结直肠癌组织NDRG4基因启动子甲基化状态观察及其诊断效能分析

目的 观察结直肠癌组织N-Myc下游调节基因4(NDRG4)基因启动子甲基化状态,分析其对结直肠癌的诊断效能。方法 收集结直肠癌石蜡组织43例份,癌旁组织24例份。采用定量甲基化特异性PCR(qMSP)法检测组织NDRG4基因启动子甲基化状态,计算甲基化率;比较不同性别、年龄、肿瘤生长部位、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期的结直肠癌患者癌组织甲基化率,绘制其诊断结直肠癌的受试者工作特征(ROC)曲线,评价其诊断效能。结果 结直肠癌组织和癌旁组织NDRG4基因启动子甲基化率分别为65.12%(28/43)和4.17%(1/24),P<0.01。不同性别、年龄、肿瘤生长部位、组织分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期的结直肠癌患者的癌组织甲基化率比较均无统计学差异(P均>0.05)。ROC曲线分析结果显示,NDRG4基因启动子甲基化率诊断结直肠癌的曲线下面积为0.823 2(95%CI:0.725 5～0.920 8,P<0.01),敏感度为65.12%(95%CI:49.01～78.54),特异度为95.83%(95%CI:76.88～99.7...     

结肠癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化状态、mRNA表达变化及意义

目的观察结肠癌组织中RAS相关区域家族1A（RASSF1A）基因启动子甲基化状态、mRNA表达变化,并探讨其意义。方法分别采用甲基化特异性PCR（MSPCR）和RT-PCR技术检测80例结肠癌及癌旁正常结肠组织中RASSF1A基因启动子甲基化、mRNA。结果 80例正常结肠组织中RASSF1A基因启动子未见甲基化,80例结肠癌组织中RASSF1A基因启动子出现甲基化者58例,两者相比,P〈0.05。正常结肠组织均可检测到RASSF1A基因mRNA,结肠癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化者未检测到RASSF1A基因mRNA、未甲基化者可检测到RASSF1A基因mRNA。RASSF1A基因启动子甲基化与结肠癌病理分型、淋巴结转移、远处转移和Dukes分期有关（P均〈0.05）。RASSF1A基因mRNA的表达与结肠癌Dukes分期有关（P〈0.05）。结论结肠癌组织中RASSF1A基因启动子出现甲基化,RASSF1A基因启动子甲基化者RASSF1A基因mRNA表达缺失,这可能与结肠癌的发生发展及转移有关。     

SOCS-3基因在结肠癌中的表达及其甲基化测定

目的通过对SOCS-3基因在结肠癌和癌旁组织中的表达及其启动子甲基化状态的测定,探讨其与结肠癌发生、发展和转移的关系。方法收集40例结肠癌患者的肿瘤标本、20例癌旁组织及10例正常结肠组织,运用甲基化特异性PCR测定SOCS-3基因CpG岛甲基化状态,同时运用实时定量PCR分析SOCS-3基因在结肠癌组织中的表达水平。结果40例结肠癌组织中有34例(85%)存在SOCS-3基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有2例(10%),而正常结肠组织中未检测到SOCS-3基因CpG岛的异常甲基化;结肠癌组织中SOCS-3基因CpG岛甲基化组与无甲基化组相比,其SOCS-3基因的相对表达量明显减少(P0.05),表明SOCS-3基因CpG岛甲基化可导致SOCS-3基因表达降低。SOCS-3基因CpG岛甲基化与性别、年龄无关(P0.05),而与肿瘤病理分级、TNM分期有关(P0.05)。结论结肠癌中存在SOCS-3基因CpG岛异常甲基化,且CpG岛的甲基化导致其基因表达降低。SOCS-3基因CpG岛甲基化可能参与了结肠癌的发生、发展和转移。     

p16、hMLH1基因甲基化与结肠癌的相关性研究

目的检测正常黏膜、结肠腺瘤、结肠癌中p16、hMLH1基因CpG岛甲基化状态,评价其在结肠癌发生中的作用及临床意义。方法收集四川省人民医院2008年10月～12月结肠组织标本60例,其中结肠癌20例、腺瘤20例、正常组织标本20例。采用特异性甲基化PCR（MSP）方法检测p16、hMLH1基因的CpG岛甲基化状态。结果 MSP方法检测发现p16启动子CpG岛甲基化阳性表达率结肠癌组与腺瘤组、正常组比较有显著性差异（P=0.020、0.020）,而腺瘤组与正常组比较无显著性差异（P〉0.05）。hMLH1启动子CpG岛甲基化阳性表达率结肠癌组与正常组比较有显著性差异（P=0.047）,结肠癌组与腺瘤组、腺瘤组与正常组比较无显著性差异（P〉0.05）。p16、hMLH1基因CpG岛甲基化与Dukes分期、肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度具有相关性（P〈0.05）,与肿瘤部位、性别无相关性（P〉0.05）。结论 p16、hMLH1启动子区CpG岛甲基化是促进结肠癌发生的重要基因事件,且可能与结肠癌Duke分期相关。     

结直肠癌组织中PAQR3、PDCD4基因甲基化水平与结直肠癌的关系

目的研究结直肠癌组织抑癌基因PAQR3、PDCD4甲基化水平,以及二者与结直肠癌临床资料之间的关系。方法收集2013~2014年结直肠癌及癌旁正常组织标本各54例,用甲基化特异性PCR(MSP)法检测结直肠标本中PAQR3、PDCD4基因甲基化水平。结果 (1)PAQR3癌组织和癌旁组织甲基化率分别为33.3%(18/54)和5.6%(3/54),差异显著(P0.05);PDCD4癌组织和癌旁组织发生甲基化率为分别为53.7%(29/54)和7.4%(7/54),差异显著(P0.001)。二者同时检测的甲基化阳性率为87%,PAQR3和PDCD4没有相关性(R=0.155,P=0.408)。(2)结直肠癌组织中PAQR3基因甲基化与性别、肿瘤部位无关,年龄越大、分化程度越低、淋巴结转移、浸润越深者,PAQR3甲基化发生率越高。结直肠癌组织中PDCD4基因甲基化与性别、年龄、肿瘤部位无关,分化程度越低、淋巴结转移、浸润越深者,PDCD4甲基化发生率越高。结论结直肠癌中PAQR3、PDCD4发生了甲基化,PAQR3基因甲基化水平与年龄、分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关,PDCD4甲基化水平与分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关。     

RUNX3基因启动子甲基化在结肠癌诊断和预后评估中的应用

目的检测正常结肠组织和结肠癌组织RUNX3基因启动子甲基化状态和mRNA表达,探索其在结肠癌诊断和预后评估中的应用。方法甲基化特异性PCR（MSP）和RT-PCR分别检测61例结肠癌组织和正常组织中RUNX3基因启动子甲基化和mRNA表达状态。结果结肠癌组织中RUNX3基因启动子甲基化率高于正常组织（P〈0.05）,所检测出甲基化的样本RUNX3基因mRNA表达明显受到抑制,分化程度越差、临床分期越晚则甲基化率越高,甲基化率与年龄和性别无关。结论结肠癌是一个多基因作用的结果,RUNX3基因启动子甲基化状态检测在结肠癌分子诊断、临床分期和预后评估中具有重要作用。     

实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR检测结直肠癌APC、MLH1基因甲基化状态

背景：启动子区甲基化致肿瘤抑制基因失活在结直肠癌的发生、发展中起重要作用,检测肿瘤相关基因的甲基化状态,可能为寻找新的结直肠癌诊断、预后相关标记物提供依据.目的：比较实时荧光定量PCR（FO-PCR）与甲基化特异性PCR（MSP）检测基因甲基化状态的差异.方法：以FQ-PCR检测66例结直肠癌组织和20例癌旁组织中与结直肠癌的发生、发展相关的抑癌基因APC和错配修复基因MLH1的甲基化状态,同时以MSP检测结直肠癌组织中APC基因的甲基化状态.结果：根据FQ-PCR结果,结直肠癌组织中APC、MLH1基因甲基化阳性率显著高于癌旁组织（48.5%和54.5%对0%和0%,P=0.000）.FQ-PCR和MSP可检出的甲基化阳性对照DNA最低浓度分别为0.015 ng/μl和1.5 ng/μl,两者对APC基因甲基化状态的检测结果差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：在DNA甲基化的检测手段中,FQ-PCR的敏感度优于MSP.     

EYA4基因在结直肠癌中的甲基化状态及其意义

背景：EYA4（eyes absent4）是一种非巯基蛋白酪氨酸磷酸酶,参与器官发育、细胞凋亡调控、先天性免疫、DNA损伤修复、血管生成等过程。目的：研究EYA4基因在结直肠癌中的甲基化状态及其意义。方法：选取2006年6月～2007年1月上海交通大学医学院附属仁济医院31例结直肠癌患者,采集其癌组织和相应癌旁非癌组织。以5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza—dC）处理人结肠癌细胞株HT29、HCT116、SW480、SW1116。应用MSP技术检测结直肠癌组织、癌旁非癌组织、HT29、HCT116、SW480、SW1116细胞中EYA4基因启动子的甲基化状态。分析结直肠癌患者临床病理特征与EYA4基因甲基化关系。采用RT—PCR和蛋白质印迹法分别检测结肠癌细胞株中EYA4基因和蛋白的表达水平。结果：结直肠癌组织EYA4基因启动子甲基化率显著高于癌旁组织（77．4％对6．5％,P〈0．01）。EYA4基因和蛋白在启动子甲基化的HT29、HCT116、SW480细胞中不表达,在启动子非甲基化的SW1116细胞中显著表达。以5-Aza—dC处理后EYA4基因和蛋白在LIT29和SW480细胞中表达上调。结论：EYA4基因是结直肠癌发生的甲基化相关基因,有望成为结直肠癌的诊断标记物。     

结直肠癌组织及细胞株中分泌型卷曲相关蛋白家族的甲基化研究

目的 研究分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)基因启动子区CpG岛甲基化与结直肠癌的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测20对结直肠癌及相应癌旁组织中SFRP基因启动子区CpG岛甲基化状况,T-A克隆测序验证MSP产物.5-氮杂-2'-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HCT116、SW480进行去甲基化处理,MSP和Western印迹法分别检测细胞株中SFRP基因甲基化和蛋白表达.结果 SFRP 1、2、4、5在结直肠癌中甲基化率分别为19/20、17/20、3/20、13/20,癌旁组织中分别为12/20、8/12、1/20、7/20.结直肠癌中SFRP 1、2、5甲基化率均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05).HCT116细胞株SFRP 1、2、4、5基因均发生甲基化,而SW480细胞株中仅SFRP1和SFRP2出现启动子甲基化.SFRP蛋白表达与启动子甲基化呈明显负相关,经5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后能有效恢复SFRP蛋白表达.结论 SFRP 1、2、5甲基化可能与结直肠癌的发生有关,SFRP基因甲基化与其表达失活密切相关.     

胃癌患者p16基因启动子甲基化检测及其临床意义

目的 探讨p16基因启动子CpG岛甲基化在胃癌发生、发展中的作用.方法 应用特异性甲基化PCR(MSP)检测58例胃癌及癌旁组织和30例正常胃黏膜组织中p16基因启动子CpG岛的甲基化状态,分析其与胃癌临床病理参数的关系.结果26例(44.8％)胃癌组织、5例(8.6％)癌旁组织也检测出甲基化的存在,30例正常胃黏膜组织标本中均未检测出p16基因甲基化的存在(P ＜0.05);p16基因甲基化与胃癌淋巴结转密切相关(P＜0.05).结论 p16基因启动子CpG岛甲基化可促进胃癌的发生、发展;此基因的异常甲基化可作为胃癌早期诊断的敏感指标.     

甲状腺乳头状癌组织中钠碘转运体基因启动子甲基化的研究

用甲基化特异性PCR检测34例甲状腺乳头状癌及癌旁组织中钠碘转运体(NIS)基因启动子的甲基化.结果显示癌组织中NIS基因启动子甲基化显著高于癌旁组织(P＜0.05),淋巴结转移组中NIS基因启动子的甲基化显著高于无淋巴结转移组(P＜0.05),提示NIS基因启动子异常甲基化是甲状腺乳头状癌发展过程中常见的分子事件,可能影响了甲状腺乳头状癌细胞的摄碘功能.     

Smad4表达异常与结直肠癌的相关性研究

目的 探讨结直肠组织Smad4 mRNA及其蛋白表达水平变化、Smad4基因CpG岛异常甲基化与结直肠癌及其临床病理特征的关联性.方法 应用RT-PCR方法及测序、半定量RT-PCR方法、甲基化特异性PCR(MSP)技术和免疫组织化学方法,各自检测43例患者的结直肠癌组织、癌旁组织及30例结直肠腺瘤组织、12例健康人结肠黏膜组织.结果 43例结直肠癌组织中有25例(58.14%)Smad4 mRNA检测到阳性表达,其阳性表达率(58.14%)及表达水平(0.73±0.25)均低于相应的癌旁组织(88.37%,0.95±0.29)、腺瘤组织(90.63%,1.01±0.37)和健康人黏膜组织(100.00%,1.18±0.33),差异均有统计学意义(P＜0.05).Smad4基因启动子甲基化阳性率结直肠癌组织(60.53%)明显高于癌旁组织(27.03%)、腺瘤组织(25.00%)和健康人黏膜组织(16.67%),差异均有统计学意义(P＜0.05).Smad4蛋白表达的阳性率结直肠癌组织(44.19%)明显低于癌旁组织(81.40%)、腺瘤组织(87.50%)和健康人黏膜组织(91.67%),差异均有统计学意义(P＜0.05),并随着浸润深度加深和淋巴结转移,阳性率也随之下降.结论 Smad4的低表达与结直肠癌的发展、生物学行为和预后可能有关,可作为重要的生物学标志及病期评估的标志之一.     

乳头状甲状腺癌抑癌基因TSHR、P16和RAS启动子甲基化研究

目的 研究促甲状腺激素受体(TSHR)、P16和RAS 3个抑癌基因在乳头状甲状腺癌的表达,分析其启动子甲基化与肿瘤发生的关系.方法 对50例乳头状甲状腺癌组织和32例对照组织(20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤)提取RNA后,以RT-PCR检测3个抑癌基因mRNA的表达情况,采用甲基化PCR(MSP)检测上述组织中3个抑癌基因启动子区甲基化的情况,并对3个抑癌基因甲基化和未甲基化的组织随机进行测序.结果 50例乳头状甲状腺癌组织中,有34例(68.0%)TSHR基因、27例(54.0%)P16基因、30例(60.0%)RAS基因启动子发生了甲基化;32例对照组织中,有7例(21.9%)TSHR基因、5例(15.6%)P16基因、10例(31.3%)RAS基因启动子发生了甲基化;乳头状甲状腺癌组TSHR、P16、RAS基因启动子甲基化率均显著高于对照组(均P<0.05).TSHR、P16和RAS mRNA在乳头状甲状腺癌中的表达量明显低于对照组织(0.41±0.11对0.63±0.08,0.51±0.17对0.72±0.22,0.56±0.10对0.67±0.16,均P<0.05).经DNA测序证实,3个抑癌基因启动子发生甲基化的其CpG岛碱基未发生改变,仍为CG;未发生甲基化的碱基由CG变为TG.结论 3个抑癌基因启动子甲基化与乳头状甲状腺癌的发生和发展均相关.     

肺癌患者PTEN基因启动子甲基化和转录表达的研究

目的 探讨张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)启动子CpG岛甲基化状态和基因表达水平与肺癌发生的关系.方法 用甲基化特异性PCR检测PTEN启动子CpG岛甲基化状态,实时定量PCR 检测PTEN mRNA的表达水平.结果 在肺癌组织中PTEN基因启动子甲基化的频率为26.67%(12/45),在肺正常组织中未发生甲基化(χ2=7.448,P＜0.01).正常组织中PTEN mRNA全部表达,肺癌组织中表达缺失率为22.22%(10/45),且表达量低于正常肺组织(t=-14.156,P＜0.001),不同年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度、肿瘤分类中其表达量无显著性差异(P＞0.05);PTEN甲基化与其mRNA表达下降密切相关.结论 肺癌中PTEN基因启动子甲基化频率明显升高,其表达普遍下调或缺失,提示PTEN启动子甲基可在肺癌发生、发展中起一定作用.     

错配修复基因hMSH2启动子甲基化与胃癌的关系

目的:探讨hMSH2基因启动子区5CpG岛高甲基化在胃癌发生过程中的作用.方法:应用甲基化特异性PCR(methylationspecific PCR,MSP)方法检测胃癌及非癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化状态.结果:40例胃癌中hMSH2基因启动子区高甲基化24例(60%),其癌旁黏膜组织中有15例(37.5%)发生甲基化,14例慢性萎缩性胃炎组织中有5例(35.7%)发生甲基化,6例慢性浅表性胃炎组织中未见甲基化.四组甲基化水平相比,差别有统计意义(P＜0.05).胃癌组甲基化水平高于癌旁组,差别有统计意义(P＜0.05).癌旁组、慢性萎缩性胃炎组、慢性浅表性胃炎组三组甲基化水平相比,差别无统计意义.胃癌各临床病理参数组之间相比差别无统计意义.结论:胃癌组织中hMSH2基因启动子区高甲基化可能是导致其错配修复功能缺陷的重要原因之一;而错配修复功能缺陷在胃癌的发生中起着重要作用,但可能与其发展关系不大.     

胃癌组织中E—cadherin基因启动子异常甲基化状态观察

目的观察胃癌组织中E—cadherin基因启动子异常甲基化状态。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）技术检测54例胃癌及其癌旁正常组织中的E—cadherin基因启动子异常甲基化状态,并分析E-cadherin基因启动子异常甲基化状态与胃癌临床病理参数的关系。结果胃癌组织中的E-cadherin基因启动子异常甲基化发生频率为48．10％（26／54）,明显高于癌旁正常组织中的11．11％（6／54）。E—cadherin基因启动子异常甲基化频率与胃癌分化程度、病理类型、浸润深度以及淋巴结转移、临床分期有关（P均〈0．05）。结论胃癌组织中E-cadherin基因启动子异常甲基化频率较高,并与胃癌浸润、转移有关。     

胃腺癌凝血栓蛋白1基因异常甲基化及其临床意义

目的　探讨凝血栓蛋白 1(THBS1)基因CpG岛异常甲基化与胃腺癌 (GAC)发生的关联。方法　应用甲基化特异性PCR检测技术 ,检测 82例GAC患者肿瘤组织 ,30例十二指肠球部溃疡 (对照组 )、30例慢性胃炎伴肠上皮化生或异型增生患者胃窦黏膜组织中 ,THBS1基因启动子CpG岛甲基化分布情况。结果　THBS1基因启动子CpG岛甲基化在对照组 (6 .7% )中的频率明显低于胃炎组(2 6 .7% ,χ2 =4 .32 ,P =0 .0 38)和胃癌组 (4 7.6 % ,χ2 =16 .2 ,P <0 .0 0 1) ,在胃炎组与胃癌组之间的频率差异也有显著性 (χ2 =4 .14 ,P =0 .0 4 2 ) ,老年胃癌患者 (6 3.6 % )中的频率明显高于非老年 (36 .7% ,χ2 =5 .72 ,P =0 .0 17) ,在TNMⅢ和Ⅳ期肿瘤 (6 6 .7% )组织中的频率明显高于Ⅰ期 (36 .8% )或Ⅱ期(36 .4 % ,χ2 =6 .93,v =2 ,P =0 .0 31) ,而肿瘤部位之间、Lauren分型肿瘤之间及不同分化程度肿瘤之间 ,THBS1基因甲基化率的差异无显著性。结论　THBS1基因启动子CpG岛甲基化可能与胃腺癌的发生有关 ,且以老年患者及Ⅲ和Ⅳ期肿瘤多见。     

RASAL1基因启动子甲基化及RAS活性与结肠癌临床病理的关系

目的:检测RASAL1(ras GTPase-activatinglike protein 1)基因甲基化率及RAS活性在人结肠癌组织中的表达,探讨其与临床病理资料间的关系.方法:以40例结肠癌标本为研究对象,相应的正常组织标本为对照.甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测RASAL1启动子CpG岛甲基化状态,免疫共沉淀法检测RAS活性,分析肿瘤组织中RASAL1基因甲基化率及RAS活性与临床病理参数间的关系.结果:40例肿瘤组织中有26例检测出RASAL1基因甲基化(26/40,67.5%),对照组40例中有12例出现甲基化(12/40,30%),肿瘤组织甲基化率明显高于正常组织(P=0.0017).肿瘤组织中RAS活性的中位数为1.07,正常组织中RAS活性的中位数为0.52,P<0.001,差异有统计学意义.结肠癌组织中RASAL1基因的甲基化率、RAS活性与患者肿瘤分化程度、侵袭深度、淋巴结转移、TNM分期有统计学差异(均P<0.05).结论:RASAL1甲基化状态与RAS活性增加有关,可能在结肠癌的发生发展中起重要作用.抑制RASAL1甲基化及RAS活性,可能成为治疗结肠癌的新靶点.     

中国北方人群p14~（ARF）启动子甲基化与原发性肝癌的临床相关性

目的通过对中国北方人群原发性肝癌p14ARF启动子甲基化的分析,探讨p14ARF基因启动子甲基化与原发性肝癌的临床相关性。方法通过甲基化特异性PCR（MSP）方法检测111例原发性肝癌组织和22例癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化状况,然后与肿瘤种类、病因、病理以及肿瘤分期等临床数据进行关联。结果肝细胞癌组织及癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化频率分别为33.7%（29/86）和5.0%（1/20）,二者差异有统计学意义（P=0.010）。肝细胞癌p14ARF基因的启动子甲基化频率在不同肿瘤分期显著相关（P=0.027）,而与肿瘤细胞分化程度以及是否感染HBV无关,肝内胆管细胞癌p14ARF基因启动子甲基化频率在不同肿瘤分期、有无HBV感染以及不同肿瘤细胞分化程度之间的差异均无统计学意义。结论肝细胞癌中p14ARF基因启动子甲基化可能是p14ARF基因失活并影响TP53功能的方式之一,p14ARF基因启动子甲基化可能与肝细胞癌发生发展相关。     

多基因甲基化检测对结直肠癌早期诊断的意义

目的 通过对结直肠癌（CRC）组织中多基因甲基化水平的检测,探讨多基因甲基化对CRC早期诊断的意义.方法 选取25例CRC患者胃镜采集标本组织,通过甲基化特异性PCR（MSP）检测CRC和炎性组织中甲基化水平,分析其与CRC患者临床各指标的关系.结果 在CRC患者中,APC、P16、MLH1、DCC甲基化率分别为52.0%（13/25）、32.0%（8/25）、44.0%（11/25）、60.0%（15/25）.炎性组织中仅有1例DCC甲基化异常表达,甲基化率为10.0%（1/10）,甲基化阳性率显著高于炎性组织（P＜0.05）,4种基因甲基化联合检测诊断CRC的阳性率为92.0%（23/25）,高于单个基因检测的甲基化阳性率,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 APC、P16、MLH1、DCC基因在CRC患者中甲基化水平异常表达,联合检测APC、P16、MLH1、DCC可能作为CRC早期诊断的标志物.