脂多糖对人牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:了解脂多糖(LPS)对人牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法:Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养牙髓细胞,检测细胞表面LPS受体CD14(mCD14);流式细胞术观察不同浓度LPS(0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml)对牙髓细胞细胞周期的影响,测定不同浓度LPS对牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响,采用χ2检验以及单因素方差分析对实验数据分别进行统计学分析。结果:人牙髓细胞不表达mCD14,LPS在浓度为0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml时可以抑制牙髓细胞增殖(P<0.01)及碱性磷酸酶活性(P<0.05)。结论:LPS具有抑制牙髓细胞增殖及牙髓细胞分化的作用。     

内毒素对人牙髓、牙周膜成纤维细胞DNA含量的影响

具核梭杆菌和牙髓类杆菌内毒素脂多糖(LPS)在50μg/ml浓度下可使人牙髓,牙周膜成纤维细胞核面积值和DNA含量升高,而100μg/ml浓度则可使细胞DNA含量降低,内毒素在不同浓度对细胞DNA含成的影响有显著差异。     

茶多酚对炎性牙周膜细胞生物活性的影响

目的观察茶多酚对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响,为茶多酚在牙周疾病的防治中提供一定依据。方法体外培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察茶多酚对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定法观察茶多酚对人牙周膜细胞的分化作用。结果100μg/ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性。加入LPS同时分别给予50～1100μg/ml不同浓度茶多酚,能对抗LPS的抑制作用,增强人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性,其中在800μg/ml作用24h时促进作用达到最强。结论茶多酚可对抗内毒素对人牙周膜细胞的毒性作用,促进细胞的增殖和骨向分化。     

牙周优势菌内毒素对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：研究牙周优势菌牙龈卟啉菌、中间普氏菌、具核梭杆菌的内毒素对人牙周膜细胞（PDL细胞）增殖和碱性磷酸酶活性（ALP）的影响。方法：采用MTT比色试验及酶动力学方法，测定PDL细胞的增殖和ALP活性。结果：内毒素在10μg/mL、100μg/mL高浓度时，可显著抑制PDL细胞增殖，而在0.01μg/mL、0.1μg/mL低浓度时，则促进PDL细胞增殖；在10μg/mL、100μg/mL可呈浓度依赖性方式抑制PDL细胞ALP活性。结论：内毒素对牙周膜细胞的抑制作用主要和其浓度有关，不同来源内毒素差异并不显著；内毒素可能通过影响PDL细胞功能而影响牙周组织的代谢和修复过程。     

表达纯化釉原蛋白可溶性上清液对牙髓细胞骨钙素和碱性磷酸酶的影响

目的：探讨釉原蛋白的作用机制，为临床应用釉原蛋白进行龋病的治疗奠定基础。方法：采用细胞培养、放射免疫测定和碱性磷酸酶（AKP）检测等实验技术，探讨釉原蛋白Am对牙髓外胚间充质细胞的作用。结果：通过观察Am纯化蛋白可溶性上清液对体外培养的牙髓细胞的骨钙素含量和碱性磷酸酶活性的影响，发现Am可增加骨钙素含量，增强碱性磷酸酶活性，并呈剂量依赖性，在100ng/ml浓度下两者分别增加3和4倍。结论：Am可促进人牙髓细胞的分化和矿化。     

牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞周期和凋亡的影响

目的:观察牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞周期和凋亡的影响。方法:用不同浓度牙髓卟啉单胞菌超声提取物(1、10、100μg/ml)作用成骨细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡变化。结果:牙髓卟啉单胞菌超声提取物显著抑制成骨细胞的增殖。且在一定时间和浓度范围内具有浓度和时间依赖性。10μg/ml和100μg/ml提取物作用24 h时,处于G1期的成骨细胞明显增多;在作用48 h时,牙髓卟啉单胞菌提取物以浓度依赖方式促进成骨细胞凋亡。结论:牙髓卟啉单胞菌超声提取物可阻滞细胞于G1期,并诱导细胞凋亡,抑制成骨细胞增殖。     

蜂胶对人牙周膜成纤维细胞作用的实验研究

目的:探讨蜂胶水提液对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)生长增殖、骨向分化的影响,寻找蜂胶促增殖及分化作用的最佳浓度。方法:将不同浓度的蜂胶水提液加入体外培养的HPDLFs中,设置阳性对照和空白对照,通过检测HPDLFs的增殖(MTT法)、碱性磷酸酶活性及骨钙素含量,观察蜂胶水提取液对HPDLFs的增殖和分化的影响。结果:10~150μg/ml浓度的蜂胶水提液对体外培养HPDLFs的增殖均有促进作用,100μg/ml浓度时促增殖作用最明显。10~200μg/ml蜂胶水提液均可提高HPDLFs的碱性磷酸酶活性、促进HPDLFs的骨钙素合成(P<0.05),其中以100μg/ml蜂胶水提液作用最显著(P<0.01)。结论:低浓度的蜂胶水提液能促进HPDLFs增殖和向成骨细胞方向分化。     

IGF-1通过PI3K/AKT信号通路促进牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的研究

目的:研究IGF-1对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用酶消化法分离培养原代人牙髓细胞。Western blot检测牙髓组织中IGF-1蛋白表达,不同浓度的IGF-1处理牙髓细胞7d,CCK8法检测细胞增殖。用IGF-1(100 μg/L)及LY294002(10 μmol/L)分别单独或同时处理牙髓细胞,培养7 d后MTT实验检测细胞增殖;在培养第3、5、7、14天时检测细胞ALP 活性;在培养第7天时用Western blot检测AKT和p-AKT蛋白表达情况。结果:IGF-1在牙髓炎组织中低表达, IGF-1在20~100 μg/L浓度范围内从作用第3天开始能够显著促进牙髓细胞增殖(P<0.05或P<0.01),且具有剂量和时间依赖效应。LY294002能够抑制牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性,具有时间依赖性。IGF-1能促进p-AKT蛋白表达,而 LY294002能减低IGF-1对p-AKT蛋白表达的促进作用。结论:IGF-1可以促进牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性,且具有浓度和时间依赖性,作用机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。[关键词] 牙髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶     

人重组骨形成蛋白-1对牙髓细胞生物学效应的研究

通过细胞培养技术，噻唑盐比色测定，酶动力学方法和放射免疫技术，了解人重组骨形成蛋白－１对体外培养的人牙髓细胞增殖，碱性磷酸酶活性及骨钙素表达的影响。结果表明，ｒｈＯＰ－１牙促进牙髓细胞增殖，提高牙髓碱性磷酸酶活性及骨钙素的表达，在本实验剂量范围内呈浓度依赖关系，具有诱导牙髓细胞中成骨方向转化的趋势。     

富血小板血浆对牙周膜成纤维细胞的增殖、迁移和分化的影响

目的: 体外研究不同浓度的富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)对牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)的增殖、迁移和分化的影响.方法:不同浓度PRP(10, 50, 100, 200, 300, 500 ml/L),加入到原代培养的人PDLFs,培养时间为3、 5、 7 d,MTT法测定细胞增殖效果,transwell系统测定细胞迁移效果,AKP试剂盒测定碱性磷酸酶活性.结果:PRP有明显促进增殖作用,以200 ml/L浓度PRP效果最好,更高浓度促进作用反而减低.细胞迁移效果中,各浓度组均比阴性对照组效果好,尤其是100 ml/L的效果最佳.对于碱性磷酸酶活性,也具有明显的促进作用,以300 ml/L的效果最佳.结论:PRP在一定浓度范围内对人PDLFs功能有明显促进效果,但是在更高浓度下,这种促进效果反而减低.     

变形链球菌超声提取物对牙髓细胞增殖和天然免疫受体基因mRNA表达的影响

目的:观察变形链球菌超声提取物对牙髓细胞的增殖活性、天然免疫受体基因mRNA表达的影响。方法:采用组织块法原代培养牙髓细胞,通过不同浓度的变形链球菌超声提取物(1、10、100μg/ml)作用于牙髓细胞,MTT法检测牙髓细胞的增殖活性;荧光定量PCR检测牙髓细胞NOD2、TLR2和TLR4 mRNA的表达水平。结果:1μg/ml变形链球菌超声提取物处理24 h可促进牙髓细胞的增殖;10μg/ml和100μg/ml处理24 h和48 h可明显抑制细胞增殖。变形链球菌超声提取物(10μg/ml)作用于牙髓细胞后,NOD2、TLR2和TLR4 mRNA表达量均增加。结论:变形链球菌超声提取物可抑制牙髓细胞的生长,促进NOD2、TLR2和TLR4 mRNA的表达。     

黄芩对产黑色素类杆菌内毒素影响的实验研究

目的 探讨黄芩在牙髓根尖周病治疗中的基础理论。方法 采用试管两倍稀释法测定黄芩对产黑色素类杆菌-牙髓卟啉单胞菌和牙龈卟啉单胞菌的MIC；采用鲎试验测定低于MIC4个浓度的黄芩对两种细菌内毒素含量的影响。结果 黄芩对两种细菌的MIC皆为1mg/ml；黄芩减少了两种细菌内毒素含量。结论 黄芩对牙髓卟啉单胞菌，牙龈卟啉单胞菌的生长，内毒素有抑制作用。     

牙髓拟杆菌ATCC35406脂多糖的提纯和鉴定

采用酚水法提取了牙髓拟杆菌的脂多糖,并用PCP法和标准电透析对粗提脂多糖进一步纯化,结果得到了高纯度的细菌脂多糖,其蛋白质和核酸含量均低于1％。氨基糖含量为89.31μg/mg,采用薄层层析法未能测出KDO的存在,总磷含量为21.66μg/mg,对鲎试剂凝集的最低剂量为≤10Pg。     

神经生长因子对人牙髓细胞增殖与分化作用的研究

目的 研究神经生长因子对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化作用的影响。方法 组织块法行人牙髓细胞的原代培养后，采用四唑盐比色法和酶动力学方法，测定不同浓度（1、10、100U／mL）的神经生长因子对体外培养的第5-8代人牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的作用。结果 与对照组相比，10U／mL的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖（P〈0．05）；100U／mL的神经生长因子可显著促进碱性磷酸酶的活性（P〈0．01）。结论 不同浓度的神经生长因子可显著促进人牙髓细胞的增殖与分化。     

牙髓卟啉单胞菌促成骨细胞凋亡的机制初探

目的:观察牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞凋亡的促进作用,并初步探讨其相关分子机制。方法:用浓度为1、10、100μg/m L牙髓卟啉单胞菌超声提取物作用于成骨细胞,分别采用Hoechst33258染色法观察细胞的形态变化;比色法检测细胞中的Caspase-3酶活性改变;同时通过Caspase抑制剂阻断实验分析相关成骨细胞的凋亡途径。结果:牙髓卟啉单胞菌超声提取物能使成骨细胞形态出现染色质浓缩、碎裂等典型的凋亡改变,并可显著提高成骨细胞的Caspase-3酶活性,且具有浓度依赖性(P<0.05);Caspase-8抑制剂和Caspase-9抑制剂可以部分抑制牙髓卟啉单胞菌提取物对成骨细胞的促凋亡作用,而Caspase-3抑制剂则能完全阻断牙髓卟啉单胞菌对成骨细胞的促凋亡作用。结论:牙髓卟啉单胞菌超声提取物具有促成骨细胞凋亡的作用,细胞内、外凋亡途径都参与了该过程,并且是一种依赖Caspase-3的凋亡通路。     

Smad7反义寡核苷酸对TGF-β1调控人牙髓细胞生长和分化的影响

目的 :观察Smad7反义寡核苷酸对转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor -β ,TGF -β1)调控人牙髓细胞生长和分化的影响。方法 :细胞培养 ,细胞转染 ,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法。结果 :Smad7反义寡核苷酸促进TGF -β1对人牙髓细胞增殖的诱导作用和对碱性磷酸酶活性的抑制作用。 结论 :Smad7参与介导TGF -β1对人牙髓细胞增殖和ALP活性的调控 ,提示TGF -β1调控人牙髓细胞生长和分化可能是通过Smad信号途径发生的     

羟基磷灰石、氢氧化钙对鼠牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的：检测羟基磷灰石和氢氧化钙颗粒对鼠原代牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响。方法：采用０．５％胰酶－０．１％ＥＤＴＡ消化法获取ＳＤ鼠原代牙髓细胞。细胞接种后，分别加入氢氧化钙和羟基磷灰石颗粒（＜５０μｍ），在７ｄ或１４ｄ分别测定鼠原代牙髓细胞的碱性磷酸酶活性。结果：氢氧化钙抑制牙髓细胞碱性磷酸酶活性与其高浓度抑制细胞生长有关；羟基磷灰石具有良好的生物相容性，但其能够显著抑制牙髓细胞碱性磷酸酶的活性，抑制率（０．６ｍｇ／ｍｌ）在７ｄ时为５４．６％，１４ｄ时为４９．０％。结论：羟基磷灰石颗粒的作用可能与牙髓细胞去分化过程有关，两种材料对牙髓细胞的活性存在着不同的作有机制。     

碱性成纤维细胞生长因子对人体外培养牙髓细胞增殖的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化的影响.方法 以常规体外组织块培养法获得牙髓细胞,采用MTT比色测定bFGF对牙髓细胞的影响.结果 bFGF在1～100ng/ml浓度范围内,可促进人牙髓细胞的增殖,与对照组相比差异显著(P<0.01).bFGF最小显效浓度是1ng/ml,而10ng/ml的bFGF促增殖作用最强,与1ng/ml的bFGF相比差异显著(P<0.01),但与100ng/ml的bFGF无显著差异(P>0.05).从第3天起,与对照组相比bFGF对人牙髓细胞有显著的促增殖作用(P<0.01).结论 bFGF能明显促进人牙髓细胞的增殖,在牙髓组织康复治疗中起到重要作用.     

内毒素对人牙周膜成纤维细胞超微结构的影响

具核梭杆菌和牙髓类杆菌100μg/ml浓度可使体外培养的人牙周膜成纤维细胞线粒体膜破裂、溶酶体膜受损、细胞出现大量空泡表明细胞功能受损。     

低分子釉原蛋白的纯化及其对人牙髓细胞和牙周膜细胞作用的研究

目的：纯化低分子猪釉原蛋白（LMWPA）,并观察其对人牙髓细胞（HDPCs）和牙周膜细胞（HPLCs）增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：取六月龄猪第二磨牙牙胚牙釉质,用液相色谱法分离纯化LMWPA,分别采用MTT法和酶动力学方法测定LMWPA对HDPCs和HPLCs的体外作用。结果：得到的LMWPA是分子量约为5.0KDa的单一组分;在50和100μg/mL时,能的显著促进HDPCs和HPLCs的增殖,ALP活性上调（P〈0.01）;而在≥150μg/mL时,能显著抑制细胞的增殖,ALP活性下调（P〈0.01）。结论：LMWPA影响HDPCs和HPLCs的增殖和碱性磷酸酶活性,并存在剂量和时间依赖性。