细胞因子IL-8和TNF-α水平显著高于PBS对照组(P<0.05),当Cps Mip为16 μg/ml 时,所产生的前炎症细胞因子IL-8 和TNF-α的量最高,分别为105.01 pg/ml和50.52 pg/ml。荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡率,发现Cps Mip对星形孢菌素(staurosporine,STS)处理的HeLa细胞有一定的抑凋亡作用,在20 μg/ml Cps Mip刺激后的细胞凋亡率比未刺激组下降了4.48%(P<0.01)。 结论 Cps Mip蛋白能诱导THP-1细胞表达并分泌前炎症细胞因子IL-8和TNF-α;Cps Mip具有一定抑制HeLa细胞凋亡的作用。     

甲基叔丁基醚对细胞周期及细胞凋亡的影响

目的：探讨汽油添加剂甲基叔丁基醚（ＭＴＢＥ）对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 采用流式细胞仪检测ＭＴＢＥ对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞周期（染毒浓度分别为１、２、４μｌ／ｍｌ,染毒时间为２４ｈ）的影响;应用结晶紫染色法,通过检测Ｈｅｌａ细胞的存活情况,了解ＭＴＢＥ对细胞凋亡的影响。结果 流式细胞仪结果显示,ＭＴＢＥ可使ＮＩＨ／３Ｔ３细胞周期发生改变。表现为Ｓ期细胞减少,而处于Ｇ２＋Ｍ期的细胞增多,提示ＭＴＢ     

舒林酸抑制结肠癌细胞株增殖及其转移机制的研究

目的 研究非选择性COX抑制荆舒林酸对结肠癌细胞株HT-29生长的影响及其参与引起细胞死亡的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测舒林酸对结肠癌细胞增殖的抑制,激光共聚焦显微镜(LSM)及荧光显微镜观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 MTT显示舒林酸能呈剂量和浓度依赖性抑制HT-29的增殖.TUNEL染色荧光显微镜下观察凋亡细胞呈棕褐色,AnnexinV/PI染色后LSM观察凋亡细胞胞膜绿染,胞核红染或呈桔黄色,FCM显示此药促进细胞的凋亡,使处于G0/G1期的细胞比例显著降低.结论 舒林酸可抑制结肠癌细胞株HT-29生长,促进其凋亡,其机制可能与其阻止细胞周期的进展有关.     

线粒体分裂融合基因在氧化应激诱导宫颈癌Hela细胞损伤中的作用

目的:利用维生素K3(VitaminK3,Vk3)复制子宫颈癌Hela细胞损伤模型,观察线粒体融合分裂基因的变化,探讨线粒体融合分裂基因在Vk3诱导Hela细胞凋亡过程中的作用。方法:MTT法检测各组Hela细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡,RT-PCR方法检测各组Hela细胞中线粒体融合基因Mfn1、Mfn2和Opa1及线粒体分裂基因Drp1、Fist1和MTP18mRNA表达。结果:Vk3能够降低Hela细胞存活率,并且Hoechst33258染色结果显示细胞呈现凋亡形态变化,凋亡率增加,Mfn1、Opa1、和MTP18mRNA表达量明显下降(P<0.05);而与Vk3单独作用组比较,Vk3+NAC联合作用组Hela细胞存活率增加(P<0.05),凋亡率降低,Mfn1、Opa1、和MTP18mRNA表达量明显增加(P<0.05)。结论:线粒体融合和分裂基因表达的降低都有可能参与了氧化应激诱导的细胞损伤作用。     

黄芩提取物联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3凋亡的研究

目的:探讨黄芩提取物(Scutellaria Baicalensis)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对卵巢癌细胞系SKOV-3增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法检测S.Baicalensis与DDP联合应用对SKOV-3细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡并计算细胞平均凋亡率,Westernblot技术观察细胞内p53、ERK1/2、p-STAT3的表达。结果:300μg/mlS.Baicalensis联合5μg/ml DDP给药:①48h后可使肿瘤细胞抑制率由单独应用DDP的15.8%提高到37.3%;②吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与10μg/ml DDP组相当;③流式细胞检测结果显示,可使细胞凋亡率从15.1%提高到42.2%(P<0.05);④westernblot结果显示,p53、ERK1/2、p-STAT3表达较5μg/ml DDP组单独给药组降低(P<0.05)。结论:S.Baicalensis与DDP联合应用增强对卵巢癌细胞株SKOV-3的致凋亡效应,联合应用可达到减毒增效的效果。     

Caveolin-1过表达抑制宫颈鳞癌Hela细胞的体外生长研究

目的 探讨转染caveolin-1基因对宫颈鳞状细胞癌Hela细胞株体外生长的影响.方法 用脂质体法把caveolin-1真核表达质粒导入Hela细胞内,筛选出稳定高表达caveolin-1的细胞克隆,并用RT-PCR、细胞免疫荧光和免疫印迹法鉴定.MMT法检测细胞的生长能力,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡情况,免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶（extracellular regulated protein kinases,Erk）1/2的磷酸化水平.结果 转染caveolin-1基因后,成功筛选得到稳定高表达caveolin-1的Hela细胞克隆,与未转染对照组相比,转染后的Hela细胞生长速度明显减慢（P〈0.05）,更多的细胞阻滞在G0/G1期[（68.04±2.57）%vs（53.41±1.01）%],凋亡细胞比例增高[（19.18±2.20）%vs（5.63±0.55）%,P〈0.05],Erk1/2相对磷酸化水平明显下降（0.28±0.05 vs 0.81±0.07,P〈0.05）.结论 caveolin-1基因能够抑制宫颈鳞癌Hela细胞株的生长、促进细胞凋亡;Erk1/2磷酸化水平下降可能在其抑癌机制中发挥重要作用.