重组人的GABA-A受体复合物α_5(155亮氨酸突变为缬氨酸)β_3γ_(2s)的药理学特征

目的:为了研究重组人的GABA-A受体复合物α_5β_3γ_(2s)的药理学特征,阐明哪一个氨基酸是影响亲合性的关键。方法:通过定位导向突变,我们构建了α_5(155亮氨酸突变为缬氨酸)亚基,并通过bac-ulovirus病毒-Sf-9昆虫表达系统重组了α_5(155亮氨酸突变为缬氨酸)β_3γ_(2s)亚基的GABA-A受体复合物,测定了15个GABA-A受体GABA位点活性化合物。结果:发现竞争性拮抗剂SR95531和抑制剂Thio-4-piol的IC_(50)值增加了约3倍。结论:155位氨基酸很有可能是影响SR95531和Thio-4-piol对含有α_5亚基的GABA-A受体复合物亲和性和药效的重要位点。     

Characterization of the Pharmacology of Recombinant Human GABAA Receptor Complexes Containing A2（α1 isoleucin 148 to valine） or A2（α1 asparatic acid 151 to asparagin） or A2 （α1 threonine 149 to glutamine） in Combination with β2γ2s Subu

Recombinant human GABAA receptors were investigated in vitro by coexpression of cDNAs coding for α1,β2 and γ2 subunits in the baculovirus/Sf-9 insect cell system,A single amino acid exchange α1(asparatic acid 151 to asparagin or α1(threonine 149 to glutamine) in the N-terminal,extracellular part of the α1 subunit induced about 10 fold decrease in an antagonist pitrazepine affinity.Other GABAA receptor ligands had little difference in their affinity.It was likely that 151 and 149 amino acid residues were essential for the binding affinity and efficacy of pitrazepine to GABAA receptor combinations containiαααααααααng an α1 subunit.     

α_(1D)-肾上腺素受体的稳定表达及其Ca~(2+)调控

目的探讨人α_(1D)-肾上腺素受体（α_(1D)-adrcnerslcreceptor,α_(1D)-AR）触发细胞的Ca(2+)释放和Ca(2+)内流机制。方法：将编码人α_(1D)-ARcDNA转染到缺乏α1－AR的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞,建立稳定表达纯一α_(1D)-AR的细胞系。采用Fura－2技术观察细胞胞浆Ca(2+)浓度变化。结果：肾上腺素激活α_(1D)-AR后既触发了CHO细胞的Ca(2+)释放又引起细胞外Ca(2+)内流。磷脂酶C（phospholipaseC,PLC）抑制剂U－73122抑制α_(1D)-AR激发Ca(2+)释放的同时也抑制了Ca(2+)内流。结论：人α_(1D)-AR与PLC激活途径相耦联释放细胞内储存Ca(2+)并通过“充电式Ca(2+)内流”机制触发细胞外Ca(2+)内流。     

大鼠肾α_1肾上腺素受体亚型:特征,功能与调制(英文)

Renal α_1-adrenoceptors are involved in the regulation of renal blood flow, glomerular filtration rate, renin secretion, and sodium, calcium and bicarbonate reabsorption. This paper reviews the characterization of rat renal α_1-adrenoceptor subtypes, their signaling mechanisms, their possible functional roles, and their regulation in the spontaneously hypertensive rat(SHR).     

人右胃网膜动脉的功能性α_1-肾上腺素受体亚型(英文)

目的:研究人右胃网膜动脉(RGA)中介导收缩的功能性α_1-肾上腺素受体(α_1-AR)亚型。方法:离体血管收缩功能实验。结果:在RGA中α_2-AR选择性拮抗剂育亨宾、α_1-AR选择性拮抗剂哌唑嗪及α_(1A)-AR选择性拮抗剂RS17053和5-MU,α_(1D)-AR选择性拮抗剂BMY7378和α_(1A)-与α_(1B)-AR选择性拮抗剂WB4101拮抗NE引起收缩效应的pA_2值分别为6.82±0.28、9.77±0.22、8.42±0.22、8.42±0.22、6.84±0.32和8.88±0.20,斜率分别为1.12±0.40、0.90±0.22、0.93±0.22、0.88±0.18、1.05±0.17、1.15±0.16。α_1-AR选择性拮抗剂的pA_2值与这些拮抗剂在表达α_(1A)-、α_(1B)-、α_(1D)-AR的细胞株上得出的pK_i值之间的相关系数分别为0.95、0.82和0.42。用α_(1B)-、α_(1D)-AR的不可逆选择性拮抗剂氯乙基可乐定(CEC)预处理RGA前后,NE的pD_2值分别为5.9±0.5和5.6±0.6,最大收缩分别为(8.9±3.2)g和(8.0±3.2)g,差异无显著性。结论:在RGA中NE引起的收缩效应主要由α_(1A)-AR介导,而α_(1B)-AR和α~(1D)-AR均不参与收缩效应。     

α_(1A)-和α_(1B)-肾上腺素受体介导HEK293细胞增殖和Ca~(2 )-钙调蛋白依赖性蛋白激酶激活(英文)

目的:研究α_1-AR三种亚型对细胞增殖和Ca~(2 )-钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CCDPK)的作用。方法:采用磷酸钙沉淀法进行转染,用放射配基结合实验测定α_1-AR表达量。用[~3H]胸腺嘧啶参入量测定细胞增殖,用免疫沉淀和髓鞘蛋白底物法测定CCDPK的活性。结果:三株表达α_(1A)-,α_(1B)-和α_(1D)-AR的细胞株表达受体密度约为0.6 nmol·g~(-1)。在普萘洛尔存在下,去甲肾上腺素(NE)作用24 h可浓度依赖地刺激HEK293/α_(1A)-AR和HEK293/α_(1B)-AR细胞DNA合成。NE 10 μmol·L~(-1)可促进HEK293/α_(1A)-AR和HEK293/α_(1B)-AR细胞DNA合成增加,刺激CCDPK活性的升高。NE不引起HEK293/α_(1D)-AR细胞DNA合成和CCDPK活性的显著改变。结论:在转染α_1-AR亚型的HEK293细胞中激动α_(1A)-或α_(1B)-AR可引起细胞增殖,激动α_(1D)-AR则无显著改变。