武汉社区腹泻病人粪便中致病菌的构成与耐药性研究

目的了解夏秋季武汉社区引起腹泻病原菌的流行性及耐药状况。方法收集2004年7月1日至10月31日武汉社区4所大型医院4536份门诊腹泻病人粪便标本进行鉴定及药敏试验;REP-PCR对主要致病菌进行基因分型。结果4536份粪便标本中,分离出非伤寒沙门菌64株（1.4%）,志贺菌29株（0.6%）,致病性大肠杆菌33株（0.7%）。其中主要致病菌是鼠伤寒沙门菌33株（52%）,D群志贺菌16株（55%）。挑选13种抗菌药物进行体外敏感试验,并将分离的致病菌对这13种抗生素的耐药率﹑敏感率﹑中介率进行比较,其中非伤寒沙门菌对喹诺酮类的耐药率较其他两种要高,但对第三代头孢的敏感性较强。分离的3种致病菌在第三代头孢抗生素的作用中对头孢他啶的敏感性最强。32株鼠伤寒沙门菌基因分型为9种,16株D群志贺菌基因分型为7种。结论武汉社区内感染性腹泻的致病菌主要以非伤寒沙门菌﹑致病性大肠杆菌和志贺菌为主,其中非伤寒沙门菌占了51%,基因分型提示有社区流行趋势,而且这些致病菌对肠道杆菌常用抗生素的耐药性较为严重。本次调查结果对该社区临床用药起到一定的提示作用。     

北京大型社区成人感染性腹泻肠道致病菌监测与耐药性分析

目的了解北京大型社区成人感染性腹泻的致病菌与耐药性,为肠道传染病防控和临床合理使用抗菌药提供依据。方法回顾性分析北京某大型社区2015年至2018年连续4年的4月至10月期间1847例成人肠道门诊腹泻的肠道致病菌和药敏数据。Vitek2 Compact全自动微生物鉴定药敏分析系统进行细菌鉴定,凝集试验进行血清分型,K.B纸片扩散法测定抗菌药物敏感性。结果2015年至2018年肠道致病菌检出率约12.3%,前4位的致病菌分别为副溶血弧菌(51.5%)、沙门菌属(16.3%)、气单胞菌属(11.4%)和类志贺邻单胞菌(7.0%)。肠道致病菌主要检出于7月和8月两个月,沙门菌属易高发于5月。副溶血弧菌、气单胞菌属对氨苄西林耐药率高外,对其他抗菌药均较敏感。但沙门菌属的耐药性偏高,环丙沙星敏感率为62.2%,头孢曲松耐药率10.8%。结论本地区感染性腹泻患者的致病菌主要为副溶血弧菌,而沙门菌属耐药性高,应加强感染性腹泻肠道病原菌及耐药性的监测,指导传染病防控和临床治疗。     

A型肉毒神经毒素基因的PCR检测及A型肉毒梭菌的鉴定

建立快速诊断及定型神经毒素对肉毒中毒的治疗、降低死亡率具有十分重要的意义。用一对Ａ型肉毒梭菌特异的寡核苷酸引物，扩增Ａ型肉毒神经毒素基因轻链区域一段４７２ｂｐ的ＤＮＡ片段，对梭状芽胞杆菌属的１０种６８株菌进行了鉴定，并对ＰＣＲ检测Ａ型肉毒神经毒素基因的灵敏度进行了检查。结果表明，所有２０株Ａ型肉毒梭菌ＰＣＲ扩增均为阳性，其余各型肉毒梭菌及其它各种梭菌均为阴性。扩增产物经限制性内切酶分析与预期的酶切片段一致。用溴化乙锭对扩增产物染色，可从３×１０３个细菌中检测出Ａ型肉毒神经毒素基因。用酚－氯仿抽提Ａ型肉毒梭菌全菌体ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，可从１０ｐｇ的ＤＮＡ中得到清晰的扩增产物。由此可见，该ＰＣＲ扩增系统用于Ａ型肉毒神经毒素基因的检测具有灵敏度高，特异性强等特点，为Ａ型肉毒梭菌的鉴定及肉毒中毒的快速诊断提供了一种新的手段。     

B型肉毒神经毒素基因的PCR检测

本研究用一对Ｂ型肉毒神经毒素基因特异的寡核苷酸引物，扩增Ｂ型基因轻链区域一段２５３ｂｐ的ＤＮＡ片段，对２２株Ｂ型肉毒梭菌进行了鉴定，所试２２株Ｂ型肉毒梭菌其ＰＣＲ均为阳性。用Ｂ型肉毒梭菌ＣＭＣＣ（Ｂ）６４３５２对ＰＣＲ的检测灵敏度进行检查，可从６０个细菌中得到明显的扩增产物。用其它各型肉毒梭菌及其它梭状芽胞杆菌共５３株对ＰＣＲ的特异性进行了检测，除一株Ａ型肉毒梭菌（ＬＣＬ００１）ＰＣＲ为阳性外，其余菌株均为阴性。ＬＣＬ００１的扩增产物其分子量以及限制性内切酶消化产物和Ｂ型肉毒梭菌的扩增产物完全一致，认为该株菌中带有不表达的Ｂ型肉毒神经毒素基因，应为Ａ（Ｂ）型。由此可见，该ＰＣＲ扩增系统不仅具有灵敏度高，特异性强等特点，而且可检测出不表达的Ｂ型肉毒神经毒素基因，用于肉毒梭菌的鉴定具有其它方法不可比拟的优点。     

B组轮状病毒ADRV与RDRV主要基因的克隆及其相关？…

对２株ＰＡＧＥ图型相似的Ｂ组轮状病毒－成人腹泻轮状病毒（ａｄｕｌｔｄａｒｒｈｅａｒｏｔａｖｉｒｕｓ,ＡＤＲＶ）和大白鼠服腹泻轮状病毒（ｒａｔｄｉａｒｒｈｅａｒｏｔａｖｉｒｕｓ,ＲＤＲＶ）主要基因的相关性进行研究。方法ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＡＤＲＶ第４、５、９三个基因的ｃＤＮＡ全长拷贝,并获其ｃＤＮＡ克隆。用ＡＤＲＶ第９基因末端引物ＲＴ－ＰＣＲ成功扩增了ＲＤＲＶｄｓＲＮＡ,获得相对分子质量与ＡＤＲＶ第９基     

抗人膀胱癌噬菌体单链抗体的初步制备

应用ＰＣＲ方法，从杂交瘤细胞中扩增鼠抗人膀胱癌抗体重、轻链可变区基因，经ＤＮＡ接头连接后与噬菌粒ｐＣＡＮＴＡＢ５重组，转化大肠杆菌后制备噬菌体抗体文库，通过亲和筛选、再转染、克隆化及鉴定，得到高亲和力抗人膀胱癌噬菌体单链抗体。     

云南拉祜族人HLA-DQA1基因分型

本文应用序列特异引物ＰＣＲ (ＰＣＲ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒ,ＰＣＲ ＳＳＰ )技术对云南拉祜族人ＨＬＡ ＤＱＡ1进行基因分型 ,以期为人类学及疾病关联研究积累基础资料。1　材料和方法1 1　研究对象及ＤＮＡ制备　随机选取云南三代均为拉祜族的无亲缘关系健康人 110例 ,静脉血ＤＮＡ提取按经典的酚 /氯仿法进行。1 2　引物　按文献合成序列特异引物[1] 和内对照引物[2 ] 。9个 5’引物和 7个 3’引物共组成 12对引物 ,能扩增 10个有表达产物的ＨＬＡ ＤＱＡ1等位基因。1 3　ＨＬＡ ＤＱＡ1基因特异性扩增及检测　…     

北京地区多重耐药的腹泻病原菌的构成及耐药特点

目的 感染性腹泻是全球性的公共卫生问题，三代头孢菌素(third-generation cephalosporins, TGCs)是严重腹泻患者的首选治疗，监测医院与腹泻有关耐TGCs的腹泻病原菌的增长趋势和耐药特点，为本地区的流行病学研究及临床合理用药提供依据。方法 收集北京地区的传染病医院2011～2020年腹泻患者大便标本进行培养，筛选致病菌经生化及血清学进一步鉴定到种或群，并以纸片扩散法测定抗菌药物的敏感性；分析耐TGCs的腹泻病原菌的特点。结果 10年间共分离出沙门菌、志贺菌、气单胞菌、类志贺毗邻单胞菌、大肠埃希菌和弧菌等腹泻病原菌2 111株，其中268株耐TGCs,占整个肠道致病菌的12.70%,产生率由2011年的2.71%上升至2020年的29.29%,以致泻大肠埃希菌(39.57%)和气单胞菌(21.55%)最高，对四代头孢菌素、氟喹诺酮类、氯霉素、复方新诺明的耐药率在29%～83%,对磷霉素的耐药率最低8.27%。耐TGCs常表现多重耐药，同时耐喹诺酮类、氯霉素、复方新诺明3类抗生素为主。结论 耐TGCs的腹泻病原菌上升迅速，耐药广泛，不同种属的耐药性不同，应加强...     

PCR与单克隆抗体ELISA夹心法快速诊断结核病的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经ＥＬＩＳＡ夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，对１０种抗酸杆菌，２种普通菌进行了检测。ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＥＬＩＳＡ检测除人型结核杆菌、ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性为１ｐｇ，相当于１３个左右细菌，ＥＬＩＳ     

肠产志贺样毒素的大肠杆菌菌株中小肠结肠炎耶 …

目的 了解肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠杆菌（ＥＳＩＥＣ）菌株中吉肠耻尔森菌ＨＰＩ和岛基因ｉｒｐ－２的存在情况。方法 使用菌落原位杂交、ＤＮＡ打点杂交和ＰＣＲ扩增方法。结果 用菌落原位杂交的方法发现在检测从各地收集原３７１株ＥＳＩＥＣ菌株中，６７株和ｉｒｐ－２基因探针杂交，占１８．０６％。在这６７株菌种中，６４株菌可使用ＰＣＲ方法扩增出ｉｒｐ－２基因，占９５．５％。鉴于在一部分肠侵袭性大肠杜菌（Ｅ