大鼠骨髓内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

目的 研究大鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)的分离、鉴定、培养方法以及向内皮细胞分化的诱导条件.方法 密度梯度离心法分离SD大鼠股骨及胫骨单个核细胞,经差速贴壁后取2次贴壁细胞置于纤连蛋白铺被的培养板中.在血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)诱导下培养两周,观察其形态学改变,以免疫细胞化学染色及Dil-acLDL、FITC-UEA-1双荧光染色法对其进行鉴定.结果 贴壁细胞呈现铺路石、团簇样生长,呈梭形、线样排列特殊形态.免疫细胞化学结果显示,贴壁细胞CD133、CD34、Flk-1、血管性假血友病因子(vWF)在不同时段呈阳性表达.诱导培养第2天,CD133阳性表达率为(79.4±4.5)%.自诱导培养的第6天开始,Flk-1与vWF呈高表达,阳性率为(74.2±3.5)%和(72.2±4.3)%.结论 用Percoll密度梯度离心法在VEGF、bFGF及EGF培养体系下可以获得较高纯度的EPC,该细胞具有内皮细胞的特性,经过体外诱导可以分化为内皮细胞.     

人胎盘来源的间充质干细胞向血管内皮细胞分化潜能的研究

目的: 探讨人胎盘来源的间充质干细胞(placenta derived mesenchymal stem cells,PDMSCs)在体外分化为血管内皮细胞的潜能。方法: 利用组织块种植法体外分离培养PDMSCs,流式细胞术鉴定其表面抗原,应用含50 μg/L VEGF和10 μg/L bFGF的诱导分化液定向诱导PDMSCs向内皮细胞分化。免疫细胞化学检测分化过程中不同时点内皮特异性标志的表达变化。透射电镜和体外血管生成实验分别检测内皮特异性结构和内皮细胞功能。结果: PDMSCs表面抗原 CD105和CD166阳性,CD31、CD34和CD45阴性。诱导分化的内皮细胞形态呈鹅卵石样,早期内皮标志Flk-1/KDR在4 d表达最强;成熟的内皮标志CD31、vWF、CD144/VE-cadherin在内皮细胞分化过程中呈现时间依赖性表达(0 d、4 d、8 d和12 d)。透射电镜下可见内皮特异性结构:Weibel-Palade小体。细胞接种在细胞外基质凝胶中可形成毛细血管样结构。结论: 胎盘中可分离出大量PDMSCs,并且PDMSCs在体外可分化为具有功能特性的内皮细胞,因此胎盘组织可能成为血管组织工程和再生医学的理想种子细胞来源。     

小型猪外周血内皮祖细胞的体外培养与分化研究

目的：研究小型猪外周血内皮祖细胞（EPC）的体外分离和定向分化、扩增培养方法，为EPC移植应用于临床提供实验依据。 方法： 密度梯度离心法从小型猪200 mL新鲜全血中分离单个核细胞，用含血管内皮生长因子等各种添加剂的内皮细胞系列专用培养液，分别在包被与不包被的培养皿中进行贴壁培养，诱导其向内皮细胞分化，观察经过不同时间培养后的细胞生长情况并进行诱导分化后的生物学鉴定，包括细胞表型鉴定、DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiI-acLDL）摄取试验、超微结构鉴定、体外血管生成实验。 结果： 包被了贴壁因子的培养皿细胞贴壁及增殖均多于未包被组。前者第3-4 d可观察到梭形贴壁细胞，10 d后出现多个细胞簇，14 d左右可观察到条索状、网状血管样结构，原代细胞培养21 d左右接近融合并且呈典型的鹅卵石样排列。第7-14 d有大于98%的细胞Flk-1、vWF、CD31表达阳性，CD34+细胞为（26.01±2.82）％，有大于95%的细胞DiI-acLDL摄取试验阳性，透射电镜可见特征性的Weible-Palade小体存在，在血管生成实验中，血管内皮生长因子显著促进EPC形成小管的数量与复杂程度，呈一定的量效关系。 结论： 密度梯度离心法结合贴壁筛选培养法可以用于体外分离外周血中EPC进行实验研究，EPC在一定的诱导培养条件下能分化成为血管内皮细胞，贴壁因子、血管内皮生长因子等对于体外培养EPC有很重要的作用。     

用CD133免疫磁珠分离脐血内皮祖细胞的实验研究

目的：从脐血中分离、培养血管内皮祖细胞,研究内皮祖细胞的生长特性和诱导分化条件。 方法： 应用MACS磁球抗体标记法纯化脐血中的CD133+细胞，通过流式细胞仪、免疫细胞化学、免疫荧光等技术及形态学（光镜、电镜）观察研究内皮祖细胞；将细胞接种于添加（或未添加）VEGF、bFGF、干细胞因子（SCF）的含20％胎牛血清（FBS）的IMDM培养基中,观察内皮祖细胞的生长特性。 结果： 分离新鲜脐血所得CD133阳性细胞占单个核细胞的(1.41±1.14)%,经流式细胞仪鉴定CD133+细胞纯度为75%-85%；将分离细胞接种于纤维连接蛋白包被的24孔板内，培养1-2 h即有细胞贴壁，7-10 d可见贴壁细胞呈铺路石样排列；14 d后细胞出现小圆形、梭形等多样性变化，可见毛细血管管腔样结构，电镜观察可见胞浆内典型的Weibel-Palade小体；在VEGF、bFGF、SCF存在条件下,检测贴壁细胞培养14 d后细胞表面抗原表达情况：与培养开始时相比，祖细胞标志CD133和CD34阳性率呈明显下降趋势，分别由(77.0±3.3)%和(93.1±4.7)%降至(1.6±2.2)%和(37.4±4.9)%，P<0.05，内皮细胞特异性标志Flk-1表达明显增加，由(22.3±3.3)%增至(94.3±4.1)%，P<0.05，同时vWF抗原呈强阳性表达，阳性率为(77.9±3.3)%。 结论： 根据细胞表面特异性分子标志（CD133+/CD34+/Flk-1+）可以从脐血中分离出EPCs，EPCs可在体外一定的诱导因子作用下，培养7-10 d分化为成熟内皮细胞。     

人外周血内皮祖细胞的分离、培养和扩增

目的:改进从人外周血中分离、培养和体外扩增血管内皮祖细胞(EPC)的方法。方法:采用不同淋巴细胞分离液,用密度梯度离心法从外周血分离EPC;用CD34免疫磁性活化细胞分选系统(MACS)分离CD34 细胞;分别培养在包被和不包被有人纤维连接蛋白(HFN)的培养板内;采用细胞免疫化学法检测内皮细胞表面标志CD31、CD34和vWF的表达。结果:从成人外周血可分离获得EPC;不同的分离条件可影响获得EPC的数量和质量,HFN对EPC的生长有促进作用。结论:进一步改进从人外周血分离获取EPC并行体外扩增的方法,为EPC的研究奠定了基础。     

人骨髓间充质干细胞体外分离培养及向血管内皮样细胞分化的研究

目的:研究人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的体外分离培养方法及在特定微环境下分化为血管内皮样细胞的潜能,可能为银屑病研究提供实验基础.方法:密度梯度离心法结合贴壁法分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),体外扩增培养并进行鉴定.加入血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导hMSCs向血管内皮细胞分化,流式细胞仪进行细胞表型鉴定,Dil-ac-LDL摄取实验鉴定血管内皮细胞功能.结果:经流式细胞仪测定分离培养的hMSCs CD71、CD44阳性表达,CD54、CDl06、CD45弱阳性表达,CD34、CD31、VWF、KDR、HLA-DR阴性表达;经bFGF、VEGF诱导后的hMSCs可见类似内皮细胞样改变,经流式细胞术检测,与对照组相比内皮细胞特异表面标志CD34、CD31、VWF、KDR表达转为阳性(P＜0.01),而HLA-DR、CD54、CDl06、CD45表达明显上调(P＜0.01);诱导分化后的内皮样细胞具有摄取Dil-ac-LDL的能力.结论:密度梯度离心法结合贴壁法可获得较纯的MSCs;在bFGF、VEGF诱导作用下,hMSCs具有向内皮细胞分化潜能,产生功能性内皮细胞.     

脐血血管内皮祖细胞的分离和诱导分化

目的 从脐血中分离内皮祖细胞，诱导其向内皮细胞分化，研究内皮祖细胞的生物学特性和诱导分化条件。方法 从新鲜脐血中纯化的CD133^ 细胞接种于添加了VEGF、bFGF、IGF—1的M199培养液中，观察梭形贴壁细胞的出现时间和特异性细胞标志。结果 培养3—4d可观察到梭形贴壁细胞，14d左右可形成索条状结构，贴壁细胞表达血管内皮细胞特异性标志VE-cadherin,vWF,UEA-1和VEGFR-2。结论 脐血中含有内皮祖细胞，在一定的条件下，可分化为内皮样细胞。     

人骨髓间充质干细胞体外内皮细胞诱导分化的研究(英)

目的：探讨人骨髓间充质干细胞hMSCs(human mesenchymal stem cells,hMSCs)体外内皮分化基础及其诱导条件。方法：〖HTSS〗采用密度分离与贴壁筛选结合法分离hMSCs，体外联合应用生长因子VEGF165和不同细胞外基质纤维连接蛋白(FN)与Ⅰ型胶原(Col)，对其进行内皮诱导分化。通过免疫细胞化学、细胞化学、流式细胞分析法及透射电镜对其分化后细胞进行鉴定。结果：hMSCs表达早期内皮分化标志之一KDR；PAS反应阳性及超微结构显示，hMSCs胞浆内含有大量糖原形成糖原池，分化后细胞胞浆外质内糖原明显减少或消失，暗示细胞发生分化；细胞诱导后CE34、β1整合素和KDR表达均增强。结论：诱导后细胞为过渡细胞群类型(transit population,TP)，可向内皮前体细胞(endothelial progenitor cells,EPC)EPC方向分化。推测由此类型细胞再分化为内皮细胞(endothelial cells,ECs)，即hMSCs→TP→EPC→ECs。     

FN和Col对VEGF诱导hMSCs体外内皮分化的影响

目的：探讨细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）FN（Fibronectin）和Col（I type Collagen）对VEGF诱导人骨髓间充质干细胞hMSCs体外内皮分化的影响。方法：采用生长因子VEGF165与纤维连接蛋白FN或Ⅰ型胶原Col，联合对hMSCs进行内皮诱导分化。通过免疫细胞化学和流式细胞分析对分化后细胞群检测。结果：分化后细胞群形态没有明显改变；FN和Col可引起内皮分化早期标志KDR和CD34增强，FN效应较为明显；两种基质蛋白也引起β1整合素表达增强。结论：hMSCs诱导后具备内皮分化趋势；ECM-整合素受体和VEGF165相互作用调控hMSCs分化；β1整合素的改变参与hMSCs的内皮分化。     

新生大鼠心肌成纤维细胞的内皮细胞分化潜能

目的 探讨心肌成纤维细胞（CFs）向内皮细胞分化以及成血管潜能。方法 新鲜左心室组织,体外分离、培养、纯化CFs,利用内皮细胞诱导液对第3代 CFs诱导培养,连续诱导培养28 d后,换用内皮细胞培养基（ECM）,并消化传代扩增至第3代。观察诱导细胞生长情况和形态变化,利用免疫细胞化学法、流式细胞术和血管形成分析实验对诱导后细胞的内皮细胞标志物的表达和功能特性进行评价。结果 新生大鼠第3代CFs,呈三角形、梭形和多边形,增殖速度迅速;波形蛋白（vimentin）、盘状结构受体2（DDR2）均呈阳性表达。诱导第3天细胞开始汇合,21 d部分细胞形成串珠样连接,28 d出现细胞汇集成环状样形状;免疫组织化学标记vWF和CD31呈阳性表达;细胞免疫荧光标记vWF、CD34、CD105均呈阳性表达;流式细胞术检测诱导后细胞表面标志物CD31表达率为50.5%,对照组CD31表达率为5.82%。结论 血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）体外定向诱导CFs可使其向血管内皮细胞分化,并表现其功能特征。     

人胚胎主动脉血管内皮祖细胞的分离、培养及鉴定

目的研究人胚胎血管内皮祖细胞(EPCs)分离、扩增及鉴定的方法,并评价其分化成血管内皮细胞的能力,为人胚胎血管来源EPCs作为干细胞技术治疗疾病的细胞材料提供依据。方法从14周龄流产人胚胎主动脉中应用胶原酶消化法分离获得EPCs,用含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和白血病抑制因子的低血清培养基体外扩增培养EPCs。分离培养的EPCs鉴定采用细胞免疫荧光染色、RT-PCR及流式细胞术,检测EPCs细胞的特异标志CD133、CD34和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)。培养的EPCs应用VEGF进行诱导分化,并评价其分化成为血管内皮细胞的能力。结果分离的人胚胎主动脉EPCs细胞表达EPCs的标志分子CD133、CD34和VEGFR2。EPCs在体外特定低血清培养条件下表现很强的增殖能力。培养的EPCs细胞经过VEGF诱导后,细胞表达CD133明显降低,表达vWF、CD31和ELAM-1增强,并且体外成管能力和摄取Ac-LDL能力增强,表明细胞分化成为血管内皮细胞。结论人胚胎早期主动脉的EPCs具有很好的体外自我更新能力和分化成为血管内皮细胞的潜能,可作为EPCs治疗疾病的细胞材料。     

人骨髓间充质干细胞的分离培养及血管内皮生长因子对其体外诱导分化作用

目的：分离和培养人骨髓间充质干细胞(mcsenchymal stem cells，MSCs)并检测其免疫学表型，探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VECF)对其体外诱导分化作用。方法：利用Pcreoll梯度分离、贴壁筛选法及单克隆培养法分离、培养、扩增MSCs；采用免疫荧光和流式细胞术检测MSCs免疫学表型；通过VFGF-165基因转染分析MSCs的表型变化。结果：体外分离、培养出高度同源性的MSCs；MSCs具有独特的细胞免疫学表型，即CD44，CD29，c-kit阳性，CD34，CD31，CD54阴性；VEGF-165诱导后CD44表达明显降低，CD31显著升高，MSCs向内皮分化。结论：成功建立人MSCs分离培养方法，探讨了MSCs细胞免疫学表型及VEGF对它的内皮诱导分化作用，为MSCs的应用提供理论基础。     

兔骨髓内皮祖细胞在组织工程血管构建中的实验研究

建立体外分离、培养及鉴定兔骨髓血内皮祖细胞（endothelial progenitor cell,EPCs）的方法,并探讨其在血管组织工程构建过程中的功能。采用密度梯度离心法分离单个核细胞,经培养鉴定为EPCs后作为种子细胞接种于人纤维连接蛋白包被（FN）的组织工程血管支架上,加入血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）进行体外诱导培养,同时设置未包被纤维连接蛋白及未添加血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的培养方法作为对照组,体外培养10 d后,对构建的组织工程血管进行鉴定分析。分离培养的骨髓单个核细胞呈典型的＂铺路石样＂外观。经免疫荧光检测、细胞吞噬功能鉴定为内皮祖细胞;种植细胞10 d后结果显示：加入纤维连接蛋白和血管内皮生长因子的血管支架可见细胞种植密度明显高于对照组,扫描电子显微镜观察到,血管内腔面较为完整的覆盖内皮细胞。HE染色显示：内皮细胞在血管支架上成活并较为均匀;免疫组化结果显示分化为成熟血管内皮细胞并表达VEGFR-2、vWF、CD34。兔骨髓单个核细胞体外培养可以诱导分化为内皮祖细胞,血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和纤维连接蛋白（FN）的组合更有利于内皮祖细胞在血管支架上增殖和分化,为人工血管制备创造了条件。     

大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞体外培养分化及鉴定

目的：探索大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞（EPCs）的培养、诱导分化及鉴定方法。方法：冲洗大鼠骨髓腔,梯度密度离心法获得单个核细胞,内皮细胞培养液EGM-2MV培养,通过细胞形态,免疫组化和免疫荧光检测CD34、VEGFR-2、vWF,CD133,摄取Dil-ac-LDL和结合FITC-Lectin-UEA-1,超微结构及染色体核型分析进行鉴定。结果：新分离的骨髓单个核细胞呈圆形,大小不一;48h后部分细胞开始贴壁,呈梭形、纺锤形或不规则形;4～8d呈细胞集落或线状排列;9～11d接近融合,呈典型鹅卵石样外观。贴壁细胞CD34、CD31、VEGFR-2、vWF、CD133均表达阳性并呈动态变化,能够摄取Dil-ac-LDL和结合FITC-Lectin-UEA-1,透射电镜见特征性Weible-Palade小体,能稳定保持二倍体核型。结论：本实验初步建立了一套大鼠骨髓血管内皮祖细胞分离、培养、诱导分化及鉴定方法体系。     

兔骨髓内皮祖细胞在组织工程血管构建中的实验研究

建立体外分离、培养及鉴定兔骨髓血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPCs)的方法,并探讨其在血管组织工程构建过程中的功能。采用密度梯度离心法分离单个核细胞,经培养鉴定为EPCs后作为种子细胞接种于人纤维连接蛋白包被(FN)的组织工程血管支架上,加入血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)进行体外诱导培养,同时设置未包被纤维连接蛋白及未添加血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养方法作为对照组,体外培养10 d后,对构建的组织工程血管进行鉴定分析。分离培养的骨髓单个核细胞呈典型的"铺路石样"外观。经免疫荧光检测、细胞吞噬功能鉴定为内皮祖细胞;种植细胞10 d后结果显示:加入纤维连接蛋白和血管内皮生长因子的血管支架可见细胞种植密度明显高于对照组,扫描电子显微镜观察到,血管内腔面较为完整的覆盖内皮细胞。HE染色显示:内皮细胞在血管支架上成活并较为均匀;免疫组化结果显示分化为成熟血管内皮细胞并表达VEGFR-2、vWF、CD34。兔骨髓单个核细胞体外培养可以诱导分化为内皮祖细胞,血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和纤维连接蛋白(FN)的组合更有利于内皮祖细胞在血管支架上增殖和分化,为人工血管制备创造了条件。     

Jagged1过表达促进老龄大鼠来源的内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化

 目的：探讨上调Jagged1表达对内皮培养条件下老龄大鼠来源的内皮祖细胞（EPC）向内皮细胞分化的影响。方法：脱臼处死1～2月龄和19～26月龄SD大鼠,PBS冲洗股骨和胫骨骨髓,Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞, 应用含10% FBS的DMEM/F12培养基以差速贴壁法进行体外培养,DiI-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染进行EPC特性鉴定。实验分为4组：对照组、PIRES2-EGFP转染组、PIRES2-EGFP-Jagged1转染组和未转染的年轻大鼠来源EPC组。荧光显微镜下计数GFP阳性细胞数并计算转染效率;免疫荧光、RT-PCR和Western blotting检测Jagged1 mRNA和蛋白、von Willebrand因子（vWF）及血管内皮生长因子激酶插入区受体（KDR）mRNA表达,体外血管生成实验检测EPC的血管形成能力。结果：转染后Jagged1在EGFP-Jagged1组表达较对照组显著增强（P<0.01）;Jagged1过表达显著促进老龄大鼠EPC vWF与KDR mRNA表达（P<0.01）和体外血管生成能力（P<0.01）; vWF与KDR mRNA表达以及体外血管生成能力在Jagged1转染组与年轻大鼠EPC组间未见有显著差别。结论：Jagged1过表达促进内皮培养条件下老龄大鼠来源EPC向成熟内皮细胞分化。     

骨髓间充质干细胞体外诱导向内皮和上皮细胞的分化

背景：骨髓来源的间充质干细胞在体外具有多系分化潜能,但其在体外向肺组织细胞的分化能力尚存在争议。 目的：体外诱导验证小鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞和上皮细胞分化的能力。 方法：分离小鼠骨髓来源的间充质干细胞,以内皮诱导液向内皮细胞分化。另外将小鼠骨髓间充质干细胞分别在以下诱导培养基中进行上皮诱导3周：单纯上皮诱导培养液,上皮诱导培养液加10 μg/L 转化生长因子β1,并以未经诱导的小鼠骨髓间充质干细胞作为阴性对照,肺泡上皮作为阳性对照。 结果与结论：小鼠骨髓间充质干细胞在上皮诱导培养液中诱导培养3周后,部分细胞由梭形变为典型的卵石样上皮细胞形态,诱导后约60%细胞表达广谱上皮细胞标志pan-CK,RT-PCR结果显示分化后的细胞表达上皮细胞特异标志CK18,未经诱导的间充质干细胞未表达。小鼠骨髓间充质干细胞在内皮诱导24 h后即出现了典型的血管网状结构,vWF免疫荧光染色显示约70%的细胞呈阳性,RT-PCR显示分化后的细胞表达内皮细胞特异性标志CD31、vWF和CD34。提示骨髓来源的间充质干细胞体外诱导培养具有跨胚层多系分化能力。     

人脐血和外周血内皮祖细胞的分离培养和鉴定

背景：国内外有关内皮祖细胞的分离培养和鉴定方面的文章很多,但是人脐血和外周血内皮祖细胞的鉴别方面文章不多。 目的：从人脐血和外周血中分离出内皮祖细胞,并对其进行培养和鉴定。 方法：选取密度梯度离心法从脐血和外周血中分离获得单个核细胞,按照1× 10⁶/cm²的浓度种植于预先铺有纤维连接蛋白的培养板中,用含血管内皮生长因子的M199培养基进行诱导培养。 结果与结论：人脐血和外周血中存在内皮祖细胞,浓度梯度离心联合贴壁筛选获得的单个核细胞在血管内皮生长因子的诱导培养下可分化成内皮祖细胞,内皮祖细胞表达CD34、CD133、CD105、KDR和CD31,能吞噬乙酰化低密度脂蛋白,结合荆豆凝集素1,它们可作为体外分选内皮祖细胞的标志。     

大鼠骨髓和外周血早晚期内皮祖细胞的分离培养和鉴定

背景：旨在从大鼠外周血及骨髓中提取内皮祖细胞,培养晚期内皮祖细胞,为干细胞移植治疗或通过内皮祖细胞联合基因治疗使内皮祖细胞高表达血管新生诱导因子,达到促进缺血性脑血管病血管新生的目的。 目的：从大鼠骨髓及外周血中分离出内皮祖细胞并对其进行鉴定。 方法：使用密度梯度离心及贴壁筛选法从大鼠骨髓和外周血中分离获得单个核细胞,进行诱导培养,观察并记录贴壁细胞的生物学特征;选取内皮祖细胞特异性表面标志CD133、CD34、KDR对原代细胞进行免疫荧光检测,利用流式细胞学技术检测KDR、CD34表达,并通过吞噬功能实验进一步鉴定培养细胞。 结果与结论：大鼠骨髓和外周血能够分离获得早晚期内皮祖细胞;贴壁细胞免疫荧光检测CD34、CD133、KDR表达阳性;流式细胞学检测CD34、KDR表达阳性;贴壁细胞能够吞噬ac-LDL,结合UEA-1。实验成功从大鼠骨髓及外周血中分离出内皮祖细胞;并获得了增殖活性强的晚期内皮祖细胞,找到了更好的成血管干细胞的种子来源。     

骨髓间充质干细胞定向分化为血管内皮样细胞的实验研究

体外诱导人骨髓的间充质干细胞(MSCs)分化成为血管内皮样细胞(ELCs),探讨骨髓来源的MSCs作为组织工程血管种子细胞的可行性。通过密度梯度离心,分离人骨髓的单个核细胞,DMEM贴壁培养MSCs,多次传代贴壁培养纯化MSCs,包含血管内皮生长因子(VEGF)、人成纤维细胞生长因子(hFGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和人表皮生长因子(hEGF)的EBM-2培养基诱导MSCs向ELCs分化,倒置显微镜观察ELCs的形态,流式细胞仪检测ELCs的血管内皮钙粘素(VE-cadherin)、CD133和CD31表达,免疫荧光检测ELCs的CD31和血管性假血友病因子(vWF)表达。结果显示,贴壁培养的MSCs呈长梭形,旋涡状生长,经过诱导细胞形态发生改变,细胞形态变圆,与血管内皮细胞(ECs)相似;流式细胞仪结果显示ELCs表达ECs的特异性标志物CD31和VE-cadherin,不表达CD133;免疫荧光结果也显示ELCs表达CD31和vWF。结果表明:MSCs具有定向诱导分化为ECs的潜能,MSCs来源的ELCs具有与ECs相似的细胞生物学特征,提示骨髓来源的MSCs可作为血管组织工程的种子细胞。