白细胞介素6对HL-60细胞NF-κB p65活性的影响

目的研究白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)对粒细胞白血病细胞系HL-60核因子-κB p65(NF-κB p65)活性的影响,以探讨IL-6在白血病发生、发展中的作用.方法指数生长期HL-60细胞置于96孔培养板内RPMI-1640培养液培养2 h后,分为A、B 2组.A组加PBS液继续培养3 h;B组分别加0.5、5、50 μg/L的IL-6继续培养3 h.用流式细胞仪 (FCM)检测HL-60细胞NF-κB p65的活化率.结果 IL-6浓度为5、50 μg/L时诱导的HL-60细胞NF-κB p65活化率分别为(16.81±2.73)%、(22.37±4.29)%,与对照组(8.44±2.20)%相比差异有统计学意义(P＜0.05);IL-6浓度在0.5 μg/L时NF-κB p65活化率为(8.69±1.61)%,与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);3种IL-6浓度组间的NF-κB p65活化率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-6有诱导HL-60细胞NF-κB p65活化的作用,且存在剂量依赖趋势.     

姬松茸粗多糖对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡及转录因子NF-κB活性的影响

目的：研究姬松茸粗多糖对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡及转录因子NF-κB活性的影响并探索其诱导凋亡机制。方法：培养HL-60细胞,用不同浓度（1,2,5,10 mg/mL）姬松茸粗多糖诱导48 h后,采用WST-1法测定细胞增殖抑制;流式细胞术测定凋亡;免疫荧光法测定NF-κB P65蛋白核转运。结果：经不同浓度姬松茸粗多糖作用后,HL-60细胞存活率分别为90.0%,77.5%,47.5%,17.5%,与对照组（99.0%）比有统计学意义（P〈0.05）;5 mg/mL姬松茸粗多糖诱导48 h后,HL-60细胞早期凋亡率为52.4%,较对照组（6.0%）明显增加（P〈0.05）;免疫荧光显示NF-κB核转运较对照组减少。结论：姬松茸粗多糖可抑制HL-60细胞增殖,呈浓度-依赖性;能诱导HL-60细胞凋亡;诱导凋亡的作用与抑制NF-κB通路异常激活相关。     

核因子-κB在TNF-α诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的　了解白血病细胞系 HL- 60中 ,肿瘤坏死因子 - α( TNF- α)诱导的核因子 - κB( NF- κB)活化与细胞凋亡之间的关系。方法　采用脂质体基因转染技术 ,将突变的核因子抑制蛋白 ( IκBα)质粒 ( p CMV4- IκBαS32 / 36 A)转染 HL-60细胞 ,于 48h后测其瞬时表达效应。用间接免疫荧光和 Western blot技术检测转染组和非转染组 HL- 60细胞的 NF-κB活化状态 ,同时用流式细胞术和 MTT法分别检测 TNF- α对两组 HL- 60细胞的凋亡诱导及生长抑制效应。结果　TNF- α可诱导非转染组 HL- 60细胞的 NF- κB活化 ,不能诱导转染组细胞的 NF- κB活化 ,即突变型 IκBα可特异性抑制HL- 60细胞的 NF- κB活化。结论　用突变型 IκBα特异性抑制 HL- 60细胞的 NF- κB活化 ,能明显增加其对 TNF- α的敏感性     

Wnt2B通过NF-κB/p65调节乳腺癌细胞的凋亡

目的研究Wnt2B对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响,探讨其在乳腺癌发生发展过程中的重要作用。方法应用免疫组化技术检测40例乳腺癌组织标本中Wnt2B的表达;应用Western blot检测乳腺癌配对细胞系MDA-MB-231和MCF-7中Wnt2B蛋白水平;通过瞬时转染Wnt2B特异的siRNA沉默高表达Wnt2B的MDA-MB-231细胞系后,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡水平;应用Western blot、共聚焦显微镜和凝胶电泳迁移实验(EM-SA)检测下调Wnt2B表达后对NF-κB/p65的表达和活性的影响。结果相对于Wnt2B阴性表达的正常乳腺组织,35例乳腺癌组织的表达呈强阳性并且存在核浆转移现象;在高转移细胞系MDA-MB-231中Wnt2B表达明显高于低转移细胞系MCF-7;针对Wnt2B的siRNA沉默成功下调MDA-MB-231中Wnt2B表达后,细胞凋亡率明显增加并伴随NF-κB/p65的表达下降和活性降低;应用NF-κB/p65特异性的抑制剂PDTC阻断此通路后,Wnt2BsiRNA诱导细胞的凋亡效应被阻断。结论 Wnt2BsiRNA通过NF-κB/p65通路抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的凋亡而产生抗瘤作用,Wnt2B可能成为乳腺癌有效治疗靶点之一。     

米非司酮对人宫颈癌HeLa细胞生长及其NF-κB p65表达的影响

目的探讨米非司酮（mifepristone,MIF）对人子宫颈癌HeLa细胞增殖及其NF-κB p65蛋白表达水平的影响。方法体外培养人子宫颈癌HeLa细胞,采用MTT法观察不同浓度MIF（5、10、20μmol/L）对HeLa细胞增殖的抑制作用;采用Western blot法检测MIF对HeLa细胞中NF-κB p65蛋白表达水平的影响。结果3个浓度的MIF均能显著抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量依赖性;MIF可以使HeLa细胞中NF-κB p65蛋白表达水平下降。结论MIF对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显的抑制作用,并且下调HeLa细胞NF-κB p65蛋白的表达。     

环孢素A诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡以及对NF-κB p65表达的影响

目的研究环孢素A(CsA)诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡作用以及对NF-κB p65表达的影响。方法倒置显微镜观察CsA高剂量(5、10、15、20μmol/L)组与CsA低剂量(1、2、4、8μmol/L)组处理MGC80-3细胞24 h后细胞形态变化;MTT比色法分别检测两剂量组处理24 h对MGC80-3细胞增殖的抑制作用,以细胞生长抑制率≤5%评价CsA的非毒性剂量;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测CsA高、低剂量组处理后的细胞凋亡率;Western blot法检测CsA高、低剂量组细胞内NF-κB p65的表达。结果 CsA低剂量组处理MGC80-3细胞24 h后显微镜下见细胞生长状况良好,CsA高剂量组见多数细胞生长贴壁不牢、皱缩变圆及坏死脱落的现象。CsA高剂量组对MGC80-3细胞增殖有抑制作用,而CsA低剂量组显示在4μmol/L浓度范围以下对细胞增殖无明显抑制作用。FCM检测表明CsA低剂量组诱导细胞凋亡率与空白组相比差异无显著性,随药物作用剂量增加CsA高剂量组诱导细胞凋亡作用增强。Western blot法表明CsA高剂量组作用后NF-κB p65表达逐渐降低(P<0.05,P<0.01),而CsA低剂量组NF-κB p65的表达基本不变。结论 CsA诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡作用与药物作用浓度呈剂量效应关系,CsA可能通过抑制NF-κB信号通路诱导MGC80-3细胞凋亡。     

NF-κB活性变化对HL-60细胞凋亡及WT1、Bcl-2基因表达的影响

目的为探讨NF-κB变化对白血病细胞凋亡的影响及其机制。方法 用PDTC抑制HL-60细胞NF-κB的活性，观察NF-κB活性抑制前后阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡的变化及WT1、Bcl-2表达水平的变化。结果 NF-κB活性抑制能明显增强阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡作用，同时明显下调WT1、Bcl-2的表达。结论 NF-κB活性抑制使白血病细胞凋亡增加，其作用可通过直接下调WT1的表达和间接下调Bcl-2的表达来实现.     

自身免疫性内耳病中NF-κB（p65）及ICAM-1的表达及意义

目的:建立自身免疫性内耳病的动物模型,研究NF-κB(p65)及ICAM-1的表达及意义,并探讨其可能的发病机制.方法:提取豚鼠内耳膜迷路组织为抗原,用环磷酰胺预处理豚鼠,将抗原与等量弗氏完全佐剂一起免疫豚鼠,用Western-Blot法检测NF-κB(p65)及ICAM-1在内耳的表达变化.结果:免疫豚鼠后听性脑干反应阈显著升高,内耳出现显著的炎细胞浸润,NF-κB(p65),ICAM-1的表达增强.结论:自身免疫性内耳病NF-κB(p65)的表达增加,并诱导ICAM-1表达而引发炎症反应,降低听功能.     

NF-κB p65对OX-LDL处理的内皮祖细胞增殖活性的影响及机制研究*

目的 研究核因子κB p65（NF-кB p65）对氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）处理的内皮祖细胞增殖活性的影响及机制。方法 分离培养人内皮祖细胞,用OX-LDL细胞培养液培养后,分别用实时荧光聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting检测细胞中NF-κBp65 mRNA及蛋白水平。用NF-κB p65 siRNA慢病毒感染内皮祖细胞,给予OX-LDL处理以后,qRT-PCR和Western blotting检测干扰效果。MTT检测内皮祖细胞的增殖活性,流式细胞术检测内皮祖细胞的凋亡变化,Western blotting检测细胞中活化的Caspase-3、Caspase-9蛋白水平,用比色法检测细胞裂解液中的超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。结果 OX-LDL处理可以诱导内皮祖细胞中NF-κB p65表达上调。NF-κB p65 siRNA慢病毒可以下调OX-LDL条件下内皮祖细胞中NF-кBp65的表达水平。OX-LDL处理后的内皮祖细胞的增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中活化的Caspase-3、Caspase-9蛋白水平也升高,细胞中SOD活性降低,MDA含量升高（P?<0.05）。敲低NF-κB p65 后的内皮祖细胞经OX-LDL诱导后,细胞增殖活性有所升高,细胞凋亡率降低,细胞中活化的Caspase-3、Caspase-9蛋白水平降低,SOD活性升高,MDA含量降低（P?<0.05）。结论 敲低NF-κB p65能够降低OX-LDL诱导的氧化应激及细胞凋亡,提高内皮祖细胞增殖活性。     

核因子-кB在TNF-α诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的了解白血病细胞系HL-60中,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的核因子-кB(NF-кB)活化与细胞凋亡之间的关系.方法采用脂质体基因转染技术,将突变的核因子抑制蛋白(IкBα)质粒(pCMV4-IкBαs32/36A)转染HL-60细胞,于48 h后测其瞬时表达效应.用间接免疫荧光和Western bbt技术检测转染组和非转染组HL-60细胞的NF-кB活化状态,同时用流式细胞术和MTT法分别检测TNF-α对两组HL-60细胞的凋亡诱导及生长抑制效应.结果 TNF-α可诱导非转染组HL-60细胞的NF-кB活化,不能诱导转染组细胞的NF-кB活化,即突变型IкBα可特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化.结论用突变型IкBα特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化,能明显增加其对TNF-α的敏感性.     

阻断NF-κB通路对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的影响

目的:探讨梗阻性黄疸时肝组织核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达与细胞凋亡的变化,并观察NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对肝脏损伤的保护作用。方法:将雄性SD大鼠72只随机分成胆总管结扎组(BDL组)、胆总管结扎+PDTC干预组(PDTC组)、假手术组(Sham组)。分别于术后第3天、第7天、第14天处死大鼠,观察肝组织细胞凋亡和NF-κB p65蛋白的表达。结果:BDL组和PDTC组NF-κB p65表达及细胞凋亡数明显增加,但在PDTC组明显低于BDL组。结论:NF-κB的活化可能是梗阻性黄疸时介导肝脏功能损害的重要因素。     

肾脏缺血预适应对核因子-κB活性及细胞凋亡的影响

目的通过建立大鼠肾脏急性缺血/再灌注（I/R）及缺血预适应（I/P＋I/R）模型,初步研究不同的缺血方式后肾脏核因子-κB（NF-κB）活性及二聚体亚单位的构成,探讨其减轻肾脏肾小管细胞凋亡的机制。方法 30只雄性SD大鼠摘除右肾、分离出左肾动脉后随机均分为3组（n=10）：A组为假手术组（Sham组）,只分离左肾动脉,暴露术野60 m in后直接缝合,24 h后取肾;B组为缺血/再灌注组（I/R组）,持续夹闭左肾动脉45m in,恢复血供24 h后取肾;C组为缺血预适应＋缺血/再灌注组（I/P＋I/R组）,左肾动脉夹闭2 m in,松开5 m in,重复3个循环,余同I/R组。分别用生化学方法检测血肌酐值的变化,组织病理学评价肾小管损伤程度评分,凝胶电泳迟滞分析检测肾组织NF-κB/DNA结合活性,超迟滞分析检测NF-κB亚单位的构成,Tunel法检测肾小管上皮细胞的凋亡。结果血清学检查及肾小管损伤评分提示,I/R组肾脏组织病理改变明显,损伤程度重,与Sham组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;与I/R组比较,I/P＋I/R组损伤程度则明显减轻,差异有统计学意义（P〈0.05）。凝胶电泳迟滞分析检测肾组织NF-κB/DNA结合活性I/P＋I/R组明显高于Sham组,差异有统计学意义（P〈0.05）;超迟滞分析检测NF-κB亚单位含有p65、p50;差异有统计学意义（P〈0.05）。结论肾脏缺血预适应可通过抑制NF-κB转录活性,减轻肾小管上皮细胞凋亡,从而发挥损伤保护效应。     

胃癌中HSP70、NF-κB p65的表达及临床意义

目的探讨热激蛋白70(HSP70)、核因子κB(NF-κB)p65在胃癌中的表达及其意义。方法收集2011年8月至2012年5月益都中心医院经病理诊断确诊为胃癌并行胃癌根治术的胃癌组织标本60例,采用免疫组织化学法检测60例胃癌患者癌组织及癌旁组织中HSP70、NF-κB p65的表达,并分析两者与胃癌病理特征的关系。结果胃癌组织中HSP70的阳性表达率显著高于癌旁胃组织(78.3%vs 13.3%)(P<0.05);NF-κB p65阳性表达率显著高于癌旁胃组织(63.3%vs 30.0%)(P<0.05);HSP70、NF-κB p65与胃癌组织分化程度、肿瘤的浸润深度以及淋巴结转移有关(P<0.05);HSP70、NF-κB p65在胃癌中的表达呈正相关(P<0.05)。结论 HSP70、NF-κB p65可能通过调节细胞凋亡及细胞增殖参与胃癌的发生、发展,监测HSP70、NF-κB p65在一定程度上有助于胃癌的治疗及预后判断。     

NF-κB抑制物对顺铂诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响

目的 了解核转录因子-κB(NF-κB)抑制物[阿司匹林、舒林酸、姜黄和二硫氨基甲酸酞吡咯烷(PDTC)]对顺铂介导的SiHa细胞凋亡的影响。 方法 体外培养宫颈癌SiHa细胞株,用前述4种NF-κB抑制物预处理细胞后,加入顺铂继续培养24 h,Western blot检测NF-κB P65的激活情况;MTT检测细胞的相对存活率;采用原位缺口末端标记法(TUNEL)比较4种药物联合顺铂和单用顺铂处理24 h细胞的凋亡;采用PI染色-流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的改变。 结果 NF-κB抑制物预处理后,再加入顺铂刺激,Western blot结果显示可抑制顺铂诱导的P65表达(P<0.05);MTT结果显示NF-κB抑制物能增加不同浓度顺铂对SiHa细胞的化疗毒性(P<0.05);NF-κB抑制物预处理后加入顺铂,TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡率均增加(P<0.05);顺铂能使S期细胞数增加(22.7% vs. 31.2%, P<0.05),而NF-κB抑制物预处理细胞则能抑制S期细胞的数量。 结论 NF-κB抑制物能增加SiHa细胞对顺铂化疗的敏感性,其机制可能是通过抑制小剂量顺铂对SiHa细胞NF-κB的激活,同时抑制小剂量顺铂对细胞DNA合成的诱导作用,进而增加顺铂诱导的细胞凋亡而达到的。     

p65结合肽与p65的亲和力检测及其对NF-κB DNA结合活性抑制作用的鉴定

目的检测NF-κB p65亚基结合肽与p65间相互作用的亲和常数,以及其对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.方法借助于生物传感器技术分析NF-κBp65亚基结合肽与p65相互作用的动力学,同时应用竞争性ELISA鉴定结合多肽对NF-κB DNA结合活性的抑制效应.结果生物传感器技术分析结果表明5条p65结合肽均能与p65发生相互作用,相互作用的亲和常数分别为GST-BPT1:2.67×10-7mol/L、GST-BPT2:9.02×10-6mol/L、GST-BPT3:1.07×10-6mol/L、GST-BPT4:8.03×10-6mol/L、GST-BPT5:9.83×10-7mol/L.竞争性ELISA检测结果表明5条p65结合肽均能在一定程度上抑制NF-κB与其顺式作用元件κB基序的结合,且这种抑制效应随多肽浓度的增加而增强.结论酵母双杂交筛选获得的5条p65结合多肽与p65间确实存在相互作用,且5条结合肽对NF-κBDNA结合活性均有一定的抑制效应,由此提示以这些多肽为先导物设计和开发靶向NF-κB的抗炎多肽药物将成为可能.     

溃结灵对Caco-2炎症细胞模型核因子-κB p65DNA结合活性的影响

[目的]观察溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型核因子-κB (NF-κB) p65蛋白DNA结合活性的影响.[方法]采用不同剂量含药血清干预Caco-2细胞,并以促炎细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β( IL-1β)]诱导Caco-2细胞建立炎症细胞模型,收集细胞.采用Trans AM核转录因子活性检测试剂盒检测细胞核蛋白NF-κB p65的含量(活性).[结果] TNF-α与IL-1β诱导的模型组细胞核蛋白NF-κB p65的含量显著高于正常对照组(P＜0.01);渍结灵高、中剂量组,蛋白酶抑制剂组和阳性药(柳氮磺胺吡啶)组细胞核蛋白NF-κB p65的含量均显著降低,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型细胞核蛋白NF-κB p65 DNA结合活性具有一定的下调作用.     

Inhibition of NF-κB by mutant IκBα enhances TNF-α-induced apoptosis in HL-60 cells by controlling bcl-xL expression

Backgound The aim of this study was to explore whether the inhibition of nuclear factor-κB (NF-κB)activation by mutant IκBα (S32,36→A) can enhance TNF-α-induced apoptosis of leukemia cells and to investigate the possible mechanism. Methods The mutant IκBα gene was transfected into HL-60 cells by liposome-mediated techniques. G418 resistant clones stably expressing mutant IκBα were obtained by the limiting dilution method. TNF-α-induced NF-κB activation was measured by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). The expression of bcl-xL was detected by RT-PCR and Western blot after 4 hours exposure of parental HL-60 and transfected HL-60 cells to a variety of concentrations of TNF-α. The percentage of apoptotic leukemia cells was evaluated by flow cytometry (FCM). Results Mutant IκBα protein was confirmed to exist by Western blot. The results of EMSA showed that NF-κB activation by TNF-α in HL-60 cells was induced in a dose-dependent manner, but was almost completely inhibited by mutant IκBα repressor in transfected cells. The levels of bcl-xL mRNA and protein in HL-60 cells increased after exposure to TNF-α, but changed very little in transfected HL-60 cells. The inhibition of NF-κB activation by mutant IκBα enhanced TNF-α-induced apoptosis. Thecytotoxic effects of TNF-α were amplified in a time- and dose-dependent manner. Conclusions NF-κB activation plays an important role in the resistance to TNF-α-induced apoptosis. The inhibition of NF-κB by mutant IκBα could provide a new approach that may enhance the antileukemia effects of TNF-α or even of other cytotoxic agents.     

hBD-3和NF-κB p65在口腔潜在恶性病变和口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 检测β-防御素-3(hBD-3)和核因子-κB(NF-κB)p65在正常口腔黏膜、口腔潜在恶性病变(OPMD)及口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达并探讨相关性.方法 收集中南大学湘雅医学院附属海口医院病理科2015年1月-2018年12月60例OPMD患者、40例OSCC患者及15例口腔黏膜正常者的临床资料及组织...