哮喘豚鼠气道壁厚度与转化生长因子β1的相关及地塞米松干预效果

我们为研究复制哮喘豚鼠模型 ,测定气道壁厚度和转化生长因子β1(ＴＧＦ β1) ,探讨二者之间的相关性及用地塞米松干预的效果。材料与方法　哮喘豚鼠制备及干预 :豚鼠 3 6只 ,雌雄不限 ,体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ。随机分为哮喘组、地塞米松干预组(简称治疗组 )和对照组 ,每组各 12只。哮喘组和治疗组豚鼠腹腔注射 10 %卵蛋白溶液 1ｍｌ,10天后以 1%卵蛋白雾化吸入 ,隔天 1次共 15次 ,制备慢性哮喘豚鼠模型 ,对照组用生理盐水。于每次激发前 ,治疗组豚鼠腹腔注射 0 0 5 %地塞米松 1ｍｌ,哮喘组和对照组腹腔注射等量的生理盐水。标本采集 :将豚…     

白细胞介素-33在过敏性哮喘小鼠体内的变化及作用

目的探讨白细胞介素-33(IL-33)在粉尘螨1类变应原(Der f 1)诱导的过敏性哮喘小鼠中的变化及作用。方法将40只雌性BALB/c小鼠用随机数字表法分为哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和阴性对照组(PBS组),每组10只。哮喘组、免疫治疗组和抑制剂组分别在第0、7和14天腹腔注射100μl粉尘螨变应原提取液(含100μg/ml Der f 1),抑制剂组小鼠同时注射抑制剂(可溶性ST2 100μl,用于抑制IL-33),PBS组注射等量PBS。第21天起,各组小鼠雾化吸入粉尘螨变应原提取液(0.5μg/ml),30 min/次,1次/d,连续7 d。免疫治疗组小鼠第25天起于雾化前0.5 h,分别用200μl的Der f 1蛋白溶液(100μg/ml)腹腔注射进行免疫治疗,PBS组用PBS代替粉尘螨变应原。第27天雾化吸入后24 h处死小鼠,收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和眼球血,并对BALF中嗜酸粒细胞进行计数,制作肺组织病理切片。ELISA法检测BALF中IL-5、IL-13和γ干扰素(IFN-γ)的含量及血清中特异性Ig E和Ig G2a水平。结果除PBS组小鼠外,其他组小鼠自第21天开始出现不同程度的哮喘症状。自第25天开始,免疫治疗组小鼠的哮喘症状开始缓解。哮喘组和PBS组小鼠BALF中嗜酸粒细胞总数分别为(4.41±0.36)×10~5/ml和(0.37±0.08)×10~5/ml,两组差异有统计学意义(t=24.50,P0.01);免疫治疗组和抑制剂组小鼠的嗜酸粒细胞总数分别为(1.43±0.14)×10~5/ml和(2.73±0.33)×10~5/ml,均明显低于哮喘组(F=129.72,P0.01)。ELISA检测结果显示,哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组BALF中IFN-γ的水平分别为(83.06±11.38)、(277.97±22.46)、(175.13±13.41)和(224.77±19.97)pg/ml,免疫治疗组和抑制剂组均明显高于哮喘组(t=17.31,t=11.71,P0.01)。哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组小鼠BALF中IL-5水平分别为(208.64±11.55)、(106.87±11.39)、(140.71±14.58)和(90.15±9.49)pg/ml,哮喘组的水平明显高于其他各组(F=97.19,P0.01)。哮喘组和免疫治疗组BALF中IL-13水平分别为(308.37±13.67)pg/ml和(175.66±11.79)pg/ml,两者差异有统计学意义(P0.01);抑制剂组小鼠的为(221.12±21.08)pg/ml,明显低于哮喘组(t=16.44,P0.01);PBS组为(97.57±18.38)pg/ml。免疫治疗组与哮喘组相比,小鼠肺部炎性症状均减轻,几乎无炎症细胞。抑制剂组小鼠的支气管周围也有嗜酸粒细胞增多症、上皮细胞脱落和支气管上皮细胞肥大,但较哮喘组要减轻许多。血清Ig E抗体水平的检测结果显示,哮喘组、免疫治疗组、抑制剂组和PBS组分别为(31.97±3.48)、(12.86±2.22)、(18.43±2.30)和(9.68±1.27)IU/ml,免疫治疗组和抑制剂组均低于哮喘组(t=-7.77,P0.01)。Ig G2a抗体水平的变化和Ig E相反,哮喘组、免疫治疗组和PBS组分别为(26.94±2.96)、(35.06±2.57)和(10.31±1.48)μg/ml,免疫治疗组高于哮喘组(t=6.55,P0.01)。结论 ELISA检测结果表明IL-33/ST2信号通路在小鼠过敏性哮喘中发挥着重要的作用。     

重组蛋白Blo t 21 T特异性免疫治疗哮喘小鼠效果研究

目的探讨热带无爪螨重组蛋白Blo t 21 T特异性免疫治疗哮喘小鼠的效果。方法将30只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和免疫治疗组3组,每组10只。哮喘组和免疫治疗组小鼠分别于第0、7、 14天腹腔注射200μl热带无爪螨变应原粗提液[含蛋白10μg, Al (OH)32 mg],第21天开始,在每天同一时间用热带无爪螨变应原粗提液(蛋白浓度为0.5μg/ml)雾化激发小鼠,连续雾化7 d,每次30 min。免疫治疗组在第25～27天雾化激发前30 min,腹腔注射重组蛋白Blo t 21 T 200μl (含蛋白10μg)。对照组用PBS替代。最后一次雾化24 h后,水合氯醛麻醉小鼠,眼球采血并收集肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。刘氏染色法计数BALF中嗜酸粒细胞, ELISA检测BALF中细胞因子白细胞介素4 (IL-4)、 IL-13、 IL-17和γ干扰素(IFN-γ)水平,以及血清中的Ig E和IgG_(2a)抗体水平。制作肺组织病理切片, HE染色观察。多组数据的统计分析采用单因素F检验,两组数据的统计分析采用SNK检验。结果免疫治疗组小鼠BALF中嗜酸粒细胞数量为(1.23±0.35)×105/ml,低于哮喘组的(5.32±1.22)×105/ml (P 0.05); 3组小鼠BALF中嗜酸粒细胞数量差异有统计学意义(P 0.05)。ELISA检测结果显示,免疫治疗组小鼠BALF中IL-4、 IL-13和IL-17水平分别为(70.96±17.62)、(159.20±21.08)和(220.80±25.95) pg/ml,低于哮喘组的(111.96±13.62)、(321.40±31.88)和(425.40±34.83) pg/ml (P 0.05),高于对照组的(12.57±3.62)、(109.62±15.38)和(114.38±18.43) pg/ml (P 0.05);免疫治疗组IFN-γ水平为(316.80±29.12) pg/ml,高于哮喘组和对照组的(72.84±10.10)、(125.60±22.38) pg/ml (P 0.05)。免疫治疗组小鼠血清中IgG_(2a)、 IgE抗体水平分别为(49.73±10.95)、(316.80±29.12)μg/ml,高于哮喘组的(27.30±4.83)、(57.40±15.96)μg/ml (P 0.05)。肺组织HE染色观察显示,哮喘组可见较明显的气管壁增厚,血管黏膜和肺组织周围有较多的炎症细胞浸润;免疫治疗组与哮喘组相比,上述症状减轻,支气管壁增厚减少,炎症细胞和分泌物均较少。结论热带无爪螨重组蛋白Blo t 21 T特异性免疫治疗可以减轻哮喘小鼠症状。     

卵清蛋白致敏大鼠支气管哮喘模型的制备

目的建立卵清蛋白特异性致敏诱导的大鼠支气管哮喘模型。方法 20只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,每组10只。第1天致敏:空白组给予生理盐水1ml腹腔注射致敏,而模型组给予1mL造模液(含V级卵清蛋白100mg,氢氧化铝100 mg和灭活百日咳杆菌6×109个)腹腔注射致敏;第15天开始激发:将两组大鼠分别置于相同大小的雾化箱内,空白组给予生理盐水6 ml雾化激发,模型组给予5%的V级卵清蛋白溶液6 ml雾化激发,每天激发一次,每次激发30 min,连续激发10天后处死大鼠,并采集相应标本。结果空白组大鼠激发后没有特殊异常表现,而模型组大鼠每次激发后出现烦躁不安、呼吸加深、加快,点头呼吸,咳嗽,闻及哮鸣音,呈哮喘样、口周发绀、反应迟钝等表现;空白组大鼠肺泡灌洗液和血液中嗜酸性粒细胞数量正常,而模型组大鼠出现相应增加;病理切片显示空白组肺组织和气道壁嗜酸性粒细胞浸润较少,而模型组嗜酸性粒细胞浸润相应地增多。结论卵清蛋白特异性致敏能成功构建大鼠支气管哮喘模型。     

鼠白细胞介素12质粒对小鼠支气管哮喘模型气道炎症及细胞因子的影响

目的　研究鼠白细胞介素 12 (IL 12 )基因表达 (mIL 12 )质粒对小鼠支气管哮喘 (简称哮喘 )模型气道炎症及细胞因子的影响 ,并分析其作用机制。方法　卵白蛋白 (OVA)致敏建立小鼠哮喘模型。BALB/c小鼠 4 1只 ,分为 6组。即哮喘模型组 (A组 ) 8只 :OVA致敏 +OVA气雾攻击 ;模型对照组 (B组 ) 6只 :用生理盐水代替 1%OVA溶液雾化 ,余处理同A组 ;mIL 12质粒预防组 (C组 ) 8只 :实验第 1、3、5天各肌肉注射mIL 12质粒 10 0 μg ;mIL 12质粒治疗组 (D组 ) 8只 :实验第 14、16、18天各肌肉注射mIL 12质粒 10 0 μg ;空质粒预防组 (E组 ) 5只 :实验第 1、3、5天各肌肉注射空质粒 10 0 μg ;空质粒治疗组 (F组 ) 6只 :实验第 14、16、18天各肌肉注射空质粒 10 0 μg。测定所有小鼠支气管 肺泡灌洗液 (BALF)中的嗜酸粒细胞 (EOS)个数和IL 4、IL 5、γ干扰素 (IFN γ)水平。结果B组小鼠EOS个数和IL 4、IL 5、IFN γ浓度分别为 (0 0 1± 0 0 3)× 10 8/L、(2 4± 4 ) pg/ml、(33± 6 ) pg/ml、(72 5± 5 9) pg/ml,C组为 (0 0 6± 0 0 4 )× 10 8/L、(43± 13) pg/ml、(6 3± 10 )pg/ml、(6 2 6± 6 0 ) pg/ml,D组为 (0 11± 0 12 )× 10 8/L、(38± 14 )pg/ml、(6 6± 14 ) pg/ml、(6 6 1± 4 0 ) pg/ml,与A     

肾上腺素和氢化可的松所致鼠主动脉内皮细胞损伤的电镜观察

一、材料和方法Wistar大鼠18只,随机分为三组:(1)对照组:7只,其中5只由腹腔注入生理盐水(0.5ml/次,1～2次/日),共注射2～5天;2只为空白对照。(2)肾上腺素组:7只,腹腔注入肾上腺素(50μg～1mg/kg/日),共注射2～5天。(3)肾上腺素     

细胞因子在小鼠支气管哮喘发病中的作用及梓醇的治疗效应

目的 研究细胞因子IL-4、IL-5、IL-8、IFN-r及 NO与哮喘发生的关系,观察中药梓醇对支气管哮喘的治疗作用.方法　将30只Balb/c小鼠随机分为三组:生理盐水对照组、哮喘模型组、梓醇治疗组,每组各10只.除对照组外,余两组采用卵蛋白和氢氧化铝混合溶液注射致敏,并雾化吸入建立哮喘模型.治疗组小鼠从第15天起每次雾化攻击前1 h给予梓醇5 mg/kg腹腔注射,连续7 d.其余两组用生理盐水替代卵蛋白进行注射.第22天处死小鼠,收取血清,并取其肺、脾组织,制备支气管肺组织匀浆,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),脾淋巴细胞和巨噬细胞培养上清液.用放射免疫法检测IL-8的水平,酶联免疫法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4、IL-5的水平,用酶法检测 NO含量,计数小鼠BALF中白细胞的数量.结果 哮喘模型组肺泡灌洗液中白细胞计数、支气管肺组织中IL-4、脾淋巴细胞培养上清液中IL-5、血清与脾淋巴细胞培养上清液中IL-8含量及脾巨噬细胞培养上清液中NO含量明显高于对照组(P<0.01);而治疗组上述指标明显低于哮喘模型组(P<0.01或P<0.05);哮喘模型组脾淋巴细胞产生INF-γ含量明显低于对照组,治疗组明显高于哮喘模型组(P<0.01).结论 细胞因子IL-4、IL-5、IL-8、IFN-γ和NO水平的变化反映了Th1和Th2的失衡和巨噬细胞功能的增强,可能参与了哮喘发病的病理生理过程,中药梓醇对支气管哮喘有一定的治疗作用.     

探讨以抑制致敏小鼠哮喘气道炎症为主的治疗新途径

目的 以Ｔｈ１反应拮抗Ｔｈ２反应，抑制哮气道以淋巴细胞和嗜酸细胞浸润为主的炎症，探索治疗哮喘的新途径。方法Ｇ５７Ｂ１／６小鼠６０只，腹腔注射０．５μｇＰＰＤ２次，间隔２周，第１７、２４天腹腔注射卵清蛋白２次。将小鼠随机分成４组，每组１５只。Ａ组小鼠吸入卵清蛋白；Ｂ组小鼠雾化吸入ＰＰＤ后，雾化吸入卵清蛋白；Ｃ组小鼠吸入卵清蛋白后，雾化吸入ＰＰＤ；Ｄ组小鼠吸入ＰＰＤ，作为对照组。用免疫组化－原位杂交检     

川芎嗪对哮喘小鼠p38蛋白激酶及类胰蛋白酶表达的影响

目的探讨川芎嗪对哮喘小鼠p38蛋白激酶（p38MAPK）及类胰蛋白酶表达的影响。方法将30只BALB/c小鼠随机分为3组：A组（对照组）、B组（哮喘组）及C组（川芎嗪组）,每组10只,采用鸡卵清蛋白（OVA）与免疫佐剂（氢氧化铝）腹腔注射致敏及用1%OVA生理盐水溶液雾化激发的方法制备哮喘小鼠模型,C组小鼠于每次激发前1 h腹腔注射川芎嗪（80mg/kg/d）,每天1次,持续5 d,A组腹腔注射等量生理盐水致敏及雾化吸入。行HE染色镜下观察各组肺组织病理改变,并采用免疫组织化学染色SP法半定量测定行肺组织中p38MAPK及类胰蛋白酶表达情况。结果 C组小鼠肺组织HE染色病理改变较B组有减轻,且免疫组化结果显示测定C组小鼠肺组织较B组p38MAPK及类胰蛋白酶MOD有降低（P〈0.05）。结论川芎嗪减轻哮喘气道炎症,部分机制可能是通过影响p38蛋白激酶信号通路及肥大细胞活化实现。     

免疫刺激DNA序列与过敏原联用对哮喘小鼠模型气道过敏性炎症的作用

目的　观察免疫刺激DNA序列 (ISS DNA)单用和与过敏原卵白蛋白 (OVA)合用 ,对支气管哮喘 (简称哮喘 )小鼠模型气道过敏性炎症的作用及作用维持时间。方法　BALB/c小鼠 36只 ,分ISS组 (A组 ) 12只、ISS +OVA组 (B组 ) 12只、OVA组 (C组 ) 6只和生理盐水 (NS)组 (D组 ) 6只。A、B、C组用OVA致敏及激发。A组和B组根据注射次数再分A1、B11次注射组 (1次腹腔注射ISS DNA 10 0μg或ISS DNA 10 0 μg +OVA 10 μg)和A2 、B2 2次注射组 (2次腹腔注射ISS DNA或ISS DNA +OVA)。各组在第 1次激发后 6周中 ,每周采血 1次测特异性IgE ,最后处死小鼠测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中细胞计数及分类 ,肺组织病理检查 ,检测脾细胞分泌γ干扰素 (IFN γ)的水平。结果　BALF中嗜酸细胞 (EOS)数A1组为 (2 39± 0 81)× 10 4/ml;A2 组为 (2 .6 2± 0 .77)× 10 4/ml;B1组为 (1.80± 0 .12 )× 10 4/ml;B2 组为 (1.84± 0 .6 7)× 10 4/ml,与C组 [(12 .4 3± 2 .13)× 10 4/ml]比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。脾细胞分泌的IFN γA1组为 (5 10± 10 2 )pg/ml;A2 组为 (492± 98)pg/ml;B1组为 (5 32± 12 0 )pg/ml;B2组为 (46 9± 132 )pg/ml,与C组 [(194± 80 )pg/ml]比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。血清IgE前 4周B组与C组比较     

布地奈德吸入对慢性支气管哮喘小鼠转化生长因子β1/Smad信号通路的影响

目的 观察布地奈德对慢性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad信号通路的影响.方法 30只小鼠按随机数字表法分成哮喘组、布地奈德组、正常对照组,每组10只.哮喘组小鼠于第0天和第14天以卵白蛋白(OVA)致敏,第24天开始雾化吸入1%OVA激发并持续28 d,建立哮喘气道重塑模型;布地奈德组在吸入OVA前2 h雾化吸入布地奈德30 min;正常对照组以生理盐水代替OVA.于最后一次雾化结束后24 h对肺组织行苏木精-伊红染色观察病理学改变;运用医学图像分析软件测定管腔内周长(Pi)、管壁面积(WAt)、支气管平滑肌面积(WAm)、支气管平滑肌细胞核数(N),将WAt、WAm、N用Pi标准化;用免疫组织化学方法检测肺组织TGF-β1蛋白表达;用逆转录-聚合酶链反应半定量检测肺组织TGF-β1、Smad 2、Smad 3、Smad 7 mRNA表达.结果 哮喘组WAt/Pi、WAm /Pi、N /Pi与对照组比较差异有统计学意义(P值均<0.05),布地奈德组与哮喘组比较差异也具有统计学意义(P值均<0.05);哮喘组TGF-β1蛋白和TGF-β1、Smad 2、Smad 3 mRNA的表达较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05),布地奈德组TGF-β1蛋白和TGF-β1、Smad 2、Smad 3 mRNA的表达下降,与哮喘组比较差异均有统计学意义(P<0.05);布地奈德组可显著上调Smad 7 mRNA的表达,与哮喘组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 早期雾化吸入布地奈德通过抑制慢性哮喘小鼠肺组织TGF-β1、Smad 2、Smad 3的过度表达,上调Smad 7的表达,从而阻断TGF-β1/Smad信号通路,明显减轻哮喘小鼠的气道重塑.     

两种尘螨1类变应原嵌合基因的原核表达及生物活性鉴定

目的原核表达尘螨1类变应原(粉尘螨1类变应原Derf1和户尘螨1类变应原Derp1基因)的嵌合基因R8,并检测其生物活性。方法以含嵌合基因R8的pUCm-T重组质粒为模板,用Derf1的特异性引物进行PCR扩增,产物经酶切后与载体pET28a(+)连接,连接产物转入大肠埃希菌(E.coli)BL21感受态细胞,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后纯化,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测;纯化后的蛋白用ELISA检测其与粉尘螨过敏患者血清(IgE)的结合能力,同时以重组rDer f 1和rDer p 1蛋白作为对照。为检验嵌合蛋白R8的免疫原性,将75只BALB/c小鼠随机均分为5组,分别为PBS组(阴性对照组)、rDer f 1组、rDer p 1组、R8组和哮喘组(阳性对照组)。除PBS组外,其余各组分别于第0、7和14天每鼠腹腔注射(0.1μg/μl)粉尘螨注射液100μl,第21~27天每鼠每天雾化吸入0.5μg/ml粉尘螨注射液悬浊液,30 min/d。rDer f 1组、rDer p 1组和R8组于第25~27天雾化前30 min,分别腹腔注射100μg/ml的rDer f 1、rDer p 1和R8蛋白各200μl进行特异性免疫治疗,PBS组用等量PBS进行腹腔注射和雾化吸入。所有小鼠于第27天雾化吸入后24 h气管切开,用1 ml PBS进行肺泡灌洗,收集肺泡灌洗液(BALF),检测γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平。结果 SDS-PAGE结果显示,R8表达产物的蛋白相对分子质量(Mr)约为35 000。ELISA检测结果显示,嵌合蛋白R8与粉尘螨过敏患者血清IgE的结合力为(37.03±12.46)μg/ml,显著低于rDerf 1[(80.44±15.50)μg/ml]和rDer p 1[(90.79±10.38)μg/ml](P<0.01)。动物实验结果显示,R8组IFN-γ水平[(343.43±38.79)pg/ml]与rDerf1组[(322.98±30.36)pg/ml]和rDer p 1组[(314.97±33.89)pg/ml]的相比,差异均无统计学意义(P>0.05);与PBS组[(393.93±50.68)pg/ml]和哮喘组[(208.44±46.11)pg/ml]相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。R8组IL-4水平显著低于其他各组水平(P<0.05或0.01)。结论表达了具有低变应原性和高免疫原性的尘螨1类变应原嵌合基因R8。     

害嗜鳞螨Ⅱ类变应原Lep d2对过敏性哮喘小鼠的免疫治疗效果分析

目的 目的 探讨害嗜鳞螨Ⅱ类变应原Lep d2对尘螨致敏哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果。方法 方法 将30只SPF级 BALB/c小鼠随机分为PBS组、 哮喘组、 Lep d2治疗组, 于实验开始时及实验第7、 14 天用尘螨提取液对哮喘组及Lep d2治 疗组小鼠腹腔注射致敏, 第21天开始雾化吸入激发, 连续7 d, 第25～27天开始, Lep d2免疫治疗组于雾化前30 min用 Lep d2变应原进行免疫治疗, PBS组及哮喘组用PBS进行腹腔注射及雾化吸入。最后1次雾化激发24 h后, 收集支气管 肺泡灌洗液 （BALF） 和血清, 并进行脾细胞培养。采用HE染色观察各组小鼠肺组织病理变化; 采用ELISA法测定BALF 和脾细胞培养液上清中IFN?γ、 IL?5、 IL?13及血清中特异性IgE （sIgE）、 sIgG2a抗体水平。结果 结果 哮喘组及Lep d2治疗组 小鼠出现哮喘急性发作症状, PBS组未出现该症状。哮喘组肺部炎性细胞浸润明显, PBS组及Lep d2治疗组肺部炎症较 轻。Lep d2治疗组BALF和脾细胞培养液上清中IFN?γ浓度均高于哮喘组 （P均＜0.01）, 但IL?5和IL?13浓度则均低于哮 喘组 （P均＜0.01）。Lep d2治疗组sIgE抗体水平低于哮喘组 （P＜0.01）; 但sIgG2a抗体水平高于哮喘组 （P均＜0.01）。结 结 论 论 害嗜鳞螨Ⅱ类变应原Lep d2疫苗可有效减轻哮喘小鼠肺部炎症。     

粉尘螨1类变应原重组融合表位免疫治疗小鼠哮喘的效果分析

目的 目的 探讨粉尘螨1类变应原重组融合表位对哮喘小鼠的免疫治疗效果。 方法 方法 将40只小鼠随机分为阴性 对照组、 哮喘组、 Der f 1治疗组和重组融合变应原Der f 1A治疗组等4组。哮喘组、 Der f 1治疗组和Der f 1A治疗组小鼠 用粉尘螨提取液于第1、 7、 14 d进行3次腹腔注射致敏, 并于第21 d开始雾化吸入激发, 持续7 d。其中治疗组于雾化吸 入前30 min, 分别用Der f 1、 Der f 1A进行特异性免疫治疗。对照组用磷酸盐缓冲液 （PBS） 进行腹腔注射和雾化吸入。完 成雾化吸入激发后, 计数支气管肺泡灌洗液 （BALF） 中白细胞总数; 观察肺组织病理切片; 检测BALF与脾细胞培养上清 液 （SCCS） 中IL?5、 IFN?γ和血清中特异性IgE、 IgG2a水平。 结果 结果 与哮喘组相比, 免疫治疗组小鼠肺部炎症明显减轻, 且 BALF中白细胞总数明显降低; 免疫治疗组小鼠BALF和SCCS中IL?5水平显著降低, IFN?γ水平则显著升高; 血清中变应 原的特异性IgE抗体水平显著降低, IgG2a抗体水平则显著升高 （P均< 0.01）。 结论 结论 粉尘螨1类变应原重组融合表位能 够有效减轻小鼠的哮喘症状, 为诊断和治疗过敏性哮喘奠定了基础。     

早期接种减毒活菌卡介苗对支气管哮喘小鼠气道炎症及黏液形成的预防作用

目的　探讨早期小剂量多次接种减毒活菌卡介苗 (BCG)对支气管哮喘 (简称哮喘 )小鼠气道炎症及黏液形成的影响。方法　选择出生 2 4h内C5 7BL/6幼鼠 2 5只 ,按随机数字表法分为 3组 ,生理盐水对照组 (A组 ,8只 ) ;鸡卵白蛋白 (OVA)致敏 /激发组 (B组 ,9只 ) ;BCG皮下接种组 (C组 ,8只 )。C组小鼠分别于第 0周、1周、2周、3周连续 4次皮下接种 2 5 μl的BCG(含 10 3 CFU/只 ) ,而A、B组小鼠皮下注射 2 5 μl的生理盐水进行对照 ;于第 4 2天和第 5 6天 ,A组以生理盐水致敏 ,B、C组以OVA致敏 ,而从第 6 6天开始雾化吸入生理盐水 (A组 )或 1%的OVA(B、C组 )进行激发 ,连续 3d ,于最后 1次激发后 4 8h收集支气管肺泡灌洗液 (BALF) ,计数白细胞总数及嗜酸粒细胞 (EOS)数 ;肺组织过碘酸 雪呋 (PAS)染色鉴定黏液形成 ,测定杯状细胞化生指数和上皮黏液储备指数 ,以及用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测肺组织黏液素基因MUC5ACmRNA的表达。结果　BALF中白细胞总数A组为 (15 0± 1 4 )× 10 4/ml ,B组为 (12 3 8± 14 5 )× 10 4/ml,C组为 (77 4±14 1)× 10 4/ml,B、C组分别与A组比较差异有统计学意义 (P均 <0 0 1) ;但B组与C组比较差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;EOS计数A组为 (0 0 90± 0 0 2 0 )×     

布地奈德吸入对慢性支气管哮喘小鼠转化生长因子β1/Smad信号通路的影响

目的 观察布地奈德对慢性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠转化生长因子β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)/Smad信号通路的影响.方法 30只小鼠按随机数字表法分成哮喘组、布地奈德组、正常对照组,每组10只.哮喘组小鼠于第0天和第14天以卵白蛋白(OVA)致敏,第24天开始雾化吸人1%OVA激发并持续28 d,建立哮喘气道重塑模型;布地奈德组在吸入OVA前2 h雾化吸入布地奈德30 min;正常对照组以生理盐水代替OVA.于最后一次雾化结束后24 h对肺组织行苏木精一伊红染色观察病理学改变;运用医学图像分析软件测定管腔内周长(Pi)、管壁面积(WAt)、支气管平滑肌面积(WAm)、支气管平滑肌细胞核数(N).将WAt、WArn、N用Pi标准化;用免疫组织化学方法检测肺组织TGF-β1蛋白表达;用逆转录-聚合酶链反应半定量检测肺组织TGF-β1、Smad 2、Smad 3、Smad 7 mRNA表达.结果 哮喘组WAt/Pi、WAm/Pi、N/Pi与对照组比较差异有统计学意义(P值均<0.05).布地奈德组与哮喘组比较差异也具有统计学意义(P值均<0.05);哮喘组TGF-β1蛋白和TGF-β1、Smad 2、Smad 3 mRNA的表达较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05),布地奈德组TGF-β1蛋白和TGF-β1、Smad 2、Smad 3 mRNA的表达下降.与哮喘组比较差异均有统计学意义(P<0.05);布地奈德组可显著上调Smad 7 mRNA的表达.与哮喘组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 早期雾化吸入布地奈德通过抑制慢性哮喘小鼠肺组织TGF-β1、Smad 2、Smad 3的过度表达.上调Smad 7的表达,从而阻断TGF-β1/Smad信号通路,明显减轻哮喘小鼠的气道重塑.     

γ干扰素转基因表达对过敏小鼠模型的治疗作用及其机制研究

目的通过腺病毒载体介导小鼠γ干扰素(mIFNγ)在小鼠肺脏转基因表达,探讨其对卵白蛋白(OVA)诱导过敏小鼠模型的治疗作用及其机制。方法48只BALB/c小鼠,按随机数字表法分为7组,即阴性对照组(A组)、过敏模型组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(B、D和F组)、转基因治疗组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(C、E和G组)。除A组外,B、C、D、E、F、G各组在第0天和第5天经腹腔给予OVA(每只15μg)致敏,第12～14天经气道吸入0.5%的OVA雾化液激发(20ml/次),建立过敏模型。第15天C、E、G组小鼠经鼻滴入50μl带有mIFNγ基因的复制缺陷型腺病毒(AdCMVmIFNγ)悬液[每只5×109/空斑形成单位(PFU)],A、B、D、F组小鼠经鼻滴入50μl生理盐水作为对照。第18天处死A、B、C组小鼠,第21天处死D和E组小鼠,第25天处死F和G组小鼠,获取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类计数,其上清液用酶联免疫吸附法测定mIFNγ的浓度,右肺用4%多聚甲醛固定及苏木精伊红(HE)染色,左肺组织提取总RNA,用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)了解肺组织中白细胞介素4(IL4)、IL-5、IL-6、IL-10、IL1-2、IL13和IL18的表达。结果(1)经鼻给予AdCMVmIFN-γ后,BALF中可测得mIFNγ的高效表达,C组第3天为(729.0±104.7)pg/ml,E组第6天为(984.5±119.1)pg/ml,G组第10天为(310.6±59.7)pg/ml。(2)B、C、D、     

猪苓多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及IL-1、IL-2活性的影响

研究表明猪苓多糖有抗肿瘤、抗衰老及提高机体免疫力的功效 〔1 ,2〕。目前已广泛应用于肿瘤和慢性肝炎的治疗及防老住颜等〔3〕。为探讨其作用机制 ,我们观察了猪苓多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能及 IL - 1、IL - 2产生的影响。1　材料与方法1.1　 动物　 BAL B/C小鼠 ,雌雄皆有 ,8～ 12 w龄 (长春生物制品研究所 )。将小白鼠随机分为两组 (实验组和对照组 ) ,每组5只。实验组每天腹腔注射猪苓多糖 0 .2 ml(2 5 mg/kg) ,对照组每日腹腔注射同等体积的生理盐水 ,连续注射 7d,第 8天检测各项免疫指标。1.2 　方法1.2 .1　 试剂及仪器　猪苓…     

Der p1 T细胞表位融合蛋白对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果

目的探讨重组变应原Der p1 T融合蛋白对屋尘螨粗提液诱导的哮喘小鼠特异性免疫治疗的效果。方法将30只雌性BALB/c小鼠随机均分为3组,分别为对照组、哮喘组和Der p1 T融合蛋白免疫治疗组(SIT组)。哮喘组和SIT组小鼠分别在第0、7、14天给予腹腔注射屋尘螨粗提液200μl/鼠(蛋白含量10μg/200μl),对照组小鼠注射等量PBS。哮喘组、SIT组小鼠于第21天采用屋尘螨粗提液雾化激发(蛋白浓度为0.5μg/ml),30 min/d,连续7 d,观察并记录小鼠哮喘发作情况,对照组使用等量PBS雾化激发。SIT组小鼠于第21天雾化前0.5 h,腹腔注射Der p1 T融合蛋白(100μg/ml) 200μl进行特异性免疫治疗,连续7d,对照组、哮喘组注射等量PBS。各组小鼠于末次雾化激发后24 h内取眼球血,收集血清,气管插管收集肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测血清中特异性IgE和IgG2a抗体水平及BALF中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4 (IL-4)、IL-10和IL-17A的含量;流式细胞仪检测脾组织中Th1/Th2和Th17/Treg细胞群落的改变;HE染色镜下观察小鼠肺组织病理形态。采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析。结果各组小鼠雾化激发后,对照组小鼠仅出现短暂的轻微烦躁症状,哮喘组小鼠表现出明显的烦躁不安、喘息、呼吸加快加深,SIT组小鼠经免疫治疗后,有轻微的喘息症状,症状较哮喘组小鼠有所改善。ELISA检测结果显示,哮喘组小鼠血清中特异性IgE抗体含量为(31.49±4.32) IU/ml,高于对照组的(8.53±1.92) IU/ml和SIT组的(16.68±2.45) IU/ml (P<0.01);哮喘组小鼠血清中抗原特异性IgG2a抗体含量为(19.56±3.89)μg/ml,低于对照组的(42.43±2.07)μg/ml和SIT组的(36.96±5.04)μg/ml (P <0.01)。哮喘组小鼠IFN-γ和IL-10水平分别为(134.23±22.49)和(22.43±8.27) pg/ml,低于对照组的(212.36±33.21)和(72.84±21.42) pg/ml (P<0.05、0.01);SIT组小鼠IFN-γ和IL-10水平分别为(183.76±24.66)和(61.05±7.97) pg/ml,与哮喘组相比,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。哮喘组小鼠IL-4和IL-17A水平分别为(165.45±34.59)和(464.21±41.36) pg/ml,高于对照组的(21.31±5.26)和(115.74±30.82)μg/ml (P<0.01);SIT组小鼠IL-4和IL-17A水平分别为(64.15±17.33)和(271.61±27.07) pg/ml,与哮喘组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,哮喘组小鼠脾组织CD4^+T淋巴细胞中Th1和Treg细胞比例分别为2.8%和4.9%,较对照组的3.7%和10.3%显著降低(P<0.05、0.01);SIT组Th1和Treg细胞比例分别为3.1%和8.8%,较哮喘组小鼠的有所升高(P<0.05、0.01)。哮喘组Th2和Th17细胞比例分别为2.8%和2.2%,较对照组的1.0%和0.3%显著升高(P<0.01),SIT组Th2和Th17细胞比例分别为1.7%和0.6%,较哮喘组小鼠有所降低(P<0.01)。肺组织病理切片结果显示,哮喘组小鼠肺组织终末细支气管有明显炎性细胞浸润,支气管平滑肌纤维断裂,上皮细胞脱落;SIT组小鼠肺组织病理变化较哮喘组的有明显好转,支气管壁增厚减少,炎性细胞浸润情况得到改善。结论 Der p1T融合蛋白对哮喘小鼠的特异性免疫治疗有一定的效果。