CIK细胞体外诱导培养及对不同肿瘤细胞株的细胞毒作用

目的体外诱导培养细胞因子诱导的杀伤性细胞（CIK）,研究其增殖、免疫表型变化及对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。方法从外周血中分离单个核细胞,多种细胞因子进行诱导,扩增培养CIK细胞,细胞计数检测其增殖能力,流式细胞仪检测细胞免疫表型,MTT法检测CIK细胞对人红白血病细胞系K562、人B淋巴瘤细胞系BJAB、人肺癌细胞系A549、人乳腺癌细胞系MCF-7、人肝癌细胞系HepG2的细胞毒性作用。结果 CIK细胞在第5天开始进入快速增殖阶段,20 d后增殖为原种植细胞数的182倍,免疫表型为CD3+（97.83±1.03）%、CD3+CD8+（77.12±1.60）%、CD3+CD56+（27.58±2.02）%。CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD56+的比例随着培养时间的延长增殖迅速（P＜0.01）;培养第13天,细胞杀伤效靶比为40∶1的情况下对细胞系进行杀伤,K562为（88.89±7.22）%、BJAB为（75.42±9.52）%、A549为（63.19±5.67）%、MCF-7为（43.53±6.31）%、HepG2为（42.63±7.69）%,CIK细胞对以上细胞系均有明显的杀伤活性。结论通过细胞因子的诱导培养,可以在体外大量增殖CIK细胞,CIK细胞对不同肿瘤细胞株有很强的杀伤作用,具有很高的临床应用价值。     

CIK细胞治疗慢性乙型肝炎的临床疗效观察

目的探讨CIK细胞对慢性乙型肝炎的治疗作用。方法分离患者自体外周血单个核细胞,用细胞因子诱导激活,并大量扩增,制备成细胞因子活化的杀伤细胞,应用该细胞治疗慢性乙型肝炎CIK组12例和对照干扰素组21例,所有病例均按标准诊断为慢性乙型肝炎。结果 CIK细胞可促进慢性乙型肝炎患者HBeAg阴转和HBV-DNA复常,疗效高于干扰素治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CIK细胞对治疗慢性乙肝有临床前景。     

CIK 细胞的生物特性和应用研究新进展

免疫细胞过继性治疗是一种新的肿瘤治疗技术,是对传统的手术、化疗、放疗等肿瘤治疗方法的有力补充。细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞是应用最为广泛的免疫细胞之一,其克服了以往免疫治疗细胞在体外扩增难、对肿瘤的细胞毒性不强和可能潜在致癌性等缺陷。CIK细胞是体外扩增的异质淋巴细胞,具有非MHC限制的抗肿瘤活性,主要的效应细胞是表达CD3＋CD56＋的NK样T细胞。虽然,到目前为止,CIK细胞的杀伤机制尚不完全清楚,但NKG2D及其配体的相互作用在CIK抗肿瘤中发挥了重要作用。大量的临床试验证明了CIK细胞治疗的可行性、有效性和安全性：CIK细胞体外培养简单,扩增能力强,容易获得足够的细胞;治疗效果明显,多数患者病情得到缓解,免疫功能提高,生活质量评分提高;副作用少且轻微,如恶心、呕吐、低烧、发抖等,都可以通过简单的治疗得到缓解。本文综述了CIK细胞的生物学特性、杀伤机制、动物实验、临床应用、以及应用CIK细胞治疗的开拓研究等方面的研究进展。     

自体CIK细胞治疗晚期非小细胞肺癌

目的 研究自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞联合化疗治疗晚期非小细胞的疗效.方法 59例患者分成A组(单用TP方案化疗)与B组(自体CIK联合TP方案治疗).对两组的生活质量、免疫学反应、缓解率(RR)、无疾病进展时间与生存期进行观察比较.CIK细胞由自体外周血单个核细胞扩增培养产生.结果 CIK细胞的数最与杀伤活性均在培养第14～21天形成高峰.与A组相比,B组病人的免疫力与生活质量显著提高.结论 自体CIK联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌能有效改善患者的免疫功能.     

CIK细胞制备方法的研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是一种新型的免疫活性细胞,是人外周血单个核细胞在体外经多种细胞因子刺激后获得的一群异质细胞,同时兼具T淋巴细胞强大的杀瘤活性和NK细胞的非MHC限制性。人们对于CIK细胞基础与临床应用的认识一直在不断的更新,本文着重从CIK细胞制备方面进行探讨。     

CIK细胞体外实验研究及治疗肿瘤的临床疗效

细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer,CIK）是近年来发现的一种新型抗瘤细胞,以其体外增殖数量大、对肿瘤杀伤活性强、抗瘤谱广、副作用小等特点,逐渐被人们所认识,并应用于临床。本文就CIK细胞体外增殖特性进行了研究并对CIK细胞治疗肿瘤的疗效进行观察。     

DC/CIK细胞治疗152例肿瘤的副反应观察

目的探讨树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞（DC/CIK细胞）治疗的副反应。方法回顾性分析152例接受DC/CIK细胞治疗的癌症患者的临床资料。结果 152例患者中,肝功能异常13例,发生率为8.6%。肾功能异常12例,发生率为7.9%。心电图异常15例,发生率为9.9%。贫血8例,发生率为5.3%。发热16例,发生率为10.5%。无治疗相关性死亡。结论 DC/CIK细胞治疗可引起轻度副反应。但是,如果不给予高度重视,早期发现,早期处理,则可能导致严重后果。     

不同冻存条件对细胞因子诱导的杀伤细胞的细胞表型及杀伤活性的影响

目的 探讨不同冻存条件下细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞表型的变化及对K562细胞杀伤活性的影响.方法 收集培养12 d的CIK细胞,分别冻存于-80℃冰箱及液氮中,于冻存后4、12、24周复苏,通过流式细胞仪检测CIK细胞表型变化,CCK-8法测定其对K562细胞的杀伤活性,并与未冻存CIK细胞进行比较.结果 液氮冻存4、12、24周及-80℃冻存4周后复苏培养的CIK细胞增殖、细胞存活率、免疫细胞表型及对K562的杀伤活性与未冻存组比较差异无统计学意义(P＞0.05).-80℃冻存12周及24后复苏培养的CIK细胞与未冻存组比较,细胞增殖明显抑制,细胞存活率低,CD3+、CD3 +/CD4+、CD3 +/CD8+、CD3 +/CD56+细胞比例显著降低,对K562细胞杀伤活性显著抑制(P＜0.05).结论 临床治疗中CIK细胞应尽量冻存于液氮中,如冻存于-80℃时冻存时间应≤4周.     

自体与异体CIK细胞抗肿瘤效应的对照研究

目的比较自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与异体CIK细胞的抗肿瘤效应。方法外周血单个核细胞诱导CIK细胞,以自体细胞单独培养为对照。用MTT法测定杀伤活性,流式细胞术分析免疫表型,ELISA法测定干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果异体CIK细胞增殖能力明显高于自体CIK细胞(P<0.01),CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比率较相同条件下自体CIK细胞组显著增多(P<0.05),培养7 d,上清液中IL-12、IFN-γ、TNF-α水平均比自体CIK细胞培养的水平高(P<0.05),对白血病细胞与淋巴瘤细胞的杀伤率显著高于自体CIK细胞(P<0.01)。结论异体CIK细胞比自体CIK细胞有更强的抗肿瘤效应。     

CIK细胞联合NaHCO3抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的 将NaHCO3口服与CIK细胞(cytokine-induced killer,CIK)联合应用以提高CIK细胞在裸鼠体内的抗肝癌活性.方法 将HePG2-Luc细胞皮下移植入裸鼠皮下构建荷瘤小鼠模型,再分四组进行实验:(1)CIK输注+普通水喂养;(2)CIK输注+ 碱性水喂养;(3)生理盐水输注+碱性水喂养;(4)生理盐水输注+普通水喂养.随后定期用小鼠活体成像仪观察肿瘤组织生长速度及荧光强度,30d后取肿瘤组织称重,并制作病理切片,免疫组化检测肿瘤组织CD3及穿孔素的表达情况.结果 CIK输注联合碱性水喂养组的肿瘤荧光强度、肿瘤生长速度都明显低于其他各组,联合组肿瘤组织的CD3阳性及穿孔素阳性细胞数也多于其他组,差异有统计学意义(P<0.05),而碳酸氢钠单独处理组与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 NaHCO3碱性水能有效增强CIK细胞抗肝癌的活性.     

CIK细胞治疗恶性实体瘤的临床疗效评价

目的评价CIK细胞治疗恶性实体瘤的临床疗效及安全性。方法选择恶性实体瘤患者48例,分为单纯化疗组、CIK细胞联合化疗治疗组、CIK细胞治疗组。采用卡氏评分(Karnofsky)评价生活质量及体力改善状况;通过比较客观有效率和疾病控制率评价近期疗效;从治疗开始至患者死亡或最后/次随访时间止,观察并记录患者的生存时间;评价CIK细胞治疗安全性。结果 CIK治疗组患者治疗后一般情况有所改善,特别是在改善食欲和睡眠,增加体质量和体力方面。这可能是CIK细胞治疗的优势所在。但是三组患者在客观有效率方面和疾病控制率方面,单纯化疗组和CIK细胞联合化疗治疗组,与CIK治疗组有显著性差异(P<0.05)。在生存时间方面CIK治疗组患者的生存时间低于单纯化疗组和CIK细胞联合化疗治疗组(P<0.05)。在整个临床观察期间,除有2例患者出现低热症状外,未出现其他不良反应。结论 CIK细胞免疫治疗能改善患者的一般状况,安全性好,是恶性实体瘤的患者在进行化疗治疗之余的有效辅助治疗手段。     

自体CIK细胞对晚期不同阶段肿瘤患者免疫状态和生活质量的影响

目的 探讨自体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）治疗晚期恶性肿瘤患者,对其免疫状态和生活质量的影响。方法 选取2013年2月至2016年3月合肥市第一人民医院血液肿瘤科收治的42例晚期肿瘤患者,按照预计生存期分为A组（预计生存期<3个月）20例、B组（预计生存期≥3个月）22例,检测治疗前后A、B组患者外周血T细胞亚群的变化。观察治疗前后A、B组患者免疫功能的变化,生活质量改善情况及治疗相关不良反应。结果 CIK细胞治疗后,A组患者CD₃⁺T细胞水平较治疗前降低（P<0.05）;B组治疗后CD₃⁺、CD₄⁺和CD₄⁺/CD₈⁺水平较治疗前明显升高（P<0.05）,CD₈⁺T淋巴细胞亚群水平较治疗前降低（P<0.05）。A、B两组患者治疗后KPS评分分别较治疗前均有提高,其中A组差异无统计学意义（P>0.05）,而B组差异有统计学意义（P<0.05）。42例患者在输注CIK过程中未出现明显不良反应。结论 CIK细胞回输安全、副作用小,自体CIK细胞治疗可提高晚期恶性肿瘤患者的免疫功能,改善其生活质量,但应尽早进行。     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗中晚期胃癌的疗效

目的 评价应用细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)过继免疫治疗晚期胃癌的有效性.方法 用淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,将诱导后的CIK细胞回输给晚期胃癌患者.采用流式细胞术分析CIK培养过程中与55例晚期胃癌患者治疗前后外周血中的T细胞亚群(CD3 ,CD4 ,CD8 )、CIK细胞(CD3 CD56 )及NK细胞(CD3-CD56 )的变化,并应用生化比色法与免疫分析技术检测患者治疗前后血清恶性肿瘤相关物质(TSGF)、胃癌相关抗原(MG7-Ag)、糖类抗原19-9(CA19-9)和癌胚抗原(CEA)含量.结果 CIK细胞对K562细胞的细胞毒活性在14～21 d时达峰值.CD3 CD56 细胞由起初的(0.7±0.4)%上升到14d的(31.6±5.5)%与21 d的(35.8±9.7)%.经CIK细胞治疗后患者的肿瘤标志物水平下降,而NK与T细胞亚群水平明显升高,且CIK升高尤为显著,同时提高了患者的生活质量.总缓解率61.8%.结论 用CIK细胞回输治疗晚期胃癌患者可提高患者的细胞免疫功能,并改善其临床体征,无明显毒副作用.     

Inhibition of human ovarian tumor growth by cytokine-induced killer cells

Despite the recent improvement in the treatment of ovarian cancer, this disease is still leading cause of cancer death in women. In this study, the anti-tumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells against human ovarian cancer was evaluated in vitro and in vivo. Although CD3+CD56+ cells were rare in fresh human peripheral blood mononuclear cells, they could expand more than 1,000-fold on day 14 in the presence of anti-CD3 antibody plus IL-2. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 45% of SK-OV-3 human ovarian cancer cells, which was determined by the 51Cr-release assay. In addition, CIK cells at a dose of 23 million cells per mouse inhibited 73% of SK-OV-3 tumor growth in nude mouse xenograft assay. This study suggests that CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for patients with ovarian cancer.     

NSCLC患者术后CIK细胞免疫治疗联合化疗疗效观察

目的评价细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK）免疫治疗联合化疗治疗术后非小细胞肺癌（NSCLC）患者的近期疗效。方法选取82例Ib-IIIa期NSCLC患者,经手术治疗后随机分为两组,常规化疗组和CIK细胞治疗联合化疗组,每组41例。观察比较两组患者生活质量及外周血CD3＋,CD4＋,CD4＋/CD8＋比值,自然杀伤细胞（Na-ture-Kille）r比率以及Th1/Th2细胞因子水平免疫功能指标的变化。结果生活质量：CIK细胞治疗联合化疗组和常规化疗组生活质量总提高率分别为90.0%与73.2%,研究组患者生活质量高于对照组（P〈0.05）。免疫功能指标：CIK细胞治疗联合化疗组于CIK细胞治疗后2周,外周血CD3＋,CD4＋T细胞,NK细胞和CD4＋/CD8＋的比值、白细胞介素-2,干扰素γ水平较治疗前升高（P〈0.01）,于治疗后4周达高峰,此后逐渐回落;而Th2细胞因子于CIK细胞治疗后2周下降,治疗后4周降至低谷。CIK细胞治疗联合化疗组于CIK细胞治疗后2、4、8周CD3＋,CD4＋,CD4＋/CD8＋,NK细胞,IL-2,IFN-γ,白细胞介素-4和白细胞介素-10与常规治疗组各时点比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 CIK细胞免疫治疗联合化疗能增强NSCLC患者术后的免疫功能,改善其生活质量。     

Antitumor activity of cytokine-induced killer cells in nude mouse xenograft model

Malignant glioma is the most common primary brain tumor in adults and the median survival for patients is less than a year. Despite aggressive treatments including surgical resection, radiotherapy, and chemotherapy, only modest improvement has been achieved in the survival of patients with glioma. In this study, the antitumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells against human glioma cancer was evaluated in vitro and in vivo. Human peripheral blood mononuclear cells were cultured with IL-2-containing medium in anti-CD3 antibody-coated flasks for 5 days, followed by incubation in IL-2-containing medium for 9 days. The number of cells increased more than 200-fold and the viability was >90%. The resulting populations were consisted of 96% CD3⁺, 2% CD3⁻CD56⁺, 68% CD3⁺CD56⁺, 2% CD4⁺, <1% CD4⁺CD56⁺, 80% CD8⁺, and 49% CD8⁺CD56⁺. This heterogeneous cell population was called as CIK cells. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 43% of U-87 MG human glioma cells, as measured by the ⁵¹Cr-release assay. In addition, CIK cells at doses of 0.3, 1, and 3 million cells per mouse inhibited 23%, 40%, and 50% of U-87 MG tumor growth in nude mouse xenograft assays, respectively. This study suggests that CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for glioma cancer patients. These authors contributed equally to this work.