拓扑替康诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的初步研究

背景与目的:拓扑替康(topotecan,TPT)是新一代水溶性、半合成喜树碱类衍生物,系拓扑异构酶I抑制剂、细胞周期特异性抗肿瘤药物;肝癌为我国发病率居第三位的恶性肿瘤,现有治疗方法的临床疗效均不理想。本文研究TPT诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的作用,及其细胞毒作用。方法:运用MTT、HE染色、透射电镜、流式细胞仪、免疫组化技术等实验方法,对TPT杀伤HepG2细胞的程度进行了测定并观察了其诱导凋亡的过程。结果:TPT能通过诱导HepG2细胞凋亡的方式,杀伤HepG2细胞,TPT对HepG2细胞具有较强的体外杀伤作用,并存在明显的剂量、时间依赖关系,IC50约为95μg/L。TPT将HepG2细胞阻断在S期,并进一步诱导其凋亡。凋亡形态特征表现为典型的间期凋亡:细胞核染色质固缩,呈新月形聚集于核膜周缘,胞质浓缩,出现空泡。在TPT诱导HepG2细胞凋亡的过程中,不影响bcl-2基因蛋白正常表达(P>0.05)。结论:TPT能诱导HepG2细胞凋亡,细胞毒性较强。     

全反式维甲酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的初步研究

[目的]研究全反式维甲酸（ATRA）体外诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡及其作用机制。[方法]ATRA处理HepG2细胞。MTT法分析细胞增殖反应;Hoechst染色法检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中caspase-9、caspase-3和NF-κB蛋白表达情况。[结果]A-TRA可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,可上调细胞中caspase-9、caspase-3表达水平（P〈0.05）。[结论]ATRA可抑制HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与cas-pase-9、caspase-3表达上调有关。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡的初步研究

目的：研究三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对肝癌细胞株Ｂｅｌ－７４０２的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法：采用ＭＴＴ法检测药物对细胞的抑制作用、相差显微镜和电镜观察细胞形态变化、琼脂糖凝胶电泳测定ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ、流式细胞术检测细胞周期变化。结果：各浓度Ａｓ２Ｏ３组（０．２５～１６μｍｏｌ／Ｌ）均可抑制肝癌细胞增殖,且抑制率具有浓度和时间依赖性,同作用时间呈直线相关,其中浓度组为１０μｍｏｌ／Ｌ）均可抑制肝癌细胞增殖,且抑制率具有浓度和时间依赖性,同作用时间呈直线相关,其中浓度组为１０μｍｏｌ／Ｌ抑制率最大,９６ｈ时达８３．８９％,２μｍｏｌ／Ｌ Ａｓ２Ｏ３以抑制肝癌细胞的增殖为主,但在形态及生化方面未见凋亡改变;１０μｍｏｌ／Ｌ Ａｓ２Ｏ３作用１０ｈ可见形态学变化,４８ｈ可见ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ出现。流式细胞检查     

补骨脂酚通过MAPK途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的:研究补骨脂酚对人肝癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:应用噻唑蓝法（MTT法）和倒置显微镜技术考察补骨脂酚对HepG2细胞生长的影响;采用荧光显微镜观察补骨脂酚处理后细胞凋亡;利用蛋白免疫印迹法检测补骨脂酚对HepG2细胞中凋亡相关蛋白及MAPK家族蛋白表达的影响;引入MAPK家族蛋白抑制剂考察生长抑制率和凋亡相关蛋白表达的变化。结果:补骨脂酚可以剂量依赖性地抑制人肝癌HepG2细胞增殖,其生长抑制作用明显强于临床上常用的抗肿瘤药5-氟尿嘧啶,并且补骨脂酚对人正常肝L02细胞具有较低的毒性。进一步研究发现,补骨脂酚可以诱导HepG2细胞发生凋亡。此外,MAPK家族参与到补骨脂酚诱导的HepG2细胞凋亡过程中,补骨脂酚可以剂量依赖性激活JNK的表达发挥促凋亡的作用,同时抑制了ERK促存活通路,然而对p38无明显影响。结论:本研究首次阐明了补骨脂酚诱导人肝癌HepG2细胞生长抑制作用机制,为进一步的临床应用提供了理论依据。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的研究

方法 采用原位杂交方法检测肝癌组织、肝癌细胞株以及正常肝组织中TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL蛋白处理肝癌细胞株Hep2和SMMC7721,应用流式细胞仪和原位末端标记,观察经药物处理前后该细胞株的凋亡发生率。结果 60例肝癌组织及20例正常肝组织均表达死亡受体DR5和DR4,但肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织。54例(90．0％)肝癌组织不表达诱捕受体DcR1,25例(41．7％)肝癌组织不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。肝癌组织中DR的高表达及DcR的低表达,不同于正常肝组织中DR的低表达及DcR的高表达,两者间差异有显著性。两种肝癌细胞株中均可检测到DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。肝癌组织中DR的表达与肿瘤的分化、肿瘤分期有关,低分化的肿瘤DR表达减少(P＜0．01),Ⅲ、Ⅳ期肿瘤DR表达显著低于I、Ⅱ期(P＜0．05)。DR表达与患者的性别、年龄、HBsAg阳性与否、AFP水平、肿瘤大小以及是否转移无关。经TRAIL(100ng/ml)处理24h,肝癌细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上,胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50％。结论 肝细胞肝癌普遍存在TRAILR的表达,并存在受体类型的表达差异。但单一的TRAIL治疗只能有限的诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721发生凋亡,HCC对TRAIL诱导的凋亡存在耐药现象。     

三氧化二砷诱导人肝癌细胞株凋亡的初步研究

细胞凋亡在肿瘤治疗学上的意义日益得到人们的重视.我们观察了中药砒霜的主要成分——三氧化二砷(As_2O_3)对肝癌细胞株的诱导凋亡作用,以探索药物治疗肝癌的新途径.1.材料与方法:(1)药物:0.1%As_2O_3溶液(癌灵Ⅰ号),哈尔滨医科大学第一附属医院药剂科惠赠.(2)细胞株:人肝癌细胞株SMMC-7721.(3)方法:MTT法观察细胞的增殖率,AO/EB荧光染色观察细胞的形态学改变,流式细胞仪检测凋亡率及细胞周期变化.2.结果:As_2O_3对SMMC-7721肝癌细胞株的生长有显著抑制作用,抑制作用强度随浓度提高、作用时间延长而增加.经2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、0.25μg/ml As_2O_3作用24h,SMMC-7721细胞株在荧光染色时,显微镜下均呈现典型的凋亡形态学改变,如核染色体凝结、固缩成块状,或染色体沿核膜成新月体形排列,或细胞核崩解碎裂,可见部分细胞呈出芽的表现.流式细胞促检测各实验组均见有亚G_1峰.细胞经1μg/     

CA3诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其机制CSCD

目的探讨CA3(CIL56)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响及其机制。方法体外培养HepG2细胞,分别加入不同浓度CA3(0、0.25、0.5、1.0、2.0和4.0 mmol/L)作用24和48 h。增强型CCK-8试剂检测不同浓度CA3对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测细胞内活性氧(ROS)的变化;Western blot法分析YAP1、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果增强型CCK-8试剂检测结果显示,0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L的CA3作用HepG2细胞24和48 h后,细胞增殖率分别为(80.5±0.3)%、(79.4±0.2)%、(76.2±0.2)%、(76.4±0.1)%、(49.3±0.4)%和(75.3±0.2)%、(64.8±0.3)%、(48.4±0.2)%、(32.2±0.4)%、(31.9±0.2)%。流式细胞术结果显示,CA3浓度升高至2 mmol/L时,凋亡率增加到58.48%。CA3处理后,HepG2细胞内活性氧产量增加,YAP1、Bcl-2蛋白表达降低,Bax、Caspase-3表达增高。结论 CA3可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与细胞内活性氧产量增加,调节YAP1、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达有关。     

Bestrophin 3高表达促进人肝癌细胞株HepG2的凋亡

目的：研究Bestrophin 3高表达对人肝癌细胞株HepG2凋亡能力的影响,并初步探讨其作用机制。 方法： 将Bestrophin 3腺病毒以感染复数(multiplicity of infection, MOI)10、20、40、80转染HepG2细胞株,Western blotting检测转染细胞内Bestrophin 3的表达,确定最佳MOI值。设对照组（未转染病毒）、LacZ组（转染携带LacZ的对照腺病毒载体）、Ad-Best3组（以最佳MOI值转染Bestrophin 3腺病毒）,CCK-8法和流式细胞术分别检测Bestrophin 3过表达对HepG2细胞增殖、凋亡的影响,Western blotting检测Bestrophin 3过表达对HepG2细胞内Bcl-2、Bax以及细胞色素C表达的影响,JC-1染色观察Bestrophin 3过表达对HepG2细胞线粒体膜电位的影响。 结果： Bestrophin 3腺病毒转染HepG2细胞的最佳MOI为40,转染后细胞过表达Bestrophin 3。Ad-Best3组的细胞存活率显著低于对照组和LacZ组\[(79.37±1.76)% vs (98.67±3.02)%、(99.67±325)%,均P<0.05\],而其细胞凋亡率显著升高\[（29.47±2.37）% vs （5.47±0.37）%,（4.95±0.44）%,均P<0.05\]。 Ad-Best3组HepG2细胞内Bcl-2的蛋白表达显著减少,Bax的蛋白表达显著增加,导致Bcl-2/Bax比值显著降低（0.32±0047 vs 1.00±000, P<0.05）;Ad-Best3组HepG2细胞的线粒体膜电位显著降低 \[(0.64±0.09)% vs （1.00±0.00)%, P<0.05\],同时线粒体中细胞色素C明显减少（P<0.05）,而细胞质中细胞色素C水平显著升高（P<0.05）。结论：过表达Bestrophin 3可能通过促使线粒体释放细胞色素C从而促进肝癌细胞株HepG2的凋亡。     

槲皮素、姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡作用的比较

目的:探讨槲皮素和姜黄素对人肝癌HepG2细胞株增殖及凋亡的作用。方法:不同质量浓度的槲皮素(0、10、20、50、100μmol/L)和姜黄素(0、2、5、10、20μmol/L)分别作用HepG2细胞24、48、72 h,以As2O3(0、2、5、10、20μmol/L)为阳性对照,MTT法检测HepG2细胞的增殖,流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡。结果:槲皮素、姜黄素及As2O3作用后,HepG2细胞形态发生变化、生长速率变慢,HepG2增殖率随着时间和药物浓度的增加逐渐减低,72 h时3种药物高浓度组HepG2细胞增殖率分别为(31±5.8)%、(51±4.6)%、(54±5.8)%。槲皮素和姜黄素均有明显的促凋亡作用,并呈时间和浓度依赖性;高浓度(100μmol/L)槲皮素作用最强,相同浓度下的姜黄素与As2O3作用相当。结论:槲皮素和姜黄素能明显抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,并且这种作用强于As2O3。     

氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:CCK-8法检测人肝癌HepG2细胞的增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。Western blot检测ERK及P-ERK蛋白的表达水平。结果:氨基葡萄糖可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,且该作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。1.0mmol/L氨基葡萄糖作用72h可以使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。同时,2.0mmol/L及4.0mmol/L氨基葡萄糖处理72h可以使人肝癌HepG2细胞发生凋亡。另外,随着药物浓度的增加,人肝癌HepG2细胞中ERK蛋白的磷酸化水平逐渐降低。结论:氨基葡萄糖可能是通过降低ERK1/2蛋白的磷酸化水平影响细胞周期,从而抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。     

VM-26诱导胶质母细胞凋亡的实验研究

选用体外培养人多形性胶质母细胞ＢＴ３２５作为对象,研究抗癌药物ＶＭ－２６的治疗作用机。方法：采用荧光显微镜、电子显微镜、等方法和技术观察细胞凋亡。结果实验显示ＶＭ－２６作用于体外培养人多形胶质母细胞ＢＴ３２５后可诱导其发生凋亡。结论：ＶＭ－２６抑制体外培养ＢＴ３２５细胞的生长,是通过阻滞细胞的进程,启动细胞自身的调控程序,诱导细胞凋亡,从而达到抗肿瘤的作用。     

瑞戈非尼联合哌立福辛诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制研究

目的 探讨瑞戈非尼联合哌立福辛(AKT抑制剂)对人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制。 方法 不同浓度瑞戈非尼(1、5、10、15、20、25 μmol/L)处理肝癌细胞后,通过CCK-8检测其细胞存活率;再设置不同浓度瑞戈非尼(0、5、10、20 μmol/L)处理肝癌细胞后,流式细胞仪检测细胞凋亡;用免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9的表达情况;设置哌立福辛组(10 μmol/L)、瑞戈非尼组(20 μmol/L)及双药联合组(哌立福辛10 μmol/L联合瑞戈非尼20 μmol/L),检测细胞凋亡及相关蛋白表达变化。 结果 从5 μmol/L浓度起,瑞戈非尼可剂量依赖性的抑制肝癌细胞增殖(P＜0.05);Bcl-2及p-AKT表达下调,Bax、p21、p27、Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-9表达上调(P＜0.05);瑞戈非尼和哌立福辛双药联合应用后,细胞凋亡率、Bax表达量明显增加(P＜0.05),Bcl-2、p-AKT表达量下降程度均较单独应用哌立福辛及瑞戈非尼明显(P＜0.05)。 结论 瑞戈非尼通过增加p21、p27、Bax、caspase-8、caspase-9的表达,减少Bcl-2、p-AKT的表达,来诱导肝癌细胞凋亡,并且瑞戈非尼与哌立福辛双药联合应用后,明显增加肝癌细胞凋亡率,为药物治疗肝癌提供新的理论基础和思路。     

法尼基转移酶抑制剂ManumyCin诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的:研究法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制。方法:采用MTT(Methythiazolyltetrazolium)法观察法尼基转移酶抑制剂Manumycin对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的抑制作用,荧光显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞术等技术检测细胞凋亡,应用Westernblot方法检测bcl-2、p53、bax的蛋白水平变化。结果:法尼基转移酶抑制剂Manumycin能明显抑制HepG2细胞的生长且呈浓度依赖性,其IC50为(17.65±0.58)μmol/L。荧光显微镜检查显示Manumycin处理的HepG2细胞DAPI染色后,细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光,典型细胞可见新月型改变,固缩或片段化的核。DNA凝胶电泳可见典型的DNA梯形带。流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞凋亡与Manumycin作用的时间和浓度相关。Manumycin能时间依赖性地诱导HepG2细胞发生G2/M期阻滞。Manumycin处理HepG2细胞后,Westernblot检测结果显示p53蛋白表达明显增加,而bcl-2蛋白和bax蛋白表达无明显变化。结论:法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌细胞株HepG2有强烈的细胞毒作用,其分子机制可能是诱导HepG2细胞凋亡。Manumycin诱导HepG2细胞凋亡与bcl-2蛋白和bax蛋白表达水平无关,而p53蛋白表达水平的上调可能在此过程中起了一定     

长春新碱诱导肝癌细胞自噬性凋亡过程中泛素与bcl-2 的变化

  目的 探讨长春新碱（VCR）诱导HepG2肝癌细胞自噬性凋亡过程中泛素表达的变化及阻断泛素一蛋白酶体通路对此凋亡和bcl-2表达的影响。方法 应用VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡，采用流式细胞仪检测凋亡及泛素的表达；以RT-PCR检测bcl-2的表达。结果 VCR处理后发生自噬性凋亡的HepG2细胞中泛素含量增加（P〈0．01）。加用蛋白酶体特异抑制剂乳胞素后的乳胞素＋VCR组凋亡率明显比单用VCR组高（P〈0．01），而bcl-2表达则比单用VCR组更低。结论 泛素一蛋白酶体通路参与了VCR诱导的HepG2细胞自噬性凋亡及对bcl-2蛋白的调控。对蛋白酶体功能的抑制可以促进VCR诱导的HepG2细胞凋亡。     

肝癌细胞条件培养液诱导新生儿脐带血贴壁细胞的转化

背景与目的:脐带血干细胞为早期未分化细胞,对外界环境的影响十分敏感,在致癌因素作用下脐带血干细胞可能发生恶性转化。本研究旨在探讨脐带血干细胞对致癌因子的敏感性。方法:应用淋巴细胞分离液从新生儿脐带血中分离出有核细胞后进行细胞培养,当细胞贴壁后,应用含有10%HepG2肝癌细胞条件培养液的培养液继续培养,获得了一个新的细胞系,将其命名为H-UCB。应用电镜、流式细胞仪和Westernblot等检测其特征,应用软琼脂实验检测其克隆形成率。结果:在培养到第三代以后H-UCB细胞增殖能力明显增强。形态学观察显示,细胞形态呈成纤维细胞样和肝细胞样,核浆比例增大。电镜观察,细胞表面有较多微绒毛,核大并且形态不规则,胞浆内有空泡,有胞吞胞饮现象。染色体分析显示,细胞的染色体众数在50～70条之间,为异倍体。流式细胞仪检测显示,细胞增殖周期为22.9h,染色体数目为二倍体和四倍体之间。Westernblot检测结果显示,c-Myc蛋白、核增殖相关蛋白(PCNA)的表达水平较高。经免疫荧光染色后进行流式细胞仪检测,显示H-UCB细胞表面标志物CD105、CD34、CD106阳性率分别为79.0%、1.2%、12.2%,而对照组HepG2细胞的CD105、CD34、CD106的阳性反应率分别为15.0%、9.8%、1.4%。软琼脂克隆形成率为(13.2±2.6)%。结论:从新生儿脐带血分离获得的有核细胞在肝癌细胞条件培养液作用下发生了恶性转化,具有肿瘤细胞的特征,属内皮细胞来源。     

绞股蓝诱导人肝细胞瘤细胞凋亡

Objective： To identify the proapoptotic effects of Gynostemma pentaphyllum Makino （GpM） on human hepatoma cells. Methods： The effects of GpM on the cell apoptosis of human hepatoma cell line Huh-7 was assessed by flow cytomety. The expression of Bcl-2, Bcl-XL, Bax and Bad molecules in hepatoma cells treated with GpM was detected by Western blot. Results： After treatment with 20 mg/mL GpM for 24 h, 56% of Huh-7 cells were undergoing apoptosis, while cell death was only observed in 12% of humaa fibroblast cells treated with GpM. Western blot demonstrated that, Bcl-2 was markedly decreased in Huh-7 cells treated with GpM. Whereas, Bax was significantly up-regulated in Huh-7 cells treated with GpM. Conclusion： Treatment of human hepatoma cells with GpM induced apoptosis through the down-regulation of Bcl-2, and up-regulation of Bax.     

Bcl-2反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的　探讨反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ） 对ｂｃｌ２ 基因的表达调控及诱导胃癌细胞凋亡的作用。方法　应用ＭＴＴ方法比较两条人工合成的ＡＳＯＤＮ 直接作用及其以脂质体（ＤＯＴＡＰ） 为载体对胃癌细胞的抑制效果。应用流式细胞术和ＲＴＰＣＲ 方法检测ＡＳＯＤＮ 对ｂｃｌ２ 蛋白和ｍＲＮＡ 表达量的调控。应用相差显微镜、电子显微镜、流式细胞术等方法,观察ｂｃｌ２ ＡＳＯＤＮ 诱导ＢＧＣ８２３ 胃癌细胞凋亡的效果。结果　ＭＴＴ实验显示两条ＡＳＯＤＮ 抑制胃癌细胞增殖的作用呈浓度和时间依赖性,且靶位点于ｍＲＮＡ蛋白编码区（ＡＳＯＤＮ２） 和以ＤＯＴＡＰ 为载体的ＡＳＯＤＮ 对胃癌细胞的增殖抑制效果为佳。ＡＳＯＤＮ作用于胃癌细胞,降低ｂｃｌ２ 蛋白和ｍＲＮＡ 表达。ｂｃｌ２ ＡＳＯＤＮ处理胃癌细胞,观察到肿瘤细胞缩小、凋亡小体出现、染色质浓缩、凋亡峰等凋亡特征性改变。结论　ｂｃｌ２ ＡＳＯＤＮ可降低ｂｃｌ２ ｍＲＮＡ和蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡     

大黄素抑制PDGF诱导的肝癌细胞增殖

目的观察大黄素（Emodin,EM）对血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF）诱导的人肝癌HepG2细胞体外增殖的影响并探讨其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,经一定量的PDGF或PDGF与EM共同作用后,以MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;免疫细胞化学法检测细胞NF-κB及PDGF的表达。结果在2.5～5.0ng/mL浓度范围内,外源性PDGF可明显促进HepG2细胞增殖,抑制细胞凋亡,影响细胞周期,使G0/G1期比例降低,S期比例增高。并能增强NF-κB的表达,PDGF各处理组与对照组相比,P〈0.05。而EM可明显抑制PDGF的上述作用,EM处理组与PDGF处理组相比,细胞增殖数、细胞凋亡率、细胞周期分布、NF-κB的表达差异均有统计学意义,P〈0.05。且EM可直接抑制PDGF的表达。结论EM对PDGF诱导的人肝癌HepG2细胞增殖有显著抑制效应,其机制可能与直接减弱PDGF的效应有关。     

大黄素抑制人肝癌HepG2细胞血管生成作用及其机制研究

目的 大黄素可促进人肝癌HepG2细胞的凋亡,然而其是否可抑制肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)血管生成及其机制罕见报道.本研究探讨大黄素对人肝癌HepG2细胞血管生成以及缺氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1a,HIF-1d)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,以及大黄素体内抗肝癌机制.方法 采用体内鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验,实验随机分为阴性对照组(生理盐水)、大黄素低剂量组(10 μmol/L)、大黄素高剂量(20 μmol/L)和阳性对照组(0.15 mg/mL地塞米松),每组各10只,每24 h每组追加同样等量药物,共72 h,观察大黄素对CAM血管生成的抑制作用.体外培养HepG2细胞,以氯化钴(CoCl2)模拟化学缺氧,设立缺氧未处理组[阴性对照组(生理盐水)]、缺氧大黄素低剂量组(10 μmol/L)、缺氧大黄素高剂量组(20 μmol/L)和缺氧阳性对照组[10 μmol/L 5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)],每组设6个复孔,处理24 h.采用小管形成实验,观察大黄素对HepG2细胞相对小管数目的影响,免疫细胞化学分析检测HIF-1α和VEGF阳性细胞的表达,Real-Time PCR分析检测HIF-1α mRNA和VEGF mRNA的表达.采用Graphpad 5.0软件进行描述性统计,组间比较采用one-way-ANOWA和Bonferroni检验.结果 CAM实验显示,实验组新生血管数目明显减少,与阴性照组比较,差异有统计学意义,F=13.374,P=0.002.阴性对照组新生血管数目为(31.47±1.81)个.给药后CAM血管生成减少,大黄素低剂量组、高剂量组和地塞米松组分别为(19.48±0.66)、(10.33±1.04)和(9.89±0.57)个,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为0.041、0.004和0.003;大黄素低剂量组和高剂量组与地塞米松组比较,差异无统计学意义,P值分别为0.539和1.000.小管形成实验显示,实验组相对小管数目明显减少,与阴性照组比较,差异有统计学意义,F=21.529,P＜0.001.阴性对照组相对小管数目为(100.00±0.00)％.给药后,相对小管数目明显减少,大黄素低剂量、高剂量组和阳性对照组分别为(65.85±12.67)％、(46.94±8.34)％和(41.77±7.53)％,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为0.049、0.001和＜0.001;大黄素低剂量组和高级剂量组与阳性对照组比较,差异无统计学意义,P值分别为0.104和0.069.免疫细胞化学分析显示,大黄素低剂量组、高剂量组和阳性对照组HIF-1α和VEGF阳性细胞显著减少.Real-Time PCR分析显示,实验组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA表达降低,与阴性照组比较,差异有统计学意义(F=31.908,P＜0.001;F=25.146,P＜0.001).阴性对照组HepG2细胞HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.92±0.15和0.95±0.15;大黄素低剂量组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.45±0.07和0.51±0.08,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为0.021和0.013;大黄素高剂量组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.32±0.05和0.40±0.07,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值分别为＜0.001和0.001;阳性对照组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达分别为0.30±0.04和0.34±0.05,与阴性对照组比较,差异有统计学意义,P值均＜0.001;大黄素低剂量组、高剂量组HIF-1α mRNA和VEGF mRNA相对表达与阳性对照组比较,差异无统计学意义,P值分别为0.663、0.362、0.443和1.000.结论 大黄素可能通过抑制HIF-1d mRNA的表达,从而降低VEGF mRNA的表达来抑制HepG2细胞新生血管的形成.