miRNA-21对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗增敏作用的研究

目的探讨microRNA-21 (miRNA-21)对宫颈癌Hela/DDP耐药的影响及其相关机制。方法实时荧光定量PCR(Real-PCR)检测Hela细胞、Hela/DDP、转染后miR-21-siRNA组及miR-21-neg中miRNA-21的表达量。MTT法检测顺铂(DDP)对Hela/DDP增殖的影响;流式细胞仪分析Hela/DDP细胞周期及凋亡率;Western blot检测顺铂处理过的Hela/DDP中PTEN蛋白的表达。结果在Hela/DDP组中miRNA-21明显高于Hela组,差异具有统计学意义(P0.05);转染miRNA-21siRNA后,Hela/DDP中miRNA-21明显低于空白对照组及阴性对照组,差异具有统计学意义(P0.05);与空白对照组及阴性对照组相比,顺铂作用Hela/DDP后,转染miRNA-21 siRNA组细胞增殖抑制率、凋亡率及PTEN蛋白表达水平均升高,并呈现G0/G1期阻滞作用,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-21可抑制Hela/DDP细胞增殖、阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡,进而提高Hela/DDP细胞对顺铂的敏感性,可能与宫颈癌Hela/DDP细胞中PTEN蛋白合成增加有关。     

胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的建立及其耐药机制研究

目的建立人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/DDP,并对其生物学特性及发生多药耐药的可能机制进行初步评价。方法采用逐步递增顺铂浓度持续作用法诱导获得SGC7901/DDP,采用CCK-8法检测药物敏感性,并计算半数抑制浓（IC50）和耐药指数RI,流式细胞仪分析细胞周期分布与细胞内罗丹明123积累量;采用实时荧光定量PCR检测耐药相关基因MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、 MRP-5、ERCC1、 Survivin的mRNA表达,及凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Bcl-2的mRNA的表达。用Western blotting法检测耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP与其亲代药物敏感胃癌细胞株 SGC7901凋亡相关蛋白 Survivin及耐药相关蛋白P-糖蛋白的表达。结果成功建立胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP,对顺铂的耐药指数为9.86,并对盐酸阿霉素,氟尿嘧啶交叉耐药,SGC7901/DDP细胞与亲本细胞SGC7901相比,生长缓慢,倍增时间延长,细胞周期分析发现S期细胞减少,G1、G2期细胞增多,细胞蓄积罗丹明123能力下降,MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bcl-2表达升高,细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3表达下降, Survivin、P-糖蛋白上升。结论耐药机制可能与MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bcl-2的表达上调和Bax、Caspase-3表达下调有关,以及Survivin与P-糖蛋白表达上调,提示多种耐药机制参与顺铂引起的胃癌细胞耐药。     

过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的作用

目的探讨过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。方法通过RT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞HEEC和子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平。用Lipofiectamine~(TM)2000将miR-132-3p mimics及NC分别转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,分为miR-132-3p mimics组、NC组以及对照组,对照组不做处理。通过CCK8法检测24 h、48 h、72 h后,三组Ishikawa细胞的增殖情况。流式细胞仪检测转染后三组Ishikawa细胞的凋亡情况。Transwell小室检测三组Ishikawa细胞侵袭、迁移情况。Western-blot检测三组Ishikawa细胞B淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X(Bax)、细胞增殖抗原标记物Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果与人子宫内膜上皮细胞HEEC相比,子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平显著下降。CCK8结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖受到抑制,Ki-67蛋白表达水平显著下降(P0.05)。流式检测结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa的凋亡率显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。Transwell结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭及迁移能力受到抑制,MMP-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 miR-132-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa中低表达,过表达miR-132-3p能够抑制细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。     

抑制survivin基因的表达对骨肉瘤细胞株U-2OS凋亡的影响

目的:观察抑制survivin基因表达后对骨肉瘤细胞株U-2OS凋亡的影响。方法:下调骨肉瘤细胞株U-2OS中survivin的表达,并采用免疫印迹法(western blot)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测U-2OS细胞株中survivin的蛋白和m RNA表达;同时采用甲基偶氮哇盐(MTT)法、流式细胞术和western blot检测下调sur v inin对化疗药物顺铂增加细胞凋亡和减少存活率作用的影响,并探讨其对抗凋亡分子Bcl-2以及促凋亡分子Bax的蛋白表达的作用。结果:survivin-si RNA成功转染U-2OS细胞株后,western blot和RT-PCR检测结果均显示U-2OS细胞株中survivin的蛋白和m RNA表达水平显著低于空白对照组(P0.05);MTT比色法结果显示下调survivin可促进化疗药物顺铂对U-2OS细胞株存活率降低及生长抑制率增加的作用;western blotting检测结果表明,与空白对照组相比,Bcl-2的蛋白表达显著减少(P0.05),而Bax的蛋白表达显著增加(P0.05)。结论:下调survivin基因表达可促进骨肉瘤U-2OS细胞株的凋亡,并增加其对化疗药物顺铂的敏感性,为以survivin作为靶基因治疗骨肉瘤提供实验依据。     

miR-25抑制剂对肺腺癌细胞A549/DDP作用的初步研究

目的研究mi R-25抑制剂对耐顺铂A549/DDP细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响及可能机制的探讨。方法培养人肺腺癌A549及耐顺铂A549/DDP细胞株,检测顺铂对两个细胞株的半数耐药浓度(IC50);转染mi R-25抑制剂至A549/DDP细胞内,提取细胞总RNA,并以q PCR法评估mi R-25抑制剂的转染效果;抑制剂转染A549/DDP细胞后,以CCK8法分别在转染24 h、48 h、72 h时测定转染组、阴性对照组及无处理组细胞的增殖抑制率,并以流式细胞仪检测转染mi R-25抑制剂72 h后三组细胞的凋亡率;设置转染抑制剂组及阴性对照组,以CCK8法检测顺铂作用于两组细胞的IC50;以细胞爬片免疫细胞化学及数字化病理扫描系统分析PTEN蛋白在转染抑制剂前后的表达情况。结果 A549细胞株的IC50为0.591μg/ml,95%可信区间为0.436~0.753μg/ml;A549/DDP细胞的IC50为9.040μg/ml,95%可信区间6.504~14.783μg/ml,A549/DDP的IC50约为A549的15.29倍;与阴性对照组及无处理组相比,转染mi R-25抑制剂的A549/DDP细胞内mi R-25含量明显下降,其增殖受到明显抑制,凋亡率明显提高,且顺铂对转染抑制剂的A549/DDP细胞的增殖抑制作用也明显提高,其IC50下降,A549/DDP细胞的耐药倍数有所逆转;细胞爬片免疫组化及表达阳性灰度值分析:抑制剂组的灰度值为139.7±2.52,阴性对照组的灰度值为194±4.58,与阴性对照组比较,抑制剂组的A549/DDP的PTEN蛋白表达得到了明显提高(P<0.05)。结论 mi R-25的特异性抑制剂能够明显降低肺腺癌细胞的内源性mi R-25的表达;抑制其增殖活力,增加其凋亡率,当与顺铂联合使用时,它可以提高肺腺癌细胞的对顺铂的敏感性,逆转其耐药倍数,并且上述作用有可能与细胞内PTEN蛋白合成的恢复性升高有关。     

shRNA干扰MDR1基因逆转胃癌细胞多药耐药性的研究

目的利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)技术沉默多药耐药基因1(multidrug resistance,MDR1),探讨其对SGC7901/L-OHP细胞株多药耐药性的逆转作用。方法采用逐步增加药物浓度法建立耐奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)的胃癌细胞株SGC7901/L-OHP,用shRNA技术沉默MDR1基因在SGC7901/L-OHP细胞中的表达,以real-time PCR检测细胞中MDR1mRNA的表达,Western blot检测细胞中P糖蛋白(P-glycopmtein,P-gp)的表达,MTT法检测转染后SGC7901/L-OHP细胞对L-OHP和5-FU的敏感性。结果shRNA沉默SGC7901/L-OHP细胞株MDR1基因后,与空白组和阴性质粒组比较,MDR1mRNA表达抑制(P0.01),且P-gp表达下调(P0.05)。干扰后的SGC7901/L-OHP细胞对L-OHP和5-FU的敏感性显著升高(P0.05)。结论shRNA可有效沉默SGC7901/L-OHP胃癌耐药细胞株MDR1基因的表达,提高耐药的胃癌细胞对化疗药的敏感性。     

磁性纳米四氧化三铁颗粒对卵巢癌细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的探讨磁性纳米四氧化三铁颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)耐药性的机制。方法将SKOV3/DDP细胞分为对照组、顺铂(DDP)组、Fe3O4-MNPs组和DDP+Fe3O4-MNPs组,用Westernblot方法检测P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)和多耐药相关蛋白1(MRP1),电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP)法测定细胞内铂含量。结果 DDP+Fe3O4-MNPs组P-gp、LRP和MRP1蛋白表达水平较DDP组下降明显(P<0.05)。DDP+Fe3O4-MNPs组细胞内铂含量明显高于DDP组(P<0.05)。结论 Fe3O4-MNPs逆转耐药的作用机制可能与Fe3O4-MNPs促进DDP进入细胞内,下调P-gp、LRP和MRP1蛋白表达,提高细胞内DDP浓度有关。     

Wnt/β-catenin信号通路在肝癌耐药中的作用研究

目的 建立肝癌顺铂耐药细胞系,探讨Wnt/β-catenin信号通路在肝癌顺铂耐药中的作用.方法 使用顺铂逐步增加剂量法诱导人肝癌HepG-2细胞,以建立其多药耐药细胞株HepG-2/DDP;MTT细胞毒实验检测顺铂对HepG-2和HepG-2/DDP细胞的生长抑制作用;荧光定量-PCR检测β-catenin 基因的表达;基因转染双链SiRNA干扰β-catenin基因的表达;Western blot实验检测目的蛋白的表达改变.结果 成功建立了人肝癌HepG-2顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对HepG-2和HepG-2/DDP细胞的IC50值分别为(2.29±0.14) μmol/L和(20.51±0.84)μmol/L(t=95.68,P＜0.01),与HepG-2细胞比较,HepG-2/DDP细胞对顺铂耐药8.96倍.荧光定量PCR结果显示:HepG-2和HepG-2/DDP细胞中β-catenin基因表达的2-△Ct值分别为0.323±0.065和0.674±0.097(P＜0.01),Western blot检测也显示β-catenin蛋白的表达在HepG-2/DDP细胞也显著高于HepG-2细胞.化学合成的靶向SiRNA可以显著下调β-catenin的表达,顺铂对照组、SiRNA靶向干扰组、SiRNA阴性干扰组HepG-2/DDP细胞的IC50值分别为(21.02±1.64)、(6.23±0.68)、(20.44±1.26) μmol/L,对照组和SiRNA靶向干扰组之间差异有统计学意义(P＜0.01).结论 顺铂耐药细胞HepG-2/DDP出现了Wnt/β-catenin信号通路的激活,SiRNA干扰β-catenin基因表达可显著提高顺铂耐药细胞HepG-2/DDP对顺铂的敏感性,为克服肝癌顺铂新靶点的寻找提供了理论依据.     

RNAi干扰Stat3基因诱导喉癌顺铂耐药细胞凋亡及对Stat3信号转导的影响

目的利用RNA干扰Stat3基因,探讨其对喉癌细胞系Hep-2细胞中对顺铂耐药的细胞凋亡的影响。方法常规体外培养人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株,重建质粒(pGPU6/GFP/Neo-sh Stat3、简称pG/G/N-sh Stat3)通过脂质体包裹转染Hep-2细胞,实验分为:Ⅰ重建质粒(pG/G/N-sh Stat3)+顺铂(DDP)组;Ⅱ单纯重建质粒(pG/G/N-sh Stat3)组;Ⅲ单纯顺铂(DDP)组;Ⅳ脂质体组;Ⅴ阴性对照组。利用流式细胞技术检测各试验组转染24h、48h及72h后的细胞凋亡情况,及各试验组转染72h后Stat3、p-Stat3及其靶目标基因产物Bcl-2蛋白表达水平。结果重建质粒(pG/G/N-sh Stat3)增强了顺铂对Hep-2细胞凋亡的促进作用;转染72h后,流式细胞仪检测结果显示重建质粒(pG/G/N-sh Stat3)+顺铂组的Stat3信号转导通路蛋白Stat3、p-Stat3蛋白及其靶目标基因产物Bcl-2蛋白的表达受到明显的抑制。结论 RNAi沉默STAT3基因通过抑制Stat3相关调控蛋白的表达,诱导喉癌顺铂耐药细胞凋亡,增强人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对化疗的敏感性。     

Evn一50增强人卵巢癌顺铂耐药株COCl／DDP对顺铂敏感性的研究

目的 观察黄荆子乙酸乙酯提取物（Evn-50）和顺铂（DDP）在体外对人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP凋亡的影响,探讨Evn-50提高人卵巢癌耐顺铂细胞株COC1/DDP对DDP敏感性的机制.方法 运用MTT、FCM、Hoechst33258染色法、Western blot等方法,观察Evn-50增强DDP抑制COC1/DDP细胞增殖作用和此过程中COC1/DDP细胞凋亡,caspase-3蛋白、增殖细胞核抗原（PCNA）及其泛素化修饰蛋白（Ubi-PCNA）表达的改变.结果 Evn-50不仅增强DDP对COC1/DDP细胞的抑制增殖作用,也增强DDP对COC1/DDP细胞的凋亡作用,同时caspase-3蛋白表达增加（P〈0.05）;而Evn-50（20 μg/ml）组与空白对照组相比PCNA蛋白表达下调（P〈0.05）,Evn-50与DDP合用组与DDP单药组均出现了Ubi-PCNA蛋白表达,Evn-50与DDP合用组与DDP组比较,Ubi-PCNA蛋白表达下调（P〈0.05）.结论 Evn-50可能通过减少PCNA表达,使DDP诱导的PCNA泛素化水平下降,从而逆转DDP耐药,最终通过激活caspase-3蛋白高表达,启动caspase级联反应,增强DDP对人卵巢癌DDP耐药细胞株COC1/DDP的凋亡作用.     

miR-495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用的影响及机制研究

目的 探讨微小核糖核酸(microRNA,miR) -495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用下的影响及机制。方法 采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株Eca109（Eca109-RAD）及分次顺铂递增法诱导建立顺铂耐药型细胞株Eca109（Eca109-DDP）,实时荧光定量聚合酶链反应 (qRT-PCR) 检测miR-495 在Eca109-RAD 及Eca109-DDP 细胞中的表达。Eca109-RAD 及Eca109-DDP 分为NC 组和miR-495 mimic 组,转染后qRT-PCR 检测各组细胞中miR-495 的表达,CCK8 检测不同放射剂量对Eca109-RAD 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,及不同浓度的顺铂对Eca109-DDP 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,NC 组和miR-495 mimic 组经放射及顺铂处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western blot 检测各组细胞中凋亡相关蛋白caspase 3,Bax 和Bcl-2 蛋白的表达。结果 与Eca109 细胞（0.99±0.01）相比,Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（0.48±0.03 ）及Eca109-DDP 细胞中miR-495的表达（0.52±0.05）均降低,差异有统计学意义(t=27.930,15.970, 均P=0.000)。与NC 组细胞相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（4.82±0.48 vs 1.00±0.03）及Eca109-DDP 细胞中miR-495 的表达（5.68±0.54vs 1.00±0.01）均显著增加,差异有统计学意义(t=13.760,15.100, 均P=0.000)。与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞对放疗敏感度增加,差异均有统计学意义(t=6.780 ～ 18.860,P = 0.000 ～ 0.001);与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-DDP 细胞对顺铂敏感度增加,差异均有统计学意义(t=7.510 ～ 21.630,均P=0.000)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞平板克隆形成能力（46.33±5.69 个vs 93.33±4.51 个）及Eca109-DDP（34.67±2.52 个vs 89.00±4.03 个）细胞平板克隆形成能力显著降低(t=11.210,19.800, 均P=0.000) 。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞凋亡率（25.66%±2.41% vs 8.39%±0.82%）及Eca109-DDP 细胞凋亡率（21.05%±5.37% vs 8.67%±1.15%）均显著增加(t=11.750,10.030,P=0.000,0.001)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞及Eca109-DDP 细胞中Bcl-2 蛋白表达均降低(t=4.650,7.450,P=0.006,0.001),Bax 和caspase 3 蛋白的表达均增加(t= 7.100 ～ 14.290, P=0.000 ～ 0.001)。结论 MiR-495 可能通过调控凋亡相关蛋白促进食管癌细胞放化疗敏感度。     

miR-199在对顺铂敏感性不同的卵巢癌细胞株中的表达及其意义

目的探讨 miR-199在卵巢癌细胞株中的表达,寻找卵巢癌化疗敏感性的指标。方法组学分析找出在顺铂敏感性不同的卵巢癌细胞株,miR-199的表达量差异较为显著,qRT-PCR 和 western blot 方法检测瞬时转染 miR199 mimic ／antagomir 后的卵巢癌细胞株,P63表达水平发生显著变化。结果miR-199在对顺铂耐药的 ES-2细胞中表达水平高于在对顺铂耐药的 SKOV3细胞中的表达,miR-199的下游蛋白 P63的表达也有差异。结论miR-199与 P63在一定程度上可以预测卵巢癌顺铂化疗敏感性,miR-199可能是通过其下游靶基因 P63发挥其在卵巢癌顺铂化疗敏感性中的作用。     

Bmi-1介导的K562/ADR细胞多药耐药机制

目的:观察Bmi-1基因沉默对白血病耐药细胞株K562/ADR耐药性的影响并初步探讨其机制。方法:将2种序列的Bmi-1小干扰RNA SiRNA转染到耐药细胞K562/ADR,检测Bmi-1基因m RNA和蛋白的表达以确定转染效果。检测Bmi-1基因沉默后耐药蛋白P-gp及其编码基因MDR1的表达情况,并采用流式细胞术检测细胞内阿霉素蓄积情况。检测Bmi-1基因沉默后NF-κB蛋白的表达变化;应用NF-κB抑制剂PDTC处理K562/ADR细胞抑制NF-κB活性后,检测P-gp蛋白的表达及其功能的变化。检测Bmi-1基因沉默后PTEN、AKT和p-AKT蛋白表达的变化。应用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理K562/ADR细胞抑制p-AKT表达后,检测NF-κB和P-gp蛋白的表达。应用PTEN抑制剂BPV(phen)处理Bmi-1基因沉默后的细胞,检测AKT、p-AKT、NF-κB和P-gp蛋白的表达。以上mRNA表达用RT-PCR法检测,蛋白表达用Western blot法检测。结果:在mRNA水平和蛋白水平2种序列的小干扰RNA均使K562/ADR细胞Bmi-1基因表达降低。MDR1/P-gp在Bmi-1 siRNA干扰细胞中的表达明显低于在K562/ADR细胞的表达(P0.05);干扰后细胞内阿霉素蓄积增多。Bmi-1基因沉默后,细胞NF-κB活性降低;NF-κB抑制剂抑制NF-κB活性后,K562/ADR细胞P-gp蛋白表达及药物泵出功能被抑制。Bmi-1基因沉默后PTEN蛋白表达增高,而p-AKT蛋白表达明显降低(P0.05)。PI3K/AKT通路抑制剂LY294002抑制p-AKT表达后,NF-κB活性和P-gp蛋白表达明显下降(P0.05)。PTEN抑制剂BPV(phen)处理Bmi-1基因沉默细胞后,NF-κB活性和P-gp蛋白表达得到重塑。结论:Bmi-1在MDR1/P-gp介导的K562/ADR细胞多药耐药中起关键作用,这种作用可能是通过激活PTEN/AKT途径调控NF-κB完成。     

姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂敏感性的研究

目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP对顺铂化疗敏感性的关系。方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对COC1/DDP细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达。结果:顺铂的浓度在1.25～5μg/mL时与姜黄素合用后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以2.5μg/mL顺铂和20μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;顺铂与姜黄素联合用药与单独用药相比,凋亡率明显增加(P<0.05);联合用药与单独用药相比Bcl-2 mRNA的表达明显降低(P<0.05),Smac mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,机制可能与降低Bcl-2基因的表达,增加Smac基因的表达有关。     

DNA损伤修复蛋白XPA表达水平对膀胱癌细胞顺铂耐药的影响

【目的】探讨DNA损伤修复蛋白XPA表达水平对膀胱癌细胞顺铂耐药的影响。【方法]Western blot法检测不同膀胱癌细胞株XPA蛋白表达水平;shRNA干扰技术筛选出稳定并低表达XPA的膀胱癌细胞株,检测细胞克隆形成率及细胞凋亡率,比较xPA低表达细胞株与XPA正常表达细胞株对顺铂的敏感性。【结果】XPA表达最高的膀胱癌细胞T24,顺铂耐药程度最高;顺铂处理shRNA～T24-XPA细胞后,相比于shRNA—T24-NC,克隆形成率显著降低（P〈0．01）,但相反促进细胞凋亡。【结论】膀胱癌化疗耐药可能与XPA水平高表达有关,干预并下调膀胱癌T24细胞XPA蛋白的表达,可降低细胞的克隆形成率,但相反增强顺铂的凋亡诱导率。     

核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响,并分析其潜在凋亡机制。方法不同浓度RPL41(0μM、20μM、50μM、100μM)处理A2780细胞,分为对照组和RPL41低、中、高剂量组。采用MTT法检测人卵巢癌A2780细胞活力变化;采用Hoechst染色法检测A2780细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测A2780细胞周期;采用蛋白印记(Western Blot)法检测A2780细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;采用RNA干扰技术沉默RPL41,分为NC组和si RPL41组,Western Blot检测沉默RPL41后A2780细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果与对照组相比,糖体蛋白RPL41可以抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖,具有剂量依赖性(P 0. 05);RPL41剂量依赖性引起A2780细胞凋亡(P 0. 05); RPL41可以显著上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,呈浓度依赖性(P 0. 05);沉默RPL41表达后,A2780细胞中Bcl-2的表达较NC组显著上升,Bax的表达较NC组显著下降(P 0. 05)。结论 RPL41可呈剂量依赖性抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,并可能通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达,参与细胞程序化死亡机制,导致A2780细胞凋亡。     

miR-320a调控水通道蛋白4对阿尔茨海默病细胞模型的影响

目的 探讨miR-320a调控水通道蛋白4(AQP4)对阿尔茨海默病细胞模型的影响。 方法 采用神经生长因子（NGF）诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株（PC12)为神经元细胞,观察PC12组和神经元细胞组的细胞形态。采用β淀粉样蛋白(Aβ)处理诱导的神经元细胞,构建AD细胞模型。根据处理因素的不同将培养细胞分为对照组（不做特殊处理）、miR-320a模拟剂组（加入miR-320a模拟剂50 nmol/L）、miR-320a抑制剂组（加入miR-320a抑制剂50 nmol/L）、Aβ处理组（加入Aβ）、Aβ+miR-320a模拟剂组（加入Aβ+miR-320a模拟剂50 nmol/L）和Aβ+miR-320a抑制剂组（加入Aβ+miR-320a抑制剂50 nmol/L）。采用CCK8法检测细胞活力。利用RT-PCR检测目标基因AQP4、miR-320a、Bax、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）mRNA的相对表达。采用免疫印迹法检测目标基因AQP4、Bax、Bcl-2蛋白的相对表达。 结果 PC12经NGF诱导后,与PC12组比较,神经元细胞组泛素羧基末端水解酶-L1(Uch-L1)基因表达明显下调,神经丝蛋白(NFP)、微管结合蛋白2(MAP2)、AQP4基因表达明显上调,MAP2和AQP4蛋白相对表达明显增高。造模后,与对照组比较,Aβ处理组神经元细胞凋亡增加,细胞活力明显减低,miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax的mRNA及蛋白表达明显增加。与Aβ处理组比较,Aβ+miR-320a模拟剂组,细胞活力明显增加,miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显增加、Bax的mRNA及蛋白表达明显降低。与Aβ+miR-320a模拟剂组比较,Aβ+miR-320a抑制剂组细胞活力明显降低,miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax的mRNA及蛋白表达明显升高。 结论 miR-320a可以上调AD细胞模型中AQP4的表达,减少细胞凋亡,增加细胞存活率。     

氯离子通道阻断剂NPPB对顺铂诱导C6细胞损伤的作用

目的探讨氯离子通道阻断剂NPPB对顺铂(DDP)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤中的作用。方法应用MTT法检测C6细胞的生存率;RT-PCR检测Bcl-2、Bax及ClC-3的mRNA表达;Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、Cyt-C的蛋白水平。结果与对照组相比,NPPB组C6细胞生存率、Bax/Bcl-2比值、ClC-3 mRNA及Cyt-C蛋白表达无明显变化;DDP组C6细胞生存率明显下降(P<0.05),ClC-3 mRNA表达降低,Bax/Bcl-2比值及Cyt-C蛋白表达明显增高。而DDP与NPPB联合组C6细胞生存率与DDP组相比明显增高,ClC-3 mRNA表达增高,Bax/Bcl-2比值呈下降趋势,Cyt-C蛋白表达明显降低。结论氯离子通道阻断剂NPPB可能通过降低Bax/Bcl-2比值,抑制Cyt-C的释放而拮抗DDP对肿瘤细胞增殖的抑制作用。     

阿霉素联合顺铂对人胃癌组织增殖和凋亡影响作用的研究

目的研究阿霉素联合顺铂对人胃癌组织增殖和凋亡的影响作用,初步探讨阿霉素联合顺铂治疗胃癌的可能机制。方法常规培养人胃癌细胞株SGC-7907,用不同浓度的阿霉素、顺铂分别单独及联合用药作用于细胞。采用MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布、凋亡的变化;Western blot检测相关蛋白的表达。结果阿霉素和顺铂能抑制SGC-7907细胞的增殖,两种药物联合应用时抑制率远远高于单药组(P0.01)。流式细胞测定仪显示单用阿霉素、单用顺铂以及联合用药在24 h内对SGC-7907细胞细胞凋亡率分别为(11.89±1.25)%、(19.51±1.33)%、(30.02±2.49)%,联合用药组明显高于单独用药组(P0.01)。Western blot检测显示,联合用药组Bax增加和Bcl-2减小更为明显,caspase-3蛋白的表达显著增强,与单药组相比差异显著(P0.01)。结论阿霉素与顺铂联合用药效果明显,可抑制胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,其作用可能与激活Bax、抑制Bcl-2和活化caspase-3有关。     

微小RNA-218对耐顺铂宫颈癌细胞生物学特性影响的研究

目的研究和探讨微小RNA-218(miR-218)对耐顺铂宫颈癌细胞的增殖克隆、迁移侵袭能力、药物敏感性等特性的影响。方法以人宫颈癌细胞株SiHa细胞系为亲本株细胞,采用低浓度加量持续诱导法产生耐顺铂SiHa细胞株(耐顺铂SiHa),以慢病毒为载体构建过表达miR-218的耐顺铂细胞株(miR-218/耐顺铂SiHa)。通过荧光定量PCR检测转染后miR-218/耐顺铂SiHa的miR-218表达情况。采用MTT法检测SiHa、耐顺铂SiHa、miR-218/耐顺铂SiHa 3组细胞在含顺铂培养液的增殖克隆及顺铂半数有效抑制浓度(IC50)。划痕试验和Transwell法检测3组细胞的迁移和侵袭能力。结果成功构建了耐顺铂SiHa及miR-218/耐顺铂SiHa细胞株,与SiHa及耐顺铂SiHa组比较,miR-218/耐顺铂SiHa组的miR-218表达量显著升高,差异有统计学意义(P0.05);在含有顺铂培养液中,耐顺铂SiHa组的克隆增殖与IC50显著高于SiHa组与miR-218/耐顺铂SiHa组,差异有统计学意义(P0.05),SiHa组与miR-218/耐顺铂SiHa组比较,差异无统计学意义(P0.05),miR-218/耐顺铂SiHa组的划痕愈合率与细胞穿膜次数显著低于SiHa组及耐顺铂SiHa组,且差异有统计学意义(P0.05)。结论过表达miR-218可以显著抑制宫颈癌细胞增殖与侵袭能力,增强对顺铂的药物敏感性,对耐药病例的治疗提供新的思路。