miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-3p在黑色素瘤和正常皮肤组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-3p的靶基因,黑色素瘤A375细胞转入miR-34a-3p模拟剂(miR-34a-3p mimics组),转入对照物miR-NC(对照组miR-NC),miR-34a-3p mimics组转染YAP1表达载体(miR-34a-3p mimics+YAP1组)。通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a-3p和YAP1对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a-3p对YAP1蛋白表达的影响。结果黑色素瘤组中的miR-34a-3p的表达量(0. 67±0. 21)低于正常皮肤组织(1. 35±0. 47),差异具有统计学意义(P 0. 05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR WT载体共转染组荧光强度(0. 39±0. 11)明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组(0. 98±0. 35),差异具有统计学意义(P 0. 05)。而miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR MUT载体共转染组(1. 31±0. 23)与其对照miR-NC与MUT载体共转染组(1. 22±0. 21)之间的荧光强度无显著差异(P 0. 05)。在培养24 h、48 h和72 h后,miR-34a-3p mimics组细胞细胞活力低于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05); miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞活力高于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics组细胞的凋亡率高于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P 0. 05)。miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋亡率低于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与对照组miR-NC比,miR-34a-3p mimics组细胞的YAP1蛋白表达量显著降低,cleaved caspase 9表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。而与miR-34a-3p mimics组比较,miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋YAP1蛋白表达量显著增加,cleaved caspase 9表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论miR-34a-3p能够通过调控靶基因YAP1的表达,抑制黑色素瘤A375细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

超声微泡造影剂介导EGFP对兔视网膜的转染效率

目的 探讨在不同能量超声和一定剂量微泡作用下,超声微泡造影剂介导下增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒对兔视网膜转染的效率、安全性以及可行性.方法 将30只新西兰大白兔随机分为6组:质粒组(A组)、质粒+微泡组(B组)、质粒+超声照射组①(C组)、质粒+超声照射组②(D组)、质粒+微泡+超声照射组①(E组)、质粒+微泡+超声照射组②(F组).将1 ml pEGFP-C1质粒与1 ml SonoVue微泡造影剂混合,由耳缘静脉注入,分别用0.5、1.0 W/cm2超声波辐照眼球.转染7天后行视网膜光镜及透射电镜检查,观察质粒、微泡及超声照射对视网膜有无损害,并在荧光显微镜下观察pEGFP-C1质粒表达情况.结果 光镜及透射电镜结果显示质粒、微泡及超声照射对视网膜无损害.A～D组均可见少量绿色荧光表达(P均＞0.05),E、F组的荧光表达较强,明显高于其他4组(P均＜0.05),E、F组荧光强度差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 在一定能量的超声照射下,超声微泡造影剂能够提高携带EGFP质粒在兔视网膜的转染效率.     

超声靶向辐照微泡促进2型糖尿病肾病大鼠模型建立的研究

目的探讨超声靶向辐照微泡促进SD大鼠2型糖尿病肾病模型建立的可行性。方法 180~200g雄性SD大鼠50只随机分为5组,正常组(A组)、单纯超声微泡辐照组(B组)、高脂高糖+低剂量链脲佐菌素(STZ)组(C组)、高脂高糖+低剂量STZ+超声微泡组(D组)、高脂高糖+低剂量STZ+超声微泡辐照组(E组)各10只。C、D、E组成功建立2型糖尿病模型后,每周测量各组空腹血糖值(FBG),检测尿微量白蛋白(mAlb),计算尿蛋白排泄率(UAER)。当UAER30mg/d时,记录出现该变化的时间,检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)及血谷丙转氨酶(ALT),光镜观察肾小球病理变化,免疫组化检测CD31的表达。结果 E组出现UAER30mg/d的时间较C、D组明显缩短(P0.05)。C、D、E组FBG、24hUAER、BUN、SCr值高于A、B组(P0.05);五组间ALT比较无显著性差异(P0.05)。C、D、E组大鼠均出现肾小球系膜细胞及基质增生,肾小球腔缩小,B组病理改变较三组轻;免疫组化B、C、D、E组CD31呈阳性表达,而A组呈阴性表达(P0.05)。结论超声微泡靶向辐照能够明显缩短2型糖尿病肾病大鼠成模时间。     

MiR-132靶向YAP抑制肝癌Huh7细胞的生长

目的研究miR-132靶向YAP后对肝癌Huh7细胞生长的抑制,为临床治疗肝癌的方法提供新的理论依据。方法实验分为三组:未转染miR-132的Huh7细胞组(control组),阴性对照组(miR NC组)以及转染miR-132的Huh7细胞组(miR-132组),通过RT-PCR检测YAP mRNA表达情况;通过流式细胞仪检测细胞凋亡改变;通过Edu检测细胞增殖能力;通过Transwell法检测细胞侵袭能力。结果 RT-PCR检测YAP mRNA发现miR-132可明显抑制YAP基因在肝癌细胞株Huh7中的表达,control组、miR NC组和miR-132组YAP mRNA的相对表达量为1.000 0±0.024 1、0.942 6±0.024 8和0.257 3±0.045 8(P<0.05);流式细胞仪检测发现转染miR-132后能明显促进肝癌Huh7细胞的凋亡,control组、miR NC组和miR-132组Huh7细胞总凋亡为4.03±0.35、4.53±0.26和13.62±0.49(P<0.05);EdU检测发现转染miR-132后肝癌Huh7细胞增殖能力明显受抑制,control组、miR NC组和miR-132组分别为(65.12±1.93)%、(64.02±0.87)%和(42.00±1.26)%(P<0.05);traswell检测结果发现转染miR-132后肝癌Huh7细胞侵袭能力明显受抑制,control组、miR NC组和miR-132组分别为3.35±0.13、0.72±0.06和0.48±0.03(P<0.05)。结论 miR-132具有抑制肝癌细胞生长的作用,并有可能通过靶向YAP而下调其表达起作用。     

超声靶向微泡破坏技术介导基因JNK1在小鼠肝癌细胞株中表达及对细胞迁移和侵袭作用的研究

目的探讨应用超声靶向微泡破坏(UTMD)技术介导小鼠肝癌细胞株Hca-P JNK1基因的表达以及肝癌细胞迁移和侵袭。方法构建并鉴定pCDNA3.1-JNK1载体。将小鼠肝癌细胞株Hca-P分组如下:A组(空白对照组),B组(质粒组),C组(脂质体+质粒组),D组(超声微泡+质粒+超声辐照组),E组(脂质体+超声微泡+质粒+超声辐照组)。采用倒置荧光显微镜观察各组细胞的转染率,荧光定量PCR和Western Blot法检测JNK1的基因和蛋白质表达水平,以CCK-8法检测5组细胞的细胞活性,应用Transwell实验检测各组细胞的体外迁移和侵袭能力。结果成功构建了pCDNA3.1-JNK1载体。各组转染率比较:E组均大于B、C、D组(P均0.05),C、D组转染率均高于B组(P均0.05),C、D组之间差异无统计学意义(P0.05)。E组JNK1 mRNA和蛋白表达水平均高于其他各组(P均0.05);E组细胞活性、迁移和侵袭能力均高于其他各组(P均0.05)结论 UTMD技术结合脂质体转染法可以提高pCDNA3.1-JNK1载体转染小鼠肝癌细胞株Hca-P的效率,加大基因JNK1表达的上调幅度,增强细胞活性、迁移和侵袭能力。     

过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的作用

目的探讨过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。方法通过RT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞HEEC和子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平。用Lipofiectamine~(TM)2000将miR-132-3p mimics及NC分别转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,分为miR-132-3p mimics组、NC组以及对照组,对照组不做处理。通过CCK8法检测24 h、48 h、72 h后,三组Ishikawa细胞的增殖情况。流式细胞仪检测转染后三组Ishikawa细胞的凋亡情况。Transwell小室检测三组Ishikawa细胞侵袭、迁移情况。Western-blot检测三组Ishikawa细胞B淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X(Bax)、细胞增殖抗原标记物Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果与人子宫内膜上皮细胞HEEC相比,子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平显著下降。CCK8结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖受到抑制,Ki-67蛋白表达水平显著下降(P0.05)。流式检测结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa的凋亡率显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。Transwell结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭及迁移能力受到抑制,MMP-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 miR-132-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa中低表达,过表达miR-132-3p能够抑制细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。     

超声联合SonoVue微泡介导NET-1siRNA转染人肝癌细胞

目的探讨超声联合微泡造影剂介导NET-1siRNA在人肝癌细胞中的转染效果。方法将培养的HepG2细胞分为5组:A组为空白对照;B组培养瓶中仅加入NET-1siRNA;C组为加入脂质体及NET-1siRNA;D组为加入造影剂及NET-1siRNA并给予超声辐照;E组为加入脂质体、造影剂、NET-1siRNA,并给予超声辐照。之后以荧光显微镜检测NET-1siRNA转染率,RT-PCR法检测各组细胞NET-1 mRNA的基因表达,Western-Blotting法检测各组细胞NET-1表达情况,MTT检测HepG2细胞生长情况。结果与C组、D组相比,E组NET-1siRNA转染率明显提高(P<0.05);D组和E组细胞内NET-1mRNA及NET-1蛋白的表达抑制率均高于其他各组(P均<0.01),而转染后24～72hHepG2细胞增殖受到明显抑制。结论超声联合微泡造影剂能有效促进NET-1siRNA在肝癌细胞中的表达,并抑制肝癌细胞的增殖。     

超声微泡造影剂促腺病毒介导MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的作用机制及安全性研究

目的 探讨超声微泡造影剂促进以腺病毒为载体介导的多药耐药基因1(MDR1)体外转染兔骨髓单个核细胞的作用机制和安全性.方法 根据是否加入超声微泡造影剂和进行超声辐照将分选的兔骨髓单个核细胞分为常规培养组(A)、腺病毒转染组(B)、腺病毒转染+超声辐照组(C)、腺病毒微泡造影剂转染组(D)和腺病毒微泡造影剂转染+超声辐照组(E).不同实验因素处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞外源性MDR1基因的转染率,同时观测转染后不同时间各组细胞体外扩增情况;台盼蓝拒染法计数各组细胞的存活率;分别用扫描电镜和透射电镜观察超声辐照后细胞超微结构的改变.结果 流式细胞仪检测各组细胞MDR1基因的转染率分别为0.39%土0.11%、5.03%±0.35%、4.93%±0.38%、5.25%±0.80%,19.93%±1.51%,E组明显高于其余4组(P＜0.05);试验各组细胞在转染后不同时期体外增殖情况差异无统计学意义(P＞0.05),各组细胞存活率差异亦无统计学意义(P＞0.05);一定强度的超声辐照后,骨髓单个核细胞胞膜出现一过性的小孔,细胞器发生可逆性肿胀改变.结论 超声微泡造影剂可使兔骨髓单个核细胞通透性暂时性提高,促进腺病毒载体介导的MDR1基因转染;同时不会对细胞的增殖能力、存活率及超微结构造成严重的不可逆损害,证明其是一种安全可行的基因转移新方法.     

miR-1225-5p靶向调控S100A9抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-1225-5p对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞系Huh7、MHCC97H和MHCCLM3及正常肝细胞系THLE-2中miR-1225-5p和S100钙结合蛋白A9(S100A9)mRNA表达水平。采用Western blot试验检测S100A9的表达水平。以Huh7细胞作为研究对象,分别转染miR-1225-5p模拟物(mimics)、S100A9的小干扰RNA至Huh7细胞,四甲基噻唑蓝染色法检测miR-1225-5p过表达或下调S100A9表达对Huh7细胞增殖的影响,Transwell检测miR-1225-5p过表达或下调S100A9表达对Huh7细胞迁移和侵袭的影响,Western blot试验检测miR-1225-5p过表达或下调S100A9表达对Huh7细胞细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、p27、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、MMP-14蛋白表达的影响。生物信息学软件预测S100A9的3′非翻译区中含有与miR-1225-5p互补的核苷酸序列,双荧光素酶报告基因试验验证miR-1225-5p与S100A9的靶向关系。结果与正常肝细胞THLE-2比较,肝癌细胞系Huh7、MHCC97H和MHCCLM3中miR-1225-5p表达水平均降低,差异均有统计学意义(P0.05),S100A9mRNA和S100A9表达水平均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。过表达miR-1225-5p或下调S100A9表达均可抑制Huh7细胞增殖、迁移和侵袭,以及CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14蛋白表达(P0.05),促进p21和p27蛋白的表达(P0.05)。miR-1225-5p在Huh7细胞中负调控S100A9表达,过表达S100A9逆转了miR-1225-5p过表达对Huh7细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-1225-5p过表达可能通过下调S100A9的表达抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

胃腺癌患者血浆中miR-199a-5p和miR-200c-3p的表达及其诊断和预后判断的价值

目的探讨胃腺癌病人血浆中miR-199a-5p、miR-200c-3p的表达及其诊断和预后判断的价值。方法选取2014年5月至2015年4月胃腺癌病人50例为观察组,同期入选体检健康者50例为研究对照,应用实时荧光定量PCR技术检测两组研究对照血浆中的miR-199a-5p和miR-200c-3p的表达水平情况;比较不同分化程度、淋巴结转移情况的胃腺癌病人的血浆中miR-199a-5p、miR-200c-3p表达水平。结果观察组的miR-199a-5p表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);观察组的miR-200c-3p表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);不同分化程度、淋巴结转移情况的胃腺癌病人的血浆miR-199a-5p、miR-200c-3p表达水平差异有统计学意义(P0.05)。结论胃腺癌病人血浆miR-199a-5p、miR-200c-3p表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移情况密切相关,可用于评估胃腺癌的病情严重程度及预后。     

共聚物P85和微泡造影剂对小鼠骨骼肌超声介导基因转染的影响

目的 探讨共聚物P85、微泡造影剂和超声在质粒DNA对小鼠骨骼肌基因转染中的影响.方法 应用共聚物P85、微泡造影剂Optison与DNA混合后直接小鼠胫前肌(TA)注射,并辐照超声.1周后取出胫前肌并快速冰冻切片,荧光显微镜计数表达GFP转染的肌纤维数,HE染色评价肌肉损伤情况.结果 共聚物P85和微泡造影剂Optison均可促进质粒DNA的基因转染(P<0.01,P<0.05).辐照超声可使P85介导的基因转染效率显著提高(P<0.01),但对微泡造影剂介导的基因转染却无显著提高(P>0.05),并且P85所介导的基因转染效率高于微泡造影剂介导的基因转染效率(P<0.01).微泡造影剂和P85耦合并辐照超声可使质粒的基因转染效率显著提高,与所有各组的差异有统计学意义(P<0.01).同时辐照超声显著增加含微泡造影剂组骨骼肌的损伤面积(P<0.01).结论 共聚物P85和微泡造影剂可介导质粒DNA的基因转染,辐照超声对其有促进作用,三者联合应用具有协同作用.     

超声辐照载血管内皮细胞生长因子抑制剂脂质微泡对皮下结肠癌移植瘤治疗效果的研究

目的 评价超声辐照载血管内皮细胞生长因子抑制剂(vascular endothelial growth factor inhibitor,VEGFI)脂质微泡对结肠癌的治疗效果.方法 将稳定表达绿色荧光蛋白的结肠癌细胞系接种于Balb/c裸鼠皮下,建立结肠癌移植瘤模型.将48只皮下种植结肠癌移植瘤的Balb/c裸鼠随机分为4组:A组(12只),空白对照组,不接受超声造影及辐照;B组(12只),接受裸脂质微泡超声造影及假照;C组(12只),裸脂质微泡超声造影及超声辐照;D组(12只),载VFGFI脂质微泡及超声辐照.辐照前和3次辐照后第1d、第3d、第7d、第11d、第16d分别对各组裸鼠测量体质量和荧光摄片,测量肿瘤大小,计算肿瘤体积,绘制肿瘤体积生长曲线及裸鼠体质量生长曲线.16d后处死裸鼠,切除并分离肿瘤组织,测量各组肿瘤质量.结果 辐照前各组裸鼠体质量和肿瘤体积差异无统计学意义(P＞0.05);随访期间,A组与B组肿瘤体积持续增大,两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);辐照后第7d,C组及D组肿瘤体积均小于A组,差异有统计学意义(P＜0.01),C组与D组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05);第7d后C组肿瘤体积变化不明显,到第16d肿瘤体积仍然小于A组,差异有统计学意义(P＜0.01),而D组肿瘤体积进一步缩小,与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05).切除肿瘤组织,D组肿瘤质量低于C组(P＜0.05),C组低于A组(P＜0.05),而A、B组之间肿瘤质量差异无统计学意义(P＞0.05).观察期间各组裸鼠体质量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 载VEGFI微泡联合超声辐照可以增强对结肠癌的治疗效果.     

低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响

目的比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响。方法使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变。结果两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P﹤0.01),C组亦均高于A组(P﹤0.05),A、B组之间差异无统计学意义;两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P﹤0.01)。透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现。结论低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞。     

脉冲超声辐照微泡增强脂质体介导基因转染的体外实验研究

目的 探讨脉冲超声辐照微泡超声造影剂提高脂质体介导增强型绿色荧光蛋白质粒在肝癌,细胞(HepG2)中转染率的可行性.方法 将HepG2接种在24孔板中,随机分为以下6组:①空白对照组;②质粒+脂质体组;③超声+质粒组;④超声+质粒+微泡组;⑤超声+质粒+脂质体组;⑥超声+质粒+脂质体+微泡组.荧光显微镜及流式细胞仪检测增强型绿色荧光蛋白表达及转染效率;MTT法检测此转染方法对HepG2生长活性的影响.结果 超声+质粒+脂质体组的转染效率最高,并对细胞活性无明显影响;而超声+质粒+脂质体+微泡组转染效率与超声+质粒+脂质体组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但细胞活性与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脉冲超声辐照可介导基因转染,并能提高脂质体基因转染效率.同时,在一定条件下,超声微泡造影剂可提高超声介导基因转染效率,此方法可为基因转染提供新的思路.     

共聚物P85联合超声微泡介导基因转染的体外实验研究

目的 探讨共聚物P85与黏附增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent protein,EGFP)质粒的微泡造影剂(microbubble,MB)结合后联合一定强度的超声(ultrasound,US)辐照,是否增强人肝癌细胞(HepG2)的质粒转染及表达.方法 以人肝癌细胞(HepG2)为研究对象,质粒DNA是可表达绿色荧光蛋白的pEGFP,添加微泡造影剂或共聚物P85后进行脉冲多普勒超声辐照(频率1 MHz,声强1 W/cm2,工作周期20%,时间20 s).24 h后台盼蓝染色评价细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞仪评价细胞的基因转染率.结果 有超声辐照组的pEGFP转染率明显高于无超声辐照组(P＜0.01),有超声辐照组中pEGFP+30%MB+P85+US组转染效率(22.14±3.06)%优于单独使用微泡组(11.34±2.2)%或P85组(9.72±1.21)%(P＜0.01).结论 微泡造影剂与共聚物P85结合同时给予超声辐照可增强基因转染效率,在基因治疗上有待于进一步关注和研究.     

超声造影剂促进野生型p53基因转染抑制大鼠卵巢癌生长的实验研究

目的 探讨超声辐照造影剂微泡促进野生型p53基因转染进而抑制大鼠卵巢癌生长的有效性。方法构建野生型p53真核质粒表达载体pcDNA3．1＋／p53，将40只卵巢癌荷瘤大鼠分成4组。第1组瘤体内注入造影剂微泡和野生型p53质粒混合物，并用超声辐照大鼠腹部瘤区；第2组注入裸质粒后予以超声辐照瘤体；第3组注射超声造影剂和基因混合物后无超声辐照；第4组仅注入裸质粒而无超声辐照。每组进行基因转染每周1次，共进行8次。2月后用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测野生型p53 mRNA在卵巢癌组织中的表达，Western Blot检测野生型p53基因蛋白表达。结果成功构建野生型p53真核质粒表达载体pcDNA3．1＋／p53，埋线法建立卵巢癌动物模型；用超声波辐照微泡促进基因转染后见p53基因转录及表达。第1组p53 mRNA的表达明显增强，高于其他3组，约是第2组的2．65倍，第4组的5．95倍。第2组高于未行超声辐照组，是第4组的2．23倍。第3、4组基因表达差异无统计学意义；Western Blot分析示p53基因蛋白表达的差异模式基本同mRNA，即第1组p53 mRNA的表达增强，高于其他3组，约是第2组的1．75倍，第4组的3．13倍；第2组高于未行超声辐照组，是第4组的1．79倍；第3、4组基因表达差异无统计学意义。结论瘤体内注射造影剂微泡和野生型p53质粒混合物后行超声辐照，可明显增加质粒基因在癌瘤组织中的导人及表达，超声联合造影剂微泡可作为卵巢癌基因治疗中促进基因转移的辅助方法。     

类风湿关节炎患者血清miR-125a-5p、miR-132的表达及意义

摘要:目的探究类风湿关节 炎(RA)患者血清miR-125a-5p. miR-132 的表达水平及临床应用价值。方法选取2021年1月至2022年1月湖北省十堰市太和医院收治的92例RA患者作为RA组,同期体检健康者80例为健康人对照组,采集各研究对象的空腹静脉血标本，实时荧光定量PCR( qRT-PCR)检测miR- 125a-5p和miR-132的表达水平;Pearson法分析miR- 125a-5p与miR-132的相关性以及二者与红细胞沉降率( ESR)、类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)和28个关节疾病活动度评分( DAS28)的相关性;ROC曲线评估miR-125a-5p、miR-132 对RA的临床筛查价值。结果与健康人 对照组相比,RA组ESR、RF和CRP的含量以及miR-125a-5p的表达水平均显著升高,而miR-132 的表达水平显著降低，差异有统计学意义(P均<0.05)。高活动组miR-125a-5p的表达水平和DAS28评分显著高于中活动组和低活动组,且中活动组显著高于低活动组(P均<0.05);高活动组miR-132的表达水平显著低于中活动组和低活动组,且中活动组显著低于低活动组(P均<0.05)。RA患者血清miR-125a-5p 的表达与DAS28 评分、ESR、RF CRP呈正相关(P<0.05),而miR-132 的表达与miR-125a-5p 、DAS28评分、ESR、RF .CRP呈负相关( P<0.05)。miR-125a-5p. miR-132 联合检测筛查RA发生的ROC曲线下面积( AUCROC )为0.986(95%CI:0.973~0.998),显著高于二者单独筛查的0.948( 95% CI:0.919~ 0.976)和0. 884( 95%CI:0.834~0.934),差异有统计学意义( Z= 3.638, P<0.001;Z=3.184,P=0.023)。结论RA 患者血清miR-125a-5p表达水平升高,miR-132表达水平降低,二者联合对RA具有一定的临床筛查价值。     

超声辐照微泡介导肝细胞生长因子基因逆转大鼠肝纤维化

目的 探讨超声辐照载肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因的超声微泡造影剂逆转大鼠肝纤维化的可行性. 方法 将成模后的40只Wistar大鼠随机分为5组,即(1)超声+载基因超声微泡造影剂组(HGF+ US/MB),(2)超声+单纯质粒组(HGF+ US),(3)质粒+超声微泡造影剂组(HGF+MB),(4)单纯质粒组(HGF),(5)单纯模型组(MA).经股静脉注入超声微泡造影剂,同时超声基因转染治疗仪辐照肝区,辐照条件为300 kHz,2 W/cm2,辐照10 s,间隔10 s,共20 min.于超声辐照后14 d行磁共振弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)检查;然后处死各组大鼠,取肝组织HE染色,观察肝纤维化恢复情况;Western Blot检测HGF蛋白在大鼠肝脏中的表达. 结果 HGF+ US/MB组的表观弥散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)值明显高于其他各组;相反地,指数表观弥散系数(exponential apparent diffusion coefficient,EADC)低于其他各组;病理组织片可见HGF+ US/MB组汇管区纤维结缔组织增生,但肝小叶结构完整,其余各组纤维组织增生程度强于HGF+US/MB组.同时,HGF+US/MB组的HGF蛋白的表达均高于其他各组(P＜0.05). 结论 超声靶向破坏微泡能够介导HGF基因在肝组织内高效表达,并产生抗纤维化效应,为肝纤维化的基因治疗提供一种新的基因转移途径.     

超声微泡转染前列腺癌细胞的参数筛选

目的观察不同辐照参数下超声微泡对前列腺癌细胞生长及基因转染效率的影响。方法采用噻唑兰比色法检测单纯超声、单纯微泡、超声辐照微泡对前列腺癌细胞生存率的影响。荧光显微镜观察超声微泡介导的质粒为EGFP基因与HSV l-TK基因共表达载体。观察它对前列腺癌细胞PC-3转染后荧光表达情况,Westernblot检测EGFP蛋白的表达情况。结果 MTT显示超声强度为1.0W/cm2,频率为1MHz,辐照时间30s时超声辐照对细胞无明显的抑制作用;采用不同浓度的微泡对前列腺癌细胞PC-3作用24h后,各实验组细胞存活率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);当采用最适的超声辐照时间辐照微泡浓度为10、20、40、80μL时,超声+微泡(80μL)组细胞存活率低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),而10、20、40μL组中细胞生长良好;转染EGFP后48h,在荧光显微镜观察对照组未见荧光表达,其他各组中均有荧光表达,并随着微泡剂量的增加,荧光表达量增多;Western blot检测显示各处理组中均有EGFP蛋白的表达,超声+微泡(20μL)+TK(1μg)组、超声+微泡(40μL)+TK(1μg)组的EGFP蛋白表达明显高于其他各组。结论在最适辐照参数下,超声微泡造影剂能够有效地促进TK基因的转染。     

微泡造影剂及超声促进绿色荧光蛋白质粒在人肝癌细胞HepG2内表达的实验研究

目的研究微泡造影剂与超声辐照是否能提高绿色荧光蛋白质粒在人肝癌细胞HepG2中的转染率。方法将培养的HepG2细胞分为四组：第一组为对照组；第二组以脂质体转染；第三组加入微泡造影剂SonoVue并予以超声辐照；第四组加入脂质体和微泡造影剂SonoVue并予以超声辐照．将合有绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-N1转染人肝癌细胞HepG2，24小时后以荧光显微镜观察人肝癌细胞HepG2中的绿色荧光蛋白表达情况，并用流式细胞仪测算转染率。结果脂质体转染组与微泡造影剂＋超声辐照组有显著性差异（P〈0．05）。脂质体＋微泡造影剂＋超声辐照组与微泡造影剂＋超声辐照组有显著性差异（P〈0．01）结论微泡造影剂和超声辐照协同脂质体能提高目标基因在肝癌细胞内的转染率。