早孕绒毛外细胞滋养细胞的体外培养方法

目的:探讨改良人早孕绒毛外细胞滋养细胞原代分离培养方法。方法:建立改良的复合酶消化梯度离心法,分离培养绒毛外细胞滋养细胞,通过免疫细胞化学、Giemsa染色和细胞侵袭实验检测细胞纯度、数量及生物学活性(侵袭性),并与低浓度胰蛋白酶消化方法进行比较。结果:低浓度胰蛋白酶消化方法和改良的复合酶消化梯度离心法所得贴壁细胞量分别为(11.69±1.26)×104和(17.21±0.51)×104,两者比较有统计学差异(P<0.05);绒毛外细胞滋养细胞纯度分别为(63.20±7.12)%和(92.10±5.11)%,两者比较有统计学差异(P<0.05),穿膜细胞数分别为(36.10±3.28)和(66.20±5.17),两者比较有统计学差异(P<0.05),提示该实验室改良的复合酶消化梯度离心法所得细胞总量、绒毛外细胞滋养细胞纯度及数量均显著高于低浓度胰蛋白酶消化方法。结论:该实验室改良的复合酶消化梯度离心法获得绒毛外细胞滋养细胞纯度和数量显著提高。     

基质金属蛋白酶MMP-9及其组织抑制剂TIMP-1在不同类型滋养细胞中的表达

目的通过研究基质金属蛋白酶MMP-9及其组织抑制剂TIMP-1在不同类型滋养细胞中的表达，探讨预测滋养细胞疾病恶变和转移的可能性。方法应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学方法对20例正常早孕（〈12周）绒毛组织、15例部分性葡萄胎、55例完全性葡萄胎、15例侵蚀性葡萄胎、8例绒毛膜癌组织中MMP-9、TIMP-1进行检测。结果（1）MMP-9在正常早孕绒毛组织、部分性葡萄胎、完全性葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌中均有表达，但随着滋养细胞恶性程度的增加其表达显著升高，差异有显著性（x^2=26．421，P〈0．0001）；（2）TIMP-1在正常早孕绒毛组织均有表达，而在部分性葡萄胎、完全性葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌中分别有6．67％、5．45％、6．67%、12．50％不表达，且随着肿瘤恶性程度的升高，其染色程度和染色细胞百分率减少，差异有显著性（x^2=9．575，P〈0．05）；结论MMP-9和TIMP-1与正常早孕滋养细胞的侵袭过程有关，MMP-9与TIMP-1比值的改变可能参与了滋养细胞疾病的恶变和转移，对临床早期预测滋养细胞疾病的恶变及预防性化疗有一定的参考意义。     

胎盘生长因子及瘦素在早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中的表达及意义

妊娠滋养细胞疾病( gestational trophoblastic disease,GTD)是一组来源于胎盘绒毛滋养细胞的疾病.根据滋养细胞的分化程度、绒毛间质多少及生物学行为,GTD可分为葡萄胎、侵蚀性葡萄胎(invasivemole)、绒毛膜癌(chorionic carcinoma)及胎盘部位滋养细胞肿瘤[1].本研究排除胎盘部位滋养细胞肿瘤.     

KISS-1蛋白和MMP-9在妊娠滋养细胞病变中的表达

目的:探讨KISS-1基因蛋白(metastin)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在妊娠滋养细胞病变(妊娠滋养细胞疾病和自然流产)中的表达及二者的相关性。方法:采用免疫组化S-P法分别检测20例正常早孕绒毛、25例自然流产绒毛、30例完全性葡萄胎、15例侵袭性葡萄胎和15例绒毛膜癌中KISS-1蛋白和MMP-9的表达。结果:KISS-1蛋白在自然流产绒毛中的表达高于正常早孕绒毛(P<0.05);侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达显著低于完全性葡萄胎(P均<0.01);在侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达与临床分期呈负相关。MMP-9在自然流产绒毛中的表达低于正常早孕绒毛(P<0.05);在完全性葡萄胎中的表达高于正常早孕绒毛(P<0.05);侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达高于完全性葡萄胎(P均<0.05);在侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达与临床分期呈正相关。在自然流产绒毛、侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中KISS-1蛋白表达和MMP-9表达均呈负相关。结论:KISS-1蛋白和MMP-9表达的变化可能参与了自然流产和妊娠滋养细胞疾病(葡萄胎、侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌)的发生、发展过程,在此过程中两种基因存在着相互作用。     

人巨细胞病毒影响绒毛外细胞滋养细胞增殖功能的体外研究

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)对绒毛外细胞滋养细胞增殖功能的影响。方法:选择绒毛外细胞滋养细胞株HPT-8进行研究,体外培养时加入HCMV,免疫荧光法检测HCMV PP65,MTT法检测不同浓度HCMV、不同作用时间对HPT-8增殖的影响。结果:病毒感染组HPT-8细胞内可见大量红色HCMV PP65抗原信号;与正常对照组比较,10～100μl病毒液作用12 h HPT-8增殖均无异常(P>0.05),70μl和100μl病毒液作用24 h HPT-8增殖明显抑制(P<0.05),20、30、40、50μl病毒液作用48 h HPT-8增殖均明显抑制(P<0.05),10μl病毒液作用72 h HPT-8增殖明显抑制(P<0.05);其中,48 h和72 h时间点,20μl、30μl、40μl病毒液导致的细胞增殖异常差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HCMV可感染HPT-8并在细胞内复制,抑制细胞增殖。     

血管生成素-1对人绒毛膜外滋养细胞基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9表达的调控作用

目的分析血管生成素-1(Ang-1)对人绒毛膜外滋养细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的调控作用。方法将体外培养的人绒毛膜外滋养细胞株HTR8/SVneo分为空白对照组(未转染)、NC-siRNA组(转染阴性对照siRNA)及Ang-1-siRNA组(转染Ang-1 siRNA)。采用实时定量PCR法检测3组细胞中Ang-1 mRNA的表达,采用Western blot法检测Ang-1、MMP-2及MMP-9蛋白的表达,采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力。结果转染48 h后,空白对照组Ang-1 mRNA表达水平为(1.36±0.04),NC-siRNA组Ang-1 mRNA表达水平为(0.98±0.07),Ang-1-siRNA组Ang-1 mRNA表达水平为(0.24±0.02),3组比较差异有统计学意义(F=257.128,P<0.001)。空白对照组Ang-1蛋白水平为(0.54±0.03),NC-siRNA组Ang-1蛋白水平为(0.49±0.07),Ang-1-siRNA组Ang-1蛋白水平为(0.12±0.06),3...     

胎盘组织MMP-9表达与孕妇子痫前期发病的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与孕妇子痫前期发病的相关性。方法将2013年4月-2014年6月在该院住院分娩的孕妇按照其妊娠20周以后的血压以及蛋白尿情况分为实验组(子痫前期66例)和对照组(正常妊娠34例),实验组分为轻度子痫前期组(33例)和重度子痫前期组(33例),应用免疫组化SP法对两组胎盘组织中MMP-9的表达水平进行检测,并测定其光密度值。同时对每个新生儿体重和胎盘重量进行测量和记录。结果在胎盘组织中,MMP-9的光密度值实验组低于对照组(t=4.375,P0.001),轻度子痫前期组高于重度子痫前期组(t=5.302,P0.001)。实验组胎盘重量(t=3.181,P=0.002)和新生儿体重(t=3.034,P=0.003)低于对照组,轻度子痫前期组胎盘重量(t=5.128,P0.001)和新生儿体重(t=4.956,P0.001)均高于重度子痫前期组。在胎盘组织中,MMP-9的表达水平与胎盘重量及新生儿体重呈正相关。与新生儿体重2.5 kg者相比,≥2.5 kg者的MMP-9在胚胎组织中的表达水平较高(t=17.121,P0.001)。结论 MMP-9在孕妇子痫前期的胎盘组织中表达程度低,孕妇病情恶化使其表达程度逐渐降低,表明MMP-9可能和子痫前期的发病有关。     

自然流产小鼠绒毛滋养细胞PCNA和OPN的表达与相关研究

目的 比较正常妊娠和自然流产小鼠绒毛滋养细胞增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)的表达,探讨自然流产的发病机制.方法 建立正常妊娠模型CBA×BALB/c 和自然流产模型CBA×DBA/2.采用免疫组化SP法测定两组孕13 d绒毛滋养细胞PCNA和OPN的表达.结果 与正常妊娠相比,自然流产绒毛滋养细胞PCNA和OPN的表达均明显降低(P＜0.01,P＜0.05).结论 绒毛滋养细胞PCNA和OPN的表达低下与自然流产的发生有关.     

20例人早孕绒毛滋养细胞的体外培养

目的建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外培养的方法。方法采用0．25％胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜对培养出的细胞进行形态评价;用细胞角蛋白和波形蛋白单克隆抗体检测细胞纯度。结果联合消化法的细胞生长迅速,接种6～8d可以传代,原代细胞生长时间明显缩短,所得细胞纯度达95％。结论联合消化法是一种较有效的人早孕绒毛滋养细胞培养方法。     

早期流产者绒毛和蜕膜组织中MMP-9、TIMP-3的表达及其意义

目的:了解MMP-9和TIMP-3在早孕、先兆流产和药物流产绒毛及蜕膜组织中的定位及表达水平,探讨其水平及平衡在维持正常妊娠中的作用。方法:选取90例早孕妇女作为研究对象,其中行负压吸宫术者30例为对照组,行药物流产术者30例为药物流产组;自愿行吸宫术的先兆流产妇女30例为先兆流产组,均留取绒毛和蜕膜组织,应用免疫组织化学技术和计算机图像分析系统检测MMP-9和TIMP-3在不同早孕流产绒毛和蜕膜组织中的表达。结果:MMP-9和TIMP-3在3组绒毛的合体滋养细胞、细胞滋养细胞、毛细血管内皮细胞的胞浆,蜕膜的蜕膜细胞、腺上皮细胞和血管内皮细胞的胞浆呈不同程度的阳性染色。通过定量分析,药物流产组绒毛和蜕膜MMP-9的表达高于先兆流产组,先兆流产组高于对照组(P<0.05);3组绒毛和蜕膜TIMP-3的表达差异无统计学意义(P>0.05)。绒毛和蜕膜中MMP-9/TIMP-3药物流产组高于先兆流产组,先兆流产组高于对照组(P<0.05)。结论:MMP-9表达水平的升高在流产发生过程中具有重要作用,MMP-9和TIMP-3的平衡对维持正常妊娠起重要作用。     

MMP-2、MMP-9在血脑屏障损伤中的作用

局灶性脑血管病都伴随血脑屏障（blood—brain barrier，BBB）的损伤，血脑屏障物质结构基础是脑毛细血管内皮细胞及基底膜，MMP-2和MMP-9通过降解基底膜导致血脑屏障损伤。     

MMP-9、PCNA在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义

目的:探讨MMP-9、PCNA在卵巢上皮性肿瘤中的表达和他们在卵巢上皮癌的浸润和转移中的作用。方法:选择临床病理资料齐全的卵巢上皮性肿瘤蜡块标本76例,利用S-P免疫组化方法检测MMP-9、PCNA在其中的表达。结果:两者在卵巢上皮癌组织中的阳性表达明显高于交界性、良性肿瘤,呈正相关(P<0.05);MMP-9在卵巢上皮性恶性肿瘤的表达与肿瘤的分化程度有显著相关性。结论:MMP-9、PCNA在卵巢上皮性肿瘤中的表达明显上调;MMP-9与卵巢上皮癌的浸袭、转移有关,可作为预测转移潜能的指标,PCNA可作为卵巢癌增殖的指标。     

MMP-2、MMP-9在乳腺导管癌中表达及意义

目的 研究乳腺导管癌中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及与IV型胶原(collagen IV)的关系。方法 免疫组化双染法检测60例乳腺导管癌中MMP-2、MMP-9和IV型胶原的表达并分析其相关性及与肿瘤大小、淋巴结转移及人类表皮生长因子受体-2(C-erbB-2)的关系。结果 MMP-2、MMP-9在乳腺导管癌中的阳性表达率分别为75%,80%,明显高于乳腺正常组织的10%;MMP-2、MMP-9在靠近基膜或者将突破基膜处的癌细胞中表达明显增强,MMP-2、MMP-9在肿瘤直径>2 cm(83.9%,90.3%)、有淋巴结转移(87.0%,91.3%)及C-erbB-2阳性组(80.9%,85.1%)的表达率明显高于相应对照组(58.6%,65.5%),(64.9%,67.6%),(46.2%,53.8%);IV型胶原的表达与MMP-2、MMP-9的表达均呈负相关。结论 在乳腺导管癌的局部侵袭和远处转移过程中,MMP-2、MMP-9对IV型胶原的降解可能起重要作用;联合检测MMP-2、MMP-9和IV型胶原,可能对判断乳腺癌的浸润转移潜能及评估预后有参考价值。     

血清MMP-2、MMP-9水平与非小细胞肺癌转移关系的研究

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清MMP-2、MMP-9水平与非小细胞肺癌的关系。方法采用ELISA法检测70例非小细胞肺癌患者及26例健康志愿者血清MMP-2和MMP-9水平。结果NSCLC患者血清MMP-2和MMP-9含量显著高于正常对照组。NSCLC有转移组血清MMP-2和MMP-9水平显著高于NSCLC无转移组。结论血清MMP-2和MMP-9的水平可作为预测非小细胞肺癌转移的指标。     

药物流产后子宫出血与蜕膜MMP-3、MMP-9及TIMP-1表达的相关性

目的:探讨米非司酮药流产后子宫出血与蜕膜基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制物-1(TIMP-1)表达含量变化的关系。方法:选取要求终止妊娠的、停经8周之内的早孕妇女,自愿选择药物流产或人工流产两种方法之一,分为人工流产组、药流不全组、药流完全组各20例。收集3组蜕膜组织采用10%甲醛固定,石蜡包埋,应用免疫组织化学方法检测MMP-3、MMP-9、TIMP-1的表达,图象分析仪定量分析。结果:MMP-3、MMP-9和TIMP-1主要分布于子宫蜕膜上皮细胞、腺上皮及基质细胞的细胞浆内。药流不全出血区MMP-3、MMP-9的表达强度显著增强(P0.01);TIMP-1的表达强度显著减弱(P0.01)。结论:米非司酮作用于蜕膜上皮细胞、腺上皮细胞及基质细胞使其表达MMP-3、MMP-9增多,TIMP-1减少,且两者比例失调,导致细胞外基质退化,血管脆性增加,发生出血。     

不同辐照方式对IL-4刺激的RAW264.7细胞MMP-2/9和VEGF表达的影响

目的 研究不同辐照方式对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响,为肿瘤的预后影响因素研究提供依据。方法 实验分为两个部分,第一部分用0、2、5、10 Gy X射线照射细胞24 h后给予IL-4刺激12 h,第二部分用IL-4刺激3 h后用0、2、5、10 Gy X射线照射9h,Western blot方法检测RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白的表达情况。结果 照射+IL-4组,随着受照剂量的增加,RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达量增加（P<0.05）,存在剂量-反应关系,并且MMP-2和VEGF存在强相关性（P<0.001）,MMP-9和VEGF也存在强相关性（P<0.001）;IL-4+照射组,随着受照剂量的增加,RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达量增加（P<0.05）,存在剂量-反应关系,并且MMP-2和VEGF存在强相关性（P<0.001）,MMP-9和VEGF也存在强相关性（P<0.001）;与照射+IL-4组比较,IL-4+照射组RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF的增加更显著（P<0.05）。结论 电离辐射能导致RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达增高,不同辐照方式对RAW264.7细胞MMP-2/9和VEGF表达的影响不同,本研究为肿瘤的治疗提供作用靶点。     

乙酰肝素酶、MMP-9在肝素干预的自然流产大鼠模型胎盘组织中的表达及意义

目的:比较正常妊娠模型大鼠、自然流产模型大鼠、肝素干预模型大鼠胎盘组织乙酰肝素酶、MMP-9表达特征的差异,探讨两者与自然流产的关系。方法:建立正常妊娠大鼠模型、自然流产大鼠模型和肝素干预大鼠模型,采用免疫组化SABC法测定3组模型孕14天胎盘组织中乙酰肝素酶和MMP-9的表达。结果:与正常妊娠模型组和肝素干预模型组相比,自然流产模型组大鼠胎盘组织中类肝素酶和MMP-9的表达显著升高(P0.01)。结论:胎盘组织中乙酰肝素酶和MMP-9的表达与自然流产的发生、发展有关,肝素可对自然流产起到一定的预防和治疗作用。     

Increased CD147 and MMP-9 expression in the normal rat brain after gamma irradiation

Radiation-induced vascular injury is a major complication of Gamma knife surgery (GKS). Previous studies have shown that CD147 and MMP-9 are closely associated with vascular remodeling and pathological angiogenesis. Thus, we analysed changes in CD147 and MMP-9 expression in the cerebral cortex to investigate the correlation between CD147 and MMP-9 in the rat following GKS. Adult male Wistar rats were subjected to GKS at a maximum dose of 75 Gy and then euthanized 1 to 12 weeks later. Using immunohistochemistry and western blot analysis, we found that CD147 and MMP-9 expression were markedly upregulated in the target area 8–12 weeks after GKS when compared with the control group. Immunofluorescent double staining demonstrated that CD147 signals colocalized with CD31, GFAP and MMP-9-positive cells. Importantly, CD147 levels correlated with increased MMP-9 expression in irradiated brain tissue. For the first time, these data demonstrate a potential relationship between CD147 and MMP-9 following GKS. In addition, our study also suggests that CD147 and MMP-9 may play a role in vascular injury after GKS.     

RAGE和MMP-9在乳腺癌组织中的表达及临床相关性研究

目的:探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在乳腺癌组织中的表达并分析其与临床相关病理因素的关系.方法:采用免疫组化法检测RAGE和MMP-9在60例乳腺癌组织及37例正常乳腺组织中的表达,并分析其与乳腺癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期之间的关系.结果:RAGE及MMP-9在乳腺癌中的阳性表达率分别为70.00％和61.67％.乳腺癌病理分级、淋巴结转移与RAGE及MMP-9高表达密切相关(P＜0.05),RAGE表达水平与MMP-9表达水平呈正相关(P＜0.05).结论:RAGE和MMP-9的表达水平可能与乳腺癌发生及转移密切相关,可作为乳腺癌药物治疗的重要靶点.     

基质金属蛋白酶在大肠癌中的表达及预后

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP-9)在大肠癌中的表达及与患者预后的关系。方法应用SP免疫组织化学法检测MMP-9在120例原发性大肠癌患者中的表达。结果 MMP-9在大肠癌患者中的阳性表达率为46.7%(56/120);MMP-9的阳性表达率与淋巴结转移有关(P﹤0.05),有淋巴结转移组MMP-9的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P=0.002),且随着Dukes’分期的加深,MMP-9的阳性表达率逐渐增高;MMP-9的表达与大肠癌患者的生存时间有关(P﹤0.05),MMP-9阳性表达的患者预后较差。结论 MMP-9的表达与淋巴结转移和生存时间有关。MMP-9可能为影响大肠癌患者预后的一个重要因素。