蜗牛多肽混合物抗过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤的作用

目的观察蜗牛多肽混合物对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的抑制作用及其可能机制。方法用H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤,MTT法测定细胞存活率;39～1250 mg·L-1蜗牛多肽混合物处理后,Hoechst染色检测细胞凋亡;罗丹明123染色检测线粒体通透性;细胞免疫化学技术和Western blot技术分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果 1.54 mmol·L-1H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡。用39～156 mg·L-1浓度的蜗牛多肽混合物处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡数量明显减少,同时可减少H2O2引起的线粒体通透性增加,升高PCNA与BDNF的表达(P﹤0.01)。结论蜗牛多肽混合物可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA与BDNF的表达有关。     

黄芩苷对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其对Trx表达的影响

目的探讨黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用体外培养细胞的方法,建立SH-SY5Y细胞H2O2损伤模型。分设药物组(50,100,200μmol/L)、H2O2损伤组、阴性对照组。采用MTT法检测细胞活力,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞的Trx表达的变化。结果同H2O2损伤组比较,黄芩苷能明显减轻H2O2引起的SH-SY5Y细胞的损伤,同时Trx表达升高。结论黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是黄芩苷通过上调Trx表达,起到抗氧化作用,继而起到抗凋亡的作用。     

海康灵各组分抗神经细胞损伤有效部位和有效剂量的研究

目的:通过比较海康灵复方中单味药对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用,筛选更为理想的量效关系。方法:采用体外细胞培养的方法,复制神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞H2O2损伤模型。通过MTT法测定细胞存活率,检测海康灵复方中单味药与复方对SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。结果:根据最佳有效剂量组建的海康灵新复方(浓度为0.159g.mL-1)同单味药与原复方比较,能减轻H2O2引起的SH-SY5Y细胞的损伤,明显提高细胞的存活率。结论:海康灵新复方对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有明显的保护作用。     

红花甙对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡保护作用的实验研究

目的研究红花甙(carthamin)对过氧化氢(H2O2)诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞(SH-SY5Y cells)凋亡的影响,并探讨其机制。方法实验分为空白对照组、H2O2损伤组及红花甙高、中、低剂量组。用H2O2作用于SH-SY5Y细胞,使其发生凋亡。MTT法检测SH-SY5Y细胞活性,比色法测丙二醛(MDA)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与损伤组比较,随着红花甙剂量的增加,SH-SY5Y细胞存活率提高(P<0.01),MDA生成量减少(P<0.01),凋亡率下降(P<0.05)。结论红花甙对H2O2诱导SH-SY5Y细胞凋亡有保护作用,与红花甙能抗氧化、降低细胞凋亡有关。     

莫诺苷抑制过氧化氢诱导的神经细胞损伤作用

目的研究从中药山茱萸提取的有效成分莫诺苷抑制过氧化氢(H2O2)诱导的神经细胞氧化损伤作用。方法培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入莫诺苷1、10、100μmol/L预孵育24h,加入H2O2300μmol/L作用18h诱导产生氧化损伤,测定细胞内细胞色素C及脑源性神经生长因子(BDNF)的含量。结果莫诺苷1、10、100μmol/L使细胞色素C的释放显著降低18%(P<0.05)、28%(P<0.05)、35%(P<0.01);BDNF(10、100mol/L)的释放增加(P<0.01)。结论莫诺苷的神经保护作用是通过抑制细胞色素C的释放,抑制神经细胞凋亡,并能促进神经细胞增加神经营养因子的释放,进而促进神经细胞的再生,抑制神经细胞氧化损伤。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对过氧化氢(H2O2)诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡的保护作用。方法采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。通过观察细胞形态,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,实时荧光定量(real-time)PCR检测细胞bax、bcl-2 mRNA表达的变化。结果同H2O2组比较,终浓度为50、100、150、200μmol.L-1的EGCG能减轻H2O2引起的SH-SY5Y神经细胞的损伤,且呈现剂量依赖趋势,能明显提高细胞的存活率,减少LDH的释放量,bax mR-NA表达下降,bcl-2 mRNA表达升高。结论 EGCG对H2O2诱导的SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用。     

PTD-SOD对Na2S2O4诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护和修复作用研究

目的研究PTD-SOD对Na2S2O4诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护和修复作用。方法建立Na2S2O4诱导的SH-SY5Y细胞缺氧损伤模型,采用MTT法检测融合蛋白PTD-SOD对细胞存活率的影响,LDH释放分析检测PTD-SOD对细胞损伤后的保护作用及损伤后细胞内氧化与抗氧化水平的变化。结果对Na2S2O4诱导的SH-SY5Y细胞缺氧损伤,MTT活性检测、LDH分析及氧化与抗氧化水平分析都表明PTD-SOD能明显提高细胞存活率和细胞内抗氧化能力。结论PTD-SOD融合蛋白能保护Na2S2O4诱导缺氧损伤的SH-SY5Y细胞,具有抑制细胞死亡,改善损伤细胞内抗氧化能力。     

黄芩苷通过上调SIRT1保护SH-SY_5Y氧化应激的损伤

观察黄芩苷(baicalin,BL)对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用,并初步探讨SIRT1是否是其发挥作用的靶点及其可能机制。培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入黄芩苷(25、50及100μmol·L-1)预孵育12 h,加入H2O2(150μmol·L-1)作用24 h诱导产生氧化损伤,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、一氧化氮(NO)含量;并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及应用免疫荧光组化法检测Caspase-3的活性、RT-PCR检测SIRT1水平。结果表明,与H2O2模型组比较,黄芩苷(50和100μmol·L-1)组的细胞存活率增高(P<0.05、P<0.01),而LDH、NO的释放量及细胞凋亡数(P<0.05、P<0.01)、Caspase-3的表达量均减少;SIRT1 mRNA表达明显(P<0.05、P<0.01)。黄芩苷对H2O2损伤的SY5Y细胞具有保护作用,可减轻神经细胞的损伤、抑制细胞的凋亡,其作用机制可能是通过上调SIRT1水平而抑制Caspase-3表达实现的。     

20-羟基蜕皮甾酮对H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

本文旨在研究一种类固醇激素即20-羟基蜕皮甾酮对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其作用机制。预孵育20-羟基蜕皮甾酮可以明显提高H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的生存率,减少乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,抑制脂质过氧化水平（MDA）升高,提高超氧化物歧化酶（SOD）活性。此外,20-羟基蜕皮甾酮可以通过降低Bax/Bcl-2的比值,延缓caspase-3的活化来抑制H2O2诱导的细胞凋亡。本研究表明20-羟基蜕皮甾酮对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞具有保护作用,有可能用于由氧化应激和凋亡导致的神经退行性疾病的治疗。     

黄腐醇对SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护机制研究

摘要：目的:研究黄腐醇体外缓解过氧化氢（H2O2）诱导SH-SY5Y细胞死亡的抗氧化损伤机制。方法:体外培养SH-SY5Y细胞,采用MTT法分别研究不同浓度的黄腐醇对SH-SY5Y细胞的毒性作用和对H2O2诱导细胞损伤的保护作用;采用流式细胞仪和显微成像实验检测黄腐醇对细胞内活性氧（ROS）水平的影响;采用免疫荧光实验检测黄腐醇对核因子E2相关因子2（Nrf2）核转位的影响及用Western Blot分析黄腐醇对抗氧化蛋白血红素加氧酶-1（HO-1）和谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（GCLC）的影响。结果:黄腐醇浓度≤0.5μmol·L-1时对SH-SY5Y细胞无毒性作用,黄腐醇对H2O2诱导的细胞损伤具有浓度依赖性保护作用（P<0.05或P<0.01）;同时黄腐醇能降低H2O2诱导的细胞内ROS水平和促进Nrf2核转位（P<0.05）及浓度依赖性地提高HO-1和GCLC蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:黄腐醇具有一定的细胞保护作用,其通过激活Nrf2通路缓解H2O2诱导SH-SY5Y细胞的氧化损伤。     

黄芩苷通过硫氧还原蛋白介导对SH-SY5Y细胞保护作用

目的 研究黄芩苷对过氧化氢(H₂O₂)损伤后的成人神经细胞瘤细胞母细胞SH-SY5Y细胞的影响,进一步探讨黄芩苷保护SH-SY5Y细胞的作用机制. 方法 不同浓度黄芩苷预先处理正常培养的SH-SY5Y细胞24 h,200 μmol.L^-1 H₂O₂损伤上述SH-SY5Y细胞24 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测各实验组细胞的硫氧还原蛋白(Trx)mRNA的表达;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测各实验组细胞的Trx 蛋白的表达. 结果 黄芩苷在50～300 μmol.L^-1浓度范围内对SH-SY5Y细胞无细胞毒作用,0,50,100和200 μmol.L^-1黄芩苷组SH-SY5Y细胞存活率分别为(0.410±0.096),(1.304±0.101),(0.899±0.089)和(0.609±0.023),50,100和200 μmol.L^-1均明显高于H₂O₂ 损伤组(0.339±0.073)的存活率,正常组,H2O2损伤组,50 ,100和200 μmol.L^-1黄芩苷组Trx mRNA的表达水平分别为(1.023±0.014),(0.021±0.004),(0.054±0.005),(0.071±0.013)和(0.042±0.004);正常组Trx蛋白表达水平为(26.230±0.857),H₂O₂损伤组为(19.230±0.982),50,100和200 μmol.L^-1黄芩苷组Trx蛋白表达水平分别为(22.440±0.888),(23.020±1.070),(22.330±1.067). 结论 黄芩苷对H₂O₂损伤后的SH-SY5Y细胞有保护作用,其作用机制可能与黄芩苷抑制H2O2诱导的Trx表达下调作用有关,起到抗氧化应激及抗细胞凋亡的作用.     

醒脑静注射液对Aβ蛋白诱导的阿尔茨海默病细胞模型自噬相关蛋白表达水平影响的初探

目的探讨醒脑静注射液对Aβ诱导的阿尔茨海默病(AD)细胞模型自噬水平的影响。方法以不同浓度醒脑静注射液预处理SH-SY5Y细胞,再以Aβ诱导SH-SY5Y细胞产生AD样损伤,以MTT法检测不同分组细胞存活率,并以Western blot法检测LC3、p62的表达。以不同浓度醒脑静注射液对SHSY5Y细胞进行预处理,再以雷帕霉素诱导SH-SY5Y细胞产生细胞毒性损伤,以MTT法检测不同分组细胞存活率。结果经醒脑静注射液预处理,细胞LC3-Ⅱ的表达水平下降,LC3-Ⅰ升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ下降(P<0.05),p62的表达水平增加(P<0.05)。在含雷帕霉素(100μmol·L-1)的培养基条件下,以醒脑静注射液预处理细胞,细胞的存活率明显增加(P<0.05)。结论低浓度醒脑静注射液可以拮抗Aβ蛋白对SH-SY5Y神经细胞的毒性作用,该作用可能是通过调节SH-SY5Y神经细胞的自噬水平来实现的。     

类叶升麻苷抗鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤机制的研究

目的研究类叶升麻苷抗鱼藤酮致多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞损伤,对帕金森病相关蛋白Parkin、α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)表达的影响,探讨类叶升麻苷抗细胞损伤的分子机制。方法化学比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,蛋白质印迹法(Western blot)检测Parkin、α-Syn的表达,免疫荧光法检测SH-SY5Y细胞α-Syn分布。结果①类叶升麻苷(10,20或40mg.L-1)可明显降低鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放;②0.5μmol.L-1的鱼藤酮处理SH-SY5Y细胞48h能引起Parkin蛋白的明显降解及α-Syn蛋白二聚体增加;③预先用类叶升麻苷(10,20或40mg.L-1)处理细胞,能够有效减少鱼藤酮诱导的Parkin蛋白的降解,呈浓度依赖性;并能够抑制鱼藤酮诱导的α-Syn蛋白二聚体增加及α-Syn阳性细胞数增加。结论类叶升麻苷对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤具有神经保护作用,其作用机制可能与减少Parkin蛋白的降解和抑制α-Syn蛋白的二聚体形成有关。     

红景天苷衍生物S01对谷氨酸及缺氧缺糖所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的探讨红景天苷衍生物S01(3′,4′,5′-三甲氧基苄基-1-硫代-β-D-吡喃葡萄糖苷)对神经细胞的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法用不同浓度S01(2,10和50mg.L-1)预处理SH-SY5Y细胞,12h后用谷氨酸或连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导SH-SY5Y细胞损伤,用MTT法检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,荧光探针负载法检测细胞内活性氧(ROS)水平和细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),化学发光法检测细胞中腺苷三磷酸(ATP)水平。结果在谷氨酸所致SH-SY5Y细胞损伤模型中,与对照组比较,模型组细胞存活率、SOD活性和ATP水平降低,LDH释放、MDA含量和细胞内ROS水平增加。与模型组比较,S01(2,10和50mg.L-1)可提高细胞存活率,减少谷氨酸引起的LDH释放,拮抗谷氨酸引起的SOD活性和ATP水平降低,并拮抗MDA和ROS水平升高。在Na2S2O4所致SH-SY5Y细胞缺氧缺糖损伤模型中,与对照组比较,模型组细胞存活率下降,LDH释放增多,细胞[Ca2+]i升高。与模型组比较,S01(2,10和50mg.L-1)可提高细胞存活率,减少缺氧缺糖引起的LDH释放和细胞内钙超载。结论S01对谷氨酸和缺氧缺糖所致神经细胞损伤具有保护作用,提示S01可能对脑缺血具有治疗作用。     

西红花苷对缺氧复氧损伤的SH-SY5Y细胞线粒体动力学的影响

目的探讨西红花苷对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)线粒体的保护作用及可能的机制。方法 SH-SY5Y细胞OGD损伤同时给予药物,4 h后复氧2 h,测定线粒体膜电位、胞内钙离子浓度;免疫荧光、免疫印迹法检测细胞线粒体Drp1、Opa1、Mfn1、Mfn2含量变化。结果 SH-SY5Y细胞缺氧后线粒体膜电位明显降低,胞内钙离子浓度升高;西红花苷明显提高OGD损伤引起的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位,降低胞内钙离子浓度,抑制Drp1表达量,上调Opa1表达量。结论西红花苷对OGD损伤的SH-SY5Y细胞具有明显的保护作用,恢复其线粒体功能,起保护作用机制可能与抑制线粒体分裂融合异常有关。     

基于CREB通路研究3,6’-二芥子酰基蔗糖的神经保护分子机制

目的 3,6’-二芥子酰基蔗糖(DISS)是远志中的寡糖酯类成分,通过研究DISS对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的增殖作用和对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路的影响,探究其发挥神经保护作用的分子机制。方法采用四甲基噻唑蓝(MTT)法测定SH-SY5Y细胞生长曲线,筛选最佳种板密度和给药时间,并检测不同浓度DISS对细胞增殖的影响;采用Western blotting法检测细胞给予DISS后不同时间点CREB、磷酸化CREB(p-CREB)和脑源性神经生长因子(BDNF)的表达水平;给予调节CREB活性的相关上游通路拮抗剂U0126(MEK拮抗剂)、H89(PKA拮抗剂)、KN93(CaMK拮抗剂)拮抗CREB上游通路,并给予DISS保护,用Western blotting法检测DISS对拮抗前后细胞内CREB,p-CREB,BDNF蛋白表达的影响。结果 SH-SY5Y最佳中板密度为2×108L-1,DISS(60μmol·L-1,30μmol·L-1)对SH-SY5Y细胞具有明显的促增殖作用(P<0.05);与正常细胞相比,DISS给药15 min时可显著增加细胞内p-CREB,BDNF的表达(P<0.05);DISS可明显增加拮抗后SH-SY5Y细胞内CREB,p-CREB,BDNF的表达水平(P<0.05)。结论 DISS可以调节CREB活性并促进下游BDNF等相关因子的表达,其神经保护作用的机制可能与活化Ca2+/CaM/CaMK-CREB-BDNF信号通路有关。     

红景天苷减轻叠氮钠诱导线粒体损伤的作用

目的观察红景天苷对呼吸链复合体IV抑制剂叠氮钠(NaN₃)诱导的线粒体损伤的保护作用，探讨其在防治神经退行性疾病中可能的作用机制。方法将叠氮钠与人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y共同孵育，MTT法测定细胞存活力，JC-1法检测线粒体膜电位变化。刃天青法检测大鼠脑线粒体功能。结果64 mmol·L^-1叠氮钠与SH-SY5Y共同孵育4 h后，细胞存活率明显下降，线粒体膜电位下降。预先加入红景天苷能明显提高细胞存活率，维持线粒体膜电位。650 μmol·L^-1叠氮钠能使大鼠脑线粒体功能下降，预先加入红景天苷能明显改善线粒体功能。结论红景天苷能够减轻叠氮钠(NaN₃)诱导的线粒体损伤，能够改善线粒体功能，这可能是其抗老年痴呆的机制之一。     

沉默Fis1基因对METH诱导体外培养SH-SY5Y细胞增殖能力、线粒体膜电位和超微结构的影响

目的评估线粒体分裂蛋白1(Fis1)在甲基苯丙胺(METH)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)损伤中的作用。方法采用成组设计方法,将体外培养SH-SY5Y细胞分为不同组别:未沉默组、沉默阴性组和沉默组,不同浓度的METH诱导各组SH-SY5Y细胞24 h。利用Western blot检测Fis1蛋白表达水平,使用CCK-8细胞毒性增殖实验分析METH对SH-SY5Y细胞增殖能力的影响,利用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测METH对SH-SY5Y细胞MMP水平的影响,使用透射电镜观察METH对SH-SY5Y细胞线粒体超微结构的影响。结果未沉默组、沉默阴性组和沉默组中,与对照组比较,各组组内随METH诱导SH-SY5Y细胞的浓度升高,Fis1蛋白表达水平升高(P<0.05)、增殖能力减弱(P<0.05)、MMP水平降低(P<0.05);与未沉默组和沉默阴性组相同浓度比较,沉默组SH-SY5Y细胞Fis1蛋白表达水平降低(P <0. 05),增殖能力增强(P <0. 05),MMP水平升高(P <0. 05)。组内与对照组比较,2. 0mmol·L~(-1)METH诱导未沉默组、沉默阴性组和沉默组,透射电镜观察见线粒体小球状结构增多(P <0. 01)。结论 Fis1可能在METH诱导体外培养SH-SY5Y细胞损伤中起关键作用。     

13-甲基十四烷酸对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的：探讨13-甲基十四烷酸（13-MTD）对过氧化氢（H2O2）诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的影响。方法：采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。光镜观察细胞形态,SRB法检测细胞存活率,AO/EB双重染色法检测细胞凋亡,MTT法检测线粒体活性。结果：与正常对照组相比,H2O2损伤模型组细胞出现明显病理改变,细胞存活率、线粒体活性均显著下降（P〈0.01）,细胞凋亡率显著升高（P〈0.01）;13-MTD10、20、40μg/mL可显著提高细胞存活率（P〈0.01）;13-MTD5、10、20μg/mL可显著下调细胞凋亡率（P〈0.01）;13-MTD5、10、20、40μg/mL可显著提高细胞MTT代谢率（P〈0.01）;且存在一定量效差异（P〈0.05,P〈0.01）。结论：不同剂量的13-MTD对H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化损伤具有保护作用。     

低浓度利福平对鱼藤酮介导的帕金森病细胞模型SH-SY5Y细胞的保护作用

目的 探讨低浓度利福平对鱼藤酮诱导的人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)细胞的影响.方法 鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型,光学显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率,RT-PCR法检测α-突触核蛋白mRNA.结果 经利福平1、10、100 nmol/L预处理后,三个利福平组细胞ROS含量、α-突触核蛋白mRNA以及细胞凋亡率均低于鱼藤酮损伤组(P＜0.01).结论 利福平具有抗氧化作用,能降低细胞α-突触核蛋白mRNA水平,并对细胞有保护作用.