榄香烯抑制脑胶质瘤细胞增殖的比较研究

目的比较研究榄香烯对胶质瘤细胞和正常神经胶质细胞的不同作用效果。方法采用噻唑蓝(MTT)方法检测榄香烯体外抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖的有效浓度；原代培养SD大鼠星形胶质细胞，比较观察不同浓度榄香烯对于C6胶质瘤细胞和原代星形胶质细胞的作用效果差异。结果榄香烯能显著抑制C6细胞增殖，IC50为19．73～39．75mg／L。体外比较观察，榄香烯作用浓度在80～100mg／L以内，不会引起正常星形胶质细胞的死亡和形态学的改变。然而。当药物浓度达30-40mg／L，C6胶质瘤细胞大部分发生了脱壁和死亡。结论榄香烯的抗肿瘤增殖作用具有一定的特异性。     

少突胶质前体细胞体外增殖与分化的实验研究

目的探讨体外条件下少突胶质前体细胞的增殖与分化特性。方法新生Sprague-Dawley（SD）大鼠取大脑皮层细胞行原代培养,第9～10天时分离少突胶质前体细胞,继续在化学条件培养基内生长。通过光、电镜及免疫化学技术研究少突胶质前体细胞的生长、分化情况,采用MTT法检测少突胶质前体细胞的增殖能力。结果原代培养第9～10天时混合胶质细胞出现明显的细胞分层,少突胶质前体细胞散布于星形胶质细胞表面。分离的少突胶质前体细胞呈Oligo2、PDGFR-α阳性,能进一步分化为成熟少突胶质细胞且表达MBP。MTT法检测显示少突胶质前体细胞在体外保持良好的增殖能力。结论少突胶质前体细胞在体外条件下继续保持定向分化及增殖生长的能力。     

脑胶质瘤复发的相关因素分析

<正>脑胶质瘤是由神经外胚层衍化而来的胶质细胞即星形胶质细胞、少枝胶质细胞和室管膜胶质细胞等发生的肿瘤,是颅内肿瘤中最常见的一种,占颅内肿瘤的35.26%～60.96%。胶质瘤在青壮年人群     

中药黄芪对脊髓星形胶质细胞单核细胞趋化蛋白-1分泌的影响

目的 :研究黄芪对体外培养的脊髓星形胶质细胞趋化蛋白 1(MCP 1)分泌的影响。方法 :自Wistar大鼠脊髓组织分离、纯化星形胶质细胞 ,体外培养 ,分别予以TNF α及TNF α 黄芪处理 ,ELISA方法检测培养上清液中MCP 1的表达。结果 :TNF α可以显著刺激星形胶质细胞合成、释放MCP 1,而黄芪可下调其刺激作用。结论 :受炎症因子刺激活化的星形胶质细胞可能是损伤脊髓局部MCP 1的来源之一 ,黄芪可以减少脊髓损伤后内源性MCP 1的产生 ,从而缓解继发性脊髓损伤 ,发挥脊髓保护作用。     

缓激肽体外选择性开放血肿瘤屏障的机制

目的原代培养大鼠脑微血管内皮细胞及星形胶质细胞，在体外探讨不同剂量缓激肽的作用靶细胞。方法细胞原代培养成功后，运用免疫荧光测定脑血管内皮细胞、星形胶质细胞及C6胶质瘤细胞在不同剂量缓激肽作用前后的细胞内钙离子变化，根据给药前后的荧光改变来确定大、小剂量缓激肽的作用靶点细胞。结果小剂量缓激肽可以引起肿瘤细胞内的钙离子水平升高。而只有大剂量缓激肽才能触发星形胶质细胞内的钙离子水平变化，脑微血管内皮细胞对大、小剂量缓激肽均无任何反应。结论缓激肽的直接作用靶点是胶质细胞及肿瘤细胞，缓激肽调节脑血管内皮细胞通透性的作用可能需要某些细胞间信使的参与。     

脑胶质瘤Th1/Th2类细胞因子的漂移及意义

我们采用逆转录聚合酶链反应(ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,检测了 4株脑胶质瘤细胞株、5 2例新鲜脑胶质瘤标本和 15例脑胶质瘤患者外周血标本的Ｔｈ1/Ｔｈ2类细胞因子的表达情况 ,初步探讨了脑胶质瘤Ｔｈ2类细胞因子漂移的意义。1.材料与方法 :胶质瘤细胞株ＳＨＧ 44、Ｕ2 5 1、Ｃ6和 9Ｌ ,购自上海细胞生物研究所或本室保存。胶质瘤组织标本5 2例 ,取自我院患者 ,术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。术后病理 :星形细胞瘤Ⅰ级 4例 ,星形细胞瘤Ⅱ级 6例 ,间变性星形细胞瘤 2 3例 ,多形性胶质母细胞瘤 9例 ,少突胶质细胞瘤 3例 ,脉络丛乳头状瘤 1例 ,…     

猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠星形胶质细胞株的构建

目的 构建永生化大鼠星形胶质细胞，为转基因细胞移植镇痛提供细胞载体。方法 采用差速粘附法体外分离和培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞。利用脂质体将含有猿肾病毒40大T抗原(SV40Tag)基因的质粒pCMVSV40T／PUR转染培养的大鼠星形胶质细胞。经嘌呤霉素1．5μg／ml筛选后，挑选阳性细胞克隆扩大培养并连续传代。PCR、RT-PCR及免疫组化检测阳性细胞克隆中SV40Tag基因的整合情况及其表达，并对传代细胞的胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)进行检测。结果 成功获得体外培养的大鼠星形胶质细胞，GFAP阳性表达；筛选获得阳性细胞克隆，连续传代培养近50代；PCR、RT-PCR产物经1．5％琼脂糖凝胶电泳分析显示558bp处有一特异性扩增条带，与阳性对照条带相同，而未转染pCMVSV40T／PUR的细胞无扩增条带，回收片段经测序、比对与SV40Tag的基因序列一致(100％)；同时转染的阳性细胞克隆SV40Tag和GFAP免疫染色阳性。结论 成功地构建了SV40Tag基因永生化的大鼠星形胶质细胞株。     

低氧/复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响

目的 探讨低氧/复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响.方法 24 h内新生SD大鼠,断头处死,分离、培养和传代星形胶质细胞,取本室构建的永生化神经前体细胞,根据培养条件的不同分为3组,每组24孔,对照组永生化神经前体细胞在正常培养条件下培养(O2 17%-CO2 5%-N2 78%);共培养组取第三代星形胶质细胞孵育24 h后接种永生化神经前体细胞,培养条件同对照组;低氧/复氧后共培养组取第三代星形胶质细胞,先置入低氧培养箱(O2 2%-CO25%-N2 93%)中孵育12 h后,恢复正常培养条件12 h,再接种永生化神经前体细胞.3组以相同密度接种永生化神经前体细胞(1×104/cm2),隔天半量置换培养基,培养时间为6 d.共培养6 d后每组取6孔,采用免疫荧光细胞化学法,观察共培养后永生化神经前体细胞的增殖与分化情况,计算其增殖倍数、神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率.结果 与对照组和共培养组相比,低氧/复氧后共培养组永生化神经前体细胞增殖倍数升高(P＜0.05),神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低氧/复氧后星形胶质细胞可促进永生化神经前体细胞增殖,但对其分化无影响.     

新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定

[目的] 探讨新生(sprague dawley,SD)大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况及培养分离,以获得纯化的少突胶质前体细胞,为今后细胞移植治疗研究提供良好的种子细胞.[方法] 出生48 h SD大鼠取大脑皮层进行混合胶质细胞的体外培养,原代培养第9～10 d时采用水平振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞,继续用定向培养基传代培养.相差显微镜观察少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况,免疫细胞化学技术进行细胞鉴定.[结果] 混合胶质细胞原代培养第9～10 d时出现明显的细胞分层,少突胶质前体细胞散布于单层的星形胶质细胞表面,胞体呈椭圆形或圆形,具有典型的双极突起,少数呈三极突起.经振荡分离后少突胶质前体细胞纯度达95%,少突胶质细胞特异性标记Olig02反应阳性,胶质纤维酸性蛋白抗体反应阴性.[结论] 新生SD大鼠大脑皮层原代培养中少突胶质前体细胞能够维持在未成熟阶段,细胞分层后通过振荡法及差速贴壁法可以获得较高纯度的少突胶质前体细胞.     

胶质瘤染色体1p/19q联合缺失特点分析

目的 研究胶质瘤1p/19q联合缺失与患者性别、年龄、肿瘤部位及病理分型是否具有相关性.方法 用荧光原位杂交法(Fluorescence in situ hybridization,FISH)对2009年1月至12月的138例胶质细胞瘤患者术后胶质瘤标本进行1P和19q缺失状态分析,男性80例,女性58例;年龄17～68岁,平均41.6岁.利用X2检验分析不同性别、年龄、肿瘤部位、病理类型的1p/19q联合缺失是否有差异.结果 星形细胞肿瘤(22.2%)的1p/19q联合缺失率显著低于少枝胶质细胞肿瘤(81.3%)和少枝星形细胞肿瘤(55.8%)(P＜0.01),少枝胶质细胞肿瘤的1p/19q联合缺失率高于少枝星形细胞肿瘤(P＜0.05).额叶胶质瘤的1p/19q联合缺失率(61.8%)显著高于颢叶(31.8%)和岛叶(34.6%)(P＜0.05).1p/19q联合缺失与患者的性别、年龄无明显相关性.结论 1p/19q联合缺失主要与胶质瘤的病理类型和部位相关,与患者的年龄和性别无明显相关性.     

甲基强的松龙对星形胶质细胞作用的研究

目的 研究甲基强的松龙(MPSS)对体外培养的星形胶质细胞的作用.方法 采用出生3d内的SD大鼠的新生鼠的大脑制成细胞悬浊液后,应用含15%胎牛血清的DMEM培养液中培养,通过摇床和逐渐传代纯化星形胶质细胞,通过PBS缓冲液代替培养基模拟缺营养模型3h后即刻应用甲基强的松龙(10umol/1),然后继续培养3d,免疫荧光技术鉴定星形胶质细胞;MTT法检测细胞的增殖活性和凋亡;PCR技术测定细胞GFAP表达的变化.结果 星彤胶质细胞摇床后传至第三代,经鉴定其星形胶质细胞纯度达95%以上;缺氧3h后部分细胞形态变圆甚至死亡漂浮在正常细胞表面;正常组和损伤组分别加入MPSS 3d后,损伤组细胞活性与GFAP表达均明显升高,但是正常则没有明显变化.结论 适当剂量的MPSS对缺营养损伤的星形胶质细胞有显著的保护作用,而对正常的星形胶质细胞无显著性保护作用.     

体外血脑屏障模型的建立

目的 利用内皮细胞系建立一套可靠、简便的血脑屏障体外研究方法。方法 采用内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞体外接触共培养的方法,探讨共培养过程中内皮细胞系所表现的多种血脑屏障特点。结果星形胶质细胞可以诱导内皮细胞系形成紧密连接并产生较高的跨内皮阻抗(TER),于第10天可达321.3 Ωcm2;同时,在体外血脑屏障模型中ECV304可与胶质细胞建立终足联系并具有较多的线粒体及较少的吞饮泡含量等与生理条件下血脑屏障相似的超微特点。在细胞生物化学特性方面,体外血脑屏障模型具有较高的血脑屏障特征酶γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)与碱性磷酸酶(ALP)活性,可分别达(480.24±104.17)U/mg蛋白、(589.13±54.35)U/mg蛋白。结论在体外血脑屏障模型中ECV304问可以形成大量的紧密连接从而具有内皮细胞及其紧密连接这一血脑屏障机能与结构的主要基础。同时,在超微结构与生化特性方面,体外血脑屏障模型也有着与生理条件下血脑屏障相似的特点。ECV304细胞与星形胶质细胞的体外共培养可以作为研究血脑屏障结构与功能的一种可靠而简便的体外实验方法。     

脑胶质瘤治疗的现状与进展

脑胶质瘤（神经胶质瘤）是由神经外胚叶衍化而来的胶质细胞即星形胶质细胞、少枝胶质细胞和室管膜胶质细胞等发生的肿瘤,是颅内肿瘤中最常见的一种,国内统计占颅内肿瘤的３５．２６％～６０．９６％（平均４４．６９％）。由于肿瘤细胞分化不一致,可以表现为不同的胶质瘤类型。在基础研究上已进入分子生物学特性与脑胶质瘤发生的关系,以及基因治疗的研究在脑胶质瘤的应用。在临床上呈现不同的生物学特性,脑胶质瘤是一常见的危害人类健康疾病,也是神经外科的难题和医学研究的重要课题之一。近年来,随着高新诊疗技术的发展,如ＣＴ、…     

幻肢痛大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞数量的变化

目的 探讨幻肢痛大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞数量的变化.方法 健康成年SD大鼠11只,雌雄不拘,体重290～300 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组:假手术组(S组,n=5)和单侧坐骨神经横断组(SNT组,n=6).术后持续观察SNT组大鼠自噬情况,并进行自噬评分.术后28d时取L5节段脊髓组织,分别进行iba-1(标记小胶质细胞)及胶质纤维酸性蛋白(标记星形胶质细胞)免疫组化染色,进行手术侧和非手术侧脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞的计数.结果 S组无一只大鼠发生自噬,SNT组术后2d开始陆续发生自噬,最高自噬评分9～11分.与S组比较,SNT组手术侧脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞数量均减少(P＜0.05).结论 幻肢痛大鼠脊髓背角小胶质细胞和星形胶质细胞数量减少.     

人工合成IKVAV多肽对星形胶质细胞增殖和Neurocan基因表达的影响

目的观察人工合成IKVAV多肽对星形胶质细胞增殖及硫酸软骨素蛋白多糖核心蛋白Neurocan基因表达的影响,并探讨IKVAV潜在的促进受损脊髓功能恢复的作用。方法设计IKVAV序列,人工合成IKVAV多肽,将星形胶质细胞接种于1%IKVAV包被的培养板上,分别于培养1 d、3 d、5 d、7 d、9 d后在激光共聚焦显微镜下观察IKVAV多肽和星形胶质细胞的组织相容性,用CCK-8法检测星形胶质细胞增殖情况,用荧光定量PCR法检测星形胶质细胞硫酸软骨素蛋白多糖核心蛋白Neurocan的表达,并与对照组比较,进行统计学分析。结果与对照组相比,实验组培养板上星形胶质细胞总数明显减少,但细胞存活率〉95%。荧光定量PCR结果显示实验组星形胶质细胞Neu-rocan的表达量较对照组显著降低。结论人工合成IKVAV多肽可抑制星形胶质细胞增殖、下调硫酸硫酸软骨素蛋白多糖的表达,从而抑制受损脊髓胶质瘢痕的形成,促进脊髓功能恢复。     

人工合成IKVAV多肽对星形胶质细胞增殖和Neurocan基因表达的影响

【摘要】 目的 观察人工合成IKVAV多肽对星形胶质细胞增殖及硫酸软骨素蛋白多糖核心蛋白Neurocan基因表达的影响,并探讨IKVAV潜在的促进受损脊髓功能恢复的作用。 方法 设计IKVAV序列,人工合成IKVAV多肽,将星形胶质细胞接种于1% IKVAV包被的培养板上,分别于培养1 d、3 d、5 d、7 d、9 d后在激光共聚焦显微镜下观察IKVAV多肽和星形胶质细胞的组织相容性,用CCK8法检测星形胶质细胞增殖情况,用荧光定量PCR法检测星形胶质细胞硫酸软骨素蛋白多糖核心蛋白Neurocan的表达,并与对照组比较,进行统计学分析。 结果 与对照组相比,实验组培养板上星形胶质细胞总数明显减少,但细胞存活率＞95%。荧光定量PCR结果显示实验组星形胶质细胞Neurocan的表达量较对照组显著降低。 结论 人工合成IKVAV多肽可抑制星形胶质细胞增殖、下调硫酸硫酸软骨素蛋白多糖的表达,从而抑制受损脊髓胶质瘢痕的形成,促进脊髓功能恢复。     

胰岛素样生长因子-1诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化研究

目的探讨胰岛素样生长因子（IGF），1对多能神经干细胞分化的影响。方法取3～5代神经干细胞培养至对数生长期后接种于多聚赖氨酸包被的盖玻片上，在含有或无IGF-1的培养基条件下贴壁培养7～10d，进行免疫组织化学检测和免疫荧光显色，观察分化为少突胶质细胞、神经元及星形细胞的数量，进行对照分析。结果神经干细胞在不含IGF-1培养基的条件下分化7～10d，分化为少突胶质细胞的数量较少，而在含有IGF-1的培养基的条件下分化为少突胶质细胞的数量明显增加。结论IGF-1可以诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化。     

应用基因芯片筛选不同胶质瘤细胞相关基因

目的 应用高密度寡核苷酸(Oligo)基因芯片技术筛选不同胶质瘤细胞相关基因.方法 提取星形胶质细胞瘤CHG-5细胞株(WHO分级Ⅱ级)、星形胶质细胞瘤U373细胞株(WHO分级Ⅲ级)、星形胶质细胞瘤SHG-44细胞株(WHO分级Ⅳ级)和神经胶质细胞U257细胞株的总RNA并逆转录为cDNA,其中cy5、cy3的dNTP分别掺入不同胶质瘤细胞和神经胶质细胞的cDNA,混合后杂交含22000个人类基因人类高密度Oligo基因芯片,经过洗片和扫描,获得荧光信号图像并用计算机分析,抽取4种差异表达基因用聚合酶链反应(PCR)验证它们不同胶质瘤细胞和神经胶质细胞中的差异表达.结果 从22000条基因中筛选出差异表达基因242条,其中123条表达上调,119条表达下调,包括细胞凋亡、细胞周期蛋白、细胞骨架和运动蛋白等相关基因.结论 基因芯片技术的胶质瘤基因表达谱分析能够高通量筛选胶质瘤相关基因,并高效对基因功能进行研究,有助于认识肿瘤发病机制.     

异丙酚对大鼠脊髓星形胶质细胞体外激活的影响

目的 研究不同浓度的异丙酚对体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞激活状况的影响。方法 体外纯化培养大鼠脊髓星形胶质细胞于盖玻片上,分为正常对照(C组);乳剂对照,脂肪乳剂0.2 ml·L-1(L组);TNF-α终浓度为1μg·L-1(T组),TNF-α终浓度为1μg·L-1及异丙酚终浓度为25 μmol·L-1(TP1组),TNF-α终浓度为1μg·L-1及异丙酚终浓度为50 μmol·L-1(TP2组),每组6孔。分别孵育0、1和2 h后取出盖玻片,用神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)标记星形胶质细胞(SABC法),采用多媒体彩色病理图文分析系统检测阳性细胞面密度(AD)和平均光密度(AOD)。结果1.与C组相比,L组在各时间点的AD、AOD值差异无显著性(P>0.05)2。与T组相比,TP2组在1、2 h时,AD、AOD值均较低(P<0.05),TP1组的AD、AOD值差异无显著性(P>0.05)。结论 异丙酚可有效抑制TNF-α对体外培养的大鼠脊髓AET的激活作用,抑制程度与剂量有关。