1例输入性卵形疟原虫实验室检测

目的对1例输人性疑似疟疾患者的血样进行实验室确诊。方法首先制备血涂片,吉姆萨染色后镜检疟原虫;其次对血样进行RDT检测;最后利用疟原虫属特异性（通用型）和4种疟原虫种特异性的巢式PCR和多重PCR检测方法,对该血样进行分子生物学检测及分型。结合分子生物学检测结果,再对血片进行镜检复核。结果初次镜检结果为间日疟原虫,RDT结果为阴性。巢式PCR检测结果,仅扩增出预期大小约800bp的卵形疟条带;多重PCR（Pf／Pv）检测无特异性条带产生。重新对薄血膜复核镜检,改判为卵形疟原虫。结论综合巢式PCR、多重PCR、RDT和镜检等检测结果,确诊该患者为卵形疟原虫感染。     

一例输入性三日疟的实验室诊断报告

目的分析一例输入性三日疟病例的实验室检测确诊病例。方法对病例的流行病学病史作回顾分析,采集血样作血涂片镜检和疟疾快速诊断(RDT),由浙江省疾病预防控制中心通过巢式PCR检测确诊。结果该病例在本次就诊前一个月,刚从尼日利亚疟疾流行区务工返家,在国外务工期间曾有"疟疾"发病史,回国前后发病间隔2周左右。本次就诊外周血涂片镜检显示为恶性疟感染,RDT结果排除恶性疟感染,巢式PCR检测扩增出三日疟原虫条带后确诊为三日疟。结论疟疾实验室诊断需要综合判断,血涂片镜检和RDT可初步提示疟疾的类型,巢式PCR检测有助于不同疟种感染的鉴别确诊。     

2015年大连市疟疾病例实验室检测结果分析

目的:分析大连市疟疾病例实验室检测结果,为疟疾诊断方法的选择提供理论依据。方法 :收集2015年大连市疟疾患者的血片和血液样本,应用镜检,RDT和巢氏PCR(Nest-PCR)分别对血片和血样进行检测。结果:17份样品镜检检出恶性疟原虫10例,卵形疟原虫1例,阴性6例;RDT检出恶性疟原虫13例,共同抗原阳性者1例,阴性3例,与镜检结果一致率为82.4%(14/17);巢式PCR检出恶性疟原虫13例,阴性4例,与镜检结果一致率为82.4%(14/17),与RDT结果的一致率为94.1%(16/17)。结论:采用镜检和RDT联合应用的方法,能够提高检测的敏感性,巢式PCR可提高虫种鉴定的准确性。     

湖北省首例输入性疟疾混合感染的实验室诊断分析

目的应用多重巢式PCR技术对一例输入性疟疾混合感染病例进行诊断和鉴定。方法采集镜检初诊为输入性卵形疟患者血样,进行疟疾快速诊断试剂检测、显微镜镜检复核、多重巢式PCR检测及测序分析。结果该患者经快速诊断试剂检测结果为非恶性疟原虫阳性;镜检复核查见寄生于红细胞内的疟原虫环状体、大滋养体和配子体,根据形态鉴定为卵形疟;多重巢式PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,在760bp和205bp处有特异性扩增条带,测序后经Blast比对,分别与Gen Bank数据库中卵形疟原虫变异亚种和恶性疟原虫部分序列的一致性为99.00%。结论该患者经多重巢式PCR和序列分析确诊为湖北省首例输入性卵形疟原虫变异亚种与恶性疟原虫混合感染病例。     

广州市白云区1例输血性恶性疟疾调查

目的对1例感染不明的恶性疟病例进行实验室检测分析并确诊。方法 2017年10月18日收集该病例临床资料,并开展流行病学溯源调查,采集患者和疑似传染源(供血者)的血样,采用血片镜检、快速疟疾诊断试剂条(RDT)和PCR三种方法进行疟疾病原检测。结果该患者无疟疾流行区外出史,因治疗白血病有大量输血史。输血后出现畏寒、发热症状和外周血涂片镜检诊断为恶性疟原虫感染,RDT检测恶性疟原虫阳性。经溯源调查,疑似传染源的供血者为非洲籍留学生,在献血前曾有疟疾病史,PCR检测供血者血站留存血样恶性疟原虫阳性。结论该病例为输血性恶性疟,因输入非洲籍留学生血液而感染恶性疟。     

快速检测试剂条、镜检和PCR在疟疾诊断中的应用研究

目的采用快速检测试剂条（rapiddiagnostictest,RDT）、镜检及聚合酶链反应（polymerasechainreac-tion,PCR）,3种检测方法进行疟原虫检测,比较3种方法在疟疾诊断中的敏感性、特异性,为科学分析检测结果和探究RDT能否在基层替代疟原虫镜检提供依据。方法收集安徽省2012年1月～2013年3月确诊以及疑似病例抗凝血148份,血片148张,采用RDT进行检测,并与镜检法和PCR的结果对比分析其敏感性与特异性。结果148份血样采用RDT、镜检和PCR3种方法检测结果阳性率分别为43．24％、36．49％、37．84％,经配对x2检验RDT阳性率高于镜检和PCR;镜检和PCR均检出2例卵形疟,而RDT结果为阴性;以镜检为标准,对间日疟和恶性疟进行分析得出,RDT的敏感度为100％,特异度87％,阳性预测值81％,阴性预测值100％;以PCR为标准,对间日疟和恶性疟进行分析得出,RDT的灵敏度为100％,特异度89％,阳性预测值84％,阴性预测值100％。3种方法均检出间日疟16例,而对恶性疟分别为RDT检出48例,镜检检出36例,PCR检出38例。结论RDT对间日疟和恶性疟敏感性较高,可以覆盖全部阳性病例,在今后疟疾低流行时期RDT有望取代基层镜检对疟疾进行诊断。     

弥勒市1例输入性间日疟的诊断与调查分析

目的 评价综合诊断技术对非典型形态疟原虫感染病例确诊、降低输入性病例误诊或漏诊率的重要性,巩固已取得的消除疟疾成果。方法 对2023年1月16日弥勒市某医院接诊1例间日疟患者进行流行病学调查;通过镜检、抗原胶体金法(RDT)和分子生物学方法(巢式PCR)检测,确诊为1例输入性间日疟感染病例。结果 该患者血涂片镜检厚血膜查见疟原虫,薄血膜中查见配子体皱缩成团,被寄生的红细胞不胀大甚至略缩小,颜色正常与周围正常红细胞一致,与WS 259—2015《疟疾的诊断》、《疟疾防治手册》中病原学检查描述间日疟形态不同。结论 用镜检、抗原胶体金法(RDT)和巢式PCR 3种方法,对非典型形态疟原虫感染病例进行确诊至关重要。     

锦州市2017年输入性恶性疟个案实验室检测及分析

目的调查锦州市境外输入性恶性疟病例流行病学特征和实验室检测能力,为疾控部门防治和快速检测恶性疟原虫提供依据。方法分析患者的临床病历和流调信息,采用镜检、快检实验(rapid diagnostic test,RDT)及荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,qPCR)3种方法对患者血样进行检测。结果患者在喀麦隆疟疾高度流行区务工期间感染疟疾,经青蒿素类复方治疗8 d;回国后1个月以持续性发热、头痛、畏寒、腹泻等症状入院治疗。镜检见疟原虫环状体、配子体,恶性疟RDT抗原和qPCR基因检测均为阳性,确诊为恶性疟原虫感染。结论应加强务工归国人员的管理,并通过镜检联合RDT及qPCR检测以提高疟原虫血检效率,对患者进行早期诊断和治疗提供实验室依据。     

上海市浦东新区1例输入性恶性疟二次再燃的调查

【目的】通过对1例输入性恶性疟二次再燃的发病与治疗情况调查,寻证输入性恶性疟出现再燃的原因,采取有效的治疗方法,进一步推进消除疟疾工作。【方法】对患者进行流行病学个案调查和疫点调查,患者血样制作血涂片进行疟原虫镜检、疟疾快速诊断实验检测恶性疟原虫特异性抗原(RDT)、巢式PCR检测恶性疟原虫。【结果】该患者从2008年始有明确的多次的非洲和东南亚出差史,具有寒战、高热、出汗后退热等典型疟疾症状,实验室RDT、血涂片、PCR检测均为恶性疟阳性,被确诊为输入性恶性疟;患者2016年12月19日首次发病,经青蒿琥酯治疗后体温正常,但3周后再燃发病,继续青蒿琥酯抗疟治疗后体温正常,本次发病是患者第2次再燃发病,经联合抗疟用药后痊愈。【结论】输入性疟疾比例逐年上升及其再燃病例增多,严重威胁着患者的生命安全,加强输入性疟疾的管理,根治传染源防止传播,已成为当前消除疟疾阶段的主要任务。     

万孚疟原虫检测试剂盒(RDTs)在湖北省输入性疟疾检测中的应用研究

目的评价湖北省级疟疾参比实验室应用万孚疟原虫检测试剂盒(RDTs)诊断输入性疟疾的效果。方法收集2015年1月至2018年6月湖北省网报疟疾病例和阴性删卡病例的完整血标本,进行回顾性分析,以省级疟疾参比实验室确诊结果为标准,分别与RDTs检测结果、镜检检测结果和巢式PCR检测结果进行比较分析。结果省级疟疾参比实验室共收集完整血标本440份,确诊阳性疟疾病例418例,阴性病例22例。在恶性疟原虫的鉴定能力上,RDTs最佳,符合率为100.00%;巢式PCR次之,符合率为97.49%;镜检法的符合率为91.40%。对于其他3种疟原虫(间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫)的种特异性鉴定能力,RDTs为最低,巢式PCR为最优,镜检法次之。根据12项单因素指标的综合分析,RDTs得分为32分,综合推广率最高,镜检法和巢式PCR得分分别为24分和19分。结论 RDTs在疟疾检测中具有一定优势,但对虫种的特异性鉴定能力较低,可以作为镜检法的辅助工具,在湖北省消除疟疾后的监测工作中广泛推广应用。     

镜检、RDT和Nest-PCR诊断疟疾的应用比较研究

目的探讨镜检、快速诊断试纸条(rapid diagnostic test,RDT)和巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reation,Nest-PCR)诊断疟疾应用领域及价值。方法收集2011—2015年疑似疟疾病例血样,采用镜检、RDT和NestPCR进行检测,比较分析3种方法的敏感性、特异性和综合性能。计数资料比较采用χ~2检验,P0.05有统计学意义。结果共收集疑似疟疾血样64份,镜检、RDT和Nest-PCR检测阳性率均为53.13%,3种方法恶性疟检出阳性率比较,差异无统计学意义(χ~2=0.33,P0.05)。RDT和Nest-PCR 3种诊断方法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均为100.00%。结论 RDT可以应用于基层检测,但须进一步开展镜检或Nest-PCR确诊。     

一例输入性恶性疟和卵形疟混合感染病例调查

目的调查黄岩区一例输入性恶性疟和卵形疟混合感染病例,为疟疾防控提供参考。方法收集病例诊治和流行病学调查资料,采集病例抗凝血作镜检和巢式PCR检测。结果该病例在赤道几内亚务工期间有疟疾发作史和治疗史,在回国后第1天即出现寒战、发热、头痛等疟疾典型临床症状,镜检确诊为恶性疟;给予青蒿琥酯针剂和双氢青蒿素哌喹片治疗后,症状消失。此后在距上次发作的第110天又再次发病,疟疾快速诊断试纸(RDT)检测阴性,镜检误诊为间日疟;后经浙江省疾病预防控制中心巢式PCR检测,判定前后两次发病分别为恶性疟原虫和卵形疟原虫感染。结论该病例是一例输入性恶性疟和卵形疟混合感染病例,今后应加强疟疾类型的鉴别诊断能力,防止漏诊误诊。     

套式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫方法的建立及其应用研究

目的建立简便、灵敏、低成本的恶性疟原虫与间日疟原虫套式PCR检测方法,并探讨应用于间日疟原虫实验室检测的效果。方法制备抗凝静脉血的干滤纸血滴标本,采用干滤纸5%Chelex-100煮沸法提取疟原虫DNA,并进行套式PCR反应;通过比较PCR检测结果与疟原虫镜检结果,评价套式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫方法的效果。结果在42份样本中,有34份血样PCR检测结果与镜检结果一致,占81%;5份镜检结果无法判断的血样,PCR检测为阳性或阴性;2份镜检结果为阴性的血样,套式PCR检测为阳性。结论套式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫结果可靠,比镜检方法灵敏,有望在疟疾的实验室诊断中得到应用。     

疟疾的实时荧光PCR快速检测方法

目的:建立疟疾的实时荧光PCR检测方法并用于疟疾的快速检测。方法:设计了疟原虫通用型实时荧光PCR检测的引物和探针,建立了疟疾的实时荧光PCR检测方法。对40份疟疾镜检阳性样本和20份镜检阴性样本进行实时荧光PCR检测,并和巢式PCR方法检测结果进行了比较。结果:疟疾实时荧光PCR检测速度快,20分钟即可完成。40份镜检阳性样本的荧光PCR检测均为阳性,2份样本的巢式PCR结果为阴性;20份镜检阴性样本中有3份样本为实时荧光PCR阳性,其余17份样本为实时荧光PCR阴性,与疟疾巢式PCR检测结果相同。结论:该实时荧光PCR方法检测速度快,特异性强,准确性高,阳性率高,不易漏检,适用于疟疾的快速检验,这对防止该病在国境口岸的传入提供了技术依据。     

江西口岸首例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染的PCR鉴定及序列分析

目的对江西口岸1例输入性疟疾病例的血样本进行检测、确认。方法利用普通PCR检测全血样本中疟原虫18S r RNA基因,将得到的测序结果在NCBI数据库进行比对,并结合吉姆萨染色镜检、胶体金快速检测和荧光定量PCR加以验证。结果血涂片镜检并未发现疟原虫,但胶体金快速检测结果为阳性。普通PCR扩增到18S r RNA基因特异性片段,卵形疟原虫特异性引物扩增到阳性条带,而恶性疟、间日疟和三日疟原虫特异性引物没有扩增到目的条带。用卵形疟不同亚型引物特异性扩增发现卵形疟原虫wallikeri亚种阳性,序列与卵形疟原虫wallikeri亚种(Gen Bank号:KF219564.1和KF696359.1)18S r RNA同源性达99%。荧光定量PCR检测亦确认为卵形疟阳性。结论该病例确认为江西口岸首例输入性卵形疟wallikeri亚种感染。     

疟疾四重巢式PCR检测方法的建立

目的建立一种能同时检测4种疟疾的多重巢式PCR检测方法。方法以4种疟原虫为研究对象,提取全血样本核酸,采用疟原虫18SSU r RNA作为分子标记,合成通用引物和4种疟原虫特异性引物,建立和优化四重巢式PCR反应体系。结果建立的方法在原虫之间无交叉反应,检测敏感性可达102copies/μl,经对随机选取的口岸发热样本进行检测,35份血液样本中,检出恶性疟13例、间日疟7例、卵形疟1例、以及恶性疟和间日疟的混合感染2例,阳性率为65.7%;比镜检的阳性率54.3%高,尤其是检出混合感染病例比例高,并对检测结果进行测序验证。结论建立的四重巢式PCR能同时检测4种不同疟原虫引发的疟疾,具有较高的特异性和敏感度,适合于口岸输入性疟疾的快速检测。     

济南市1例恶性疟疾的调查

目的通过流行病学调查和实验室检测,早期确认经输血传播的疟疾病例,为疟疾防控提供依据。方法对济南市1例因输血感染恶性疟疾的病例进行流行病学调查,收集相关资料;采集患者血液进行疟疾快速诊断(RDT)和疟原虫镜检,追踪献血者发病就诊经过。结果患者无国外旅行史和既往疟疾感染史,发病前6 d有输血史。采集患者抗凝全血制作血涂片,检测恶性疟原虫阳性。经复核供血者献血时留存血样本,镜检和PCR结果均为恶性疟。经同源性检测,测序结果经过DNAstar软件进行比对,符合率为100.00%。结论该恶性疟病例为输血感染病例,献血员为境外感染病例。     

大连市金州区1例输入性恶性疟的诊治分析

目的对1例输入性恶性疟病例进行实验室检测和临床治疗分析。方法收集该病例的实验室检测结果和临床资料,并进行流行病学调查。对患者进行血涂片病原学检查、疟疾快速诊断检测及荧光定量检测。结果患者在科特迪瓦疟疾高度流行区务工,入境时无不适感;回国1个月以发热、恶心、畏寒、头痛、肌肉及关节疼痛等症状入院。瑞氏-吉姆萨染色见疟原虫环状体,RDT和qPCR检测结果均显示恶性疟原虫感染。给予患者双氢青蒿素哌喹片0.5 g/次,一日服用一次,首剂加倍;伯氨喹40 mg/次,一日服用一次,治疗一个月症状好转。结论镜检、RDT及qPCR三联检测能提高疟原虫的检出率,为患者临床诊治提供依据。     

多重qPCR检测疟原虫方法的建立及应用评价

目的 建立一种能检测4种疟原虫多重qPCR(multiplex quantitative real-time polymerase chain reaction)方法，并对其进行临床应用评价。方法 以4种疟原虫18S rRNA基因作为靶序列，在保守区域设计双侧扩增引物，根据4种疟原虫特异性区域分别设计荧光探针，建立多重qPCR检测方法，并测试其特异性、敏感性，同时应用该方法对疟疾或疑似疟疾的临床血样进行检测。结果 建立检测4种疟原虫多重qPCR方法具有良好的特异性与敏感性，检测下限可达10拷贝/μl。该方法对浙江省2020年—2021年115份疟疾或疑似疟疾的临床血样进行检测，结果与疟疾分子诊断参考方法巢式PCR一致，临床特异度与敏感度均为100%。结论 本研究所建立的检测4种疟原虫多重qPCR方法简单快速、特异性好、敏感性高，可应用于疟疾临床病原诊断和参比实验室样本复核。     

基因扩增检测四种感染人的疟原虫种类、数量的方法

目的建立对四种感染人的疟原虫种类、数量进行基因检测的方法。方法根据恶性疟、三日疟、卵形疟、间日疟的18SrRNA基因序列,设计属、种特异性引物和TaqMan探针,用荧光定量扩增反应确定标本中的基因拷贝数,用电泳区别各种疟原虫,并对2份疟疾血样进行检测。结果建立的检测方法对疟疾血样进行检测,荧光定量PCR具有良好的反应性,通过电泳能区分检测标本中的疟原虫株。结论建立的方法能够特异而灵敏地检测出标本中疟原虫的种类、数量,适合疟疾防治检测的需要。