结直肠癌患者KRAS、NRAS、BRAF及PIK3CA基因突变与其临床病理特征关系的研究

目的 探讨结直肠癌(colorectal cancer, CRC)患者KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变情况及其与临床病理特征的关系。方法 收集2012—2016年复旦大学附属上海市第五人民医院手术切除的91例原发性CRC患者肿瘤手术切除标本进行回顾性分析,采用扩增阻碍突变系统(ARMS)进行实时荧光定量PCR检测KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变情况,应用统计学分析其与临床病理学特征的关系。结果 91例CRC患者中,KRAS/NRAS/BRAF/PIK3CA总突变率为53.8%(49/91),其中KRAS突变率为40.7%(37/91),NRAS突变率为4.4%(4/91),BRAF突变率为3.3%(3/91),PIK3CA突变率为2.2%(2/91),KRAS/PIK3CA双突变率为2.2%(2/91),KRAS/NRAS双突变率为1.1%(1/91)。BRAF基因在低分化癌患者中突变率显著高于中-高分化癌患者(P<0.05)。PIK3CA基因突变与肿瘤原发部位有关(P<0.05)。有淋巴结转移患者的KRNS/NRAS/BRAF/PIK3...     

结直肠癌患者应用ARMS法检测KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变分析

目的探讨结直肠癌(CRC)患者应用扩增阻碍突变系统(Amplification Refractory Mutation System,ARMS)法检测KRAS、NRAS、PIK3CA及BRAF基因突变情况并分析其与临床病理特征的关系。方法收集中国医科大学附属盛京医院60例结直肠癌患者手术切除组织,采用ARMS法检测KRAS、NRAS、PIK3CA及BRAF基因突变情况。结果 KRAS基因突变23例,突变率为38.3%;NRAS基因突变1例,突变率为1.7%;PIK3CA基因突变4例,突变率为6.7%;BRAF基因突变3例,突变率为5%。检出双突变2例,分别为PIK3CA与KRAS突变,PIK3CA与BRAF突变。有淋巴结转移患者KRAS基因突变率显著高于无淋巴结转移患者(P=0.031)。KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变之间无明显相关性。结论在结直肠癌患者中,KRAS基因突变率最高,且多发生于有淋巴结转移患者,NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变率较低。对结直肠癌患者进行KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因联合检测,为临床个体化靶向治疗提供更准确的理论依据。     

结直肠癌微卫星不稳定状态与KRAS、NRAS、BRAF基因突变和临床病理特征及预后的关系

目的 探讨结直肠癌(CRC)的微卫星不稳定(MSI)状态与KRAS、NRAS、BRAF基因突变、临床病理特征及预后的相关性。方法 选取2015年3月至2020年12月于汕头市中心医院和中山大学肿瘤防治中心收治的经病理确诊为CRC的861例患者作为研究对象,检测其4种错配修复(MMR)蛋白表达、MSI状态,KRAS、NRAS、NRAS基因突变情况。分析MMR蛋白表达、KRAS、NRAS和BRAF基因突变与CRC患者临床病理特征的相关性,MMR蛋白表达与KRAS、NRAS和BRAF基因突变的相关性,并采用COX回归模型探讨CRC患者2年内死亡的独立影响因素。结果 CRC中的MMR蛋白表达总缺失率为12.08%,KRAS基因突变率为42.28%,NRAS基因突变率为2.21%,BRAF基因突变率为6.50%。不同年龄、肿瘤部位、组织学类型、肿瘤最大径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态、CEA水平的患者MMR蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、肿瘤部位、组织学类型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态、CA199水平的患者KRAS基因突变比较,差异有统计学意义(...     

结直肠癌患者血清外泌体与组织中KRAS，BRAF，NRAS 和PIK3CA 基因突变检测及临床意义的比较

目的 检测结直肠癌(colorectal cancer, CRC) 患者血清外泌体KRAS,BRAF,NRAS 和PIK3CA 相关基因位点的突变,分析其与癌组织基因突变的一致性及其可能的影响因素。方法 2019 年2 月～ 2021 年1 月中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院100 例结直肠癌患者作为研究对象。提取患者血清外泌体,并用蛋白免疫印迹（Westernblot,WB）法检测外泌体标志物CD63 和TSG101 的蛋白表达;聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测血清外泌体及手术切除的癌组织中KRAS,BRAF,NRAS 和PIK3CA 基因突变情况,Kappa 一致性检验分析血清外泌体突变与组织突变的一致性,Logistic 单因素回归分析影响一致性的因素。结果 癌症基因组图谱（the cancer genomeatlas,TCGA）数据显示,KRAS,BRAF,NRAS 和PIK3CA 的结直肠癌突变率分别为35% ～ 96%,5% ～ 15%,5% ～ 30%和18% ～ 36%,且KRAS 和BRAF 的突变与结直肠癌患者的低存活率有关。血清外泌体中KRAS,BRAF,NRAS 和PIK3CA 的突变率分别为94.00%,11.00%,17.00% 和35.00%;结直肠癌组织KRAS,BRAF,NRAS 和PIK3CA 的突变率分别为34.00%,5.00%,6.00% 和16.00%;血清外泌体中KRAS,BRAF,NRAS 和PIK3CA 的突变率均高于组织,差异有统计学意义（χ2=101.027 ～ 256.250,均P ＜ 0.05）。血清外泌体与组织中KRAS 突变的一致率为40.00%（Kappa值=0.064,P>0.05）,BRAF 突变的一致率为99.00%（Kappa 值=0.599,P<0.05）,NRAS 突变的一致率为89.00%（Kappa 值=0.475,P<0.05）,KRAS 突变的一致率为81.00%（Kappa 值=0.523,P<0.05）。ECOG 评分、转移、临床分期是影响外泌体和组织KRAS,BRAF,NRAS 和PIK3CA 的突变检测一致性的因素。结论 结直肠癌患者血清外泌体KRAS,BRAF,NRAS 和PIK3CA 的突变率高于组织,二者BRAF,NRAS 和PIK3CA 的一致性中等,为外泌体的基因检测指导临床靶向治疗提供参考。     

结直肠癌组织中KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变与临床病理特征及MMR蛋白、p53蛋白表达的相关性研究

目的 分析结直肠癌组织中KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变情况,探讨其与临床病理参数及MMR蛋白、p53蛋白表达的关系.方法 回顾性分析140例结直肠癌组织的临床病理特征,应用扩增阻碍突变系统(ARMS)进行实时荧光定量PCR检测140例结直肠癌组织KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变情况...     

某地区结直肠癌患者KRAS基因及BRAF基因突变状态的检测分析

目的 检测某地区结直肠癌患者KRAS基因和BRAF基因的突变状态及其与年龄、性别的关系.方法 由某地区30例结直肠癌患者石蜡组织中提取DNA,通过直接测序法及荧光定量PCR法检测KRAS基因及BRAF基因突变状态.结果 KRAS基因突变率为43.3%,共发现6种突变类型,主要位于12、13密码子,其中以c.38G>A突变率最高(38.5%).单因素及多因素分析均提示KRAS突变与年龄或性别无相关性.BRAF基因突变率为0.结论 某地区结直肠癌患者KRAS基因突变率高,靶向治疗前进行突变状态检测具有重要临床价值.     

结肠直肠癌KRAS、NRAS、BRAF基因突变及其与临床病理特征、p53蛋白表达间相关性研究

目的：筛查肠直肠癌患者的KRAS、NRAS和BRAF基因亚型突变状态, 并分析其与患者临床病理特征及p53蛋白表达情况间的相关性。方法：收集110例手术切除的结肠直肠癌病理资料及组织学样本, 总结临床病理特征;采用突变阻滞扩增系统法检测KRAS、NRAS基因2、3、4号外显子第12、13、61、117、146密码子及BRAF基因15号外显子第600密码子的突变情况;采用免疫组织化学（免疫组化）法检测p53蛋白的表达情况。结果：KRAS基因突变率为45.4%（50/110）, 其中49例患者检测到2号外显子第12和13密码子突变, 1例检测到4号外显子第117和146密码子突变;NRAS基因突变率为6.3%（7/110）, 其中3例检测到2号外显子第12和13密码子突变, 3例检测到3号外显子第61密码子突变, 1例检测到4号外显子第146密码子突变, 且与KRAS基因存在共突变;BRAF基因15号外显子第600密码子突变率为2.7%（3/110）;p53蛋白阳性表达率为57.3%（63/110）, 其中27例患者存在KRAS基因突变, 7例存在NRAS基因突变, 2例存在BRAF基因突变。KRAS基因突变率与患者的淋巴结转移显著相关（P<0.05）;而NRAS基因突变与其组织分型及p53蛋白表达显著相关（P<0.05）;BRAF基因突变率与右半结肠癌显著相关（P<0.05）。结论：KRAS与结肠直肠癌发生、发展的分子机制关系密切;BRAF基因突变仅见于右半结肠, 提示右半结肠癌发生机制可能有其特殊性;p53蛋白表达与NRAS基因突变之间是否存在相互作用关系值得进一步研究。     

结直肠癌患者组织中K-ras和BRAF基因突变与不同病理特征的相关性分析

目的分析K-ras基因、BRAF基因突变在结直肠癌(CRC)不同病变中的特点,从而探索CRC基因治疗的靶点。方法采用实时荧光定量PCR法检测130例CRC患者肿瘤标本的K-ras基因、BRAF基因突变情况,并按不同的临床特征进行分析。结果 K-ras基因突变率在所有CRC患者中为36.15%(47/130),其在直肠癌患者中的突变率明显高于结肠癌患者[47.62%(30/63)vs 25.37%(17/67)],差异有统计学意义(χ~2=6.691,P0.01),直肠癌患者Gly12ASP位点的突变率显著高于结肠癌患者[46.03%(29/63)vs 26.87%(20/67)],差异有统计学意义(χ~2=5.167,P0.05);在Ⅰ+Ⅱ期CRC患者中的突变率显著低于Ⅲ+Ⅳ期CRC患者[15.28%(11/72)vs 62.07%(36/58)],差异有统计学意义(χ~2=30.469,P=0.000)。BRAF基因突变率在所有CRC患者中为6.92%(9/130),其在结肠癌患者中的突变率明显高于直肠癌患者[11.94%(8/67)vs 1.59%(1/63),使用Fisher确切概率法P0.05];BRAF基因突变率在CRC患者术前血清CA199水平升高者明显高于水平正常者[11.59%(8/69)vs 1.64%(1/61),使用Fisher确切概率法P0.05]。K-ras基因突变率与具体的病理学特征如性别、年龄、组织学分型等无统计学相关性(P0.05)。结论在CRC患者中,K-ras基因突变较BRAF基因突变更为常见,且直肠癌患者较结肠癌患者更易表现为K-ras基因突变;K-ras基因突变率越高,CRC患者的TNM分期就越高;K-ras基因上Gly12ASP位点的突变与直肠癌的发生发展密切相关,血清CA199水平可作为BRAF基因突变的标志性物质。K-ras和BRAF基因突变靶点的相关研究有望为CRC的分子靶向治疗提供有力的理论支持。     

早期结直肠癌患者的静脉血KRAS基因突变检测

目的检测早期结直肠癌患者的静脉血鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)突变情况。方法将肠镜留取的患者结直肠癌组织标本进行病理学诊断,将病理学诊断为腺瘤伴高级别癌变的24例患者作为试验组,诊断为正常的12例患者纳入对照组。采用艾德-扩增阻滞突变系统(ARMS)检测标本的19种KRAS基因突变。结果试验组24例腺瘤伴高级别癌变患者肿瘤发生部位和组织学类型比较,差异无统计学意义(P0.05)。试验组24例静脉血和对照组12例静脉血标本中KRAS基因均未检出突变。结论早期结直肠癌(和癌前)患者的血液中KRAS基因突变量较低,需要提高检测方法的灵敏度。     

PIK3CA基因突变状态在乳腺癌不同临床病理特征中的研究

目的检测乳腺癌组织磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)基因突变状态,并分析突变与临床病理特征的关系。方法选取176例原发性乳腺癌患者石蜡组织标本,提取组织DNA,对外显子9及20进行探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应(ARMS-PCR)扩增,检测PIK3CA基因的突变状态,另取20例乳腺腺病组织标本作为阴性对照。结果 176例乳腺癌组织中发现突变45例,突变率25.6%,其中以20号外显子H1047R突变率为主,突变率26.7%(12/45);PIK3CA基因突变在ER阳性和阴性、PR阳性和阴性患者中差异有统计学意义(P0.05),但在HER2阳性和阴性患者中差异无统计学意义(P0.05);PIK3CA基因突变与乳腺癌患者肿瘤大小、年龄、淋巴结状态之间无明显相关性,但与组织学分级有相关性。结论 PIK3CA基因突变与乳腺癌激素受体表达和肿瘤进展相关,PIK3CA基因突变检测对指导临床制订个体化治疗有重要意义。     

非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体和PIK3CA基因突变与临床病理特征和预后的关系

目的 观察非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3...     

BRAF 基因突变与结直肠癌的研究进展

结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一,在美国每年约有近13万的新发病例,大约56 000人死于结直肠癌,是第2位导致癌症死亡的因素.结直肠癌在我国男、女性恶性肿瘤发病率排名中分列第三和第二位.近年来研究[1]发现有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号通路在结直肠癌发生、发展过程中起重要作用,而BRAF基因编码的丝/苏氨酸特异性激酶正是该通路重要的转导因子,参与调控细胞内多种生物学事件,当通路被异常激活时,肿瘤即可发生.因此,BRAF基因在结直肠癌中的作用日益受到关注,其生物学行为及其临床意义成为近年来的研究热点.     

PIK3CA基因突变与人类肿瘤关系的研究进展

人类癌症关于PIK3CA基因产物p110a-磷脂酰基醇3激酶（PI3K）催化亚单位的研究已进行15年余。研究表明, PI3K家族尤其是p110α的激酶活性与关键癌基因蛋白密切相关,对肿瘤形成起重要作用［1］。而PIK3常有PIK3CA突变,PIK3扩增等激活［2］。有报道30%的人类实体瘤中存在PIK3CA基因突变,并且靶向PIK3CA的抑制剂如NVP-BKM120、XL147等已开始临床试验［3］。PIK3CA有望成为心新的治疗靶点。本文将对PIK3CA基因突变在人类肿瘤中的突变情况进行综述。     

非小细胞肺癌患者中PIK3CA基因突变的临床特征和预后

目的:探讨非小细胞肺癌PIK3CA基因突变的临床特征和预后。方法:回顾性分析16例PIK3CA基因突变的非小细胞肺癌临床特征,Kaplan-Meier法计算生存率,Log-rank法进行生存率显著性检验。结果:非小细胞肺癌中PIK3CA基因突变率3.09%(16/517),中位总生存时间23.0个月,其中复合突变12例,中位总生存时间28.0个月,单纯突变4例,中位总生存时间21.0个月,两者差异无统计学意义(P=0.06);伴随EGFR基因突变5例,中位总生存时间28.5个月,不伴随EGFR基因突变11例,中位总生存时间21个月(P=0.45);伴随TP53基因突变4例,中位总生存时间30.6个月,不伴随TP53基因突变12例,中位总生存时间21.0个月(P=0.51)。结论:PIK3CA基因突变非小细胞肺癌临床特征上无特异性,但复合突变比单纯突变临床可能获益更多。     

运用高灵敏度COLD-PCR法检测胰腺癌和结直肠癌患者KRAS基因突变

目的 评价COLD-PCR法检测胰腺癌和结直肠癌患者KRAS基因突变的价值.方法 采用COLD-PCR/Sanger测序法与普通PCR/Sanger测序法检测KRAS基因野生型结直肠癌细胞系SW116中混有的KRAS基因突变型和结直肠癌细胞系SW480中的KR4S基因突变,确定两种方法 的灵敏度,并采用两种方法 分别检测20例胰腺癌和39例结直肠癌患者石蜡包埋组织的KRAS基因突变,并评价两种方法 的符合率.结果 细胞系检测结果 显示,普通PCR/Sanger测序法和COLD-PCR/Sanger测序法检测KRAS基因突变的灵敏度分别为1∶20和1∶100(突变型:野生型).COLD-PCR/Sanger法检测20例胰腺癌患者KRAS基因突变率[75%(15/20)]高于普通PCR/Sanger测序法[40%(8/20),x2=5.013,P<0.05];COLD-PCR/Sanger测序法检测39例结直肠癌患者的KRAS基因突变率[44%(17/39)]高于普通PCR/Sanger测序法[31%(12/39),x2=1. 372,P=0.174)].两种方法 检测胰腺癌标本的符合率为65%,但一致性较差(Kappa=0.364,P<0.05);而两种方法 检测结直肠癌标本的符合率为87%,且一致性较好(Kappa=0.730,P<0.05).结论 COLD-PCR/Sanger测序法是一种高灵敏性检测胰腺癌和结直肠癌患者KRAS基因突变的方法 .     

396例非小细胞肺癌EGFR,KRAS,ALK和BRAF基因突变状态及其临床病理特征

目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因、Kirsten鼠肉瘤基因(KR AS)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因和鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1(BR AF)基因的表达及其临床病理特征。方法:收集郑州大学第一附属医院病理确诊NSCLC患者396例临床病理资料,采用高通量二代测序(next-generation sequencing,NGS)检测肿瘤组织中EGFR,KRAS,A L K和B R A F基因的突变状态,分析基因的突变率及其与临床病理特征的关系。结果:EG F R基因突变阳性率为49.24%(195/396例),女性、腺癌、非吸烟患者中突变率较高(P0.05);KRAS基因突变阳性率为8.59%(34/396例),男性、腺癌、大于60岁老年吸烟患者中突变率较高(P0.05);ALK基因突变阳性率为6.06%(24/396例),60岁以下年轻患者中突变率较高;BRAF基因突变阳性率为3.28%(13/396例)。其中EGFR合并ALK突变共存1例,EGFR合并BR AF突变共存2例,KRAS合并ALK突变共存1例,ALK合并BRAF突变共存1例,KRAS合并BRAF突变共存1例,EGFR,KRAS合并BRAF三基因突变共存1例。结论:NSCLC患者EGFR,KRAS,ALK和BRAF基因突变阳性率与国内外报道相仿,与患者临床病理特征存在相关性,存在2个及以上基因突变共存,共存突变患者的临床治疗方案仍有待进一步研究提供循证依据。     

结直肠癌组织中MMR蛋白表达、MSI、RAS和BRAF 基因突变与临床病理特征的关系

目的 探讨结直肠癌患者癌组织中错配修复(MMR)蛋白表达、微卫星不稳定性(MSI)、大鼠肉瘤(RAS)基因和致癌同源体B1(BRAF)基因突变与临床病理特征的关系。方法 选取该院2022年1-12月接受根治手术治疗的352例结直肠癌患者的肿瘤组织和血液标本、42例非肠癌患者的实体瘤组织和血液标本,采用免疫组化法检测MMR蛋白表达,一代测序片段分析法检测MSI,实时荧光定量聚合酶链反应检测KRAS、NRAS和BRAF基因突变状态,分析MMR蛋白表达、MSI和3种基因突变状态与结直肠癌临床病理特征的关系。结果 352例CRC患者肿瘤组织中检出MMR缺陷(dMMR)29例(8.2%),高度微卫星不稳定(MSI-H)26例(7.4%),KRAS基因突变161例(45.7%),NRAS基因突变13例(3.7%),BRAF基因突变11例(3.1%)。与dMMR有关因素为低龄、黏液腺癌、原发于右半结肠癌(P<0.05);与MSI-H相关因素包括低龄、肿瘤家族史、原发于右半结肠癌(P<0.05);KRAS和NRAS基因高突变率分别与黏液腺癌和淋巴结转移有关(P<0.05);BRAF基...     

HRM法检测结直肠癌患者循环DNA中KRAS和EGFR基因突变

摘要:目的：探讨高分辨率熔解曲线(HRM) 法检测结直肠癌患者循环DNA中KRAS和EGFR基因突变的可行性。 方法：用HRM法检测70例结直肠癌患者KRAS基因2号和3号外显子以及EGFR基因19和21号外显子的突变情况,用直接测序法验证结果的准确性。 结果：70 例结直肠癌患者血液标本经HRM法、直接测序法分别检测到18例(25.7%)和17例(24.3%)KRAS基因2号外显子突变;均检测到3例EGFR基因19号外显子突变(4.3%);两法均未检测到3号外显子和21号外显子突变。HRM检测与直接测序法结果符合率为99.6% (279/280)。 结论：HRM法检测结直肠癌患者血样本KRAS和EGFR基因突变,具有准确度高、操作简单、检测成本低等优点,适合在临床推广应用。     

结直肠黏液腺癌临床病理与MMR蛋白表达及KRAS、BRAF基因突变的相关性分析

目的 分析结直肠黏液腺癌临床病理因素与MMR蛋白表达及KRAS、BRAF基因突变的相关性。方法 回顾性分析2014-01—2022-01山东省东阿县人民医院手术切除的33例黏液腺癌和307例非黏液腺癌患者的临床病理资料,采用免疫组化法和扩增阻滞突变系统(ARMS)对340例结直肠癌标本石蜡组织的MMR蛋白表达及KRAS、BRAF基因突变状态检测,并对其进行相关性分析。结果 黏液腺癌占结直肠癌的9.7%(33/340),与肿瘤大小、病变部位、浸润深度、错配修复蛋白表达及BRAF基因突变等临床病理因素有相关性(P<0.05)。结论 黏液腺癌是结直肠癌的少见组织学亚型,分析临床病例特征与错配修复蛋白联合KRAS、BRAF突变检测可为患者预后评估及个体化治疗提供依据。