免疫删减法制备共刺激分子CD80单克隆抗体及其生物学活性鉴定

目的：制备共刺激分子ＣＤ８０单抗并鉴定其生物学活性。方法；采用给经ＭＤＡ４５３细胞免疫的小鼠注射环磷酰胺１００ｍｇ／（ｋｇ．次）诱导ＭＤＡ４５３细胞的免疫耐受细胞上，再用已建立能稳定表达ｈＣＤ８０分子的ＭＤＡ４５３细胞免疫小鼠，取经检测抗体阳性强的小鼠脾细胞，按常规方法制备单抗。通过Ｔ增殖阻断实验鉴定其活性。     

两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备及生物学特性的研究

目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能。结果 :经表型分析、Westernblot和竞争抑制试验 ,证实mAbB1、mAb4F1是识别人CD4 0L分子的特异性单抗 ,且识别的位点不同 ;mAbB1、mAb4F1均能不同程度地拮抗CD4 0L TC介导的Daudi细胞生长抑制和抑制混合淋巴细胞反应。结论 :成功地获得两株能稳定分泌特异性抗人CD4 0L单克隆抗体的杂交瘤 (1B1、4F1) ,这两株单抗对CD4 0L的生物学功能具有明显的阻断作用 ,为阻断型单抗     

CD80和CD86研究进展

ＣＤ８０，ＣＤ８６是近年来发现的两个参与Ｔ细胞活化的协同刺激分子。本文综述了其基因结构、分析及表达、免疫学功能及其受体系统，特别提出了ＣＤ８０，ＣＤ８６在肿瘤转基因治疗中的作用。     

CD80和CD86介导的共刺激信号的比较及其生物学作用

共刺激信号在T细胞的活化中具有重要的作用,CD80和CD86是两个重要的共刺激分子。尽管两者存在许多相似之处,但随着研究的深入,发现两者在分子结构、所介导的生物学功能等方面均存在着诸多的不同。研究两者区别对于更好的了解它们的功能具有重要的意义。     

阻断共刺激通路诱导产生的无能细胞的抗原特异性免疫调节作用

目的：了解联合阻断B7-CD28和CD40-CD154通路诱导产生的小鼠免疫无能细胞的免疫调节特性和表型，以及是否具有抗原特异性。方法：Anti-CD154和anti-CD80单克隆抗体加入BALB／C(夏应细胞)和C3H(刺激细胞)的混合淋巴细胞培养(MLR)体系中诱导产生无能细胞。将无能细胞或对照细胞分别加入新的BALB／C和C3H的MLR体系中观察抑制效果。在反应细胞和刺激细胞／第三方刺激细胞(C57BL/6J)之间的MLR体系中加入无能细胞观察抗原特异性。无能细胞中加入刺激细胞或rmIL-2,观察无能细胞的逆转情况。通过流式细胞仪检测无能细胞的表型。结果：无能细胞对反应细胞和刺激细胞之间的MLR具有抑制作用，且呈剂量依赖关系。无能细胞对于反应细胞和第三方刺激细胞之间的MLR无抑制作用。C3H刺激细胞和rmIL-2共同刺激才能逆转无能细胞的无能状态。无能细胞中CD25^ CD4^ T细胞含量上升，而CD45RB^kwCD4^ 和CD28^-CD8^ T细胞含量无改变。结论：联合阻断B7-CD28和CD40-CD154通路诱导产生的小鼠免疫无能细胞具有抗原特异性的免疫调节功能，可以通过感染性耐受的方式抑制淋巴细胞的增殖。     

CD80和CD86研究进展

ＣＤ８０，ＣＤ８６是近年来发现的两个参与Ｔ细胞活化的协同刺激分子。本文综述了其基因结构、分析及表达、免疫学功能及其受体系统，特别提出了ＣＤ８０，ＣＤ８６在肿瘤转基因治疗中的作用。     

抗人CD80双价抗体的构建、表达及生物学功能初步研究

构建及表达抗人CD80双价抗体(dimeric antibody fragment,diabody),并初步研究其生物学功能.PCR法获得轻重链可变区基因,构建表达载体pIRES2-EGFP/diabody.将pIRES2-EGFP/diabody转染中华仓鼠卵巢细胞(CHO),G418加压,筛选稳定高表达细胞株,扩大...     

同种异体移植肾组织中CD80和CD86表达的观察

目的观察同种异体肾移植肾组织中CD80和CD86的表达,以探讨其在急性肾移植细胞性排异反应中可能的致病作用。方法以正常肾组织(NC组)为对照,采用免疫组织化学方法观察急性细胞性排异反应组(ACR组),无急性细胞性排异反应组(N-ACR组)肾组织中CD80和CD86的表达及肾间质中浸润CD4+和CD8+淋巴细胞数。结果ACR组肾小管上皮细胞的CD80和CD86表达较N-ACR组增高,其肾间质中CD4+和CD8+淋巴细胞数也较N-ACR组和NC组明显增高,同时N-ACR组肾间质的CD4+和CD8+表达较NC组明显增高。结论肾小管上皮细胞作为抗原提呈细胞参与了同种异体肾移植急性细胞性排异反应过程。     

脑胶质瘤中S-100,CD80和CD86的表达及其生物学意义

目的 :研究S - 10 0、CD80和CD86在脑胶质瘤中的表达及其生物学意义。方法 :应用免疫组织化学染色法检测 30例脑胶质瘤、10例瘤旁组织和 10例正常脑组织手术标本中S - 10 0、CD80和CD86的表达水平。结果 :S - 10 0蛋白在脑胶质瘤、瘤旁组织和正常脑组织的阳性率均为 10 0 % ,用HPISA - 10 0 0图像分析测得其不同的平均阳性灰度值 (AGV)分别为 72 2 0± 12 30、35 6 0± 9 5 0和 2 8 6 0± 10 2 0 ,脑胶质瘤组织与正常脑组织比较 ,差别有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,而瘤旁组织与正常脑组织比较 ,差别无统计学意义 (P >0 0 5 )。脑胶质瘤瘤旁组织及正常脑组织中未发现CD80和CD86表达 ,脑胶质瘤组织未发现表达CD80 ,但有 1例 (1/ 30 )CD86弱阳性。结论 :S - 10 0蛋白在胶质瘤组织中表达上调提示与胶质细胞的异常增殖及胶质瘤的发生发展有关。CD80和CD86在正常脑组织及胶质瘤中到底是否表达尚待进一步深入研究。     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4Ig和anti-CD154单抗在移植中的研究进展

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4Ig和anti-CD154单抗是目前器官移植的新型生物免疫抑制剂.两者均通过阻断协同刺激信号来抑制T淋巴细胞的活化,从而起到免疫耐受作用,在器官移植中有很好的应用前景.CTLA-4 Ig和anti-CD154单抗在动物模型实验中研究发现单用或联用有长久强效的免疫耐受作用能延长移植物的存活期.在临床中的应用尚处于初期,其临床副作用、安全性及长期的疗效有待进一步观察.     

Variation in the ordered structure of complexes between CD154 and anti-CD154 monoclonal antibodies

The cell surface co-stimulatory protein CD154 (CD40L) is a target for monoclonal antibody (mAb) inhibitors of T-cell mediated immune diseases. This protein, like most other members of the TNF ligand family, forms homotrimeric complexes on the cell surface and in solution, with a three-fold axis of symmetry. We find that several different anti-CD154 monoclonal antibodies form distinctive complexes with soluble CD154. These soluble complexes have been analyzed using size exclusion chromatography, static and dynamic light scattering, and electron microscopy and shown to consist of caged structures of various geometries. The cell surface complexes have been analyzed by confocal microscopy and, depending on the mAb, remain as small, separate complexes or form large aggregates. The formation of these complexes in solution is likely to have an impact on measures of affinity, while the cell surface complexes could affect binding potency and provoke other biological effects.     

CD80鼠-人嵌合抗体的CHO细胞表达及体外生物学功能的初步研究

目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能.方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;Protein G亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用.结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56 mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖.结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性.     

抗人CD100单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的：研制可识别天然CD100分子的单克隆抗体（mAb)。方法：采用真核表达的CD100分子免疫BALB/c小鼠，以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤，并分别用人急性T淋巴细胞性白血病细胞系MOLT-4，猿T淋巴细胞系MLA-144及猴EB病毒转化的B淋巴细胞系（BLCL），进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性。结果：共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。所有mAb均可识别人和猴细胞系的膜表面天然CD100分子，其中6株可识别猿细胞系膜表面的天然CD100分子，结论：成功地制备了7株抗CD100分子的特异性mAb。为研究人和猿，猴CD100分子的结构与功能提供了新的手段。     

鼠抗人B7-1分子功能性单克隆抗体的制备及生物学特性

目的：制备鼠抗人Ｂ７－１分子的功能性单克隆抗体,研究其对高表达相应配基分子细胞的生物学效应。方法：用两株转入Ｂ７－１基因细胞株ＸＧ７－Ｂ７和Ｌ－Ｂ７分别作为免疫原及检测细胞株,利用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。以快速定性试纸分析法鉴定单抗所属的小鼠ＩｇＧ亚类,采用竞争抑制及间接免疫荧光法分析单抗的特异性和亲和力。以高表达Ｂ７－１分子的恶性淋巴瘤细胞Ｒａｊｉ和Ｄａｕｄｉ为靶细胞,分析单抗对其生     

抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性研究

目的研究抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性.方法采用亲和层析法纯化本室构建的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体可溶性表达产物,并用SDS-PAGE,Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验测定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用3H-TdR掺入实验和51Cr释放试验测定该双特异双链抗体的生物学性质.结果纯化的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与Jurkat(CD3+)和Daudi细胞(CD20+)的结合活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环,并能竞争性封闭亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47与Jurkat和Daudi细胞的结合位点;该双特异双链抗体具有促有丝分裂原作用和介导激活的T细胞杀伤Daudi细胞的活性.结论抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47相同的性质,且能介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿瘤细胞,是一个有望用于B细胞恶性肿瘤临床治疗的双特异性抗体.     

抗人CD80单链抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析

目的:构建及表达抗人CD80单链抗体(ScFv),并初步研究其生物学功能。方法:采用RT-PCR法从分泌鼠抗人CD80mAb的杂交瘤细胞株(4E5)中克隆VH和VL基因。用重叠延伸拼接PCR方法构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,并亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体,脂质体法转染中华仓鼠卵巢细胞(CHO),G418加压筛选。纯化抗CD80-ScFv,并分析其对膜型CD80的识别。竞争抑制实验分析抗CD80-ScFv与相应抗原的结合能力。MTT法体外分析抗CD80-ScFv对CD80介导的共刺激信号的阻断作用。结果:构建的抗CD80-ScFv基因全长为828 bp,经测序含有信号肽和连接肽。实验获得稳定表达细胞株SA-Ⅱ,其培养上清与L929-CD80细胞的阳性结合率达98%以上。抗体纯化后产率约为15.12 mg/L,其能够识别Raji和Daudi细胞天然表达的CD80分子,结合率分别为96.6%和95.0%。抗CD80-ScFv对鼠源亲本抗体4E5与抗原结合的竞争抑制率达98.67%,并能阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制PBMC的增殖,增殖率下降43.48%。结论:成功建立了抗CD80-ScFv CHO细胞的表达株(命名为SA-Ⅱ),该抗体能够特异识别细胞表面膜型CD80分子并介导相应的生物学功能。     

抗CD4单抗增强抗CD3单抗／IL—2活化的肿瘤特异性T细胞的抗瘤活性

目的探讨抗CD4mAb增强抗CD3mAb刺激的肿瘤特异性T细胞增殖和杀瘤活性的作用。方法将肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞,采用4种不同的方案培养1单独加2×104U/LrIL2IL2组2单独加抗CD3mAb抗CD3组3加抗CD3mAb48h后,再加入抗CD3mAb和2×104U/LrIL2抗CD3 IL2组4同时加抗CD3mAb和抗CD4mAb48h后,再加入抗CD3mAb、抗CD4mAb和2×104U/LrIL2抗CD3 IL2 抗CD4组。然后分别检测4组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果抗CD3 IL2组细胞的3HTdR掺入量在第6,12和20d分别为:22045、13986和1931;抗CD3 IL2 抗CD4组细胞的3HTdR掺入量在第6、12和20d,分别为46193、31047和7443,后者明显高于前者P0.05。在培养12d时,抗CD3 IL2组的细胞对FBL3细胞株的最大杀伤率为83.6%;抗CD3 IL2 抗CD4组细胞的最大杀伤率为91.7%。细胞表型:FACS分析表明,抗CD3 IL2 抗CD4组培养12d的细胞,99%以上为Thy1.2 细胞,且CD4 、CD25 细胞的百分率均高于抗CD3 IL2组。结论抗CD4mAb对抗CD3mAb刺激、IL2诱导的肿瘤特异性T细胞的增殖和杀瘤活性具有增强作用。