MiRNA-92a靶向PTEN通过PI3K/AKT信号通路促进卵巢癌细胞转移

目的:探讨miRNA-92a对卵巢癌细胞侵袭与迁移能力变化的影响和可能的作用机制。方法:RTqPCR检测卵巢癌组织和卵巢癌细胞miRNA-92a的表达水平;转染miRNA-92ainhibitor/mimic后,Transwell小室法检测SKOV3与A2780细胞的侵袭与迁移能力;蛋白质印迹法检测SKOV3与A2780细胞中p-PI3k,p-Akt和PTEN蛋白水平的变化;预测miRNA-92a靶基因并经双荧光素酶报告基因验证。结果:MiRNA-92a在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中高表达(P0.05);转染miRNA-92a inhibitor后,SKOV3与A2780细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制,同时p-PI3k和p-Akt蛋白水平均显著降低,PTEN蛋白水平显著升高(均P0.05);转染miRNA-92a mimic后,以上指标相反;miRNA-92a靶基因为PTEN,且过表达PTEN能逆转过表达miRNA-92a诱导的侵袭转移与p-PI3k,p-Akt表达(均P0.05)。结论:MiRNA-92a直接结合靶基因PTEN,通过激活PI3k/Akt通路活性,促进卵巢癌细胞SKOV3的侵袭与迁移能力。     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导K562细胞凋亡作用研究

本研究探讨8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxyhysin,BrMChR)对人髓系白血病细胞株K562细胞增殖和凋亡的影响及细胞凋亡过程中caspase-3活性与p-Akt蛋白表达的变化。采用MTT方法检测BrMChR对K562细胞生长抑制的影响,用细胞形态学观察和流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot方法检测p-Akt蛋白的表达。结果显示:与同浓度的白杨素(chrysin,ChR)相比,BrMChR对K562细胞的生长抑制作用及凋亡诱导作用更强,并随药物剂量的增加而加强;3μmol/L BrMChR作用K562细胞12小时细胞凋亡率可达21.8%,而同浓度的ChR作用K562细胞12小时细胞凋亡率仅为3.68%。随着BrMChR浓度增加,caspase-3活性增加(p<0.05),p-Akt蛋白表达下调(p<0.01)。结论 :BrMChR能诱导K562细胞凋亡,其作用强于ChR;p-Akt可能参与了BrMChR诱导K562细胞凋亡过程。     

蝎毒多肽提取物对K562细胞PI3K和p-Akt信号蛋白表达及细胞增殖的影响

本研究旨在探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对人慢性髓系白血病细胞系K562细胞凋亡调控的PI3K和p-Akt信号蛋白的影响及作用机制。将体外培养的K562细胞,经PESV处理不同时间后,通过MTT法检测细胞增殖曲线,Western blot法检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化。结果表明,与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率增加,PI3K及p-Akt蛋白表达降低。结论:PESV可能通过抑制凋亡调控的PI3K、p-Akt信号蛋白,抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。     

SARI过表达对CBFL细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变。构建SARI基因过表达慢病毒载体,并转染Kasuimi-1细胞。采用荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞转染后SARI基因过表达效果。设置空白对照(CON)、空载体对照(NC)和SARI过表达(OE) 3组。MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyto C、Caspase 9、Caspase 3、cleaved-Caspase 3、PARP、cleavedPARP,以及PI3K/Akt通路蛋白PI3K(p85)、p-PI3K(p85)、Akt、p-Akt的表达变化。结果:Kasumi-1细胞具有c-KIT N822K突变。成功构建稳定过表达SARI基因的Kasumi-1细胞。与NC组细胞相比,OE组细胞增殖减缓,凋亡增加;抗凋亡蛋白BCL-2表达降低,促凋亡蛋白BAX表达增高;出现Cyto C蛋白的表达; Caspase 9、Caspase 3表达降低,cleaved-Caspase3表达增高; PARP表达降低,活性剪切体cleaved-PARP表达增高,PI3K/Akt通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt磷酸化水平下调(P 0. 05)。结论:SARI基因过表达可通过线粒体途径诱导CBFL细胞凋亡,机制可能与PI3K/Akt信号通路失活有关。     

MicroRNA-29b表达改变对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响

目的：探讨microRNA-29b (miRNA-29b)在卵巢癌细胞中的表达差异及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：采用real-time PCR技术检测人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3及正常人卵巢上皮细胞系IOSE80中miRNA-29b的表达水平;采用转染技术上调SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平;采用CCK-8法检测SKOV-3细胞增殖能力;采用Transwell法检测SKOV-3细胞的侵袭能力;采用Western印迹法检测SKOV-3细胞中蛋白表达水平。结果：与IOSE80细胞相比,人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3细胞miRNA-29b的表达下降（P<0.05）。转染miRNA-29b mimic后SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平增加;从第4天开始,转染miRNA-29b的SKOV3细胞增殖能力下降（P<0.05）。转染miRNA-29b减少了通过聚碳酸酯膜的SKOV3细胞数量,抑制了SKOV3细胞的侵袭能力（P<0.05）;转染miRNA-29b mimic后,卵巢癌细胞SKOV3中抑制凋亡蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达均降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论：miRNA-29b可通过抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达来抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭。     

ORP-150基因沉默对SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默ORP-150基因对体外培养卵巢癌细胞SKOV-3的增殖、转移及侵袭的影响并初步探讨其可能作用机制。方法:运用慢病毒包装sh RNA方法沉默SKOV-3细胞的ORP-150基因;研究分为3组:实验组(ORP-150 sh RNA)、阴性对照组(NC sh RNA)和空白对照组(CON);采用q RT-PCR和Wester n印迹法检测基因敲减效率,CCK8法、克隆形成试验检测OR P-150沉默对细胞增殖能力的影响,划痕试验、Transwell试验检测SKOV-3细胞侵袭迁移能力的变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western印迹法探讨ORP-150基因敲减后影响细胞表型改变的作用机制。结果:沉默ORP-1 5 0基因可以抑制卵巢癌细胞的增殖能力、克隆形成能力以及跨膜转移扩散能力(P0.0 5),但对细胞的侵袭能力无明显影响(P0.05);敲减ORP-150基因后卵巢癌细胞凋亡明显增加(P0.05);敲减ORP-150基因后的卵巢癌细胞可能通过Wnt信号通路及Caspase级联反应影响细胞的修复,最终抑制细胞增殖,促进凋亡发生。结论:沉默ORP-150基因可以抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖和转移,同时促进凋亡发生。这种细胞表型的改变可能是通过下调Wnt信号通路中β-catenin,同时的表达,以及抑制Caspase级联反应从而下调c-myc,cyclin D1和caspase-3蛋白的表达来实现,ORP-150基因沉默可能是卵巢癌治疗的新靶点。     

竹节香附素A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察竹节香附素A（RDA）对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 分别使用0、5、10、20及40μmol/L的RDA干预HeLa细胞48 h,CCK-8实验测定细胞增殖率,计算半抑制浓度（IC₅₀）,确定药物浓度。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的蛋白表达水平。将HeLa细胞分为4组,即空白对照组、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组、RDA组和联合用药组,检测及比较各组细胞增殖率、凋亡率和p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量。结果 随着RDA浓度的增加,HeLa细胞的增殖率降低、凋亡率升高（P均< 0.05）,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量升高（P均< 0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量降低（P均< 0.05）;IGF-1激活PI3K/Akt/mTOR信号通路后,RDA仍然能抑制HeLa细胞增殖（P均< 0.05）,降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量（P均< 0.05）。结论 RDA可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞产生抑制增殖与促进凋亡的效果。     

AG490抑制K562细胞增殖和下调PHLPP蛋白的表达

本研究旨在探讨AG490抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡过程中p-Akt及PHLPP表达的变化。以不同浓度的AG490作用于人慢性髓系急性红白血病细胞株K562,采用WST-1法检测细胞的增殖活性,AnnexinⅤ-FITC双染检测细胞凋亡,Western blot检测p-Akt、Akt、PHLPP蛋白表达水平的变化。结果表明,AG490以时间及浓度依赖性方式抑制K562细胞增殖,其48 h的IC50值为338.0μmol/L;AG490 100μmol/L诱导K562细胞凋亡,呈明显的时间依赖性;AG490 100μmol/L作用于K562细胞后p-Akt及其调节蛋白PHLPP的表达水平呈时间依赖性方式下降,但是对总Akt的表达水平无明显影响。结论:AG490可能通过下调p-Akt的表达抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,但同时也可能通过下调p-Akt的调节蛋白PHLPP的表达水平而使AG490对K562增殖的抑制效果受限。     

夏枯草提取物对缺氧/复氧诱导心肌细胞氧化应激损伤保护作用及抗凋亡的机制

目的:观察不同浓度的夏枯草提取物(Prunellae Spica extract,PSE)对心肌细胞H9c2缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:体外培养心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R模型。实验分为对照组、H/R组、H/R+PSE 20μg/mL组、H/R+PSE 40μg/mL组和H/R+PSE 80μg/mL组。采用CCK-8法检测H9c2心肌细胞存活率。检测天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、磷酸肌酸激酶(creatine phosphate kinase,CPK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,H/R组H9c2细胞的存活率显著降低(P<0.05),凋亡率显著增加,AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平显著增加,SOD水平显著降低(均P<0.05)。与H/R组相比,PSE能够显著促进细胞存活,抑制细胞凋亡,降低AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平,提高SOD水平(均P<0.05),并呈浓度依赖性。蛋白质印迹法检测显示:与对照组相比,H/R组H9c2细胞Bax和cleavedcaspase-3蛋白的表达显著增加(均P<0.05),Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达显著降低(均P<0.05);与H/R组相比,PSE能够显著抑制Bax和cleaved-caspase-3蛋白的表达(均P<0.05),促进Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达(均P<0.05)。结论:PSE对H9c2心肌细胞的H/R损伤具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤H929细胞增殖和凋亡实验研究

目的:观察冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人骨髓瘤H929细胞株增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法:分别用ORI 0、4、8、12、16、20、24、28、32μmol/L处理H929细胞12、24和36 h,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测H929细胞增殖抑制率,TUNEL法和荧光显微镜检观察Here29细胞形态变化及凋亡,AnnexinV-FITC/PI双集流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白印迹技术(Western blot)检测BAX、BCL-2、caspase-3、PARP、p38、JNK、ERK以及PI3K、Akt的表达变化。结果:ORI 8-16μmol/L体外显著抑制H929细胞增殖,并与浓度及时间呈正相关(P0.05,P0.05;r=0.961,r=0.973)。TUNEL染色法检出细胞核固缩、核碎裂;流式细胞术显示,H929细胞凋亡率呈浓度依赖性递增(P0.05,r=0.88);Western blot检测结果提示,pro-caspase-3、BCL-2、p-PI3K、p-Akt表达呈浓度依赖性递减(r=0.9861,r=0.9725,r=0.9413,r=0.9373),而BAX、Cleaved PARP及p-p38、p-JNK、p-ERK表达递增(r=0.9178, r=0.8877,r=0.882,r=0.9645,r=0.8623)。结论:一定浓度ORI在体外能有效抑制骨髓瘤细胞H929的增殖,并诱导细胞凋亡,其可能的分子机制与上调MAPK及下调PI3K/Akt信号通路相关蛋白有关。     

SETDB1-siRNA对卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的 探讨转染SETDB1-siRNA对卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法 将体外培养的SKOV-3细胞分为(1)组(正常培养)、(2)组(转染阴性对照NC-siRNA)和(3)组(转染SETDB1干扰序列SETDB1-siRNA),采用实时荧光定量PCR检测细胞中SETDB1 mRNA表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡情况,Western blot检测蛋白表达情况。结果 与(1)组相比,转染NC-siRNA后SKOV-3细胞中SETDB1 mRNA和蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。转染SETDB1-siRNA可使SKOV-3细胞中SETDB1 mRNA和蛋白的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染NC-siRNA后SKOV-3细胞的增殖能力与(1)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。转染SETDB1-siRNA后SKOV-3细胞从2 d开始增殖能力明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。与(1)组相比,转染NC-siRNA对SKOV-3细胞穿膜...     

高三尖杉酯碱联合伊马替尼对K562/G01细胞的作用及机制研究

目的:探索高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)联合伊马替尼(Imatinib,IM)对K562/G01细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:应用CCK-8法检测HHT联合IM对K562/G01细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率及磷酸化酪氨酸水平,Western blot检测P210及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达水平。结果:HHT联合IM与单药相比,对K562/G01细胞的增殖活性具有明显抑制作用(P0.05),细胞的凋亡率显著增加(P0.05);HHT与IM联合可显著抑制K562/G01细胞内的p-Tyr及p-Crkl的表达水平,并能使p210蛋白及其下游通路蛋白P13K和p-Akt的表达水平明显降低。结论:HHT联合IM可协同抑制K562/G01细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制p210蛋白表达及其激酶活性有关。     

大黄素可能通过Akt-Caspase 3信号通路诱导K562/Adr细胞凋亡

目的:观察大黄素(emodin)对多药耐药白血病细胞株K562/Adr凋亡的影响及Akt-Caspase 3信号通路在其中的作用。方法:采用Annexin V/PI双染的流式细胞术和DNA倍体分析法检测细胞凋亡;Western blot法检测大黄素作用后不同时间段caspase-3前体蛋白、PARA、Akt、p-Akt表达水平的变化。结果:大黄素能够诱导K562/Adr细胞凋亡,并呈量效关系。大黄素作用K562/Adr细胞后caspase-3前体蛋白、Akt、p-Akt、PARA 116 KD表达水平下调,PARP 85 KD表达水平增加,并呈时效关系。结论:Akt-Caspase 3信号通路可能参与大黄素诱导K562/Adr细胞凋亡的过程。     

shRNA沉默NSD2基因表达对OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨干扰shRNA下调NSD2基因表达对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt /mTOR信号通路的影响。方法:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞,应用real time Q-PCR检测NSD2 mRNA的表达和Western blot法检测NSD2蛋白的表达,以鉴定NSD2 shRNA的沉默效果,应用CCK-8试验检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定组蛋白H3K36二甲基化水平(H3K36me2)、BAX BCL-2、caspase-3、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的变化。结果:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞72 h后,real time Q-PCR和Western blot检测显示NSD2的mRNA和蛋白表达均有明显下降(P0.05),NSD2 shRNA组细胞增殖率明显低于对照和Neg shRNA组(P0.05),NSD2 shRNA组细胞的凋亡率明显高于对照组和和Neg shRNA组(30.37±4.22)%vs(1.36±0.52)%和(2.17±1.43)%(P0.05);促凋亡蛋白BAX表达上调,抑制凋亡蛋白BCL-2表达下调,caspase-3表达上调;H3K36me2水平较对照组明显下降,而检测Akt /mTOR通路蛋白发现,Akt总蛋白水平未明显下降,但是活性形式的磷酸化p-Akt、p-mTOR和p-P70S6K表达下调。结论:干扰沉默NSD2基因可抑制弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是调节组蛋白H3K36me2水平变化,特异性地抑制Akt /mTOR信号通路的活性。     

三七皂甙R1抑制PI3K/AKT通路对AML小鼠存活和Caspase-3,VEGF表达水平的影响

目的:探讨SR1对AML模型小鼠肿瘤细胞生长、侵袭、迁移及小鼠存活的影响及其作用机制。方法:采用尾静脉注射HL-60细胞的方法建立AML小鼠模型,实验组分别腹腔注射SR110、25和50 mg/kg,1次/d,连续给药1周后,检测其对各组小鼠存活率、肿瘤体积及重量的影响;免疫组织化学法检测Caspase-3和VEGF表达水平;蛋白印迹法检测PI3K/AKT信号通路磷酸化水平。结果:SR110、25和50 mg/kg可呈剂量依赖性地抑制肿瘤的生长(P<0.01,r=-0.9994、-0.9952),从而显著提高荷瘤小鼠的存活率(P<0.01);SR1能正向调节肿瘤组织中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达(P<0.01,r=0.9855),同时负向调节肿瘤组织中迁移相关蛋白VEGF的表达(P<0.01,r=-0.9848);此外,SR1能通过显著降低肿瘤组织中p-PI3K、p-AKT的蛋白表达来剂量依赖性地减少PI3K/AKT信号通路磷酸化水平(P<0.01,r=-0.9372、-0.9953)。结论:SR1能通过抑制肿瘤细胞侵袭和迁移增加AML小鼠的存活率,其作用机制与促进Caspase-3表达、抑制VEGF表达及抑制PI3K/AKT信号通路磷酸化有关。     

灵芝多糖诱导耐药卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的研究灵芝多糖在体外对耐药卵巢癌细胞株SKOV-3/DDP的增值抑制和诱导凋亡的作用,并初步探讨其作用机制。方法 （1）采用MTT法检测灵芝多糖对耐药卵巢癌细胞株SKOV-3/DDP细胞增殖的抑制作用。（2）采用光学显微镜、相差显微镜观察灵芝多糖作用后细胞形态变化。（3）采用DNA片段检测证实细胞凋亡;（4）采用DCFH-DA荧光分光光度法检测细胞内ROS水平。（5）采用Real-time PCR技术检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）mRNA的表达,观察细胞内过氧化物的清除情况。结果灵芝多糖可明显抑制SKOV-3/DDP3细胞增殖并诱导其发生凋亡。结论灵芝多糖诱导细胞凋亡的机制可能是通过增加肿瘤细胞内ROS的生成,降低GSH-Px和CAT mRNA的表达,即通过氧化应激途径诱导SKOV-3/DDP细胞发生凋亡。     

地榆皂苷Ⅱ抑制结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡的体外实验研究

目的 探讨地榆皂苷Ⅱ对结肠癌细胞HT-29增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用并探讨其作用机制。方法 采用CCK-8法检测地榆皂苷Ⅱ对细胞增殖的影响,采用划痕试验检测地榆皂苷Ⅱ对细胞迁移能力的影响,采用Transwell小室实验检测地榆皂苷Ⅱ对细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术测定地榆皂苷Ⅱ对细胞凋亡的影响,分别采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法测定地榆皂苷Ⅱ对细胞中蛋白激酶B (AKT)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号通路mRNA和蛋白表达的影响。结果 地榆皂苷Ⅱ(0、1、5、10、20、40、60和80μmol/mL)可剂量依赖性抑制结肠癌细胞HT-29的增殖;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20μmol/mL)可剂量依赖性抑制结肠癌细胞HT-29的迁移能力;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20μmol/mL)可剂量依赖性抑制结肠癌细胞HT-29的侵袭能力;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20μmol/mL)可剂量依赖性促进结肠癌细胞HT-29的凋亡;地榆皂苷Ⅱ(5、10和20μmol/mL)可剂量依赖性降低结肠癌细胞HT-29中AKT和PI3K mRNA的表达,增加Ca...     

舒尼替尼对白血病细胞K562作用及其分子机制研究

本研究旨在探讨舒尼替尼对白血病K562细胞的作用及其机制.应用MTT法检测以IC50为3.2μg/ml的舒尼替尼作用不同时间后K562细胞的增殖情况;用凝胶电泳分析DNA片段化、用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测舒尼替尼对K562细胞凋亡的影响;应用RT-PCR检测3.2 μg/ml舒尼替尼作用于K562细胞后C-MYC、hTERT、BCR-ABL mRNA的表达变化;Western blot检测不同浓度舒尼替尼处理K562细胞后和3.2μg/ml舒尼替尼作用不同时间后Akt、p-Akt蛋白表达的变化.结果表明,舒尼替尼可明显抑制K562细胞增殖,呈时间依赖性;舒尼替尼诱导K562细胞呈现典型的DNA梯状带,促进细胞原位凋亡;3.2μg/ml舒尼替尼作用后K562细胞C-MYC、hTERT、BCR-ABL mRNA表达呈时间依赖性降低;Western blot显示,p-Akt蛋白呈时间和剂量依赖性降低,而Akt蛋白表达无明显变化.结论：舒尼替尼能有效地通过诱导凋亡抑制K562细胞增殖,其机制可能与下调BCR-ABL、C-MYC和hTERT的表达及抑制Akt磷酸化有一定的关系.     

地塞米松对紫杉醇诱导人卵巢癌细胞株SKOV-3细胞凋亡的影响

目的：探讨地塞米松预处理对紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡的影响。方法：应用MTT比色法检测地塞米松对紫杉醇抑制细胞增殖的影响,TUNEL法形态学观察细胞凋亡,流式细胞仪PI单染测定地塞米松预处理对紫杉醇诱导人卵巢癌细胞株SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：不同浓度地塞米松对紫杉醇抑制SKOV-3细胞增殖有不同程度的拮抗作用,TUNEL分析表明地塞米松预处理后能抑制紫杉醇诱导SKOV-3细胞凋亡,流式细胞仪PI单染法分析表明,用地塞米松预处理后再用紫杉醇组的细胞凋亡率为（5.55±0.53）%,而单用紫杉醇组细胞凋亡率为（13.90±1.62）%,地塞米松进行预处理组细胞凋亡率明显降低（P〈0.01）,且与细胞周期中G2/M期无关。结论：不同浓度地塞米松对紫杉醇抑制SKOV-3细胞增殖有不同程度的保护作用,地塞米松能够拮抗紫杉醇诱导人卵巢癌细胞株SKOV-3细胞凋亡,且与细胞周期中G2/M期无关。     

线粒体分裂蛋白抑制剂对β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞凋亡的作用及机制

目的:研究线粒体分裂蛋白抑制剂对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导小胶质细胞凋亡的作用及其机制。方法:随机将BV-2小胶质细胞分为con组、Aβ组、mdi组和Aβ+mdi组,con组不做特殊处理,mdi组培养基中加入10μmol/L mdivi-1,Aβ组培养基中加入20μmol/L Aβ,Aβ+mdi组培养基分别加入2、5、10、20μmol/L mdivi-1和20μmol/L Aβ。采用MTT法检测细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot法检测Drp1、CytC和Caspase-3蛋白水平变化,RT-PCR法检测CA11b mRNA表达变化。结果:与con组相比,Aβ组的细胞存活率明显下降,凋亡显著增加,CA11b mRNA上升,线粒体Drp1、细胞浆CytC和激活的Caspase-3增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ组相比,Aβ+mdi组的细胞存活率明显上升,凋亡显著减少,CA11b mRNA下降,线粒体Drp1、细胞浆CytC和激活的Caspase-3减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:线粒体分裂蛋白抑制剂对Aβ诱导小胶质细胞凋亡有保护作用,其机制可能为抑制线粒体/CytC/Caspase-3凋亡途径。