荧光原位杂交技术检测乳腺癌Her-2/neu扩增

目的：探讨荧光原位杂交技术（FISH）检测乳腺癌Her-2/neu的扩增情况,比较FISH法与免疫组织化学（I HC）法检测结果的一致性。方法：收集乳腺癌患者手术切除的肿瘤标本50例。经石蜡包埋,组织切片后,应用FISH法检测Her-2/neu扩增情况,I HC法检测Her-2/neu蛋白表达情况,并对两种检测方法的结果进行统计学分析。结果：50例标本中FISH阳性17例,FISH阴性33例,FISH阳性率34%（17/50）。50例标本中I HC（～）14例,I HC（0～＋）36例,I HC蛋白表达率28%（14/50）。FISH法与I HC法检测结果的总符合率为82%（41/50）（K=0.581）。结论：FISH法具有较高的稳定性与可靠性,临床开展FISH法检测Her-2/neu基因扩增情况作为I HC法的补充,可以更加准确和客观地对乳腺癌患者的治疗和预后进行评价。     

Her-2/neu和乳腺癌

1981年,Shih从胚胎大鼠的神经母细胞瘤中克隆了一个新的癌基因,命名为neu。数年后,两个研究小组先后从人cDNA文库中分离出与表皮生长因子受体Her鄄1的基因高度同源的Her鄄2,并与逆转录病毒基因v鄄erb鄄B2同源的c鄄erb鄄B2。随后的序列分析和染色体谱分析发现neu、Her鄄2和c鄄erb鄄B2其实是一个基因。原癌基因Her鄄2/neu(c鄄erb鄄B2)是表皮生长因子受体家族成员之一[1]。人Her鄄2/neu基因位于染色体17q21,编码相对分子质量为185000的跨膜蛋白P185,其胞内区有酪氨酸激酶活性。该蛋白在多种正常组织中有低表达,包括乳腺、胃肠道、呼吸道…     

乳腺癌HER-2基因荧光原位杂交检测的临床应用

目的研究荧光原位杂交(FISH)用于乳腺癌HER-2检测的临床应用及HER-2基因扩增与乳腺癌临床病理的相关性。方法应用FISH技术和免疫组化(IHC)技术检测40例乳腺浸润性导管癌石蜡包埋标本,对比分析。结果IHC检测CerbB-2(3+)/(2+)/(1+或0),其FISH阳性率分别为85.7%、50%、5.9%。24例腋窝淋巴结阳性者,其FISH检测HER-2基因扩增10例(P=0.0399)。ER/PR阴性8例,其HER-2基因扩增6例(P0.05)。结论IHC检测HER-2蛋白有很高的假阳性及假阴性,FISH有效性及准确性显著高于IHC,可在临床广泛推广应用。HER-2基因扩增与腋窝淋巴结阳性相关。     

乳腺癌HER-2基因荧光原位杂交检测的临床应用

目的研究荧光原位杂交（FISH）用于乳腺癌HER-2检测的临床应用及HER-2基因扩增与乳腺癌临床病理的相关性。方法应用FISH技术和免疫组化（IHC）技术检测40例乳腺浸润性导管癌石蜡包埋标本,对比分析。结果IHC检测CerbB-2（3＋）/（2＋）/（1＋或0）,其FISH阳性率分别为85.7%、50%、5.9%。24例腋窝淋巴结阳性者,其FISH检测HER-2基因扩增10例（P=0.0399）。ER/PR阴性8例,其HER-2基因扩增6例（P〉0.05）。结论IHC检测HER-2蛋白有很高的假阳性及假阴性,FISH有效性及准确性显著高于IHC,可在临床广泛推广应用。HER-2基因扩增与腋窝淋巴结阳性相关。     

荧光定量聚合酶链反应检测人乳腺癌C-erbB2基因扩增及过度表达的研究

目的建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测C-erbB 2基因表达水平,探讨其在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ-PCR法,并以2β-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者、30例良性乳腺疾病患者和81例乳腺癌患者外周血中C-erbB 2的表达量。结果C-erbB 2表达水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无显著性意义(P>0.05),乳腺癌组均高于前两组(P<0.05),2β-微球蛋白在三组间差异无显著性意义(P>0.05)。81例乳腺癌患者阳性率为50.6%,良性乳腺疾病组为0。C-erbB 2表达与患者年龄和肿瘤大小和类型无关(P>0.05),与乳腺癌临床分期、组织学分级以及腋淋巴结转移相关(P<0.05)。结论FQ-PCR技术是高度灵敏、高度特异的快速定量检测C-erbB 2方法,可有效地诊断乳腺癌并对其疗效、转移和预后进行监测。     

乳腺癌Her-2/neu蛋白表达与基因扩增的相关性分析

目的:应用免疫组织化学(IHC)法和荧光原位杂交(FISH)法分析乳腺癌相关蛋白Her-2/neu表达情况及其与基因状态间的相关性,并探讨其临床价值。方法:采用PathVysionTM探针试剂盒中基因识别位点探针(LSI)Her-2/neu基因探针和着丝粒17探针(CEP 17),以FISH法分析96例浸润性乳腺癌患者的石蜡切片病理标本中17号染色体和Her-2/neu基因状态,并分析已经IHC证实的Her-2/neu不同表达水平与FISH结果间的一致性,同时分析Her-2/neu基因状态与相应蛋白表达水平间的关系。结果:96例浸润性乳腺癌患者的病理标本中,FISH法检测的Her-2/neu阳性率为26.0%。IHC检测结果为(-)或(+)者的FISH阳性率为13.2%(7/53),IHC(++)者的FISH阳性率为31.4%(11/35),IHC(+++)者的FISH阳性率为87.5%(7/8),三者都以Her-2/neu高度扩增(Her-2/neu/CEP17﹥10)为主。所有患者中17号染色体为非整体性者占45.8%(44/96),其中亚二体性(CEP17﹤2)占7.3%(7/96),多体性占38.5%(CEP17﹥2)(37/96)[包括低多体性(2     

荧光原位杂交(FISH)技术与免疫组织化学(IHC)技术应用于乳腺癌患者Her2基因检测的评价

目的探讨采用荧光原住杂交（FISH）技术检测乳腺癌患者中的Her2基因与免疫组织化学（IHC）检测Her2基因的结果的一致性以及导致两者差异的可能原因;了解荆州地区乳腺癌患者中Her2基因的分布。方法以FISH方法,对55例免疫组织化学分别为（3＋）,（2＋）,（1＋）和阴性（-）的乳腺癌新鲜石蜡切片标本进行Her2基因的检测。结果55例标本中,有16例采用FISH方法检测出Her2基因的表达;12例Her2基因表达（3＋）的标本中11例检测出Her2基因;7例Her2基因表达（2＋）的标本中5例检测出Her2基因;10例Her2基因表达（1＋）的标本中未检测出Her2基因;26例Her2基因表达（-）的标本中未栓测出Her2基因。结论初步筛查Her2基因状态可以首选免疫组织化学方法,对于IHC（2＋）的标本,应该行FISH确诊。     

荧光原位杂交和基因组半定量法检测乳腺癌组织中c—erbB-2基因扩增

目的利用荧光原位杂交（FISH）与基因组半定量法检测乳腺正常良性和恶性组织中原癌基因c-erbB-2的扩增情况。方法收集50例临床切除的乳腺肿瘤组织，抽提收集样品基因组DNA并扩增c—erbB-2的特异序列构建转化子，以c-erbB-2的特异序列为探针进行间期核FISH检测乳腺肿瘤组织中c-erbB-2基因的扩增，并采用基因组半定量法比较不同组别乳腺组织中c-erbB-2基因的扩增。结果FISH检测发现正常乳腺组织中未出现c-erbB-2扩增，而良性与恶性组织中有不同程度的扩增，基因组半定量分析显示恶性肿瘤组织中c-erbB-2扩增程度高于良性与正常组织。结论c-erbB-2扩增是乳腺癌变的可靠的分子指标。可用荧光原位杂交与基因组半定量法对乳腺癌进行分子生物学诊断，且前者的敏感性与稳定性优于后者。     

荧光原位杂交和基因组半定量法检测乳腺癌组织中c-erbB-2基因扩增

目的利用荧光原位杂交(FISH)与基因组半定量法检测乳腺正常良性和恶性组织中原癌基因c-erbB-2的扩增情况。方法收集50例临床切除的乳腺肿瘤组织,抽提收集样品基因组DNA并扩增c-erbB-2的特异序列构建转化子,以c-erbB-2的特异序列为探针进行间期核FISH检测乳腺肿瘤组织中c-erbB-2基因的扩增,并采用基因组半定量法比较不同组别乳腺组织中c-erbB-2基因的扩增。结果FISH检测发现正常乳腺组织中未出现c-erbB-2扩增,而良性与恶性组织中有不同程度的扩增,基因组半定量分析显示恶性肿瘤组织中c-erbB-2扩增程度高于良性与正常组织。结论c-erbB-2扩增是乳腺癌变的可靠的分子指标。可用荧光原位杂交与基因组半定量法对乳腺癌进行分子生物学诊断,且前者的敏感性与稳定性优于后者。     

乳腺癌中基因BCSG1和C-erbB2的表达及意义

目的了解乳腺癌中乳腺癌特异性基因1（BCSG1）和C-erbB2表达概况,探讨BCSG1和C-erbB2在乳腺癌中表达水平及意义。方法用免疫组化方法检测40例乳腺癌患者中BCSG1和C-erbB2的表达。结果40例乳腺癌组织中阳性表达26例,占65%,40例正常乳腺组织均呈阴性表达,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。乳腺癌组织中BCSG1阳性表达与腋窝淋巴结转移、TNM分期、复发和转移有关（P〈0.05）。40例乳腺癌组织中C-erbB2蛋白阳性表达率为37.5%（15/40）,正常乳腺组织中均为阴性表达;两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。乳腺癌组织中C-erbB2阳性表达与腋窝淋巴结转移、TNM分期、复发和转移有关（P〉0.05）。结论基因BCSG1和C-erbB2表达异常是乳腺癌产生的机制之一,与乳腺癌的发生及发展有关。BCSG1可能是乳腺癌的一个重要预后指标。     

荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的比较桂林市荧光原位杂交法（FISH）和免疫组织化学法（IHC）检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体（HER-2）基因扩增及其蛋白表达情况的一致性．探讨FISH与IHC检测乳腺癌HER-2基因状态的临床意义。方法应用IHC和FISH对50例乳腺癌患者HER-2蛋白表达、基因扩增情况及17号染色体倍体性进行检测,分析IHC与FISH检测HER-2基因状态的差异以及HER-2蛋白状态与17号染色体倍体性的相关性。结果FISH与IHC结果总的符合率为82．0％．两者之间存在较好的一致性fkappa=0．6401,FISH检测IHC结果为3＋、2＋和0／1＋者的符合率分别为92．9％、70．0％和80．8％;IHC3＋及2＋者出现17号染色体多体性的几率比IHC0／1＋者高（P〈0．05）。结论FISH可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中HER-2的基因状态及17号染色体倍体性：FISH检测IHC3＋者符合率较高,FISH与IHC的差异主要在于IHC2＋和IHC0／＋组,IHC仅作为检测HER-2基因状态的初筛方法．而IHC结果为2＋或0／1＋者的HER-2基因状态必须应用FISH进一步确定。     

荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的 比较桂林市荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体(HER-2)基因扩增及其蛋白表达情况的一致性,探讨FISH与IHC检测乳腺癌HER-2基因状态的临床意义.方法 应用IHC和FISH对50例乳腺癌患者HER-2蛋白表达、基因扩增情况及17号染色体倍体性进行检测,分析IHC与FISH检测HER-2基因状态的差异以及HER-2蛋白状态与17号染色体倍体性的相天性.结果 FISH与IHC结果 总的符合率为82.0%,两者之间存在较好的一致性(kappa=0.640),FISH检测IHC结果 为3+、2+和0/1+者的符合率分别为92.9%、70.0%和80.8%;IHC3+及2+者出现17号染色体多体性的几率比IHC0/1+者高(P<0.05).结论 FISH可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中HER-2的基因状态及17号染色体倍体性;FISH检测IHC3+者符合率较高,FSH与IHC的差异主要在于IHC2+和IHC0/+组,IHC仅作为检测HER-2基因状态的初筛方法 ,而IHC结果 为2+或0/1+者的HER-2基因状态必须应用FISH进一步确定.     

乳腺癌钼靶X线表现与ER、PR及Her-2因子表达的相关性研究

目的初步探讨乳腺癌钼靶X线表现与ER、PR与Her-2因子表达之间的关系。方法将93例乳腺癌患者钼靶X线表现肿块、钙化、病变区密度和结构扭曲与免疫组织化学测定的ER、PR和Her-2的表达进行对照研究。结果93例乳腺癌患者中,肿块边缘毛刺征者ER、PR阳性表达率高;病变区有钙化和结构扭曲者Her-2阳性表达率高;病变区高密度和结构扭曲ER、PR阳性表达率低;分支铸形钙化更倾向于Her-2高表达;肿块大小与ER、PR和Her-2表达均无关。结论乳腺癌钼靶X线征象和ER、PR及Her-2的表达有密切关系,在一定程度上反映了ER、PR及Her-2的表达状态,为乳腺癌的术前辅助内分泌治疗和预后评估提供更多信息。     

C-erbB2、c-myc和CCND1 mRNA联合检测在乳腺癌诊断中的应用

目的建立荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测C-erbB2、核内原癌基因（c-myc）和细胞周期蛋白D1（CC-ND1）mRNA水平,探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者（正常对照组）、30例良性乳腺疾病患者（良性乳腺疾病组）和121例乳腺癌患者（乳腺癌组）外周血中C-erbB2、c-myc和CCND1的mRNA水平。结果 C-erbB2、c-myc和CCND1的mRNA水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学意义（P〉0.05）,乳腺癌组均高于前两组（P〈0.05）,β2-微球蛋白三组间差异无统计学意义（P〉0.05）;三种mRNA联合检测的阳性率高于单个mRNA的检测。结论 FQ-PCR技术可快速定量检测C-erbB2、c-myc和CCND1的mR-NA,三者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的阳性率。     

膀胱移行细胞癌各分期分级中荧光原位杂交检测敏感性比较

目的评价荧光原位杂交(FISH)在诊断膀胱移行细胞癌各分期分级中的敏感性。方法应用荧光标记的3、7、17号染色体及p16基因探针检测138例血尿患者尿液中脱落细胞的染色体及基因畸变情况,根据诊断标准计算FISH诊断膀胱移行细胞癌的敏感性。同时留取上述患者尿液送病理科行尿找瘤细胞检查,并比较两种方法对膀胱移行细胞癌的诊断效能。结果 FISH图像中细胞核大且不规则者更易观察到染色体基因异常情况,并可见具有较多染色体改变的细胞呈花斑状的染色图像。FISH和尿细胞学诊断膀胱移行细胞癌的总敏感性为83.9%和36.8%,在各分期分级中敏感性为T1期83.6%和31.3%,T2-4期100%和55.6%,G1级36.3%和9.1%,G2级95.2%和42.9%,G3级100%和50%。FISH诊断膀胱移行细胞癌的总敏感性及在肿瘤各种分期分级中敏感性与尿细胞学结果比较均有统计学差异(P<0.05)。FISH诊断膀胱移行细胞癌敏感性高于尿细胞学。结论 FISH对膀胱移行细胞癌的诊断有较高的敏感度。     

HER-2 DNA quantification of paraffin-embedded breast carcinomas with LightCycler real-time PCR in comparison to immunohistochemistry and chromogenic in situ hybridization

OBJECTIVES: To compare the detection of HER-2 status by real-time PCR, on paraffin-embedded breast carcinomas, in respect to immunohistochemistry (IHC) and chromogenic in situ hybridization (CISH). DESIGN AND METHODS: Paraffin-embedded breast carcinomas collected from 85 patients diagnosed with early stage breast cancer were analyzed for HER-2 gene amplification by real-time PCR and CISH, as well as for HER-2 protein expression by IHC. RESULTS: HER-2 gene amplification was observed in 19 (22.4%) of 85 breast cancer patients by real-time PCR and in 19 (22.4%) of 85 patients by CISH. Strong (3+) HER-2 protein over-expression was observed in 13 (15.3%) out of 85 patients. Moreover, there were 4 out of 85 (4.7%) patients that had moderate (2+) HER-2 protein over-expression, while 68 out of 85 (80%) patients had no HER-2 protein over-expression by IHC. There were strong concordance rates between real-time PCR and IHC (79/85, 92.9%, p<0.0001) and real-time PCR and CISH (77/85, 90.6%, p<0.0001). The concordance rate between the three methods was 90.6% (p<0.0001). CONCLUSIONS: Our data show that the results obtained for amplification of HER-2 by real-time PCR on the LightCycler are comparable to those obtained by IHC and CISH.     

乳腺癌HER-2基因扩增与临床病理特征的关系

目的 比较荧光原位杂交(FISH)和免疫组化(IHC)检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体2(HER-2)基因扩增及蛋白表达的一致性,并探讨HER-2基因扩增与临床病理特征的关系.方法 回顾性分析本院采用FISH法检测HER-2基因状态的112例乳腺癌,与IHC结果进行一致性分析,并对HER-2基因扩增与年龄、组织学分级、淋巴结转移及激素受体的关系进行统计学分析.结果 112例浸润性乳腺癌中,HER-2基因扩增57例,其中IHC检测HER-2(3+)者27例,(2+)者29例,(1+)者1例,分别占IHC病例总数的96.4％ (27/28)、48.3％ (29/60)和5.3％ (1/19).HER-2基因扩增与雌/孕激素受体呈负相关,而与年龄、组织学分级、淋巴结转移差异不显著.结论 对于IHC检测HER-2(3+)、(+或0)的病例可选择性做FISH进行确认,对于HER-2(2+)病例应常规进行FISH检测,以便更加准确和客观地对治疗和预后进行评价.     

HER2 testing in patients with breast cancer: poor correlation between weak positivity by immunohistochemistry and gene amplification by fluorescence in situ hybridization

OBJECTIVE: To evaluate amplification of the HER-2/neu gene by fluorescence ir situ hybridization (FISH) in tumors with weakly positive (2+) immunohistochemical staining. METHODS: A total of 1556 breast tumor biopsy specimens were referred to Mayo Medical Laboratories, Rochester, Minn, for HER2 testing between August and December 2000. Immunohistochemical (IHC) analysis was performed with use of a diagnostic test for the assessment of HER2 overexpression, the HercepTest. The IHC-stained slides were interpreted and scored on a scale ranging from 0 to 3+ according to Food and Drug Administration-approved guidelines. All specimens scored as 2+ were also routinely evaluated by FISH with use of a HER-2/neu DNA probe kit (PathVysion). Specimens were determined to be amplified if the ratio of HER-2/neu signals to chromosome 17 centromere (CEP17) signals was higher than 2.0. RESULTS: Thirty-eight percent of the specimens evaluated with the HercepTest were scored 0, 35% were 1+, 14% were 2+, and 13% were 3+. Of the 216 tumor specimens scored as 2+, 26 (12%) had a high level of HER-2/neu gene amplification, 54 (25%) demonstrated duplication of HER2, 4 (2%) deleted HER-2/neu and/or CEP17, and 123 (57%) had no apparent HER-2/neu anomaly, no apparent CEP17 anomaly, nor apparent single gain (aneusomy) of CEP17. CONCLUSION: We recommend that all specimens with a 2+ HercepTest result be evaluated by FISH for HER-2/neu gene amplification. The results of both assays should be considered before making a decision to recommend anti-HER2 therapy.