妊娠相关血浆蛋白A定量测定方法的建立

目的:建立人外周血妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)定量酶联免疫测定方法.方法:以生物素化牛血清白蛋白-链霉亲和素间接包被微孔板,将标记有生物素的抗PAPP-A抗体作为捕获抗体,结合标本中的抗原成分;标记有辣根过氧化物酶的抗PAPP-A抗体作为检测抗体,经酶催化底物显色,定量测定人体外周血PAPP-A.结果:所建立的测定方法灵敏度为0.31 mg/L,回收率均在95%～100%之间;该方法线性、稳定性及特异性良好;3份低、中、高浓度的血清标本重复测定10次,批内变异系数(CV)均小于10%,批间CV均小于15%;该方法测量结果与国外同类方法测量结果具有相关性(r=0.982,P<0.05),2种检测方法高度相关.结论:本文采用间接包被技术所建立的人外周血PAPPA固相酶联免疫测定方法灵敏、可靠、稳定性好,与国外同类方法的试剂盒之间相关性较高.     

内源性哇巴因改良ELISA方法的建立

目的：内源性哇巴因（Endogenous Ouabain,EO)是一种新的肾上腺皮质激素，其血清中含量甚微，本实验在系统研究了哇巴因酶免疫学特性及以往研究工作的基础上，建立了内源性哇巴因改良ELISA方法。方法：（1）哇巴因偶联物的制备及兔抗哇巴因多克隆抗体的制备与标记。（2）棋盘滴定摸索出最佳抗原抗体包被浓度，并对其各项质控指标进行测定。（3）临床标本的检测。结果：抗原最佳包被浓度为3μg/ml，抗体最适稀释度为1：30000，该方法特异性高，灵敏度为0．4ng/ml，准确度界于90－110％，以该方法检测高血压病Ⅲ期，肾脏病及正常对照血清86份，其检测结果与献报导一致。结论：该内源性哇巴因改良ELISA方法用于血清内源性哇巴因浓度其特异性，灵敏度，准确度均好。     

ELISA法测定甲型H1N1流感病毒裂解疫苗中卵清蛋白含量的不确定度分析

目的:对ELISA法测定甲型H1N1流感病毒裂解疫苗中卵清蛋白含量不确定度进行评定分析。方法:按照卵清蛋白检测试剂盒说明书对甲型H1N1流感病毒裂解疫苗中卵清蛋白含量进行测定。根据《测量不确定度评定与表示》(JJF1059-1999)中有关规定对测量结果中带来的各个不确定度进行分析、评定和量化。结果:量化各个不确定度分量,提出了该法的合成不确定度评估结果。结论:该法测定甲型H1N1流感病毒裂解疫苗中卵清蛋白含量的扩展不确定度U=0.68 ng.mL-1(k=2)。     

鸡胚细胞疫苗制品宿主细胞蛋白残留量检测方法的建立

目的 建立鸡胚细胞疫苗制品中宿主细胞蛋白残留量的检测方法.方法 制备鸡胚细胞蛋白和抗鸡胚细胞蛋白抗体,摸索ELISA双抗体夹心法的试验条件,建立酶联免疫检测方法,并进行各项指标的验证.结果 纯化的鸡胚细胞蛋白抗体纯度达到90％以上,抗体效价可达1∶128.蛋白质印迹法分析显示,纯化抗体与鸡胚细胞蛋白呈现特异性结合.该方...     

间接ELISA测定血清中RI含量方法的建立

目的：建立检测血清中核糖核酸酶抑制因子（Ribonuclease Inhibitor，RI）含量的问：陵酶联免疫吸附法（EUSA），并分析该方法的特异性和敏感性。方法：用血清样品包被酶标板，兔抗人RI抗体为一抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体为二抗，建立血清RI定量检测的间接EUSA法。结果：所建立的用于血清中RI含量检测的间接ELISA方法特异性好．灵敏度高。结论：间接ELISA法可以用于测定血清中的RI抗原含量，具有良好的灵敏度和稳定性，能够有效的反映出人血清中的RI表达情况。     

原代地鼠肾细胞疫苗中残余宿主细胞蛋白检测方法的建立及初步验证

目的 建立定量检测原代地鼠肾细胞(primary hamster kidney cell,PHKC)疫苗中残余宿主细胞蛋白含量的方法 .方法 制备PHKC蛋白免疫家兔,对获得的抗血清进行纯化并标记辣根过氧化物酶,通过优化各反应条件建立ELISA方法 ,同时进行方法学验证.结果 ELISA检测方法的最佳包被抗体质量浓度为6 mg/L,酶标抗体工作浓度为1:2000,最佳检测区间为12.500～200.000μg/L,定量限度为23.250μg/L,准确度和精密度较佳.结论 建立了一种简单、准确、可靠检测PHKC病毒性疫苗中宿主细胞蛋白残留量的ELISA双抗体夹心法.     

检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒的建立及应用研究

目的  建立特异、敏感的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒。方法  采用大肠杆菌菌体蛋白免疫家兔,制备得到高效价抗菌体蛋白抗血清。将经饱和硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析和亲和层析纯化的兔抗大肠杆菌菌体蛋白特异性多克隆抗体作为包被抗体和检测抗体,用生物素标记检测抗体,并加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素。结果　建立的大肠杆菌菌体蛋白夹心ELISA检测方法的敏感性为0.32 μg/L,检测范围为1~100 μg/L,与国际同类商品化试剂盒相当。此法具有良好的稳定性,其批内变异系数小于7.7%,批间变异系数小于6.2%。结论  建立了特异、敏感、稳定的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒,为生物制品中残留大肠杆菌菌体蛋白的质量控制提供了一种重要的检测方法。     

检测百日咳毒素的双抗体夹心ELISA法的建立

目的  建立白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产中百日咳毒素（pertussis toxin, PT）含量的测定方法。方法  免疫家兔制备高效价抗PT血清,纯化抗PT多克隆抗体并进行酶标记,建立双抗体夹心ELISA法并对其进行验证。结果  建立的方法在0~20 ng/ml PT测量区间呈现最佳线性,相关系数＞0.99,且重复性好。检测百日咳丝状血凝素和黏着素,结果均为阴性,说明该法特异性良好。试验内10次、不同试验间3次测定16.0、8.0、4.0、3.0 ng/ml PT,变异系数为2.8%~9.7%,回收率为95.7%~106.0%,精密度和准确度验证均符合常规质量控制要求,定量限度为3.0 ng/ml。结论  该方法能有效检测百日咳杆菌大罐发酵过程中分泌的PT,为PT质量控制奠定了重要基础。     

海洋真菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立及方法学评价

目的建立酶联免疫吸附法(ELISA)以检测海洋真菌多糖YS4108发酵过程中抗肿瘤多糖(YCP)的含量。方法以CDAP(1-氰基-4-二甲胺吡啶四氟硼酸盐)为交联剂制备YCP-BSA偶联产物,利用该偶联产物为包被抗原,YCP为竞争抗原,两者与定量的YCP-McAb反应,建立检测YCP的间接竞争ELISA测定法。结果最佳抗原包被浓度为2.5 mg/L,最佳单抗工作浓度为1∶5 000,HRP-抗小鼠IgG工作浓度为1∶4 000。得到回归方程lg(B/B0%)=-0.171 8 lgCYCP+1.963 8,r=0.991 6,可测量最适范围为1~1 000μg/L,最小检测量为0.1μg/L,批内和批间RSD分别小于5.45%和8.37%。结论建立了快速测定YCP含量的间接竞争ELISA法。     

测定脑膜炎球菌疫苗C群多糖的双抗体夹心ELISA法的建立

目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 meningococcal polysaccharide vaccine,MPV4)C群多糖含量的双抗体夹心ELISA法.  方法 制备抗C群多糖多克隆抗体,所得的多克隆抗体经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法对其标记辣根过氧化物酶.分别将抗C群多糖多克隆抗体作为包被抗体和酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对C群多糖进行特异性定量测定.  结果 建立的双抗体夹心ELISA法特异性较好,未检出与A、Y、W135群多糖的交叉反应.C群多糖在2.5～20.0 ng/ml质量浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.99.该法的准确度和精密度均较好,试验内和试验间变异系数和多糖回收率分别为0.6％ ～9.1％和87.5％ ～ 100.0％,定量限度为4.0 ng/ml.采用该法测定3批MPV4显示,C群多糖含量及多糖分子大小KD值和回收率的测定结果均与先前的测定结果一致,均符合暂行质量标准.  结论 建立的双抗体夹心ELISA法可用于MPV4 C群多糖的关键质量指标测定.     

贯众的药理研究进展

贯众在传统药理研究基础上有新进展,主要有抗乙肝病毒、流感病毒、柯萨奇Ｂ病毒及埃柯病毒、疱疹病毒的研究;抗菌作用的研究;对子宫平滑肌作用的研究;抗白血病及抗艾滋病毒作用的研究。     

定量检测细胞凋亡的ELISA法

细胞凋亡普遍存在于胚胎发生及个体发育的多种生理和病理过程中,本文介绍了细胞凋亡,定量检测ＢＬＩＳＡ法的原理,方法及有关注意事项。     

ELISA法定量测定抗精子抗体AsAb

目的 通过对抗精子总抗体(AsAb)的测定,探讨其与临床不育(或不孕)症的关系.方法 对107例志愿者AsAb的类型和含量用ELISA法进行了分型和定量研究.结果 总抗体的测定上限可达500U/ml;回收率在96.4%～103.0%之间;批内重复性为2.1%～5.0%;本试剂盒呈色稳定性较好,操作简单.通过测定其参考值范围为AsAb＜75.3U/ml.结论 该法准确可靠,可作为临床诊断不育或不孕症病因的辅助诊断方法.     

SDSPAGE结合125I示踪法与ELISA法测定血中rh-bFGF的比较

目的：比较和评价SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）结合^125I示踪法与ELISA法测定血浆中重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor,rh-bFGF)。方法：10只大鼠iv^125I-rh-bFGF1600ng/kg,用SDS－PAGE结合放射性计数测定血浆rh-bFGF含量。9只大鼠iv,rh-bFGF 1600ng/kg,用ELISA法测定血浆rh-bFGF含量。结果：两种方法的灵敏度、回收率和重现性好。ELISA法测定血浆rh-bFGF含量较SDS－PAGE结合^125I示踪法低。结论：SDS－PAGE结合^125I示踪法与ELISA均可满足药动学研究的要求。     

应用ELISA测定睫状神经营养因子中卡那霉素残留量

目的:建立ELISA检测卡那霉素残留量的方法并进行方法学验证,用于重组技术产品的质量控制。方法:采用间接竞争ELISA方法,样本中残留的卡那霉素将和微孔板上预包被的偶联抗原竞争抗卡那霉素抗体,加入酶标二抗后,用3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)底物显色,样本吸光值与残留卡那霉素的含量成负相关,用酶标仪进行检测并用SOFT MAX分析软件进行分析。结果:ELISA方法测定卡那霉素残留量在0.5~40.5 ng.mL-1范围内线性良好,且符合四参数方程式:y=(A-D)/[1+(X/C)B]+D,r2≥0.99;板内变异小于15%,板间变异小于20%,实验重复性好,加标回收率在80%~120%之间;该方法检测与庆大霉素、盐酸四环素、链霉素和氨苄西林药物未显示交叉反应。应用该法对1批睫状神经营养因子(CNTF)原液的卡那霉素残留量进行测定,结果表明,每人用剂量CNTF(100μg)卡那霉素残留量小于0.5 ng。结论:该方法具有灵敏度高、操作简便、检测迅速等特点,可用于重组技术产品中卡那霉素残留量的检定。     

测定人血清中利妥昔单抗及其生物类似物浓度ELISA方法的建立及验证

目的:建立和验证测定人血清中利妥昔单抗和生物类似物的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法,用于生物类似药的药动学评估。方法:在96孔板中包被rat anti Rituximab (MCA2260)以捕获人血清中的抗CD20人鼠嵌合单抗(TQB2303)或者利妥昔单抗,加入生物素标记MCA2260与被捕获TQB2303或者利妥昔单抗结合,以链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联试剂作为检测试剂。从选择性、特异性、精密度和准确度、稀释线性、钩状效应和平行性等方面分别验证了本方法在定量分析人血清中利妥昔单抗和TQB2303浓度时的可靠性。结果:本方法检测利妥昔单抗和TQB2303的灵敏度为19. 53 ng·m L-1;用2个待测物5个浓度水平验证样品的数据,统计计算方法的批间精密度和准确度分别在10. 1%～22. 4%和1. 8%～6. 1%范围内;方法的选择性、特异性和2～2 000倍稀释范围内稀释线性均符合指导原则的要求;方法在1 000. 00～1 000 000. 00ng·m L-1浓度范围内无钩状效应,受试药物TQB2303的稳定性可以支持从样品采集到样品测定的整个过程。此外本实验用真...     

反相高效液相色谱法测定双嘧达莫片的含量

目的 建立双嘧达莫片的反相高效液相色谱含量测定方法,更有效地控制药品质量.方法 采用Diamonsal C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为0.05% 磷酸二氢钾-甲醇(20:80),流速1.5mL·min-1,检测波长为283nm.结果 双嘧达莫在6.25～250/μg·mL-1范围内线性关系良好,r=1(n=11),平均回收率为99.17%,RSD为0.49%(n=6).结论 该方法简便、快速、准确.     

双抗体夹心ELISA法定量检测左旋多巴

目的建立左旋多巴的酶联免疫定量分析方法。方法以左旋多巴与载体蛋白钥孔戚血蓝素偶联,制备免疫抗原Levodopa-KLH。采用杂交瘤技术制备的特异性抗左旋多巴单克隆抗体作为包被抗体,待测左旋多巴为夹心抗原,免疫抗原Levodopa-KLH免疫新西兰兔得到的多克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定左旋多巴的双抗体夹心ELISA方法。结果左旋多巴浓度在40～2 000 ng/mL范围内呈良好线性关系,Y=0.8367 X+0.3423,相关系数r2=0.993 3,检测限为20 ng/mL。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为9.53%和12.77%,平均回收率为87.86%,与卡比多巴、多巴胺、异丙肾上腺素、去甲肾上腺素、肾上腺素、维生素C、5-羟色胺、金刚烷胺基本无交叉反应,健全性分析表明,人血清稀释倍数对该方法无影响,8 d连续检测标准曲线表明稳定性良好。结论这种定量检测左旋多巴的双抗体夹心ELISA方法,灵敏度高,重复性好,为左旋多巴研究提供了定量检测的方法,并为药代动力学、临床血药浓度监测提供备选方法。     

二阶导数光谱法测定酮基布洛芬栓的含量

本文采用二阶导数光谱法测定酮基布洛芬栓的含量,以255±1nm处为测定波长,排除了基质的干扰,具简便快速。平均回收率为99.80%,CV=1.51%