microRN A-141在结肠癌中的表达分析研究

目的：分析microRNA141（miR‐141）在结肠癌组织中的表达及意义。方法采用荧光定量 PCR（SYBR Green）法检测48例结肠癌组织和对应癌旁正常组织中miR‐141的表达。结果 miR‐141在结肠癌组织中的相对表达量为5．19±0．52,与对应癌旁正常组织1．01±0．13比较差异有统计学意义（P＜0．05）;随着结肠癌分化程度的降低结肠癌组织中miR‐141的表达增高;miR‐141在淋巴结转移组的相对表达量为6．05±0．14,在淋巴结无转移组中为4．30±0．23,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论 miR‐141高表达可能与结肠癌的分化程度和淋巴结有无转移有关。miR‐141的出现为结肠癌的研究提供了新的切入点。     

微小RNA204在人肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的：研究微小RNA204（miR‐204）在人肾透明细胞癌（RCCC）中的表达及临床意义。方法收集泌尿外科行手术切除的RCCC及对应癌旁正常肾脏组织标本共65例,运用qRT‐PCR技术检测miR‐204在RCCC及癌旁组织中的表达水平,统计分析miR‐204表达水平与患者临床病理资料间的相关性;采用人工合成的miR‐204模拟物转染人RCCCCaki‐1细胞,分别采用qRT‐PCR及Western‐Blot检测转染后 miR‐204下游潜在靶点Bcl‐2及SIRT1 mRNA 及蛋白的表达变化。结果 miR‐204在RCCC组织中表达水平显著低于对应癌旁正常肾组织（P＜0．05）;miR‐204低表达与肿瘤体积增大（＞3 cm ,P＜0．05）、肿瘤淋巴结转移（P＜0．05）及高TNM分期（Ⅲ＋Ⅳ期,P＜0．05）显著相关;miR‐204转染人RCCCCaki‐1细胞后可显著降低细胞内Bcl‐2及SIRT1 mRNA及蛋白的表达水平（P＜0．05）。结论 miR‐204在RCCC组织中表达下调并与肿瘤恶性临床病理特征有关, miR‐204可能通过下调Bcl‐2及SIRT1的表达来抑制RCCC的发生、发展过程。     

Pim-1在非小细胞肺癌中的表达及其与c-M yc的相关性

目的：研究原癌基因Pim‐1在非小细胞肺癌及癌旁正常组织中的表达情况及其与c‐M yc的相关性。方法收集该院胸外科手术切除的非小细胞肺癌患者的肺癌及癌旁正常肺组织标本各30例,统计临床病例资料及跟踪后期病理结果,利用RT‐PCR、qRT‐PCR及免疫组织化学方法检测肺癌及癌旁正常组织中 Pim‐1 mRNA、c‐Myc及 Pim‐1蛋白的表达,分析Pim‐1表达与临床病理特征及c‐Myc表达的相关性。结果在非小细胞肺癌中Pim‐1阳性率、mRNA及蛋白表达量明显高于癌旁组织, mRNA表达量分别为0．798±0．083和0．394±0．107（P＜0．01）,蛋白阳性例数分别为18例及6例（P＝0．002）。Pim‐1蛋白的表达与非小细胞肺癌患者的年龄差距、性别差异、有无吸烟史、肿瘤病理类型及分化程度无关（P＞0．05）,但与有无淋巴结转移及肿瘤的TNM分期有关（P＜0．05）,有淋巴结转移及TNM分期升高,其表达量也随之上调。Pim‐1与c‐Myc蛋白表达呈正相关,相关系数（r）为0．433（P＝0．017）。结论 Pim‐1在非小细胞肺癌组织中呈高表达趋势,且随着存在淋巴结的转移及 TNM 分期的升高,其表达也随之增加。     

不同分级与分期膀胱癌人微小核糖核酸3658和人源性长寿保障基因Ⅱ型表达的变化

目的：检测人微小核糖核酸3658（miR－3658）和人源性长寿保障基因Ⅱ型（LASS2）在不同病理分级、临床分期膀胱癌组织中的表达情况。方法通过实时荧光定量PCR检测96对新鲜膀胱癌组织（膀胱癌组）和癌旁正常组织（癌旁组）中miR－3658和LASS2基因的表达情况;采用免疫组化法检测LASS2的蛋白表达。结果采用2－ΔΔCt的相对表达量分析,膀胱癌组的miR－3658表达水平显著高于癌旁组,而膀胱癌组LASS2的表达水平低于癌旁组（P＜0.01）。不同病理分级、临床分期膀胱癌组织之间,miR－3658和LASS2基因均呈差异性表达。与高分化膀胱癌相比,低分化膀胱癌miR－3658呈高表达,LASS2呈低表达（ P＜0.01）。随着肿瘤浸润深度及临床分期的增加,miR－3658表达水平呈递增趋势,而LASS2则逐渐下降（P＜0.01）。免疫组化结果显示,膀胱癌组LASS2蛋白阳性表达率低于癌旁组,且随着肿瘤病理分级、浸润深度、分期程度的增加,其阳性表达率逐渐降低（ P＜0.05）。结论 miR－3658的高表达及LASS2的低表达可能参与膀胱癌的发生发展过程,并与其恶性程度相关。     

MicroRNA-155在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的探讨microRNA-155（miR-155）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancer, PTC）患者中的表达情况及与临床病理 特征的相关性,miR-155指导PTC预后的可行性。方法收集86例PTC患者的癌及癌旁新鲜组织,用荧光定量PCR的方法检测 miR-155在上述组织中的表达,并结合其临床病理特点进行回顾性分析。结果69.8%（60/86）的PTC患者癌组织的miR-155表 达较癌旁正常组织上调,相对上调倍数为2.63±2.73倍;而在表达上调组中,PTC原发灶更大［（1.66±0.96）cm vs（1.19±0.52）cm, P=0.021］;更容易出现甲状腺包膜外侵犯（56.7% vs 23.1%,P=0.004）;淋巴结转移率更高（70% vs 46.2%,P=0.036）;具有更晚的 TNM分期,Ⅲ~Ⅳ期的比例更高（20% vs 0%,P=0.014）。PTC癌组织中miR-155相对表达量（ΔCT）高低与淋巴结转移个数具备 一定的相关性（r=0.531,P=0.001）。结论PTC中miR-155的高表达具有更大肿瘤病灶,更易甲状腺包膜外侵犯,更高颈部淋巴 结转移率及更晚的TNM分期等临床病理特点,可能作为不良临床预后的判断指标之一。     

肾透明细胞癌患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达及意义

目的探讨肾透明细胞癌( CCRCC)患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达及意义。方法用ELISA法定量检测CD146蛋白含量及Real-Time PCR技术检测102例CCRCC患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达,并以51例肾脏良性病变患者手术正常肾组织作为对照。结果发现存在转移的CCRCC患者, CD146蛋白浓度与对照组比较差异有统计学意义(F =52.1,P <0.01),CD146 mRNA 的平均表达值(0.0438±0.0024)明显高于原位CCRCC患者(0.0382±0.0011,P=0.018)和对照组患者(0.0344±0.0010,P=0.001)。结论 CD146 mRNA表达上调与CCRCC的病理分级及淋巴结转移相关,有望成为评判CCRCC恶性程度、转移潜能及预后的一个新指标,为临床的干预性治疗提供可靠±据。     

m iR-335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用

目的：探讨miR‐335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用。方法（1）选取乳腺癌组织及癌旁正常组织,分别采用RT‐PCR、Western blot检测组织中 miR‐335及生存素蛋白表达。（2）选取乳腺癌细胞系 MCF‐7,分别转染 miR‐335 mimic及mimic对照组,采用RT‐PCR、Western blot检测组织中miR‐335及生存素蛋白表达。（3）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别将野生型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐wt）和突变型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐Mut）与miR‐335 mimic或模拟物阴性对照（NC）共转染至乳腺癌细胞系MCF‐7,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。（4）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别转染mimic对照组、miR‐335 mimic及miR‐335 mimic＋survivin ,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖活性。结果（1）与癌旁组织相比较,乳腺癌组织中miR‐335表达显著降低（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达显著增高（P＜0．05）。（2）与转染mimic对照组相比较,转染miR‐335 mimic可使乳腺癌细胞MCF‐7中miR‐335表达上调（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达表达下调（P＜0．05）。（3）与转染NC相比较,共转染miR‐335 mimic与survivin‐wt可使MCF‐7荧光素酶活性降低（P＜0．05）,而共转染miR‐335 mimic与survivin‐Mut则MCF‐7荧光素酶活性无显著性变化（P＞0．05）。（4）转染miR‐335mimic后,MCF‐7增殖活性较转染mimic对照组显著降低（P＜0．05）;而转染miR‐335 mimic＋survivin后,MCF‐7增殖活性较单纯转染miR‐335 mimic显著提高（P＜0．05）,但仍显著低于转染mimic对照组（P＜0．05）。结论在乳腺癌组织中miR‐335呈现低表达,生存素呈现高表达;而miR‐335可通过靶向生存素抑制乳腺癌细胞系MCF‐7增殖。     

miRNA-185在前列腺癌中的临床意义研究

目的：检测前列腺癌患者miRNA‐185的表达情况，探讨其相关的临床意义。方法选择2009年1月至2013年1月该院泌尿外科收治的前列腺癌患者64例，每例病例均留取前列腺癌标本和癌旁正常对照组织。miRNA‐185表达使用荧光定量PCR检测。结果前列腺癌组织和癌旁正常组织中miRNA‐185的表达量分别为（0．175±0．083）2‐△Ct、（0．344±0．112）2‐△Ct，前列腺癌组织miRNA‐185的表达量显著低于癌旁正常组织（P＜0．01）。前列腺癌患者miRNA‐185表达与年龄无显著的相关性（P＞0．05），然而前列腺癌患者患者miRNA‐185表达在不同PSA表达水平、Gleason评分、临床分期、有无远处转移之间差异有统计学意义（P＜0．05）。结论miRNA‐185低表达参与了前列腺癌的发生、发展过程，有可能作为前列腺癌分级、预后评估的新指标。     

MMP12mRNA在人肺腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的检测MMP12mRNA在人肺腺癌组织中的表达,探讨其与临床病理特征的关系。方法收集肺腺癌患者肿瘤组织样本39例,每例患者另取癌旁组织作为对照,应用real-timePCR技术,分别以GAPDH、RPLP0、PUM1、HPRT1和TBP为内参基因分析肺腺癌肿瘤组织及癌旁组织MMP12mRNA表达水平。扩大样本至103例,以PUM1为内参基因分析肺腺癌肿瘤组织及癌旁组织MMP12mRNA表达水平及MMP12mRNA表达水平与患者临床病理特征的关系。结果肺腺癌肿瘤组织相对于癌旁组织MMP12mRNA表达水平上调者所占比例较表达水平无改变或表达水平下调者增高,且以PUM1为内参基因检测肺腺癌肿瘤组织MMP12mRNA表达水平高于癌旁组织（P＜0.05）,且MMP12mRNA在男性患者（男性vs女性,2.07±3.25vs0.53±2.90,P＜0.05）、病理亚型为实性/微乳头状生长为主浸润性腺癌（实性/微乳头状生长为主vs附壁样/乳头状/腺泡状生长为主,3.30±2.95vs0.75±3.20,P＜0.05）中表达水平上调。结论MMP12mRNA在肺腺癌肿瘤组织中表达水平上调,可能参与肺腺癌发生、发展,且性别可能作为肺腺癌肿瘤组织MMP12mRNA表达水平上调的危险因素。     

EphB4在肝癌组织中的表达及临床意义

目的：研究酪氨酸蛋白激酶受体EphB4在肝癌组织中的表达及临床意义,并分析EphB4对肝癌细胞增殖的影响。方法采用逆转录‐聚合酶链反应（RT‐PCR）和免疫组化技术分析EphB4在60例肝癌组织与相应癌旁组织中的表达差异,分析EphB4在肝癌组织中的表达水平与肝癌患者临床病理学之间的相关性,进行单因素生存分析,MTS实验分析EphB4对肝癌细胞系SK‐Hep‐1活力的影响。结果RT‐PCR检测结果显示EphB4在肝癌组织中mRNA表达水平（1．39±0．80）。明显高于癌旁组织（0．56±0．33）,差异有统计学意义（P＜0．01）;免疫组化分析发现EphB4在肝癌组织和癌旁组织中的阳性率分别为81．7％和23．3％;EphB4在肝癌组织中的表达与AFP水平、肿瘤大小、TNM分期相关（P＜0．05）;EphB4蛋白表达阳性和阴性的肝癌患者3年生存率分别为22．5％和54．5％,差异有统计学意义（P＜0．05）;过表达EphB4显著提高肝癌细胞增殖能力（P＜0．05）。结论EphB4在肝癌组织中表达显著上调,与肝癌进展和预后相关;并且EphB4能促进肝癌细胞增殖,其可作为肝癌进展的标志物之一。     

miR141对前列腺癌LNCaP细胞周期的影响及其机制研究

目的 观察miR141对LNCa P细胞的增殖及其细胞周期的影响。 方法 收集温州医科大学附属第二医院2015年12月-2017年6月前列腺癌患者癌组织及癌旁组织,采用q PCR检测miR141表达情况;同时检测LNCa P细胞miR141表达情况。将LNCa P细胞分为LNCa P组(不进行转染)、mimics组(转染miR141-mimics)与inhibitor组(转染miRNA-141 inhibitor)。观察其转染效率,并用MTT法检测3组细胞的增殖率,流式细胞仪检测3组细胞的细胞周期情况,通过WB检测P27、CDK4和Cyclin D1表达情况。 结果 在癌组织中miR-141的水平显著高于癌旁组织(P<0.05),在LNCa P细胞中miRNA-141的水平相比于癌组织较低(P<0.05),但略高于癌旁组织。LNCa P细胞转染miRNA-141-mimics后,miRNA-141表达显著升高(P<0.05),转染miRNA-141-mimics及miRNA-141 inhibitor后,miRNA-141表达略高于LNCa P细胞。在LNCa P转染miRNA-141 mimics 48 h时,细胞增殖率相比于LNCa P及inhibitor组要低,说明miRNA-141能阻碍LNCa P细胞的增殖。在LNCa P转染miRNA-141 mimics后,细胞周期在G₁期发生阻滞。mimics组与LNCa P组、inhibitor组相比,P27明显升高,而CDK4和Cyclin D1则明显下降。 结论 miR141影响LNCa P的增殖,能使LNCa P阻滞在G₁期。      

miR-155在胃癌组织中的表达及临床意义

目的分析胃癌组织和癌旁组织miR-155的表达差异及其临床意义。方法收集手术切除的胃癌标本52例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）检测胃癌组织及癌旁组织标本miR-155的表达水平,并分析其表达水平与临床病理因素的关系。结果miR-155在胃癌组织中的表达量显著高于其在配对癌旁组织中的表达量（P〈0．05）;淋巴结转移组的表达量高于淋巴结未转移组（P〈0．05）。结论miR-155可能在胃癌发生、发展和转移过程中起到重要作用。     

宫颈癌全外显组测定及易感基因研究

目的：临床研究微小RNA‐96（MiR‐96）、缺氧诱导因子‐1α（HIF‐1α）、Twist与Slug等易感基因在宫颈癌中的表达水平。方法选择2010年3月至2014年5月在该院就诊的宫颈癌患者128例为观察组,同时选择健康者100例作为对照组。测定MiR‐96、HIF‐1α、Twist与Slug等在宫颈癌组织中的表达水平。（1）HIF‐1α：采用HIF‐1α试剂盒对单克隆抗体HIF‐1α进行检测,按照试剂盒的要求进行染色及制备组织标本,显微镜下观察阳性细胞率大于10％者为阳性;（2）MiR‐96、Twist与Slug：用Trizol试剂按照试剂盒的说明提取总RNA,将RNA进行反转录,通过PCR定量检测MiR‐96、Twist与Slug的相对表达值。结果（1）HIF‐1α在正常组织中无阳性表达,而在肿瘤组织中阳性表达率远高于正常组织,两组比较差异有统计学意义（P＜0．05）;（2）MiR‐96在肿瘤组织中的相对表达值远高于正常组织,两组比较差异有统计学意义（P＜0．05）;（3）Twist与Slug基因在肿瘤组织中的相对表达量远高于正常组织,两组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论与正常组织相比,MiR‐96、HIF‐1α、Twist与Slug基因在肿瘤组织中有显著的高表达。     

长链非编码 RNALOC100288637在原发性肝癌中差异性表达的生物学意义及相关机制研究

目的：研究长链非编码 RNA （LncRNA ） LOC100288637在肝癌中的表达差异,对肝癌细胞增殖的影响及相关机制。方法分析GEO数据集GSE58043和GSE10694,得出LOC100288637及hsa‐miR‐101‐3p在肝癌组织中差异表达,RNA‐hy‐brid分析LOC100288637与hsa‐miR‐101‐3p的结合具有可能性。逆转录‐聚合酶链式反应在组织和细胞水平检测LOC100288637表达量。荧光原位杂交观察LOC100288637在细胞中的定位。敲低LOC100288637后CCK‐8检测细胞增殖情况。过表达hsa‐miR‐101‐3p后,检测 LOC100288637的变化。结果 LOC100288637在肝癌组织中的表达量高于癌旁组织（ P＜0．05）;LOC100288637在肝癌细胞系中的表达量高于肝细胞系（P＜0．05）。LOC100288637在 HepG2细胞核质均有表达,以细胞质居多。敲低LOC100288637后 HepG2细胞增殖活性降低（P＜0．01）。过表达hsa‐miR‐101‐3p后,LOC100288637表达量下降（P＜0．05）。结论 LncRNA LOC100288637可能在肝癌发生,发展过程中起重要作用并接受hsa‐miR‐101‐3p靶向调控影响肝癌细胞的增殖。     

MiRNA-155在肝细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的:观察微小RNA-155(miRNA-155)在肝细胞癌(hepatocellular cancer,HCC)组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法:应用实时定量反转录PCR检测77例HCC患者癌组织和癌旁组织中miRNA-155表达情况,并分析不同病理特征HCC患者间miRNA-155表达差异。Kaplan-Meier生存曲线分析miRNA-155和患者预后的关系。结果:miRNA-155在HCC癌组织中表达量显著高于癌旁组织(P<0.01);高miRNA-155表达和HCC患者TMN分期(P<0.05)、微血管侵犯(P<0.05)密切相关。Kaplan-Meier生存分析显示,miRNA-15高表达的HCC患者平均生存期(16.07±1.52)个月,miRNA-155低表达患者为(28.25±1.38)个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miRNA-155在HCC患者中存在过表达,且与患者预后存在一定关系。     

miRNA-26a抑制ox-LDL介导的HAECs凋亡作用的机制研究

目的：探究miR‐26a在ox‐LDL介导内皮细胞HAECs凋亡中的作用及其调控机制。方法采用不同浓度的氧化低密度脂蛋白（ox‐LDL）在体外作用于HAECs细胞,噻唑蓝（MTT）和TUNEL染色检测ox‐LDL作用HAECs后细胞的活性与凋亡率,定量实时聚合酶链反应（qRT‐PCR）检测ox‐LDL作用HAECs后细胞中miR‐26a的表达水平。在HAECs中过表达miR‐26amimic,MTT和TUNEL染色检测ox‐LDL作用后细胞的活性和凋亡率。构建荧光素酶报告载体pMIR‐PTEN的3′UTR,利用荧光素酶活性检测鉴定miR‐26a的预测靶基因。qRT‐PCR和蛋白质印迹法（Westernblot）分别检测PTEN的mRNA和蛋白表达水平。结果ox‐LDL能够介导HAECs细胞的毒性死亡和细胞凋亡,并且降低了HAECs细胞中miR‐26a的表达水平。过表达miR‐26amimic能够抑制ox‐LDL作用HAECs后细胞的毒性和凋亡。转染miR‐26amimic显著抑制荧光素酶的活性（P＜0．05）。转染miR‐26amimic显著下调HAECs细胞中PTEN的mRNA和蛋白表达水平（P＜0．05）。结论miR‐26a能够抑制抑制ox‐LDL作用HAECs后细胞的毒性和凋亡,其可能的作用机制是下调了PTEN的表达。miR‐26a可能成为治疗凋亡相关的动脉粥样硬化的潜在靶点。     

miR-21对人喉鳞癌细胞Hep2迁移侵袭能力的影响

目的：探讨微小RNA‐21（miR‐21）对人喉鳞癌细胞Hep2迁移、侵袭能力的影响。方法用脂质体Lipofectami‐neTM2000将miR‐21抑制剂和miR‐21NC转入人喉鳞癌细胞Hep2中,48h后,运用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）／磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）的激活情况,以及基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9与伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白（RECK）的表达。结果与miR‐21NC比较,miR‐21抑制剂能明显降低Hep2细胞活力[（0．688±0．043）vs．（0．375±0．012）],抑制细胞迁移能力[（6．57±0．02）μmvs．（20．49±2．18）μm]及细胞侵袭能力[（100．7±10．2）vs．（46．8±4．3）],差异均有统计学意义（P＜0．01）;同时miR‐21抑制剂能明显下调PI3K、MMP2及MMP9的表达（P＜0．01）,降低Akt的磷酸化水平（P＜0．01）,并上调PTEN及RECK的表达（P＜0．01）。结论miR‐21抑制剂能明显抑制人喉鳞癌细胞Hep2的迁移、侵袭能力,可能与PTEN／PI3K／Akt信号通路有关。     

水通道蛋白-5与多药耐药因子在结肠癌组织中的表达及其关系

目的：检测不同分化程度结肠癌组织中水通道蛋白（AQP）‐5与耐药因子的表达及相互关系。方法对45例结肠癌组织、36例癌旁组织采用实时荧光定量PCR（RT‐PCR）、蛋白免疫印迹法（Westernblot）、免疫组织化学染色检测AQP‐5及耐药因子P‐糖蛋白（P‐gp）、谷胱甘肽转移酶（GST‐π）、拓扑异构酶（TopoⅡ）、胸苷酸的限速酶（TS）的表达情况。结果免疫组织化学染色结果表明,AQP‐5主要分布于细胞膜和细胞质;RT‐PCR和Westernblot检测结果显示,结肠癌组织中AQP‐5的表达显著高于癌旁对照组（P＜0．05）,且表达量随分化程度降低而升高（P＜0．05）。免疫组织化学染色发现,P‐gp主要分布于细胞膜和细胞质,GST‐π主要分布于细胞核和细胞质,TopoⅡ主要分布于细胞核,TS主要分布于细胞质。RT‐PCR和Westernblot检测结果显示,结肠癌组织中耐药因子表达量显著高于癌旁组织（P＜0．05）,其中P‐gp、GST‐π、TopoⅡ随着分化程度降低表达增加,TS在不同分化程度结肠癌组织中表达变化不明显（P＞0．05）。AQP‐5与P‐gp、GST‐π、TopoⅡ的表达呈正相关（P＜0．05）,与TS表达无相关性（P＞0．05）。结论AQP‐5与耐药因子P‐gp、GST‐π、TopoⅡ、TS蛋白在结肠癌组织中高度表达,可能促进了结肠癌的转移和进展。