阿霉素诱导细胞凋亡时的基因调控

目的 :探讨阿霉素诱导细胞凋亡的分子机制。方法 :通过光镜和电镜观察阿霉素作用不同时间后的形态学改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪分析 DNA含量和细胞周期 ,并检测细胞 p5 3基因蛋白表达 ;免疫组织化学法检测 bcl- 2基因蛋白的表达。结果 :阿霉素作用于 MEC- 1细胞后出现了细胞凋亡的特征 ,p5 3蛋白表达的荧光指数 (FI)值分别为 0 .2 0± 0 .0 4、0 .42± 0 .11、1.6 7± 0 .17,bcl- 2基因蛋白表达逐步降低。结论 :p5 3基因和bcl- 2基因参与凋亡过程可能是阿霉素诱导 m Ec- 1细胞凋亡的主要机制     

阿霉素诱导人肝癌细胞BEL—7402凋亡的观察

目的研究化疗药物阿霉素抗癌作用与癌细胞凋广的关系及意义。方法应用流式细胞仪、激光共聚焦扫描显微镜动态观察阿霉素对体外培养的人肝癌细胞BEL－7402的生长抑制作用与细胞凋亡的关系。结果阿霉素可阻滞人肝癌细胞BEL－7402从G0/G1期进入S期,诱导细胞凋亡。结论本研究显示阿霉素抗癌作用与诱导细胞凋亡有关。应用流式细胞仪、激光共聚焦扫描显微镜观察细胞凋亡是有效、可行的方法。     

他莫昔芬诱导K562细胞凋亡的实验研究

 目的 观察他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增生抑制及诱导凋亡作用。方法 在体外设定的浓度梯度和作用时间下用他莫昔芬处理K562细胞,采用锥虫蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率,Wright-Giemsa染色光镜观察细胞形态、琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯带（DNA,ladder）、流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 他莫昔芬能够抑制K562细胞增生;1 ~ 5μmol／L他莫昔芬可诱导K562他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞。结论 他莫昔芬可抑制K562细胞生长,诱导其凋亡。     

细胞凋亡信号传导研究进展

细胞凋亡是受基因调控的一种主动性细胞自杀过程,它与细胞增殖的动态平衡是维系生长发育、内环境稳定和免疫调节所必须的最基本过程,细胞内有一整套极其复杂的信号系统精细地调控细胞凋亡过程,近年来人们对细胞凋亡信号传导途径的研究已取得明显进展,主要表现在:①蛋白酶Caspase家族在细胞凋亡中起重要作用;②线粒体内膜空间释放促死亡蛋白是导致凋亡发生的主要因素;③死亡配基和细胞内应激是细胞凋亡信号传导中两条重要途径。 1 Caspase家族在细胞凋亡中的作用 Caspase是特异酶切ASP氨基位点的半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase),Caspase的发现来自线虫凋亡基因的遗传学研究,在哺乳动物以至少发现13个成员,根据其发现顺序统一命名为Caspase 1—13,目前尚不清楚为什么在哺乳动物中存在如此之多Caspase,而且发现在某些情况下,不同Caspase裂解相同的蛋白底物,推测可能原因有:①Caspase或许是以组织或亚细胞特异性方式激活的;②Caspase或许对底物具有专一性;③Caspase或许是按级联裂解顺序排列的;④Caspase为不同凋亡刺激所必须。 所有蛋白水解酶Caspase都具有相似的氨基酸序列、结构和底物特异性,它们均以酶原(Proenzyme)形式存在,由N端长副区(Prodomain)约30KD,大亚单位约2     

8-Br-CAMP诱导入食管癌细胞凋亡的研究

目的：本文主要研究人食管癌１０９细胞株经８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ诱导后细胞凋亡的发生。方法：用ＴＵＮＥＬ法观察诱导后细胞凋亡情况。结果：人食管癌１０９例细胞株自发凋亡率为１０．３％，经８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ诱导后倾向细胞增加。结论：８－Ｂｒ－ｃＤＮＡ具有促进人食管癌细胞凋亡倾向的效应。     

组织因子/因子Ⅶ激活PI3K/Akt信号途径调控阿霉素诱导人胶质母细胞瘤细胞凋亡的研究

Objective: To investigate the role of tissue factor (TF) in chemotherapeutic reagent - induced apoptosis on human glioblastoma and explore its mechanism. Methods: The expression of TF was examined by Western blotting. The cytotoxicity of doxorubicin was determined by WST assay. The activation of Caspase-3 and PARP induced by adoxorubicin were tested by Western blotting. Results: Human glioblastoma cell line U373MG expressed high level of TF while LN-229 was with low-TF level. The chemotherapeutic reagent doxorubicin revealed stronger cytotoxic effect on high-TF U373MG cells than low-TF LN-229 cells. Enforced strong expression of TF was achieved by transfection of TF-pcDNA3 combinant on LN-229 cells in a dose-dependent manner. Enforced TF expression in transfected LN-229 cells not only impaired the doxorubicin-induced cleavage of Caspase-3 and PARP, but also inhibited the cytotoxic effect of doxorubicin. Furthermore, activation of Akt was strong in high-TF U373MG cells but weak in low-TF LN-229 cells. Incubation of factor VII (FVII) with enforced TF-expressing LN-229 cells increased the phosphorylation of Akt in a time-dependent manner. Conclusion: These results suggest that over-expression of TF on glioblastoma could inhibit doxorubicin-induced apoptosis. Interaction of FVII and TF activates the downstream PI3K/Akt pathway. Tumor-derived over-expression of TF might play a role in chemotherapy resistance in glioblastoma, at lest in part, by activating PI3K/Akt-mediated survival and anti-apoptotic mechanism through the interaction of TF/FVII signaling.     

细胞外信号调节蛋白激酶在人胃癌细胞Fas介导的凋亡信号通路中的作用

目的　分析在胃癌细胞系SGC 790 1中,细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在Fas介导的信号通路中的表达及其作用,探讨该信号通路与胃癌发生和发展的关系。方法　利用同位素标记法和特异性识别磷酸化ERK抗体进行Western印迹杂交,检测Fas抗体孵育不同时间点胃癌细胞ERK的活性;利用流式细胞术检测胃癌细胞在各处理因素作用下细胞凋亡情况。结果　经抗Fas抗体处理后,胃癌细胞中ERK活性升高,在30min时达高峰;在MEK1抑制剂PD980 5 9作用下,ERK活性明显下降。抑制剂预处理组sub G1 细胞占30 .5 %±2 .6 %,单纯抗Fas抗体处理组sub G1 细胞占3.1 %±0 .2 %,对照组为3.0 %±0 .1 %。结论　在胃癌细胞中,抗Fas抗体可介导ERK活性的升高,导致细胞对Fas介导的凋亡信号脱敏;MEK1抑制剂可使胃癌细胞对Fas介导的凋亡信号敏感;胃癌细胞通过Fas介导的ERK的活化,逃逸免疫监视,持续生长。     

紫杉醇诱导细胞凋亡机制研究进展

总结近年来紫杉醇诱导细胞凋亡机制的研究进展 ,阐述其多种可能的途径 ,为临床应用该类药物提供更好的指导。     

Raji细胞抵抗阿霉素诱导细胞凋亡分子机制的实验研究

目的：观察Ｒａｊｉ细胞抵抗职霉素诱导细胞凋亡的分子机制，从细胞凋亡的角度探讨肿瘤细胞耐药机制。方法：ＭＴＴ方法测定阿霉素和肽素诱导的细胞毒实验，碘化丙啶染色ＦＡＣＳ和ＤＮＡ降解断裂法分析阿霉素诱导的细胞凋亡，ＦＡＣＳ分析Ｒａｊｉ细胞ｂｃｌ－２的表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｏｌｔ观察Ｒａｊｉ细胞ｐ５３、ｂａｘ分子的表达，ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＤＲ１、ＭＲＰ和ＧＳＴπ的表达水平。结果：Ｒａｊｉ细胞对阿霉素和肽     

INDUCTION OF APOPTOSIS IN S-180 AND S-180R TUMOR CELLS BY ADRIAMYCIN IN VIVO

Apoptosis of tumor cells have become a newstandard for chemotherapy. It is useful to demonstrateinduction of apoptosis in tumor cells by anti-cancer drugsin vivo. We reported the results of apoptosis induction inmurine tumor cell line S-180 and it’s resistant cell linc S-180R by adriamycin in different dose and different time.We found that apoptosis in S-180 cells could be inducedby low dose of adriamycin, the apoptosis was started at 24h. after the administration, and reached to 62.5% of thecells to apptosis until 72 h. Comparison with theparental cell line, only 13% of S-180R cells wereapoptosed. At high dose, 20% of S-180R cells wereapoptosed, whereas, almost all S-180 cells were killed inthe same time. The lymphocytes were appeared inabdominal cavity of the mice after treatment ofadriamycin for 24 h. It was very interested to find outthat there was no lymphocyte left in the abdominal cavityof the mice with S-180R cells treated at high dose ofadriamycin.     

冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制

目的：研究冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K562细胞，检测细胞生长抑制率．观察细胞凋亡时的形态学变化．对细胞凋亡前后的端粒酶活性进行检测。结果：冬凌草甲素可显著降低K562细胞的端粒酶活性．抑翻细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：冬凌草甲素能抑制K562细胞的生长并诱导细胞发生凋亡．降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

抗氧化剂对三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡作用的影响

目的 :探讨细胞内抗氧化剂与氧化砷 ( As2 O3 )诱导细胞凋亡的关系。方法 :采用 HL-60细胞为体外模型 ,采用流式细胞术观察不同抗氧化剂对氧化砷诱导细胞凋亡的影响。结果 :自由基清除剂超氧化物歧化酶( SOD)、过氧化氢酶 ( CAT)、维生素 C ( V-C)和巯基化合物乙酰半胱氨酸 ( CYS)可拮抗氧化砷诱导的细胞凋亡 ;砷制剂主要诱导 HL -60细胞 G2 -M期细胞凋亡 ;氧化砷对端粒酶有微弱抑制作用。结论 :砷制剂与细胞内巯基及自由基清除酶等抗氧化剂结合 ,致使酶活性下降 ,细胞抗氧化能力下降 ,可能是砷制剂诱导细胞凋亡的机理之一。     

TNF诱导HL—60细胞凋亡的初步观察

目的为了研究肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的抗肿瘤机制,观察了ＴＮＦ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。方法用流式细胞分析及ＤＮＡ电泳分析检测ＨＬ－６０细胞发生凋亡的情况。结果ＴＮＦ（４０μｇ／Ｌ）处理细胞后,流式细胞仪分别在６０ｈ,８４ｈ出现凋亡特有的ＡＰ峰（分别占６３．５％、８５．６％）;琼脂糖凝胶电泳显现出特征性的ＤＮＡ“梯状”带。结论ＴＮＦ（４０μｇ／Ｌ）具有诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的作用。推测ＴＮＦ的抗肿瘤作用可能与诱导细胞凋亡有关     

全反式维甲酸对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨 HL- 6 0细胞经全反式维甲酸 (ATRA)作用后对化疗药物阿糖胞苷 (Ara- C)诱导凋亡敏感性的变化。方法 :应用光镜检查凋亡细胞形态 ,DNA电泳检查梯状条带及流式细胞仪检测细胞周期分布、凋亡细胞率和 bcl- 2蛋白表达的阳性细胞率和相对荧光强度 (MFI)。结果 :ATRA0 .3mg/ L 作用 HL- 6 0细胞 72 h后 ,S期细胞显著减少至 32 .9% (P<0 .0 5 ) ,G0 / G1 期细胞明显增加达 5 8.5 % (P<0 .0 5 ) ,bcl- 2阳性细胞率和 MFI分别下降至 18%和 0 .6 3(P<0 .0 5 ) ;Ara- C1.5 m g/ L 作用 HL- 6 0细胞 4h,凋亡细胞率为 5 5 .1% ,DNA电泳见明显的梯状条带。当 HL- 6 0细胞经 ATRA0 .3m g/ L 作用 72 h后再加 Ara- C1.5 m g/ L 继续培养 4h,细胞凋亡率明显减少至 34 .4% (P<0 .0 5 ) ,DNA电泳见梯状条带亮度减弱。结论 :ATRA降低 HL- 6 0细胞对 Ara- C诱导凋亡敏感性 ,其机制可能与 ATRA阻滞 G0 / G1 期细胞进入 S期有关     

羟基喜树碱诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的 :探讨国产羟基喜树碱 (HCPT)对 HL - 6 0细胞的作用机制和规律。方法 :应用细胞形态学检查 ,DNA凝胶电泳及流式细胞仪分析检测。结果 :HCPT 1mg/ L和 5 mg/ L作为 HL - 6 0细胞 4h细胞凋亡率分别为 5 0 .6 %和 6 8.6 %。光镜检查见细胞核固缩、碎裂 ;电镜检查见染色质向核周边凝集。 DNA电泳显示典型的梯状条带。当 HCPT浓度超过 5 mg/ L或作用超过 4h,细胞凋亡率无明显增加 ,出现饱和现象。HL - 6 0细胞经 HCPT作用后 ,S期细胞显著减少 ,G0 / G1 期细胞增加。结论 :HCPT诱导 HL - 6 0细胞出现凋亡并具有饱和效应 ,HCPT为 S期特异性药物。临床上 HCPT应与细胞周期非特异性药物联合用药。     

3种化疗药物诱导HL-60细胞凋亡及Fas FasL的表达

目的:观察阿糖胞苷(Ara-c)、柔红霉素(DNR)及长春新碱(VCR)诱导HL-60细胞株凋亡的规律及细胞凋亡中Fas、FasL抗原的变化,探讨凋亡基因在细胞凋亡中的作用。方法:应用流式细胞仪及吖啶橙染色荧光显微镜观察3种化疗药物对HL-60细胞凋亡的影响,及细胞Fas、FasL的表达情况。结果:DNR和Ara-C能诱导HL-60细胞发生凋亡,荧光显微镜观察HL-60细胞可见凋亡小体、核染色质聚集、胞体出芽改变。流式细胞仪检测在G1期前出现sub-G1峰,随着化疗药物浓度的增加及共培养作用时间的延长,HL-60细胞凋亡率逐渐增加。每个实验组细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。VCR每个实验组细胞凋亡率与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。DNR作用HL-60细胞可使Fas、FasL表达增加;Ara-C可使FasL表达增加,而Fas表达无变化;VCR作用后Fas表达增加,而对FasL表达无影响。结论:DNR和Ara-C可诱导HL-60细胞凋亡,VCR诱导调亡作用不明显。DNR可上调HL-60细胞Fas/FasL表达,Fas/FasL系统参与DNR诱导的细胞凋亡过程。     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞的编程性细胞死亡

目的探讨高三尖杉酯碱诱导人白血病细胞系K562细胞编程性细胞死亡的作用。方法将不同浓度高三尖杉酯碱加入K562细胞培养体系，采用光镜、电镜和电泳方法观察药物处理后K562细胞的编程性细胞死亡。结果高三尖杉酯碱（2μg／ml～200μg／ml）能明显诱导K562细胞的编程性细胞死亡，药物处理后24h和36h时死亡细胞所占比例较高。光镜下该类细胞体积变小，核染色质凝聚，核碎裂。电镜下见该类细胞核膜完整，核染色质向边缘集中，形成致密染色质块。DNA电泳示小片段DNA明显增加，微呈梯形外观。结论高三尖杉酯碱能诱导人白血病K562细胞系的编程性细胞死亡。     

化疗药物体外诱导白血病细胞凋亡与临床疗效的关系

目的 :探索急性淋巴细胞白血病 (AL L)患者体外化疗药物诱导白血病细胞凋亡在化疗疗效预测中的价值。方法 :应用 Td T介导的脱氧核苷酸切口和末端标记法 (Tunel)、单克隆抗体免疫组化检测等方法研究 2 8例初治 AL L 患者体外化疗药物诱导白血病细胞凋亡、bcl- 2表达与临床化疗疗效的关系。结果 :2 8例 AL L 患者中 ,2 0例获完全缓解 (CR)者 ,bcl- 2表达显著低于 8例未缓解(NR)者 (P<0 .0 5 ) ;CR患者长春新碱 (VCR)、柔红霉素 (DNR)和地塞米松 (DXM)体外诱导白血病细胞凋亡率均高于 NR患者 ,差异有显著性 (P均 <0 .0 5 ) ;体外 VCR、DNR和 DXM3种药诱导白血病细胞的总凋亡率 ,可以作为临床预测 AL L 患者 VDCP方案疗效的定量指标。结论 :体外化疗药物能否有效地诱导白血病细胞凋亡是判断 AL L 患者化疗敏感性的重要指标