添加两种不同培养成分对人未成熟卵体外成熟培养的影响

目的:研究添加两种不同培养成分对人未成熟卵母细胞体外成熟培养(IVM)的效果。方法:选择接受ICSI治疗的77名不孕患者共收集未成熟卵177枚,随机分A组(激素组)33例,添加0.075 IU/ml FSH及0.075 IU/ml LH至基础IVM培养液中;B组(成熟卵泡液组)44例,50%基础IVM培养液与50%人成熟卵泡液配成。将两组收集的未成熟卵母细胞放入不同培养液中培养48 h,每24 h倒置显微镜下观察卵母细胞的形态;对MII卵进行ICSI,ICSI操作后继续培养,ICSI后16～20 h进行受精观察,24及48 h分别进行卵裂观察及胚胎评分。结果:①B组未成熟卵母细胞48 h成熟率和MI期卵母细胞48 h成熟率显著高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),两组培养液GV期卵母细胞24和48 h成熟率比较差异无统计学意义(P>0.05)。②B组2PN卵裂率显著高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),两组2PN受精率及可利用胚胎率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人成熟卵泡液内可能含有一些未知的有利于卵母细胞成熟的因子,深入研究卵泡液的成分,进一步明确其促卵母细胞成熟机制对开发新的IVM培养液、改善IVM的临床结局有重要意义。     

未成熟卵母细胞体外成熟在多囊卵巢综合征的临床应用

目的:探讨未成熟卵母细胞体外成熟在多囊卵巢综合症的应用。方法:自然或小剂量FSH刺激至卵泡直径达到10mm注射hCG,36h后经阴道穿刺获取未成熟卵母细胞,体外培养24～48h,成熟卵母细胞进行ICSI。结果:11例PCOS患者共获卵141个,平均12.8个,培养24～48h后共96个达到MⅡ期,成熟率68%,ICSI后受精共59个,自然受精6个,ICSI受精率68%,自然受精率67%,46个发生卵裂(其中6个为自然受精),ICSI卵裂率68%,优质胚胎(Ⅰ～Ⅲ级)37个,自然受精6个均为优质胚胎。移植后14天,2例血hCG阳性,移植后28天探及子宫内单个孕囊并见原始心管搏动。IVM失败后4例原克罗米芬抵抗者,3例诱导排卵成功,其中1例妊娠,另1例经HMG两个周期妊娠。结论:①IVM是PCOS不孕治疗的新选择;②体外成熟卵母细胞可以自然受精;③经阴道卵巢穿刺可以作为PCOS手术治疗的一种方式。     

细胞松弛素B在人类体外成熟卵子冷冻中的作用

目的:探讨细胞松弛素B在人类体外成熟卵子玻璃化冷冻中的作用。方法:收集常规胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)周期中未成熟卵母细胞234枚(包括生发泡期即GV期和第1次减数分裂中期即MⅠ期),在体外培养24～48 h,181枚卵母细胞成熟(排出第2极体),随机分成3组并行玻璃化冷冻。A组(43枚)用细胞松弛素B(CB)预处理30 min后行玻璃化冷冻;B组(66枚)用CB预处理20 min后行玻璃化冷冻,C组(72枚)未用CB预处理直接行玻璃化冷冻。D组为对照组30枚体内成熟卵子未用CB处理直接玻璃化冷冻。各组卵子冷冻3周后解冻,复苏的卵子行ICSI辅助授精,观察各组成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:冻融后的体外成熟卵子,其成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率均显著低于体内成熟卵子(P<0.05)。A组的成活率显著低于B、C两组(P<0.05),A、B、C 3组间的受精率、卵裂率差异无统计学意义(P>0.05),A、B两组未获囊胚,C组仅有1枚囊胚。结论:冻融体外成熟卵子,成活率、受精率、卵裂率均下降,囊胚形成率低,胚胎后期发育潜能显著降低。CB预处理未能提高卵子冷冻的成活率、受精率、卵裂率及胚胎的发育潜能。     

ICSI周期未成熟卵母细胞24h体外成熟后受精 发育潜能和临床结局分析

目的 研究胞浆内单精子注射(ICSI)周期中未成熟卵母细胞体外培养24 h成熟后进行ICSI的受精、发育潜能和临床结局，以期为未成熟卵母细胞的临床应用提供参考。方法 回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖医学中心2018年1月—2021年10月行辅助生殖助孕治疗的不孕症患者的临床资料，以ICSI周期中未成熟卵母细胞比例>50%的69例患者作为研究对象，将263枚24 h体外成熟(IVM)的卵母细胞(B组)与来自相同周期的241枚体内成熟的同胞卵母细胞(A组)进行对比，分别比较两组胚胎的受精、发育潜能及临床结局。结果 B组成熟的卵母细胞(MII)比率59.63%明显高于A组的34.63%,差异有统计学意义(P<0.01),两组其余的基础资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在受精方面，B组2原核(2PN)受精率50.57%与A组的51.45%接近；1PN率3.42%、3PN率3.42%和退化(DA)率16.73%与A组相比(分别为2.07%、3.32%、12.45%)呈升高趋势，但差异均无统计学意义(P>0.05)。B组第3天(D3)继培数68.42%较A组的50.81%明显增多，D3优胚率15.79%和可利用囊胚率20.88%较A组(分别为28.23%、39.68%)明显下降，差异均有统计学意义(P<0.05);第2天(D2)卵裂率90.98%、囊胚形成率34.07%、优质囊胚率8.79%与A组相比(分别为95.97%、49.21%、11.11%)呈下降趋势，但差异均无统计学意义(P>0.05)。A组复苏移植18例：妊娠3例(分娩1例，正在进行的妊娠2例);B组复苏移植15例：妊娠3例(分娩2例，正在进行的妊娠1例),分娩胎儿均健康无畸形及并发症。结论 对于MII卵母细胞较少的ICSI周期，未成熟卵母细胞体外培养24 h成熟后进行ICSI具有一定的临床应用价值，充分利用这部分卵母细胞可以提高卵子利用率和增加妊娠机会。     

辅助生殖技术中卵母细胞及卵裂期胞质空泡对胚胎生长发育的影响

目的:探讨辅助生殖技术中卵母细胞及卵裂期胞质空泡对早期胚胎发育及囊胚形成的影响。方法:回顾性分析行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵细胞胞质内单精子注射术(ICSI)治疗的有空泡异常形态发生的474个周期(共469例患者)共获卵8 324个,其中形态完全正常的MII卵母细胞共5 392个为胞质形态正常组,有空泡的卵母细胞共510个为卵母细胞胞质空泡组,同时该研究还发现了559个在卵母细胞期无空泡而在卵裂期出现空泡的胚胎作为卵裂期空泡组;比较各组间的优质胚胎率及可利用囊胚率。结果:卵母细胞胞质空泡组的优质胚胎率及可利用囊胚率均低于胞质形态正常组,但差异均无统计学意义(P>0.05);卵裂期空泡组的优质胚胎率及可利用囊胚率均高于卵母细胞胞质空泡组,但仅优质胚胎率差异有统计学意义(P<0.01),可利用囊胚率差异无统计学意义(P>0.05)。10例患者移植全部有卵母细胞胞质空泡的胚胎,其中3例单胎足月活产,1例患新生儿缺血缺氧性脑病,其余两名新生儿未见明显异常。结论:卵母细胞胞质空泡及卵裂期自发空泡的形成可能并不降低形成早期胚胎的质量及发育潜能,这些胚胎可以正常着床及足月活产。     

体外培养成熟技术对未成熟卵母细胞冻融的影响

目的:探索影响未成熟卵母细胞冻融技术的关键因素。方法:A组:来源于体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中自愿捐献的多余的成熟卵母细胞(MⅡ期),共56个;B组:来源于手术切除的卵巢组织中的未成熟卵母细胞(GV或MⅠ),共67个。不同成熟时期卵母细胞经慢冻快融后培养和体外受精,观察其体外成熟、受精及胚胎发育情况。结果:A组与B组相比,两组冻融后的存活率有显著性差异(60.71%vs 77.61%,P<0.05);A组受精率高于B组,但两组比较无显著性差异(61.76%vs 50.00%,P>0.05);A组与B组相比,两组冻融后的卵裂率和优质胚胎率有显著性差异(76.19%vs 37.50%,47.62%vs 12.50%,P<0.05)。A组获2枚囊胚,而B组没有囊胚培养成功。结论:体外成熟培养技术可能是影响冻融后未成熟卵母细胞发育的关键因素。     

卵母细胞体外成熟调节的研究进展

虽然已有一定数量的未成熟人卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精-胚胎移植(IVF-ET)后得到的正常后代,但其发育潜能显然不如体内成熟的卵母细胞好,这主要是由于对灵长类动物卵母细胞胞质成熟及卵母细胞获得发育能力方面的分子机理和生理生化过程知之甚少,现有的IVM条件不足以维持卵母细胞的胞质成熟.所以,改良IVM培养基的有效成分,积极探索卵母细胞IVM的条件,成功建立IVM、IVF和体外胚胎培养(IVC)程序,对生殖生物学及生殖工程的发展具有重要意义.就未成熟卵母细胞的IVM调节因素的研究进展进行综述.     

卵母细胞胞质中央颗粒化对受精、胚胎发育及临床妊娠结局的影响

目的:探讨卵母细胞胞质中央颗粒化在辅助生殖技术中对受精、早期胚胎发育、囊胚形成及临床妊娠结局的影响。方法:回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖中心2010年4月～2011年3月常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或卵细胞胞质内单精子注射术(ICSI)治疗的患者,选取全部卵母细胞胞质中央颗粒化的89例患者作为胞质中央颗粒化组,随机选择同期卵母细胞形态无异常的335例患者作为胞质形态正常组,比较两组间受精、早期胚胎发育、囊胚形成及妊娠结局的差异。结果:胞质形态正常组与胞质中央颗粒化组之间的受精率、优质胚胎率、可利用胚胎率及囊胚形成率差异均有统计学意义(P<0.05),两组间的新鲜周期胚胎着床率、临床妊娠率和流产率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:卵母细胞胞质中央颗粒化可能影响其受精、胚胎发育及囊胚的形成。     

超排卵周期未成熟卵母细胞体外培养及其激活效应

目的:探讨超排卵周期中获得的未成熟卵母细胞的利用价值及人工辅助激活能否改善源于此类卵母细胞的胚胎的发育结局。方法:对226枚超排卵周期中获得的未成熟卵母细胞行体外成熟(IVM)培养,发育至MⅡ期卵母细胞行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)授精,受精后卵母细胞随机分成非激活组和激活组,非激活组卵母细胞ICSI后不作任何处理直接移入G-1中培养,激活组卵母细胞ICSI后入7%无水乙醇作用6 min(即人工辅助激活),比较两组受精、卵裂、优质胚胎、囊胚及优质囊胚形成情况。结果:未激活组和激活组体外成熟率分别为83.9%(94/112)和82.5%(94/114)、受精率分别为80.9%(76/94)和76.6%(72/94)、优质胚胎率分别为14.3%(10/70)和25.0%(18/72),囊胚形成率分别为8.6%(6/70)和16.7%(12/72),两组间差异无统计学意义(P>0.05),但卵裂率激活组(100%,72/72)高于未激活组(92.1%,70/76),差异有统计学意义(P<0.05),优质囊胚率激活组(83.3%,10/12)明显高于未激活组(0%,0/6),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:超排卵周期中的未成熟卵母细胞经体外培养成熟可获得比较满意的受精率及早期胚胎发育潜能,人工辅助激活技术为超排卵周期中获取的未成熟卵母细胞的充分利用提供一种新的思路     

ICSI联合IVM技术在卵巢低反应高龄患者中的应用

目的:探讨胞浆内单精子注射(ICSI)联合未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)技术在卵巢低反应高龄患者中的应用价值。方法:回顾性分析2016年1月—2018年9月于郑州大学第一附属医院生殖医学中心行ICSI助孕治疗81个周期,年龄≥35岁,获卵数≤3个,且卵母细胞均未成熟。按促排卵方案分为微刺激方案组(n=37)和拮抗剂方案组(n=44),统计2组患者基础情况、实验室结果及妊娠结局。结果:①2组患者年龄、不孕时间、基础内分泌、基础窦卵泡数及抗苗勒管激素(AMH)比较,差异均无统计学意义(P0.05);②拮抗剂方案组Gn总量较微刺激方案组高,差异有统计学意义(P0.05);③微刺激方案组与拮抗剂方案组体外培养成熟率、2PN率、卵裂率、可利用胚胎率及优胚率比较差异均无统计学意义(P0.05);④微刺激方案组与拮抗剂方案组的胚胎存活率、种植率和临床妊娠率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:对于卵巢低反应的高龄患者行ICSI联合IVM培养有利于提高卵母细胞成熟率及胚胎利用率,增加妊娠机会,微刺激方案Gn用量少对卵巢低反应患者是经济有效的选择。     

ICSI联合IVM技术在卵巢低反应高龄患者中的应用

目的：探讨胞浆内单精子注射（ICSI）联合未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）技术在卵巢低反应高龄患者中的应用价值。方法：回顾性分析2016年1月—2018年9月于郑州大学第一附属医院生殖医学中心行ICSI助孕治疗81个周期，年龄≥35岁，获卵数≤3个，且卵母细胞均未成熟。按促排卵方案分为微刺激方案组（n=37）和拮抗剂方案组（n=44），统计2组患者基础情况、实验室结果及妊娠结局。结果：①2组患者年龄、不孕时间、基础内分泌、基础窦卵泡数及抗苗勒管激素（AMH）比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；②拮抗剂方案组Gn总量较微刺激方案组高，差异有统计学意义（P＜0.05）；③微刺激方案组与拮抗剂方案组体外培养成熟率、2PN率、卵裂率、可利用胚胎率及优胚率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；④微刺激方案组与拮抗剂方案组的胚胎存活率、种植率和临床妊娠率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：对于卵巢低反应的高龄患者行ICSI联合IVM培养有利于提高卵母细胞成熟率及胚胎利用率，增加妊娠机会，微刺激方案Gn用量少对卵巢低反应患者是经济有效的选择。     

自体血清体外成熟培养液卵胞浆优化在首次ICSI治疗中的应用

目的：探讨自体血清体外成熟培养（IVM）液卵胞浆优化对首次行胞浆内单精子注射（ICSI）助孕患者的应用价值。方法：选择2017年1月—2018年7月在安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心（我中心）首次行ICSI助孕的不孕症患者共1 074例，根据取卵日有无采用自体血清配制的IVM液培养设为血培组（819例）和非血培组（255例）。血培组取卵后IVM培养2～4 h行ICSI授精，非血培组取卵后在常规受精液中培养2～4 h行ICSI授精。比较2组患者的一般情况、胚胎发育情况和临床结局。结果：2组患者的年龄、不孕时间、体质量指数（BMI）、基础卵泡刺激素（FSH）和基础黄体生成激素（LH）水平比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。血培组患者的获卵数、受精率、囊胚形成率稍高于非血培组，非血培组的优质囊胚率稍高于血培组，但是差异均无统计学意义（均P＞0.05）。血培组中47例、非血培组中22例行新鲜周期胚胎移植。2组患者新鲜移植周期的年龄、基础FSH水平、hCG日子宫内膜厚度、移植胚胎数、临床妊娠率、周期取消率和胚胎种植率比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），血培组流产率显著降低（6.25% vs. 36.36%）、活产/继续妊娠率显著增加（93.75% vs. 63.64%），差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论：对于常规首次行ICSI助孕的患者，采用自体血清短时间培养与常规受精液培养相比可降低流产率，改善妊娠结局。     

辅助激活联合补救单精子胞浆注射在常规受精失败卵母细胞中的应用

目的:探讨辅助激活联合单精子胞浆注射(ICSI)技术在常规IVF受精失败周期中的应用。方法:15例常规IVF受精失败患者卵母细胞接受辅助激活联合ICSI处理(激活组),另15例常规IVF受精失败患者卵母细胞直接行补救ICSI处理(非激活组),记录和分析未受精卵母细胞经辅助激活联合ICSI处理后所获受精率、优质胚胎率、囊胚形成率及妊娠结局。结果:激活组(15周期,220枚未受精卵母细胞)正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、囊胚形成率分别为50%(110/220)、90.9%(100/110)、33%(33/100)及15%(15/100),其中妊娠1例;非激活组(15周期,200枚未受精卵母细胞)正常受精率、卵裂率、优质胚胎率及囊胚形成率分别为85%(170/200)、92.9%(158/170)、9.5%(15/158)及0,无妊娠发生。在正常受精率上非激活组高于激活组,且存在显著性差异(P<0.05),而在优质胚胎率和囊胚形成率方面,激活组显著高于非激活组(P<0.05)。结论:辅助激活联合ICSI可以提高常规IVF受精失败周期的优质胚胎率及囊胚形成率进而改善妊娠结局。     

拮抗剂方案OPU-ICSI不同时机选择对新鲜胚胎移植周期临床结局的影响

目的：比较促性腺激素释放激素（GnRH）拮抗剂方案中选择不同的胞浆内单精子注射（ICSI）实施时机对新鲜胚胎移植周期中胚胎质量及妊娠结局的影响。方法：选择2016年1月—2018年5月在我科采用GnRH拮抗剂方案促排卵，行新鲜胚胎移植的531个周期，按不同取卵（OPU）-ICSI间隔时间分为2组：38～40 h为组1（n=101），41～43 h为组2（n=430），比较2组患者的卵母细胞成熟度、胚胎质量和妊娠结局。结果：组1患者的卵子成熟率低于组2，但组2 的早期流产率低于组1，差异有统计学意义（均P＜0.05）。2组患者的受精率、分裂率、可利用胚胎率、优胚率、种植率和临床妊娠率等比较，差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论：在GnRH拮抗剂方案新鲜胚胎移植周期中，ICSI时机选择在38～43 h的窗口期均能达到比较一致的胚胎质量及临床妊娠率。关于OPU-ICSI间隔短（小于40 h）早期流产率较高，需要更多的和细致分组的研究。     

人未成熟卵玻璃化冷冻初步实验探讨

目的:对人未成熟卵母细胞玻璃化冷存保存技术进行初步实验探讨。方法:采用OPS玻璃化冷冻方法,对未成熟的卵子进行冷冻,解冻后体外成熟培养,ICSI受精,观察胚胎培养情况,并对某些影响因素进行探讨。结果:冷冻了GV期卵62个,M I期卵40个。两期卵细胞复苏后存活率、成熟率、受精率和卵裂率分别为:80.65%、77.50%,52.00%、41.94%,57.69%、61.54%,60.00%、62.50%,两组间比较无统计学差异(P>0.05);采用HTF或G-Mops两种缓冲液配制玻璃化冷冻液冷冻解冻未成熟卵效果无统计学差异(P>0.05);未成熟卵解冻后置于含性激素的TCM199与单纯IVF30中成熟培养效果无统计学差异(P>0.05)。结论:应用OPS玻璃化冷冻方法能够有效冻存未成熟卵母细胞。     

SCHEDULE TO INJECT IN VITRO MATURED OOCYTES MAY INCREASE PREGNANCY AFTER INTRACYTOPLASMIC SPERM INJECTION

To ascertain the value of using immature oocytes in an intracytoplasmic sperm injection (ICSI) program, the authors designed a schedule, at 5 p.m. on day 1 (the day of oocyte retrieval) and at 8 a.m. and 2 p.m. on day 2, to recognize and inject the in vitro matured (IVM) oocytes. For the 1166 oocytes retrieved in 107 ICSI cycles, 128 (11.0%) were at the stage of metaphase I (MI) and 113 (9.7%) at germinal vesicle. Routine ICSI for metaphase II oocytes was performed at 2 p.m. on day 1 (initial ICSI). In culture medium of human tubal fluid with 15% maternal serum, 85.1% (205/241) immature oocytes progressed to maturation in which 16.4% (21/128) of MI oocytes matured at 5 p.m. of day 1. The rate of normal fertilization for IVM oocytes (58.5%) was not significantly different from that of initial ICSI (64.0%). One patient received a transfer of two fertilized IVM oocytes alone that were injected at 5 p.m. of day 1, maturing from the MI stage, and achieved a normal pregnancy. The fertilized IVM oocytes were replaced along with the embryos from initial ICSI for 40 cycles that led to 14 (35%) clinical pregnancies. In 43 fertilized IVM oocytes donated for research, we observed that cleavage (95.3%) to the 2- to 4-cell stage was not distinct from that of initial ICSI (94.6%); however, the percentage of embryos of grade I and II morphology was significantly smaller (24.4% vs. 62.5%). Only five (11.6%) developed to blastocysts in vitro. Twenty-one fertilized IVM oocytes were frozen for future transfer. A schedule to inject IVM oocytes in ICSI cycles may generate more accessible embryos for fresh transfer or cryopreservation to increase the chance of pregnancy, although the embryo quality was relatively poor.     

Effects of insulin-like growth factor-I, epidermal growth factor and cysteamine on the in vitro maturation and development of oocytes collected from 6- to 8-week-old Merino lambs

To improve the viability of embryos produced in vitro from lamb oocytes, maturation medium was supplemented with insulin-like growth factor-I (IGF-I), epidermal growth factor (EGF), cysteamine, and combinations thereof. Experiment 1 examined the effects of IGF-I supplementation and duration of oocyte maturation on nuclear maturation and embryo development while Experiments 2 and 3 examined the effects of cysteamine and EGF supplementation respectively on embryo development. In Experiment 4, embryo development was examined after maturation with various combinations of supplements. IGF-I supplementation increased cleavage rate (P < 0.05) but its effect on the rate of blastocyst production from original oocytes was variable. Supplementation with IGF-I increased (P < 0.01) the proportion of oocytes at Metaphase II (MII) after 18 h of maturation but not at later times. EGF either alone or combined with IGF-I significantly (P < 0.05) increased cleavage rates compared with other treatment groups but EGF consistently failed to improve blastocyst production rates. Cysteamine improved hatching rates but only when supplemented alone. Maturation of lamb oocytes for 22 h in medium supplemented with 100 ng mL(-1) IGF-I and 100 microm cysteamine resulted in the production of 16.0 lambs per donor lamb after embryos were transferred to recipient ewes. It is concluded that EGF and, to a lesser extent, IGF-I, whilst beneficial to initial cleavage, can adversely influence subsequent embryo development. Improvements in embryo viability may more likely be obtained by addressing issues that influence fetal oocyte quality than by modifying in vitro methodology.     

短时受精失败后行早补救ICSI的临床应用研究

目的:探讨短时受精失败后行早补救ICSI的应用价值。方法:对2010年10月～2011年6月在唐山市妇幼保健院生殖遗传科接受IVF-ET治疗的28例患者(观察组)进行短时受精观察,于受精后4～6 h去除卵丘细胞,观察卵子的第二极体的排出情况,对第二极体排出率低于1/2的周期实施早期补救ICSI(观察组)。选择同期行ICSI治疗的63例患者作为对照组,比较两组的受精及妊娠情况。结果:观察组受精率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但多精受精率、优胚率、妊娠率无统计学意义(P>0.05)。结论:短时受精后行早补救ICSI能极大地提高卵母细胞的利用率,并获得很好的临床妊娠结局,对预防及降低受精失败有重要意义。