蝙蝠葛活性成分对Hela细胞株的抑制增殖作用

[目的]探讨蝙蝠葛活性成分对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株的抑制增殖作用.[方法]应用MTT法检测蝙蝠葛活性成分对体外培养的人宫颈癌Hela细胞株增殖抑制作用及其细胞毒活性;分别采用倒置显微镜、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色观察Hela细胞处理前后的形态学变化;采用流式细胞仪检测Hela细胞株的细胞周期分布相;应用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原Ki-67、细胞周期蛋白CyclinD1及候选抑癌基因Syk的表达情况.[结果]MTT比色法观察结果表明,蝙蝠葛活性成分对人宫颈癌Hela细胞株有明显的抑制增殖作用,且呈现明显的质量浓度和时间依赖性.倒置显微镜、AO/EB染色观察见,蝙蝠葛活性成分处理的Hela细胞出现一系列典型的凋亡细胞特征.流式细胞仪检测结果显示,蝙蝠葛活性成分作用后加药组出现G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期和G2/M期细胞比例则明显下降(P<0.01),将细胞阻滞在G0/G1期;免疫细胞化学观察结果表明,蝙蝠葛活性成分作用后加药组Syk表达增加,Ki-67和CyclinD1蛋白表达降低,与对照组相比较差异均有统计学意义(P<0.01).[结论]蝙蝠葛活性成分对人宫颈癌Hela细胞株有明显的生长抑制作用,并可导致G0/G1期阻滞.G0/G1细胞周期阻滞可能是蝙蝠葛活性成分抗肿瘤作用的机制之一.     

siRNA抑制RASSF1A表达对Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨RASSF1A基因的特异性小干扰RNA(siRNA)对宫颈癌Hela细胞系生长增殖及凋亡的影响。方法采用LipofectamineTM2000介导的脂质体法将特异性siRNA瞬时转染进Hela细胞,半定量RT-PCR检测转染前后RASSF1A mR-NA表达变化,免疫细胞化学法检测RASSF1A蛋白表达水平变化,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 RT-PCR与免疫细胞化学检测结果显示,转染siRNA后RASSF1A基因的表达下降,细胞增殖加快,而细胞凋亡率则显著降低。结论靶向RASSF1A基因的siRNA可有效降低宫颈癌Hela细胞中该基因的表达,用于RASSF1A基因功能研究;RASSF1A基因表达下调促进细胞增殖,同时导致细胞凋亡减少。     

宫颈癌Ki-67及PCNA表达的比较研究

目的研究Ki-67及PCNA两种增殖抗原在宫颈癌组织中的表达特点，了解其表达的相关性。方法采用免疫组化方法（S—P法）对57例宫颈癌（包括原位癌，早期浸润癌及浸润癌）组织切片进行Ki-67及PCNA染色，并对两者进行相关性分析，同时检测9例慢性宫颈炎作为对照研究。结果9例慢性宫颈炎中Ki-67均表达阴性，而PCNA有8例基底细胞阳性；在宫颈癌中PCNA抗原表达强度明显高于Ki-67（P〈0．005）。结论在宫颈癌组织中PCNA抗原表达较强，几乎涵盖了所有Ki-67的增殖信息。     

Livin在原白头翁素衍生物作用于人乳腺癌细胞株中的表达及其意义

目的:观察原白头翁素衍生物(溴甲基呋喃酮)作用于人乳腺癌MCF-7细胞后Livin的表达率的变化及其意义。方法:用体外培养法培养人乳腺癌MCF-7细胞株,采用免疫细胞化学法检测Ki-67抗原和Livin蛋白表达情况。结果:原白头翁素衍生物体外对乳腺癌细胞有抗增殖作用,免疫细胞化学法分析表明原白头翁素衍生物能下调Ki-67抗原和Livin的表达。结论:原白头翁素衍生物对人乳腺癌MCF-7细胞有抑制作用,其机制可能与Livin下调相关。     

水飞蓟宾对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其机制研究

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,Slybin)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抗增殖作用及其机制.方法 MTT法观察水飞蓟宾对细胞增殖的抑制作用,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki-67蛋白的表达,流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态和超微结构的变化.结果水飞蓟宾可明显抑制HepG2的增殖,经水飞蓟宾作用后PCNA及Ki-67的表达显著减弱(P<0.01);水飞蓟宾可使实验组细胞阻滞于G2/M期,并产生明显凋亡(P<0.05);光镜发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染,电镜可见凋亡及凋亡小体.结论水飞蓟宾可通过下调HepG2中PCNA及Ki-67蛋白的表达,改变细胞周期进程,诱导细胞凋亡来发挥其增殖作用.     

Bmi-1 siRNA对宫颈癌Hela细胞体外增殖能力的影响

[目的]观察siRNA沉默Bmi-1表达对Hela细胞增殖能力的影响。[方法]构建了表达Bmi-1 siRNA的重组真核表达载体,将其转染入Hela细胞,利用荧光法观察转染效率。用RT-PCR及Western blot方法检测转染后细胞Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白的表达情况;用MTT比色法、台盼蓝拒染法检测Bmi-1 siRNA对Hela细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期;用平板克隆形成实验检测Bmi-1 siRNA对Hela细胞的单细胞增殖能力的影响;应用免疫细胞化学(SP法)及Western blot法检测各组细胞Ki-67及CyclinD1的表达。[结果]将构建好的重组质粒成功转染进入了Hela细胞中且转染效率在90%左右;Bmi-1 siRNA转染Hela细胞Bmi-1 mRNA及Bmi-1蛋白表达沉默,Bmi-1表达沉默后抑制Hela细胞增殖并使细胞周期阻滞于G0-G1期,能明显抑制Hela细胞的单细胞增殖能力;同时Ki-67及CyclinD1的表达均明显下降。[结论]siRNA介导的Bmi-1基因的表达沉默能抑制Hela细胞的增殖能力,Bmi-1表达可能与宫颈癌的发生发展相关。     

基因Caveolin-1转染对宫颈癌Hela细胞系增殖能力的影响

目的 探讨基因caveolin-1（CAV1）转染对模拟CO2气腹后宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响。方法 筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆后,实时荧光定量PCR鉴定。通过脂质体法将含有全长构建caveolin-1 cDNA真核表达载体转染宫颈癌Hela细胞系,采用流式细胞仪检测细胞周期,MTT法、细胞集落形成实验检测Hela细胞系增值能力变化。结果：转染成功的Hela细胞系caveolin-1基因及蛋白表达明显上升,高表达caveolin-1使细胞阻滞在G0/G1期,增殖指数降低。与对照组相比,转染成功的Hela细胞系增值能力降低,细胞集落形成率降低。结论 过表达caveolin-1基因能够抑制宫颈癌Hela细胞的增值能力。     

宫颈病变中PCNA、Ki-67的表达及其与高危型HPV感染的相关性分析

目的:探讨PCNA、Ki-67在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达意义及与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的关系.方法:收集手术切除的宫颈标本280例,其中,研究组中宫颈癌72例,CIN148例,对照组中慢性宫颈炎60例.应用免疫组化检测宫颈标本中增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67抗原的表达情况,采用PCR技术检测宫颈标本中HR-HPV感染情况.结果:宫颈癌组、CIN组PC-NA表达阳性率明显高于宫颈炎组,且宫颈癌组、CINⅡ～Ⅲ组PCNA阳性率高于CIN Ⅰ组,差异具有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌组、CIN组Ki-67表达阳性率明显高于宫颈炎组,且宫颈癌组、CINⅡ～Ⅲ组Ki-67阳性率高于CINⅠ组,差异具有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌组、CIN组、PCNA、Ki-67过表达情况明显高于宫颈炎组,且CINⅡ～Ⅲ组PCNA、Ki-67过表达率明显高于CINI组,差异具有统计学意义(P＜0.05);PCNA表达强度与HPV感染呈现正相关(r=0.706,P=0.011);Ki-67表达强度与HPV感染呈现正相关(r=0.695,P=0.021).结论:PCNA、Ki-67在早期宫颈癌及不同级别CIN中的表达存在很大差异,不同级别CIN中HPV感染率亦存在较大差异,因此临床上可以通过联合检测HPV、PCNA、Ki-67等指标对早期宫颈癌、CIN进行辅助诊断.     

腹腔镜CO_2气腹对人宫颈癌CaSki细胞体外增殖能力的影响

目的 探讨腹腔镜CO2气腹对人宫颈癌CaSki细胞体外增殖能力的影响.方法 建立腹腔镜CO2气腹体外模型,以不同压力(0、7、14 mmHg)的CO2气腹对人宫颈痛CaSki细胞分别处理不同时间(1、2、3、4 h),设未处理组为对照.采用流式细胞仪检测各组细胞周期分布及增殖指数的变化,采用免疫细胞化学法分别检测处理后各组细胞PCNA 和 Ki-67的表达情况.结果 ①7 mmHg CO2气腹主要增加G2～M期细胞比例,而14 mmHg CO2气腹主要增加S期细胞比例.②caSki细胞的增殖指数与一定的压力和时间成正相关.③CO2气腹在一定的压力和作用时间范围能上调PCNA和Ki-67在CaSki细胞中的表达.结论 CO2气腹可提高人宫颈癌CaSki细胞体外增殖能力,从而实现其促肿瘤细胞生长的生物学效应.     

CO2对人宫颈癌Hela细胞VEGF-C和MMP9表达的影响

目的探讨体外模拟二氧化碳气腹对宫颈恶性肿瘤细胞生长转移能力的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞株,以CO2分别处理1,2,3h后,置于常规培养箱中分别培养24,48,72h,采用实时荧光定量PCR法及免疫细胞化学法检测各组Hela细胞VEGF-C、MMP9 mRNA和蛋白的表达。结果 CO2处理后Hela细胞VEGF-C、MMP9 mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.01);在不同CO2处理时间及培养时间下,VEGF-C、MMP9 mRNA和蛋白的表达均有差异(P<0.01)。结论 CO2环境可促进Hela细胞生长转移因子VEGF-C、MMP9表达增加,从而增强Hela细胞的生长转移能力。     

PCNA,Ki-67,p53蛋白及β-HCG在宫颈鳞癌中的表达及临床病理意义

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA),Ki-67,p53蛋白及β-HCG在宫颈鳞癌中的表达及其临床病理意义.方法:采用免疫组化方法检测不同临床分期、不同病理分级的55例宫颈鳞癌标本中PCNA,Ki-67,p53及β-HCG的表达情况.结果:PCNA,Ki-67,p53蛋白在宫颈鳞癌中的表达率高于慢性宫颈炎,表达差异有统计学意义(P<0.05),在Ⅲ级鳞癌及有淋巴结转移者中的表达率高于Ⅰ级、Ⅱ级鳞癌及无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05);β-HCG在宫颈鳞癌中的表达率高于慢性宫颈炎,在中晚期宫颈癌及有淋巴结转移者中的表达高于早期宫颈癌及无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05).结论:PCNA,Ki-67,p53蛋白的表达率与宫颈癌的病理分级及淋巴结转移有关;β-HCG表达率与宫颈癌的临床分期及淋巴结转移有关;PCNA ,Ki-67, p53,β-HCG与宫颈癌的预后有关.     

siRNA抑制Ki-67表达对乳腺癌MCF-7／ADR细胞阿霉素耐药性的研究

目的采用Ki-67RNA表达载体干扰沉默Ki-67基因,检测其对乳腺癌MCF-7／ADR细胞株耐-67mRNA及蛋白表达的影响,观察沉默艇-67基因前后乳腺癌细胞株对阿霉素敏感性改变。方法体外合成靶向艇-67siRNA表达载体,应用脂质体法瞬时转染尉-67高表达的乳腺癌细胞株MCF-7／ADR,应用RT-PCR和Western印迹法检测转染后Ki-67mRNA及蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖活性及转染前后细胞对阿霉素敏感性的变化。结果Ki-67siRNA载体转染后24h可显著抑制乳腺癌MCF-7／ADR细胞株的Ki-67mRNA和蛋白表达及细胞的增殖活性。Ki-67siRNA组阿霉素IC50值为（6．3±0．9）μg/ml。结论si—Ki-67能够有效抑制Ki-67基因的表达,降低乳腺癌细胞的增殖能力,沉默Ki-67表达能部分逆转阿霉素耐药现象。     

沉默HERC4表达可抑制宫颈癌细胞的增殖、凋亡和迁移

目的 探讨HERC4对宫颈癌细胞生物学功能的影响及其分子机制.方法 设计特异HERC4siRNA干扰序列,Lipofectamine2000法转染Hela细胞,Western blotting检测转染特异siRNA后Hela细胞HERC4蛋白的表达水平;CCK-8法检测转染后Hela细胞的增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后Hela细胞凋亡率的变化;划痕实验检测转染后Hela细胞迁移能力.Western blotting检测转染后Hela细胞CyclinD1、Bcl-2表达变化.结果 转染特异siRNA后Hela细胞HERC4蛋白表达量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组相比,干扰组Hela细胞生长速度明显减慢,细胞凋亡率增加,迁移能力明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).转染后Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P＜0.01).结论 siRNA可有效降低宫颈癌Hela细胞中HERC4的表达,并通过抑制Cyclin D1表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移能力,抑制Bcl-2表达增加细胞凋亡能力.     

Egr-1启动子调控hNIS基因的重组质粒构建及转染细胞株的建立

目的构建早期生长反应基因-1（Egr-1）启动子调控人钠碘转运体（hNIS）基因的重组质粒并稳定转染人宫颈癌细胞株Hela,评价Egr-1启动子对hNIS蛋白功能的辐射诱导作用。方法以Egr-1／pMRl8T为模板PCR扩增Egr-1启动子序列,亚克隆至真核表达载体FL％-hNIS／pcDNA3,构成重组质粒Egr-1-hNIS／pcDNA3,酶切电泳鉴定,通过FuGENEHD转染入Hela细胞,G418筛选抗性克隆,获取单克隆Hela—Egr-1-hNIS。分别采用流式细胞仪、RT．PCR检测Hela-Egr-1-hNIS细胞系中NIS基因和NIS蛋白的表达。动态摄取碘一125实验观察Hela—Egr-1-hNIS细胞和前期研究所得细胞株Hela—NIS（＋）给予不同剂量的x线辐照前后的摄碘功能。未转染的Hela细胞作为阴性对照组。结果成功构建重组质粒Egr-1．hNIS／pcDNA3,转染Hela细胞后获得了稳定表达细胞系Hela—Egr--一hNIS,流式细胞仪测得NIS表达效率为11．2％;RT—PCR检测到Hela—Egr-1-hNIS有NISmRNA的转录,而对照组无NIS蛋白表达。动态摄碘实验提示Hela—Egr-1-hNIS细胞摄碘能力比阴性对照Hela细胞提高了13倍;辐照后摄碘能力增强,在0～6Gy范围内与辐射剂量成正相关（r=0．960,P〈0．05）;而Hela—NIS（＋）组辐照后摄碘功能下降,与辐射剂量无相关性（r=-0．770,P〉0．05）。结论成功构建Egr-1启动子调控的稳定表达hNIS蛋白的Hela-Egr-1-hNIS细胞系,该细胞系具有较强的摄碘功能及辐射诱导作用,有望在体内治疗中获得更好的治疗效果。     

三氧化二砷对人宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及对增殖细胞核抗原（PCNA）和凋亡相关蛋白bcl-2表达的影响。方法MTT法观察生长抑制作用；膜联蛋白V（Annexinv）-异硫氰酸荧光素（FITC）＋碘化丙啶（PI）双参数流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡，FCM测定细胞周期及PCNA、bcl-2表达。结果As2O3可显著抑制Hela细胞生长增殖，且剂量一效应关系显著（r=0.98，P〈0.01），其48h的IC50值为5．59μmol／L。Hela细胞经As2O3处理后可发生凋亡。As2O3能显著下调PCNA表达并使细胞周期阻滞于G3／M期（P〈0.01），但对bcl-2表达无影响（P〉0．05）。结论As2O3在体外可显著抑制人宫颈癌Hela细胞生长并诱导凋亡，其机制可能与细胞周期阻滞及降低PCNA蛋白表达有关。     

丹皮酚对人肝癌Bel-7404的抑瘤效应及其机制

目的：探讨丹皮酚（Paeonol,Pae）抑制人肝癌细胞株Bel-7404增殖作用及其分子机制。方法：应用光学显微镜、MTT法检测经不同浓度、不同时间Poe处理Bel-7404细胞后的增殖抑制作用;DNA凝胶电泳法、TUNEL法检测细胞凋亡;用RT—PCR法、免疫细胞化学ABC法检测抑癌基因PTEN和致癌基因Akt表达水平。结果：与空白对照组比,Pae能抑制人肝癌细胞Bel-7404的增殖,诱导其凋亡,光镜下可见明显的凋亡细胞;DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征;RT—PCR和免疫细胞化学检测显示,Poe处理Bel-7404后可使PTEN表达升高,Akt表达下降。结论：Pae具有抗Bel-7404细胞增殖的作用,其机制可能是通过抑制P13K通路,增强诱导其凋亡有关。     

染料木黄酮增强阿比特龙抑制去势抵抗前列腺癌细胞22RV1效应研究

目的 研究染料木黄酮增强阿比特龙对去势抵抗前列腺癌(CRPC)细胞的影响及其机制.方法 将CRPC细胞株22RV1作为体外细胞模型,染料木黄酮和阿比特龙单独或联合使用时,采用MTT比色法及免疫细胞化学法检测癌细胞的活力及抗原Ki-67表达,反映其增殖情况;通过West-ern blot检测前列腺癌特异性抗原(PSA)、兔抗人增殖细胞核抗原(PCNA)和酶AKR1C3、CYP17A1的表达水平;通过ELISA实验法检测染料木黄酮与阿比特龙联合作用对22RV1细胞裂解液中睾酮水平的影响.结果 MTT检测结果显示,染料木黄酮和阿比特龙单独或联合使用时,在体外对CRPC细胞株22RV1细胞活力具有抑制作用(P<0.05);与单独使用阿比特龙比较,染料木黄酮能增强阿比特龙对22RV1细胞的抑制作用(P＜0.05);免疫细胞化学法检测结果显示染料木黄酮能增强阿比特龙的抗肿瘤效果,减弱抗原Ki-67的表达.但Westenr blot结果显示CYP17A1的表达并未明显减弱,PSA、PCNA和AKR1C3的表达随染料木黄酮浓度的增加逐渐下调.ELISA法检测睾酮水平未明显下降.结论 染料木黄酮可增强阿比特龙在体外对去势抵抗前列腺癌细胞的抑制作用,降低PSA、PCNA和AKR1C3及抗原Ki-67的表达.     

潜在抑癌基因 eIF4 E3对宫颈癌细胞分裂增殖的影响

目的：探讨潜在抑癌基因eIF4E3对宫颈癌细胞分裂增殖能力的影响及其分子机制。方法转染eIF4E3表达质粒至Hela细胞和C33A细胞,用定量PCR和WB鉴定转染效率,用CCK－8、流式细胞术分别检测过表达eIF4E3后对细胞增殖及细胞周期的影响,用平板克隆实验检测细胞克隆形成率,用WB分析细胞周期相关蛋白的表达。结果转染 eIF4E3表达质粒后, Hela 细胞和C33A 细胞的增殖能力显著下降,在48 h 分别下降32.84％和30.42％（P＜0.05）;平板克隆形成率分别下降39.99％和21.42％（P＜0.05）; G2／M期细胞比率分别下降55.33％和54.79％（ P＜0.05）;PCNA蛋白和cyclin B蛋白水平显著下调,而cyclin A1和P27蛋白水平无明显改变。结论 eIF4E3通过下调cyclin B1蛋白表达,抑制细胞周期G2／M期,从而抑制宫颈癌细胞的分裂增殖及克隆形成能力。本发现为进一步研究和阐明eIF4E3是否宫颈癌的抑癌基因打下了坚实基础,为宫颈癌预防和诊治靶点的研究提供了重要线索。     

17-β雌二醇对宫颈癌Hela细胞环氧合酶-2和增殖细胞核抗原表达的影响

目的:探讨17-β雌二醇(E2)对宫颈癌Hela细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和增殖细胞核抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法:Hela细胞分别用0.1%乙醇(对照组)、E2(E2组)、E2+依托昔布(E2+依托昔布组)作用24 h后,采用免疫细胞化学、Western blot及RT-PCR方法检测COX-2和PCNA的表达。结果:E2组COX-2和PCNA蛋白及mRNA水平较对照组明显升高(P0.01);而E2+依托昔布组PCNA水平较E2组显著降低(P0.01),但依然高于对照组。结论:E2可促进Hela细胞COX-2表达,并进一步上调PCNA水平。     

以Celecoxib为基础的联合方案对宫颈癌细胞抑制作用的研究

目的:探讨环氧化酶-2(cox-2)抑制剂Celecoxib与化疗药顺铂(DDP)联合应用对人宫颈癌Hela细胞的作用及机制。方法:用免疫细胞化学SP法检测Hela细胞cox-2蛋白表达后,将Celecoxib、DDP单独或联合处理Hela细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果:Celecoxib可下调Hela细胞cox-2蛋白表达,抑制其增殖作用呈浓度和时间依赖性。在一定浓度范围内DDP也抑制Hela细胞生长,作用呈量效关系。Celecoxib与DDP联合应用后抗增殖作用较单一用药显著增强(P<0.05),DDP浓度≥1 mg/L时两者有协同或相加作用。Celecoxib及DDP均可有效诱导Hela细胞凋亡,联用凋亡率明显增加并出现G0-G1期细胞阻滞。结论:Celecoxib与DDP联用可通过抑制增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞对Hela细胞有协同抗肿瘤效应,提示两者联合可能在宫颈癌临床治疗上具有潜在价值。