HBV血清标志物和DNA联合检测对提高输血安全性的价值

目的 探讨2种方法联合检测对提高输血安全性的价值.方法 采用酶联免疫吸附测定(ELISA)和荧光定量PCR技术,分别对确诊或疑似乙型肝炎血液标本(346份)和初筛合格献血员标本(300份)进行HBV血清标志物和DNA含量检测.结果 经ELISA法检测,346份确诊或疑似乙型肝炎血液标本,HBV标志物阴性62份,其中检出HBV-DNA阳性1份(1.5%);在300份初筛合格的献血员标本中,检出HBV-DNA阳性6份(2.0%),其中222份ELISA法全阴性的标本,检出HBV-DNA阳性2份(0.9%).结论 在HBsAg阴性者中,也可能存在HBV感染;HBV血清标志物和DNA的联合检测,对提高输血安全性有重要意义.     

实时荧光PCR检测HBsAg阴性、抗HBc阳性献血者血液中HBV DNA研究

目的对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性、乙型肝炎核心抗体（抗HBc）阳性的献血者血液进行经输血传播乙型肝炎病毒（HBV）的风险评估,为完善HBV血液筛查模式及确保临床用血安全提供依据。方法对献血者血液常规检测阴性的标本进行8×45 μL汇集,应用实时荧光聚合酶链反应(PCR)进行混样核酸检测HBV DNA。对血液常规筛查和混样核酸检测合格的标本,进行随机乙型肝炎血清学5项标志物的酶联免疫吸附试验(ELISA)。对获得的HBsAg阴性、混样HBV DNA阴性、抗HBc阳性的标本,进一步采用单份样本（720 μL）实时荧光PCR法检测并定量分析。结果混样标本共检测12 552份,检出HBsAg阴性、HBV DNA阳性标本2份,阳性率为0.02%。随机筛查混样核酸检测阴性标本614份,检出抗HBc阳性标本320份,对此320份标本进行单份核酸检测,检出阳性标本1份,阳性率为0.31%。结论HBsAg阴性、抗HBc阳性献血者血液存在输血传播HBV的风险,应用核酸扩增技术检测血液HBV DNA能大大提高血液安全性。     

献血员乙型肝炎病毒感染筛查安全性初步评价

[目的]探讨HBsAg阴性血清中是否有HBV-DNA的存在,以对我国目前献血员的乙型肝炎筛查安全性进行初步评价.[方法]利用酶联免疫吸附试验对HBsAg阴性的1430例非献血员和1608例献血员血清进行乙肝标志物检测,剔除单独anti-HBs阳性和全阴性血清,其余血清采用聚合酶链反应定量检测HBV-DNA拷贝数.[结果]剔除单独anti-HBs阳性和全阴性血清后,非献血员标本中其他阳性组合模式有52份(3.64%),HBV-DNA呈阳性1份(0.07%);献血员标本有182份(11.32%),HBV-DNA呈阳性4份(0.25%);所有HBV-DNA阳性血清均为anti-HBc阳性.[结论]HBsAg阴性血清中仍有HBV-DNA存在的可能,仅检测HBsAg筛查献血员是不够的,应对献血员进行更严格的HBV标志物检查,例如增加anti-HBc的检测.如有条件,可检测HBV-DNA.     

血清HBV NRAg的临床应用探讨

目的 探讨乙型肝炎病毒核酸相关抗原(HBV NRAg)用于临床乙型肝炎诊断的实验价值及与乙型肝炎病毒DNA定量的相关性.方法 收集门诊及住院患者标本432份,ELISA法检测血清HBV NRAg、HBV血清标志物,FQ-PCR检测HBV DNA,同时进行肝功能生化检测.结果 HBV NRAg与HBV DNA的总符合率为90.70%;86例HBV DNA阳性样本中,HBV NRAg阳性率为95.35%,显著高于PreS1(79.06%)和HBeAg(51.16%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 HBV NRAg与HBV DNA具有很好的一致性,可作为临床HBV感染的筛选及判断HBV复制的有意义的补充项目.     

乌鲁木齐无偿献血者HBsAg阴性HBV DNA阳性的追踪分析

目的酶免疫法(EIA)筛查乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阴性标本进行核酸检测(NAT),定期追踪发现血清转换期标本,降低临床输血风险。方法采用2种不同厂家试剂双筛乙肝表面抗原(HBsAg),丙肝抗体(抗-HCV),艾滋病抗体(抗-HIV),梅毒螺旋体抗体(抗-TP),丙氨酸氨基转移酶(ALT),均阴性者进行NAT检测,HBV DNA阳性追踪分析。结果筛出2份HBV DNA阳性,其中1例为"窗口期"标本,发现血清转换期献血员;1例为隐匿性乙型肝炎标本,不是血清转换期献血员。结论 EIA筛查后血液安全性有很好的保障,但经血传播HBV风险依然处于较高的水平,NAT应用对提高血液安全,降低输血传播HBV残余风险意义重大,从而为卫生部门制定相关政策提供科学依据。     

乙肝病毒HBcAg与血清标志物、HBVDNA的关系

目的 探讨人群中HBcAg、HBV血清标志物和HBV DNA检出情况及三者关系,分析它们在乙型肝炎病人中存在的原因及临床价值,为临床提供乙肝病毒传染性及诊断的实验室依据.方法 用放射免疫法检测1 460例标本的血清标志物,同时对其中133例标本用聚合酶链反应(PCR)法检测HBV DNA.结果 421例HBsAg阳性中HBcAg阳性率为86.94%,98例HBeAg阳性中HBcAg阳性率为65.31%.在同时检测HBcAg和HBV DNA的133例各种感染模式中,HBcAg与HBV DNA阳性率相似,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 HBcAg与具有病毒活动性复制意义的指标HBV DNA有良好的一致性.HBcAg与HBV DNA可以反映HBV感染与复制,尤其可反映HRsAg阴性或HBeAg阴性的乙肝患者仍存在的病毒复制.     

HBsAg阴性安全性初步评价

目的 探讨HBsAg阴性血清中是否有HBV-DNA的存在以及其传染性强弱,使用PCR仪对我国目前献血员的乙肝筛查安全性进行初步评价.方法 利用酶联免疫吸附实验对HBsAg阴性的1430例非献血员和1608例献血员血清进行乙肝标志物检测,剔除单独Anti-HBs阳性和全阴性血清,其余血清采用聚合酶链反应定量检测HBV-DNA拷贝数.结果 剔除单独Anti-HBs阳性和全阴性血清标本后,非献血员标本中其他阳性组合模式有52份（3.64% ）,HBV-DNA呈阳性1份（0.07% ）;献血员标本有182份（11.32% ）,HBV-DNA呈阳性4份（0.25% ）;所有HBV-DNA阳性血清均为Anti-HBc阳性.结论 HBsAg阴性血清中仍有HBV-DNA存在的可能,仅检测HBsAg筛查献血员是不够的,应对献血员进行更严格的HBV标志物检查,例如增加Anti-HBc的检测.如有条件,可检测HBV-DNA.     

时间分辨荧光免疫法筛选献血员 HBsAg 的研究

乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）为乙型肝炎病毒（HBV）感染的主要证据之一，检测HBsAg是采供血机构筛选献血员、防止HBV经输血传播的重要措施。目前采供血机构普遍采用酶标记免疫检测技术（ELISA）法，但ELISA技术对低水平存在的血清HBsAg难以进行有效检测，可能导致HBsAg阳性献血员的漏检。我们采用时间分辨荧光免疫技术对1200份已通过二次ELISA检测结果为阴性的合格献血员血清标本进行TRFIA检测，[第一段]     

荧光定量PCR法与酶联免疫吸附法在乙型肝炎病毒检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR法与酶联免疫吸附(ELISA)法在乙型肝炎病毒(HBV)检测中的应用,以及不同HBV感染者血清学标志物和HBV DNA定量之间的关系。方法采用荧光定量PCR法和ELISA法对100份献血者血浆标本的HBV DNA和血清学标志物进行检测,并比较分析检测结果。结果乙型肝炎标志物呈阳性的各组中均有不同程度的病毒DNA复制。大三阳(HBs Ag、HBeAg、HBcAb三项阳性)的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值分别为96.0%和3.12×10~8,小三阳(HBsAg、HBeAb和HBcAb三项阳性)的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值分别为86.7%和5.88×10~5,HB-s Ab和HBeAg二项阳性的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值分别为50.0%和6.01×10~4,HBsAb、HBeAb和HBcAb三项阳性的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值分别为45.5%和2.30×10~4,其他血清标志物阳性组合的阳性率和HBV DNA拷贝数平均值均较低。以大三阳的阳性率和HBV DNA含量最高,与其他组比较,差异具有统计学意义(P0.01)。结论荧光定量PCR法检测HBV DNA具有灵敏度高、结果可靠的优点,可真实反应HBV感染和复制状态,可为乙型肝炎的早期诊断、传染性判断、治疗监测及病情转归提供客观依据。     

乙型肝炎患者血清前S1抗原检测的临床意义

目的探讨前S1抗原在乙型肝炎血清标志物模式中的价值及临床意义。方法对3017例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性患者血清标本同时进行乙型肝炎病毒(HBV)标志物、前S1抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测和HBV DNA的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测,并分前S1抗原阳性组与阴性组进行统计学分析。结果前S1抗原阳性的乙型肝炎血清标志物模式组中HBV DNA的检出率为77.09%,检出率较高的3种血清学模式是HBsAg与乙型肝炎e抗原(HBeAg)双阳(模式⑤,100.00%),HBsAg、HBeAg、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)三阳(模式①,95.99%),HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb四阳(模式③,94.44%);前S1抗原阴性的乙型肝炎血清标志物模式组中HBV DNA的检出率是29.30%,检出率较高的3种血清学模式是模式⑤(100.00%)、模式③(66.67%)、模式①(64.04%)。前S1抗原阳性组检出HBV DNA的平均含量是(7.36±0.90)拷贝/mL,阴性组是(5.42±1.16)拷贝/mL。两组比较:HBV DNA的检出率(P<0.005)和HBV DNA的含量(P<0.05)差异都有显著性。结论前S1抗原作为一种新的反映HBV复制状态和传染性的指标,在乙型肝炎血清标志物模式中具有重要意义,其阳性血清标志物模式患者HBV复制活跃,HBV含量高。     

血站供合格血液中HBV标志物检测结果分析

目的检测并分析血站供合格血液中乙型肝炎病毒（HBV）标志物,探讨对献血员进行抗．HBc（IgM）筛查的必要性。方法应用酶联免疫方法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗．HBe、抗-HBc（IsM）。结果3757袋血液标本中,HBsAg均阴性;抗-HBs阳性1181袋,占31．43％;HBeAg阳性3袋,抗．HBe阳性6袋;抗．HBc（IgM）阳性218袋,占5．80％;其中抗．HBc（IgM）与抗-HBs双重阳性185袋,单项抗．HBc（IgM）阳性32袋,抗-HBc（IgM）与HBeAg双重阳性1袋,单项抗．HBe阳性5袋。结论采供血机构对献血者HBV血清标志物仅进行HBsAg检测,对于血液质量和安全输血存在隐患。应对献血员进行抗-HBc（IgM）项目筛查,尽可能降低HBV引起的输血风险,减少医疗纠纷。     

Pre-S1抗原在临床及健康体检中的应用价值

目的探讨Pre-S1抗原检测的临床意义。方法采用ELISA方法检测乙肝病毒“两对半”及Pre-S1抗原,HBV-DNA检测运用荧光定量PCR方法。结果在HBsAg阳性的标本中,HBV-DNA检出率为69.3%,而Pre-S1检出率为65.8%;97例Pre-S1阳性而HBeAg阴性的标本,占Pre-S1总阳性病例的27.8%,在HBeAg阴性的病例中HBV-DNA阳性为97例,占HBV DNA总阳性病例的25.5%。在HBsAg阴性组的标本402例中,检出Pre-S1阳性9例。结论Pre-S1抗原与HBV-DNA高度相关;PreS1可替代或补充HBe系统及HBV-DNA的检测,建议纳入从业人员健康体检和献血员筛查的检测项目。     

HBV Pre-S1蛋白与胎儿宫内感染

目的:探讨HBV前S1蛋白与胎儿感染的相关性,为筛查HBsAg阳性孕产妇中可能感染胎儿的高危人群提供参考依据。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心方法、分级定量PCR检测、酶联免疫吸附试验,检测256例HBV携带孕妇及其分娩的256例新生儿静脉血前S1蛋白、HBV DNA及HBV标志物。结果:①256例新生儿中发生HBV感染81例,感染率为31.6%。②前S1蛋白阳性孕产妇所分娩的85例新生儿中,感染率为88.2%(75/85),显著高于前S1蛋白阴性者的3.5%(6/171)(P<0.01)。③在感染的81例新生儿中,有79例其母前S1蛋白阳性(97.5%)(79/81),81例其母HBVDNA阳性,两者差异无统计学意义(P>0.01)。结论:①孕妇单纯HBsAg阳性,其婴儿感染率相对较低,如合并有前S1蛋白阳性或HBV DNA阳性,则胎盘传播率显著上升;②前S1蛋白检测可以代替血HBV DNA检测作为判断胎儿宫内感染的重要依据,可作为筛查HBsAg阳性孕产妇中易发生垂直传播人群的方法。     

Frequency and significance of antibodies against hepatitis B core (anti-HBc) antigen as the only serological marker for hepatitis B infection in Lebanese blood donors

During a 2-year period, blood samples from 2505 Lebanese blood donors were chosen at random, at various periods of time at one blood donation centre (Hotel Dieu de France, Beirut, Lebanon) and were screened for markers of HBV infection (HBsAg, anti-HBc and anti-HBs). The study showed HBsAg positivity of 0.6% and an overall exposure rate to HBV of 10.0%. Out of the 2505 blood donors screened, 56 (22%) were found to be 'anti-HBc alone' positive which is almost four times the HBsAg positivity. The 56 'anti-HBc alone' samples were retested by another ELISA kit commercially available and 54 samples were 'anti-HBc alone' positive by both assays. The 54 samples had no serological markers as evidence of infection with human immunodeficiency virus (HIV) or hepatitis C virus (HCV). Only seven (13%) out of the 54 samples were HBV DNA positive by PCR and all were HBV genotype D. All seven HBV DNA-positive samples had HBV DNA levels below 400 copies/ml. Although any circulating HBV DNA among our 'anti-HBc alone' blood donors was below the detection limit of our Amplicor Monitor assay, some of these samples had circulating virus. A national study, where a larger number of blood donors from different blood donation centres across the country will perhaps determine whether screening for anti-HBc in addition to HBsAg detection is needed in Lebanese blood donors.     

核酸扩增与酶联免疫法联合在血液筛查中的初步应用

目的:在酶联免疫法(enzyme immunoassay,EIA)检测的基础上,探讨HBV核酸扩增检测(nucleicacid amplification testing NAT)技术应用于血液筛查的意义。方法:分别使用两种模式(单检或混检)NAT与EIA两遍检测方式同时进行血液筛查,对NAT阳性标本作进一步做鉴别试验和病毒血清标志物。结果:20925份EIA(-)标本共发现28份核酸三项(HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA)呈反应性,均为HBV-DNA,即EIA两遍检测合格后的HBV-DNA阳性率0.13%,检测其中11份血清,乙肝标志物均呈阳性。结论:EIA阴性献血者中仍有极少数的HBV感染者,核酸扩增检测和酶联免疫检测互补能够检测出EIA漏检的HBV携带者,对提高HBsAg阴性血液标本中HBV感染检出率具有重要价值。     

Relationship between HBV cccDNA expression in the human ovary and vertical transmission of HBV

This study aimed to investigate the relationship between hepatitis B virus (HBV) covalently closed circular DNA (cccDNA) in the ovary and vertical transmission of HBV. HBV DNA and HBV cccDNA were assayed in the ovaries of 33 pregnant women who were positive for HBV DNA. The HBVM (HBV markers, including HBsAg, HBsAb, HBeAg, HBeAb, HBcAb) level and the HBV DNA content in peripheral blood of infants were measured. The overall positive rate of HBV DNA and HBV cccDNA in samples was 51·52% (17/33). The intrauterine infection rate of the infants was 12·12% (4/33). When HBV DNA and HBV cccDNA were both positive, the intrauterine infection rate of infants was significantly higher than when they were both negative (P<0·05). Levels of HBV cccDNA and the rate of positive samples were significantly higher in mothers with infants with intrauterine infection than in those without (P<0·01 and P<0·05, respectively). HBV can infect the human ovary and may transmit to the filial generation via the ovum.     

孕妇感染乙型肝炎病毒的状态与宫内感染关系的研究

目的　探讨孕妇感染乙型肝炎病毒 (HBV)的状态与宫内感染的关系。方法　采用酶联免疫吸附(ELISA)及荧光定量PCR法对产前孕妇进行乙型肝炎两对半免疫学标志联合测定和HBVDNA载量检测 ;新生儿分娩后取脐动脉血检测HBVDNA载量。根据上述检测结果研究孕妇感染HBV的状态与宫内感染的关系。结果乙型肝炎e抗原 (HBeAg)和HBVDNA阳性的孕妇发生宫内感染率分别为4 6 .0 3% ,90 .4 8% ;HBeAg和HBVDNA阴性孕妇为 3.97% ,32 .5 4 % ;两组孕妇宫内感染率和HBVDNA阳性率比较 ,差异均有高度显著性 (P <0 .0 1)。孕妇血清中不同载量HBVDNA与新生儿宫内感染率进行直线回归分析 ,相关系数为 0 .96 73,成正相关。结论　以HBVDNA的载量作为观察指标研究分析孕妇HBV感染状态与宫内垂直传播的关系较免疫学指标HBeAg更加直接可靠 ;孕妇血清HBVDNA载量多是造成宫内感染的主要因素之一。     

原发性肝癌患者乙肝病毒感染模式及其与甲胎蛋白和肝功能的关系

目的 探讨原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma,PHC）患者乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染模式与血清甲胎蛋白（AFP）及肝功能检查的关系.方法 采用化学发光免疫分析和ELISA法及用速率法生化分析分别检测116例PHC患者.进行了甲胎蛋白、乙型肝炎病毒五项标志物及肝功能总胆红素（TBILI）、谷丙转氨酶（ALT）、谷氨酰转肽酶（GGT）及碱性磷酸酶（ALP）血清检测.结果 116例PHC患者HBV总感染率为97.4%（113/116）.HBsAg阴性为8.62%（10/116）.PHC患者HBV血清标志物感染模式,以HBsAg、抗-HBe和抗HBc阳性模式（小三阳）感染类型最多.表明该模式的乙肝患者为原发性肝癌的高危人群.只有3例（2.6%）PHC无HBV感染标记.116例PHC患者AFP测定有29例（25.0%）结果阴性,87例测定结果阳性,阳性率达75.0%.116例PHC患者全部病例均行肝功能检查,原发性肝癌患者肝功能异常者有较高的发生率.肝功能损害各个指标浓度呈不同程度的增高.结论 HBV与PHC之间的关系非常明确,HBV感染不仅是肝癌发生的一个重要的危险因素,而且表明肝癌病人常伴有HBV的复制活跃.提示仍有25.0%PHC患者血清AFP检测结果呈阴性而易被漏诊.约有50%原发性肝癌患者肝功能损害.因此,积极预防和控制HBV感染流行,恰当治疗、保肝和护肝措施,是减少原发性肝癌发生的关键所在.     

Low impact of silent hepatitis B virus infection on the incidence of post-transfusion hepatitis in Venezuela]

OBJECTIVE: Silent infection by hepatitis B virus (HBV) occurs in the absence of serological markers for the virus. This type of occult infection is generally chronic, asymptomatic, and associated with low levels of viral replication. This study determined the presence of HBV DNA in the sera of blood donors who were negative for serological markers that were tested during screening, with the goal of evaluating the impact of silent HBV infection in posttransfusion hepatitis B in Venezuela. METHODS: A total of 2,075 sera were tested in 53 serum pools of 25-50 donations (0.5-1.0 mL from each sample). The pools were subjected to ultracentrifugation prior to DNA extraction by the proteinase K, phenol/chloroform method. RESULTS: No HBV DNA was found in any of the pools by nested polymerase chain reaction, using primers for highly conserved regions of the genes that code for the surface antigen and for the viral capsid. Aminotransferase levels were normal in 98% of 200 sera that were tested. CONCLUSIONS: These results suggest that there is a low risk of acquiring posttransfusion hepatitis B in Venezuela.