钩吻提取液对Hela细胞生长增殖和细胞周期的影响

目的 探讨钩吻(Gelsemium elegang Benth)提取液对Hela细胞生长增殖以及细胞周期的影响。方法 采用XTT法分析细胞增殖，Timelapse显微镜形态观察，流式细胞仪检测凋亡和细胞增殖状态，综合评价钩吻提取液抗Hela细胞生长和增殖的作用。结果 钩吻B组分具有明显的抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡。且存在明显的剂量和时间-效应关系。经钩吻B处理的Hela细胞周期发生明显变化，G0／G1期细胞比例降低，S期细胞比例增加，而G2/M期细胞比例变化不明显。结论 钩吻B组分可抑制Hela细胞增殖、诱导凋亡，具有明显的抗肿瘤细胞的作用；钩吻B组分主要阻止细胞由G1期向S期转化，并在此阶段诱发凋亡。     

钩吻B2组分对Hela细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨钩吻醇提-氯仿萃取(GW-B2)组分对Hela细胞生长与增殖以及细胞周期的影响。方法:采用XTT法分析细胞生长与增殖,Timelapse显微镜观察细胞生长和形态,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,综合评价GW-B2组分抗Hela细胞的作用。结果:GW-B2具有明显抑制Hela细胞生长与增殖的作用,1μL/mL GW-B2组分处理的Hela细胞生长速度明显降低,在2~5μL/mL的剂量范围内,细胞生长与增殖能力基本完全被抑制。GW-B2组分处理后,Hela细胞主要的形态学变化为贴壁能力丧失,悬浮细胞增多,细胞分裂阻滞,部分细胞崩解破碎。GW-B2组分能明显的诱导Hela细胞凋亡,1μL/mL、2μL/mL和5μL/mL GW-B2组分处理72h后,Hela细胞的凋亡率分别可达8.16%、36.83和61.32%,而对细胞周期的影响主要是G2/M期阻滞,同时对G0/G1期也有一定的阻滞作用。结论:GW-B2组分具有抑制Hela细胞增殖、诱导凋亡,具有明显的抗肿瘤细胞的作用;GW-B2组分对细胞周期的影响主要是G2/M期阻滞,随后可诱导细胞的凋亡。     

康莱特对HL-60/ADR细胞周期蛋白A表达的影响

目的 探索康莱特对HL-60/ADR细胞周期蛋白CyclinA表达的影响.方法 (1)康莱特作用HL-60/ADR细胞后,MTT法检查阿霉素对该细胞的抑制效应;(2)收集康莱特作用后的HL-60/ADR细胞,一定浓度阿霉素作用一定时间,流式细胞仪检查细胞内阿霉素的浓度;(3)康莱特作用对数生长期HL-60/ADR细胞,流式细胞仪分析细胞周期的变化及细胞周期蛋白CyclinA的表达.结果 (1)1mg/ml康莱特作用HL-60/ADR细胞96h,阿霉素对该细胞的抑制效应较对康莱特未作用的HL-60/ADR细胞抑制效应强,P＜0.05;(2)不同浓度的康莱特作用HL-60/ADR细胞96h后,1.5ug/ml的阿霉素作用6h,HL-60/ADR细胞内的阿霉素荧光强度均较对照组高,P＜0.05,且具有剂量依赖关系;(3)1mg/ml康莱特作用HL-60/ADR细胞48h,HL-60/ADR细胞的细胞周期蛋白A的mean值(1207.9±109.6)较对照组(798.04±93.3)高,P＜0.05.但康莱特对HL-60/ADR细胞周期的影响与对照组比较无显著性差异.结论 康莱特具有上调HL-60/ADR细胞周期蛋白A的表达,此可能是康莱特增强HL-60/ADR对阿霉素敏感性的机理之一.     

不同方法制备的蝌蚪提取液对HL-60细胞的作用

为探讨不同方法制备的蝌蚪提取液对ＨＬ６０细胞作用的差异，利用水提法、醚提法、醇提法制备不同的蝌蚪提取液，依次称为Ｔ８７１１、Ｔ８７１２（此二者均为水提法制备，区别在于前者在水提的基础上用盐酸沉淀去除酸性蛋白）、Ｔ８７１３、Ｔ８７１４，分别将其以不同浓度与ＲＰＭＩ１６４０培养基混合，以培养ＨＬ６０细胞。结果显示：几种蝌蚪提取液对ＨＬ６０细胞的生长均有抑制作用，且在一定范围内呈浓度依赖性，其中以Ｔ８７１３的抑制效应最显著。经蝌蚪提取液作用后，Ｗｒｉｇｈｔ染色显示ＨＬ６０细胞的形态表现为向单核／巨噬样细胞分化的特征，细胞还原硝基蓝四氮唑盐（ＮＢＴ）的能力和酸性非特异性酯酶（αＮＡＥ）的活力均显著提高。提示蝌蚪提取液可抑制ＨＬ６０细胞增殖，并且诱导其向成熟的单核／巨噬样细胞分化，其中以醚提法制备的提取液作用效果最好     

海藻多糖对HL-60细胞体外增殖的影响

目的探讨海藻多糖对人HL-60细胞增殖的影响.方法采用集落培养、MTT、形态观察等方法,研究海藻多糖对(HL-60)体外增殖的影响.结果海藻多糖对体外培养的HL-60细胞的抑制作用随时间和浓度的增加而增强,MTT结果示当浓度为800 μg/ml,作用48 h时抑制率为(51.30±3.10)%.结论海藻多糖体外可抑制HL-60细胞增殖,提示其在抗肿瘤方面有一定的开发应用前景.     

流式细胞术分析不同剂量X射线对HL-60细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

比较不同剂量X射线对HL-60细胞的影响,建立X射线诱导HL-60细胞凋亡的生物研究模型,探索细胞周期检测点对放射剂量的耐受性.采用对数生长期的HL-60细胞经2,5,10,15,20Gy的X射线照射后培养4h,用流式细胞仪分析HL-60细胞周期的改变.结果发现,不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡,凋亡率有随照射剂量增大而增高的趋势.经2,5Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增多,经15,20Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞和G2/M期细胞的比例均减少.结果显示,以X射线照射HL-60细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,小剂量照射和大剂量照射可能引起不同时相的细胞发生凋亡,提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系.     

冬凌草甲素对HL-60细胞p53表达及细胞周期的影响

目的探讨冬凌草甲素对HL-60细胞p53表达及细胞周期的影响。方法通过PI染色,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡峰,并以RT-PCR检测p53基因的表达。结果流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后使细胞周期发生变化:G1期、S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增加,凋亡的细胞数比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加。RT-PCR检测结果显示,20μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比,HL-60细胞p53 mRNA水平显著升高,且随时间延长表现得更为明显。结论冬凌草甲素能使细胞周期发生变化和p53基因的上调,从而诱导细胞发生凋亡。     

二甲基亚砜对HL-60细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

探讨二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）对ＨＬ－６０细胞端粒酶活性和细胞周期的影响。采用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ方法检测二甲基亚砜处理前后的ＨＬ－６０细胞端粒酶活性的改变,以流式细胞仪分析细胞周期的改变。二甲基亚砜作用于ＨＬ－６０细胞后,其端粒酶活性明显受到抑制,且细胞周期明显改变,Ｓ期细胞数显著减少。二甲基亚砜可抑制ＨＬ－６０细胞的端粒酶活性,阻止细胞周期的进程。     

^32P照射对HL-60细胞增殖周期的影响

目的 观察^32P照射对HL-60细胞周期的影响。方法 不同剂量^32P体外照射HL-60细胞24、48和72h，流式细胞法检测细胞周期。结果 不同剂量^32P照射HL-60细胞对细胞周期有明显影响，首先发生G2/M期阻滞；随剂量增大，G2/M期和S期均发生阻滞，以G2/M期阻滞为主。结论 ^32P体外照射HL-60细胞对细胞周期有明显的干扰作用。     

c-myc特异性小分子干扰RNA对体外培养HL-60细胞增殖、细胞周期及C-myc蛋白表达的作用

目的:研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA(siRNA)对HL-60细胞增殖及内源性c-myc基因表达的影响,探讨应用siRNA进行白血病基凶治疗的可能性.方法:取倍增期HL-60细胞分空白对照组、阴性对照组、转染组3组,培养24～96 h后收获细胞进行检测.采用MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞仪进行细胞周期分析,逆转录PCR方法检测c-myc mRNA表达的变化,免疫细胞化学染色法检测C-myc蛋白表达的改变.结果:分组培养后,转染组细胞增殖较2个对照组受到抑制(P均<0.05),其抑制作用于转染后48、72 h最明显(P均<0.05).转染组S期细胞比值由空白对照组的(56.1±4.7)%降至(29.2±3.5)%,G./G1 期细胞由(36.8±3.3)%升高至(53.6±4.3)%,差异有统计学意义(P均<0.05).c-myc siRNA对目的基因mRNA表达的抑制作用于24 h最明显(P<0.05),96 h抑制作用基本消失(P>0.05).转染组细胞中C-myc蛋白表达与2个对照组相比降低(P均<0.05).结论:针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增殖及内源性c-myc基因表达有抑制作用,有望为白血病提供新的治疗靶位点.     

氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和诱导凋亡的影响,为其抗肿瘤研究提供理论依据。方法：将HL-60细胞分为不同浓度氟伐他汀处理组（终浓度分别为0、0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1）,对照组不加氟伐他汀,阳性药对照组加入全反式维甲酸(ATRA,终浓度为10 μmol•L^-1）,计数活细胞数目检测细胞增殖情况;用CCK-8试剂盒检测HL-60细胞生长抑制率;用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,氟伐他汀0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1处理1~4 d 的HL-60细胞,活细胞数有不同程度减少(P<0.01),且随着氟伐他汀剂量的增加和作用时间的延长,活细胞数明显减少。用氟伐他汀处理HL-60细胞2~72 h后,细胞生长抑制率随着氟伐他汀剂量的增加和处理时间的延长逐渐升高,其中氟伐他汀10.0和20.0 μmol•L^-1处理48和72 h后,细胞生长抑制率明显高于同浓度氟伐他汀作用2 h后（P<0.01）。流式细胞仪分析结果表明,与对照组比较,氟伐他汀处理HL-60细胞48 h后,G₀/G₁期细胞百分比明显上升（P<0.05）,S期细胞百分比明显下降及细胞凋亡率增加（P<0.01）。当用甲羟戊酸和氟伐他汀共同处理HL-60细胞后,可逆转氟伐他汀的上述作用（G₀/G₁期细胞56.11% ,S期细胞37.12%）。结论：氟伐他汀能抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡₀作用可能是通过甲羟戊酸途径介 导的。     

六亚甲基二乙酰胺体外诱导HL-60 细胞分化的机制

目的探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法HL-60细胞与HMBA体外培养3d；运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原；半定量PT-PCR分析c-myc、Rb基因 mRNA的表达。结果HL-60细胞经HMBA处理后显示CD11b表达显著增高；胞内抗原Cyclin E表达显著下降，Cyclin D、p27表达显著增高，并呈剂量依赖关系；RT-PCR反应显示c-myc mRNA表达显著下调，Rb mRNA表达显著增高。结论HMBA能体外诱导HL-60细胞分化，其机制可能是通过下调Cyclin E、上调p27；同时使得增殖分化相关基因c-myc mRNA表达下调、Rb mRNA表达上调而使细胞阻滞于G1期，抑制细胞增殖，诱导细胞分化。     

HL—60细胞在诱导分化中DNA含量及细胞动力学观察

以显微分光光度法和流式细胞计观察经维甲酸(RA)或二甲亚砜(DMSO)处理 HL-60细胞的 DNA含量和细胞增殖的动态变化.结果显示 HL-60细胞的 DNA 含量由原来高出一倍以上降至接近正常.其中 RA处理细胞 DNA 在处理后第3天和第5天有二次剧降,而 DMSO 处理细胞 DNA 量呈平缓逐日下降.两种处理细胞在诱导第2天 G_1/G_0期细胞明显增多,并在第3天达到高峰。对两种诱导剂作用机理进行了讨论.     

中药金克通过G1期阻滞和诱导凋亡抑制HL-60细胞增殖

目的 研究中药金克对体外HL-60细胞系细胞周期调控方面的影响.方法 使用MTT比色法检测HL-60细胞活力,使用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,使用Western blot检测细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达. 结果金克能通过G1期阻滞和诱导凋亡使HL-60细胞活性降低.金克作用于HL-60细胞引起剂量和时间依赖性凋亡.金克阻滞HL-60细胞在G1期的原因是CDKI蛋白(p19INK4,p21Cip/waf1 和 p27Kip1)表达增高,同时CDK2,CDK4,CDK6,Cyclin D1和Cyclin E表达降低.金克也引起凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达.结论 首次证明了金克通过G1期阻滞和诱导凋亡抑制HL-60细胞的增殖,这表明金克是一个细胞周期特异性的抗癌药物.     

HL-60细胞培养上清液对人脐带血单个核细胞增殖的影响

目的白血病细胞能够通过自分泌方式分泌细胞因子而作用于自身,使细胞大量的增殖;白血病细胞所分泌的细胞因子也能作用于人脐带血（UCB）单个核细胞（MNCs）中的CD34＋/CD133＋细胞亚群使之增殖。关于HL-60细胞（急性早幼粒白血病细胞）培养上清液能否使UCB-MNCs增殖尚未见报道,本实验主要目的是观察HL-60细胞培养上清液对人UCB-MNCs增殖的影响。方法实验分为①有HL-60细胞培养上清液＋StemSpanSFEM组;②StemSpan誖SFEM组;③HL-60细胞培养上清液＋高糖（HG）-DMEM组;④HG-DMEM组;⑤HL-60细胞培养上清液＋低糖（LG）-DMEM组;⑥LG-DMEM组。收分离的人UCB-MNCs按2.5×106/瓶分别接种于6组培养液中,37℃,5%CO2,饱和湿度培养,分别于第3,第6,第9,第12天计细胞总数。结果①培养至第3天,HL-60细胞培养上清液＋StemSpanSFEM组和StemSpanSFEM组MNCs数较培养前和其余各组明显升高（均P〈0.05）,至第9天细胞数维持在较高水平;②HL-60细胞培养上清液＋StemSpanSFEM组和StemSpanSFEM组各时点上,前者MNCs数量较后者有所增加,但无统计学意义（P〉0.05）;③添加HL-60上清的高糖组和低糖组,各时点上的MNCs数均较相应的对照组升高（均P〈0.05）。结论 HL-60细胞培养上清液对人UCB-MNCs具有一定的增殖作用,其有效生物活性物质有待进一步研究。     

小檗碱对HL-60细胞的诱导分化及增殖抑制作用

目的 研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖与分化的影响。方法 应用锥虫蓝排染法、生长曲线测定法、克隆形成实验检测药物对HL-60细胞生长的影响；细胞分化根据细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)还原能力、细胞表面标记的改变来判断；细胞周期变化用流式细胞仪测定。结果 HL-60细胞经小檗碱处理后生长明显受抑，IC50为5．29(24h)，2．65(48h)，0．74(72h)mg／L。选择1，2，4，8mg／L小檗碱作用于HL-60细胞，动态观察发现HL-60细胞向成熟细胞分化：细胞核变小，核浆比减少；NBT还原能力显著增强；CD11b表达升高，4mg／L组CD11b阳性率高达85．1％。细胞周期分析发现，小檗碱处理后细胞阻滞于G0／G1期，S期细胞明显减少。结论 盐酸小檗碱可抑制HL-60细胞的增殖，并诱导HL-60细胞向成熟细胞分化。     

HL－60和抗分化HL－60细胞的基本生物学和细胞遗传学特征比较

对本实验室克隆的人急性早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０及其抗维甲酸分化亚系ＨＬ－６０／ＲＡ进行细胞增殖、细胞周期、分裂中期细胞染色体分布和Ｇ－显带核型分析。发现两者在倍增时间和细胞形态上基本一致。在细胞周期分布上，两者都具有肿瘤细胞的周期分布特征，但ＨＬ－６０／ＲＡ细胞的Ｓ期细胞群少于ＨＬ－６０细胞。两者染色体数量分布比较集中，染色体众数分别为４５±３（ＨＬ－６０）和４５±１（ＨＬ－６０／ＲＡ），呈近二倍体核型，Ｇ－显带核型分析表明两者都接近正常二倍体核型，都含较多的异常染色体。上述结果说明ＨＬ－６０和ＨＬ－６０／ＲＡ细胞的遗传学来源一致。