老年小鼠血脑屏障在术后认知功能障碍中的作用

 目的    观察老年小鼠在异氟醚暴露或阑尾切除术后学习和记忆能力变化及海马区血脑屏障通透性变化情况,寻找血脑屏障改变的原因。方法    30只C57BL 老年小鼠(18月龄)随机分为3组:对照组(C组)不予任何干预,手术组(S组)接受阑尾切除术,吸入组(I组)吸入异氯醚。采用伊文思蓝(Evans-blue,EB)透过率检测各组海马区血脑屏障通透性的改变,并通过Western blot检测occludin和claudin-5 蛋白,观察手术后紧密连接蛋白的变化,检测MMP-2和MMP-9的改变。结果    相比于吸入组及对照组,手术组的潜伏期延长,平台穿越次数减少,EB透过率增加,紧密连接蛋白occludin表达减少,MMP-2和MMP-9表达增加。结论    通过增加MMP-2和MMP-9的表达,引起紧密连接蛋白occludin表达的减少,并导致血脑屏障破坏,最终引起术后认知功能障碍的发生。     

安宫牛黄丸对大鼠脑出血后MMP-9表达的影响

目的探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血（Intracerebral Hemorrhage,ICH）后脑组织基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法将sD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组、安宫牛黄丸治疗组,每组5只大鼠。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,观察48h时点各组大鼠血脑屏障通透性变化,RT．PCR分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9mRNA表达的影响,WesternBlot分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9蛋白表达的影响。结果大鼠实验性脑出血后48hMMP-9阳性细胞数及伊文思蓝渗出量增多,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达增加;安宫牛黄丸处理后,MMP-9阳性细胞数减少（P〈0．01）,伊文思蓝渗出量降低（P〈0．01）,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达下降。结论脑出血后MMP-9表达与血脑屏障通透性密切相关,安宫牛黄丸能够有效抑制大鼠脑出血后MMP-9表达,减轻脑水肿。     

Detrimental Effect of Electromagnetic Pulse Exposure on Permeability of In Vitro Blood-brain-barrier Model

Objective To study the effect of electromagnetic pulse (EMP) exposure on permeability of in vitro blood-brain-barrier (BBB) model. Methods An in vitro BBB model, established by co-culturing brain microvascular endothelial cells (BMVEC) and astroglial cells (AC) isolated from rat brain, was exposed to EMP at 100 kV/m and 400 kV/m, respectively. Permeability of the model was assayed by measuring the transendothelial electrical resistance (TEER) and the horseradish peroxidase (HRP) transmission at different time points. Levels of BBB tight junction-related proteins were measured at 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20, 24 h after EMP exposure by Western blotting. Results The TEER level was lower in BBB model group than in control group at 12 h after EMP, exposure which returned to its normal level at 24 h. The 24 h recovery process was triphasic and biphasic respectively after EMP exposure at 100 kV/m and 400 kV/m. Following exposure to 400 kV/m EMP, the HRP permeability increased at 1-12 h and returned to its normal level at 24 h. Western blotting showed that the claudin-5 and ZO-1 protein levels were changed after EMP exposure. Conclusion EMP exposure at 100 kV/m and 400 kV/m can increase the permeability of in vitro BBB model and BBB tight junction-related proteins such as ZO-1 and claudin-5 may change EMP-induced BBB permeability.     

补肾祛痰活血汤对缺血再灌注损伤大鼠Occludin、 ZO-1蛋白的调节作用

目的：观察补肾祛痰活血汤对预处理脑缺血再灌注损伤的大鼠脑组织水肿、血脑屏障通透性及损伤区咬合蛋白（Occludin）、闭锁小带蛋白（zonula occludens-1, ZO-1）的影响。方法 SD成年雄性大鼠50只,按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、治疗组、对照组,每组10只。治疗组给补肾祛痰活血汤、对照组给消栓通络胶囊,正常组、模型组、假手术组给与相应量的双蒸馏水。采用线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,72 h后,干湿重法测定脑含水量反映脑水肿程度,用免疫组织化学方法测定损伤区Occludin、ZO-1蛋白的表达量,并对各结果进行相关性分析。结果与正常组、假手术组比较,模型组、治疗组、对照组72 h时间点大鼠脑组织含水量较正常组、假手术组要增高一些,脑组织损伤区周围Occludin、ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。脑组织含水量与脑组织损伤程度正相关,脑组织损伤区周围Occludin、ZO-1蛋白与脑组织损伤程度呈负相关。结论补肾祛痰活血汤对缺血性脑损伤发生后损伤区Occludin、ZO-1蛋白含量降低有抑制作用,抑制血脑屏障通透性增高,减轻脑水肿形成。     

EMAP-Ⅱ对紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1相互作用的调节和机制

  目的 研究内皮—单核细胞激活多肽Ⅱ（EMAP-Ⅱ）对血肿瘤屏障（BTB）紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1分布和相互作用的影响,以及蛋白激酶C（PKC）活性的变化,探讨PKC在EMAP-Ⅱ开放紧密连接中的作用。方法 提取和培养大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外BTB模型;实验分为7组,即模型组、EMAP-Ⅱ 0.5 h组、EMAP-Ⅱ 1 h组、EMAP-Ⅱ 2 h组、EMAP-Ⅱ 3 h组、EMAP-Ⅱ 6 h组和EMAP-Ⅱ 12 h组。应用Milicell-ERS系统检测体外BTB模型跨内皮细胞阻抗值的变化;双重免疫荧光检测内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1 的分布和定位;免疫共沉淀检测内皮细胞中occludin和ZO-1的结合水平;PKC活性检测试剂盒检测体外BTB模型内皮细胞中总PKC的活性。结果 与模型组相比,EMAP-Ⅱ显著降低了体外BTB模型的跨内皮细胞阻抗值,增加了BTB通透性;在模型组,紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1 在内皮细胞边缘呈连续分布,并且二者存在共定位,EMAP-Ⅱ能够使occludin和ZO-1 在内皮细胞边缘的分布减少,二者的共定位减弱;免疫共沉淀结果也显示EMAP-Ⅱ能够减弱occludin和ZO-1的结合;上述作用在EMAP-Ⅱ作用 1 h时效果最显著（P<0.01）;同时发现EMAP-Ⅱ作用后,BTB模型内皮细胞中PKC的活性显著升高,在EMAP-Ⅱ作用 1 h时达峰值（P<0.01）。结论 EMAP-Ⅱ能够调节紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞的相互作用,开放紧密连接;PKC可能是EMAP-Ⅱ影响occludin和ZO-1相互作用、调节紧密连接的机制之一。     

脑疏宁对颅脑创伤后大鼠血脑屏障通透性及MMP-9表达的影响

目的观察中药脑疏宁对创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)通透性及脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响,探讨中药保护血脑屏障的作用机理.方法按Feeney自由落体撞击法造成TBI模型,采用免疫组织化学技术观察大鼠脑组织MMP-9表达.结果模型组创伤后24h BBB破坏,脑组织含水量增加,病灶区MMP-9蛋白表达增高,脑疏宁组BBB通透性、脑组织含水量及MMP-9表达较模型组降低(P＜0.01).结论颅脑损伤后MMP-9表达增高,促使BBB破坏,导致血管源性脑水肿.中药脑疏宁可以保护BBB,降低脑组织含水量,其作用可能与抑制MMP-9在损伤脑组织中的表达有关.     

外源性转化生长因子β1对大鼠癫痫持续状态后血脑屏障通透性的影响

目的:探讨经鼻腔给予外源性转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对大鼠癫痫持续状态(statusepilepticus,SE)后血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性的影响。方法:建立匹罗卡品(pilocarpine)SE模型。SD大鼠252只随机分成正常对照组、模型组和TGF组,各组设计7个观察时间点,即SE后3 h、6 h、24 h、2 d、3 d、4 d、7 d。各大鼠在相应的时间点处死取材,应用化学定量的方法检测大鼠脑组织内伊文思蓝(Evans blue,EB)的含量,应用免疫组织化学法检测相应时间点海马区的zonula occluden-1(ZO-1)蛋白的表达。结果:大鼠脑内的EB含量与正常对照组相比,模型组和TGF组都先增加,24 h达到峰值,后逐渐下降,7 d接近正常;TGF组与模型组比较,脑内EB含量均低于模型组,6 h至2 d增加均有统计学意义(P0.05～P0.01)。TGF组和模型组比较,海马区ZO-1蛋白的表达都是先降后升,以24 h为最低,其中6 h、24 h、2 d差异均有统计学意义(P0.05～P0.01),TGF组明显高于模型组,低于正常对照组。结论:经鼻腔给予外源性TGF-β1能降低大鼠SE后BBB的通透性。     

脑缺血再灌注早期L-NAME的脑保护机制研究

目的通过L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠脑缺血再灌注损伤早期MMP-9、GFAP动态表达及与血脑屏障形态、功能关系的研究,探讨脑缺血再灌注早期L-NAME的脑保护机制。方法 108只SD大鼠随机分为3组:假手术组,损伤组,L-NAME治疗组。干湿重法测定缺血脑组织含水量,伊文思蓝测定血脑屏障通透性,免疫组织化学技术检测脑组织的MMP-9蛋白、GFAP蛋白的表达,电镜研究血脑屏障超微结构。结果脑缺血再灌注损伤后大脑皮质的神经细胞线粒体肿胀或溶解;脑毛细血管周围出现空泡化,内皮肿胀,基底膜厚薄不均。脑缺血再灌注损伤后脑含水量和EB含量明显增高,MMP-9、GFAP表达升高,差异具有统计学意义。L-NAME治疗后,脑含水量和EB含量明显下降,MMP-9、GFAP表达恢复至正常水平,脑毛细血管、神经细胞、突触及基底膜等超微结构基本恢复正常。结论 L-NAME对脑缺血再灌注损伤早期具有明显的保护作用,其机制与抑制MMP-9、GFAP表达,清除自由基和调节星形胶质细胞适度增生有关。     

The effects of electromagnetic pulse on the protein levels of tight junction associated-proteins in the cerebral cortex, hippocampus, heart, lung, and testis of rats

Objective To investigate changes in the expression of tight junction (TJ) proteins in the cerebral cortex,hippocampus,heart,lung,and testes of rats after exposure to electromagnetic pulse (EMP).Methods Eighteen adult male Sprague-Dawley rats were divided into sham and exposure groups.The exposure groups received EMP at 200 kV/m for 200 pulses with a repetition rate of 1 Hz.The expression of TJ proteins (ZO-1,occludin,actin) in the several organs was examined by western blotting.Results ZO-1 levels in the ce...     

补铁对生长发育期铅接触大鼠血脑屏障通透性的影响

目的: 探讨补铁对生长发育期慢性铅接触大鼠血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性及内皮细胞紧密连接蛋白的影响.方法: 选择 21 d龄的雄性SD大鼠38只,随机分为对照组(n=10)、染铅组(n=14)和补铁且染铅组(n=14).除对照组外,其他两组均自由饮用含400 mg/L的Pb(AC)2水溶液;补铁且染铅组以20 mg/kg浓度的FeSO4水溶液隔日进行ig,其他两组以相同的方法隔日用去离子水ig.饲养6 wk后,检测大鼠的血红蛋白和血铅含量,用硝酸镧示踪法观察血脑屏障的通透性,并测定脑组织内皮细胞紧密连接蛋白occludin的表达.结果: 补铁且染铅组与染铅组相比,大鼠的血红蛋白含量显著增高(P<0.05),血铅含量显著降低(P<0.05);电镜下观察可见,染铅组大鼠毛细血管内的镧盐颗粒穿过血脑屏障进入到脑组织内,而补铁且染铅组与对照组均未见镧盐颗粒渗透过血脑屏障.同时,补铁且染铅组内皮细胞紧密连接蛋白occludin的表达水平与染铅组相比明显增加.结论: 生长发育期铅接触可使血脑屏障通透性增加,脑毛细血管内皮细胞紧密连接蛋白occludin表达降低可能是血脑屏障通透性改变的主要分子机制之一;铅接触的同时适量补充铁元素,可保护由慢性铅接触所造成的血脑屏障紧密连接的损伤.     

肿瘤坏死因子α对急性肝功能衰竭小鼠中血脑屏障紧密连接的影响及机制

目的探讨急性肝功能衰竭中肿瘤坏死因子α(TNF-α)对血脑屏障(BBB)渗透性的影响。方法通过施加D-氨基半路糖(D-GalN)和脂多糖或D-GalN和TNF-α形成急性肝功能衰竭小鼠模型。通过依文思蓝染色研究BBB的渗透性,并在电镜下观察其形态改变。Western blot检测Occludin蛋白的表达。结果在急性肝功能衰竭小鼠中BBB渗透性增加,电镜下观察到组织的紧密连接瓦解和内皮细胞皱缩,并伴随囊泡和空泡增加。此外,急性肝功能衰竭小鼠的脑组织紧密连接相关蛋白Occludin的表达显著降低。结论 TNF-α在急性肝功能衰竭小鼠脑水肿中的形成过程中起到重要的作用,BBB渗透性增加可能是由于紧密连接丧失和其相关蛋白Occludin下调所致。     

高压氧对蛛网膜下腔出血大鼠脑内基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:探讨高压氧(HBO)对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在蛛网膜下腔出血(SAH)后的表达的影响及其对血脑屏障(BBB)的保护作用。方法:采用自体股动脉血枕大池单次注血法建立大鼠实验性SAH模型。造模成功后分不同时间点对HBO组给予高压氧暴露。并分不同时间点测脑含水量、BBB通透性及MMP-9的表达情况。结果:SAH后各组脑含水量、BBB通透性、MMP-9表达较Sham组显著升高(P<0.05),但在同一时间点HBO组较SAH组脑含水量、BBB通透性、MMP-9表达显著减少(P<0.05)。结论:HBO可能通过抑制MMP-9的表达,减轻了BBB的破坏,从而减轻脑水肿,对大鼠SAH后BBB具有保护作用。     

丁苯酞对SD大鼠脑出血后血脑屏障的影响及其机制

目的：探讨SD大鼠脑出血后高尔基体和血脑屏障的变化及丁苯酞的干预作用和机制。方法：SD大鼠随机 分为正常对照组、假手术组、脑出血组及丁苯酞组。造模48 h后测量各组的伊文思蓝含量，采用蛋白质印迹法及real- time PCR检测Cdc42，GM130，ZO-1和Occludin蛋白灰度比值及mRNA相对表达量，免疫荧光观察Cdc42和GM130是否 存在共定位及脑出血后丁苯酞干预的荧光强度，免疫组织化学观察ZO-1和Occludin在血肿周围内皮细胞上的分布。结 果：脑出血组的神经功能评分及伊文思蓝含量明显高于假手术组(P<0.05)；丁苯酞组的神经功能评分及伊文思蓝含量 较脑出血组明显降低(P<0.05)。 脑出血组Occludin，ZO-1，GM130及Cdc42蛋白灰度比值及mRNA相对表达量较假手术 组降低(P<0.05)；丁苯酞组中Occludin，ZO-1及Cdc42蛋白灰度比值及mRNA相对表达量较脑出血组升高(P<0.05)，而 GM130 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学发现脑出血组中Occludin和ZO-1在血肿周围的表达较假手术 组降低(P<0.05)，而丁苯酞组则增加(P<0.05)。结论：脑出血后高尔基体形态发生改变，血脑屏障受到破坏；丁苯酞 能减轻神经功能缺损及血脑屏障破坏程度，其机制与Cdc42的上调相关，而与GM130可能无关。     

多西环素对大鼠体外循环后肺内MMP-9和TIMP活性和基因表达的影响

目的:探讨多西环素对大鼠体外循环后肺内基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)活性和基因表达的影响?方法:健康雄性SD大鼠36只随机分为对照组?体外循环组(CPB组)和治疗组,分别于手术结束时(T1)和手术结束后6 h(T2)收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本?Western blot法测定BALF中MMP-9和TIMP-1的蛋白活性,RT-PCR法测定肺组织MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达?结果:治疗组大鼠肺组织水肿减轻,BALF的中性粒细胞减少;CPB组BALF中MMP-9活性明显升高,CPB后6 h表达最强,治疗组MMP-9活性较CPB组有明显下降,TIMP-1的活性在CPB组和治疗组于CPB结束后呈较弱的增强趋势,两组间相同时间点的表达差异不明显;CPB组和治疗组MMP-9mRNA表达增强,但治疗组MMP-9 mRNA的表达在相应时间点较治疗组下降;TIMP-1 mRNA在治疗组表达增强,且T2时间点显著增强;MMP-9/TIMP-1 mRNA在CPB组和治疗组均有显著增大,但治疗组中T2时间点MMP-9/TIMP-1 mRNA比值较CPB组明显下降?结论:CPB可以引起大鼠术后肺内MMP-9的活性和基因表达增强,导致术后早期肺内MMP-9/TIMP-1 mRNA表达失衡,多西环素可以抑制CPB后大鼠肺组织内MMP-9蛋白水平和mRNA的表达,还可能上调TIMP-1的表达而间接抑制MMP-9 mRNA表达,改善MMP-9/TIMP-1的比例失衡?     

缺血再灌注大鼠脑内基质金属蛋白酶的动态变化

目的 研究局灶性脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶(MMPs)的变化。方法 应用含明胶的定量酶谱技术,检测大鼠局灶性脑缺血再灌注7 d内MMP-2和MMP-9的表达。结果 MMP-9(92 kd)在假手术组和手术组非缺血侧没有或仅有极低量的表达,手术组缺血侧再灌注3 h后开始出现MMP-9表达,24、48 h较假手术组显著升高(P<0.05,P<0.01),并显著高于其它各组(P<0.05)。MMP-2(72 kd)在各组缺血侧与非缺血侧均有表达,48 h缺血侧开始较假手术组升高(P<0.05),7 d到达高峰;3 h和24 h与7 d相比,有显著性差别(均P<0.01)。各组非缺血侧之间无显著差别(P>0.05)。结论 脑缺血再灌注后MMP-9和MMP-2的水平升高;MMP-9上调可能与缺血再灌注后的炎症损伤有关,MMP-2可能与炎症反应损伤后的修复过程相关。     

ALDH2通过线粒体融合与裂变减轻脂多糖诱导的脑微血管内皮细胞屏障的损伤

目的 观察乙醛脱氢酶2（ALDH2）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障的影响,并探讨线粒体融合与裂变在内皮屏障中的作用。方法 小鼠脑微血管内皮细胞分为3组：对照组：不给予任何处理;LPS损伤组（LPS）：1 μg/mL的LPS刺激24 h;LPS+ALDH2激动剂Alda-1组（LPS+Alda-1）：在LPS刺激前给予20 μmol/mL的Alda-1预处理1 h。CCK-8实验检测细胞活性;跨内皮细胞电阻和FITC-Dextran葡聚糖实验检测细胞通透性变化;试剂盒丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）测定氧化应激水平;超氧化物阴离子荧光探针检测细胞活性氧（ROS）的表达;Western blot检测细胞ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin以及线粒体融合蛋白Mfn2、OPA1和分裂蛋白Drp1、Fis1表达。结果 与对照组相比,LPS组跨内皮细胞电阻值降低、FITC-Dextran渗漏性增高,MDA含量升高、SOD活性下降,ROS荧光表达增强,ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、线粒体融合蛋白Mfn2和OPA1表达降低,而线粒体分裂蛋白Drp1和Fis1表达升高（P<0.05）。应用Alda-1干预后,可显著抑制LPS所致的内皮细胞膜通透性升高,减低ROS荧光表达,ALDH2、ZO-1、Occludin 、OPA1和Mfn2蛋白表达增高,而Drp1和Fis1蛋白表达降低（P<0.05）。结论 ALDH2通过抑制线粒体ROS的产生,减轻LPS诱导脑微血管内皮细胞屏障的损伤,其机制可能与促进线粒体融合及抑制线粒体裂变有关。     

多西环素对大鼠体外循环后肺内MMP-9和TIMP-1活性和基因表达的影响

目的：探讨多西环素对大鼠体外循环后肺内基质金属蛋白酶-９和组织基质金属蛋白酶抑制剂-1活性和基因表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠３６只随机分为对照组（A组）、体外循环组（B组）和治疗组（C组）,分别于手术结束时（T1）和手术结束后6小时（T2）收集支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织标本。Western-blot法测定BALF中MMP-9和TIMP-1的蛋白活性,RT-PCR法测定肺组织MMP-9和TIMP-1mRNA的表达。结果：治疗组大鼠肺组织水肿减轻,BALF的中性粒细胞减少;CPB组BALF中MMP-9活性明显升高,CPB后6小时表达最强,治疗组MMP-9活性较CPB组有明显下降,TIMP-1的活性在CPB组和治疗组于CPB结束后呈较弱的增强趋势,两组间相同时间点的表达差异不明显;CPB组和治疗组MMP-9mRNA表达增强,但治疗组MMP-9mRNA的表达在相应时间点较治疗组下降;TIMP-1mRNA在治疗组表达增强,且T２时间点显著增强;MMP-9/TIMP-1mRNA在CPB组和治疗组均有显著增大,但治疗组中T2时间点组MMP-9/TIMP-1mRNA比值较CPB组明显下降。结论：CPB可以引起大鼠术后肺内MMP-9的活性和基因表达增强,导致术后早期肺内MMP-9/TIMP-1mRNA表达失衡,多西环素可以抑制CPB后大鼠肺组织内MMP-9蛋白水平和mRNA的表达,还可能上调TIMP-1的表达而间接抑制MMP-9mRNA表达,改善MMP-9/TIMP-1的比例失衡。     

氯沙坦对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性和MMP-9表达的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ受体阻断药氯沙坦对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法：采用血管内栓线阻断法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型， 于脑缺血2h、再灌注24h后测定脑组织含水量、伊文斯蓝（EB）含量， 免疫组织化学方法测定MMP 9表达。结果：脑缺血2h、再灌注24h， 大鼠脑组织含水量及EB含量增加， MMP-9呈现高表达。 而氯沙坦组脑组织含水量、 EB含量及MMP-9表达明显低于脑缺血再灌注组（P＜0.05）。 结论：氯沙坦通过降低脑缺血再灌注大鼠基质金属蛋白酶 9的活性及血脑屏障通透性， 从而发挥其脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

低灌注时水通道蛋白-4在血脑屏障通透性升高中的作用

目的 探讨慢性低灌注时,水通道蛋白-4(aquaporin-4, AQP4)的表达与构型变化在血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)通透性增高中的作用。方法 Wistar大鼠采用双侧颈总动脉结扎术(2-vessel occlusion, 2VO)建立慢性低灌注模型,测定2VO术后不同时间点脑组织伊文思蓝(evans blue, EB)含量,评价BBB通透性,RT-PCR和Western印迹法测定不同时间点AQP4 mRNA及蛋白水平表达,免疫荧光双标法观察AQP4的构型变化。结果 2VO术后早期,BBB通透性迅速升高,AQP4 mRNA和蛋白表达水平与BBB通透性变化趋势一致,均在术后3d时达到高峰,1、2周时仍显著升高(P<0.01),随着慢性缺血时间的延长,无论是BBB通透性还是AQP4 mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,至3个月时与假手术组相比,差异无统计学意义。而AQP4的功能构型OAPs与BBB通透性变化趋势呈负相关,2VO术后早期AQP4与GFAP共定位明显减少,随后逐渐增多,术后3个月时恢复至正常水平。结论 慢性低灌注状态可引起BBB通透性升高,AQP4的表达与构型改变与BBB通透性密切相关。     

血管内皮细胞条件培养基促进胃癌细胞增殖和迁移

探讨血管内皮细胞培养基对胃癌细胞增殖和迁移的影响,分析血管内皮细胞调控胃癌细胞发生转移的机制。方法 设置对照组和共培养组,分别将正常培养基和人脐静脉血管内皮细胞HUVEC条件培养基作用于胃癌细胞HGC27,采用MTT法和划痕试验检测胃癌细胞HGC27的增殖活性和迁移能力。设置Control组、6 h组、12 h组和24 h组,以HUVEC的条件培养基作用于胃癌细胞6、12和24 h,Western blot检测EMT标志物和紧密连接蛋白的表达变化,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架和紧密连接蛋白的分布变化。结果 MTT及划痕试验表明HUVEC条件培养基促进胃癌细胞HGC27的增殖和迁移。与Control组比较,间接共培养后胃癌细胞的形态呈间充质状改变,丝状伪足样凸起数量显著增加。 Western blot结果显示间接共培养后胃癌细胞上皮标志物E-cadherin表达水平逐渐下降,而间充质标志物N-cadherin和MMP-9逐渐增加,具有时序性变化规律。ZO-1和Occludin的表达也逐渐下降,细胞膜分布减少。结论 间接共培养下,血管内皮细胞通过上调胃癌细胞MMP-9,破坏紧密连接,促进胃癌细胞增殖和迁移