多重PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立一种直接、快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重PCR方法。方法设计3对引物,在同一反应管中同时扩增检测mecA、femA和IS431基因,扩增产物经凝胶成像系统分析。结果9株MRSA菌株mecA、fe-mA和IS431均阳性,5株凝固酶阴性的耐甲氧西林的葡萄球菌mecA和IS431阳性,7株甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌femA和IS431阳性,11株甲氧西林敏感的凝固酶阴性葡萄球菌IS431阳性,而大肠杆菌、肺炎链球菌等非葡萄球菌mecA、femA和IS431均阴性;当MRSA茵浓度达102CFU／ml时就可检出。结论通过同时扩增mecA、femA和IS431基因的多重PCR技术,能准确、快速地鉴定耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）产色筛选平板法和聚合酶链反应（PCR）检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

医院感染MRSA的mecA基因和耐消毒剂基因qacA的流行病学研究

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因和耐消毒剂基因qacA携带情况。方法采用全自动微生物分析系统VITEK2-COMPACT及配套鉴定卡、药敏卡对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行鉴定和药敏试验．并用WHONET5．6软件进行数据统计分析;用PCR扩增mecA基因和qacA基因,并对阳性基因进行测序分析。结果2009年1月至12月共分离金黄色葡萄球菌260株,其中耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）140株f53．8％1．对其中50株进行mecA基因和qacA基因检测,发现mecA基因阳性50株,阳性率为100％。未检出qacA基因。结论50株MRSA菌株均携带meCA基因,均未检测到耐消毒剂基风ⅡacA。     

葡萄球菌耐消毒剂基因qacA／B检测及临床意义

目的 了解临床分离的葡萄球菌mecA基因及耐消毒剂基因qacA/B的存在状况.方法 临床分离的40株葡萄球菌,分别用头孢西丁(30 μg)筛查法和聚合酶链反应(PCR)法检测mecA基因,同时采用PCR法检测其耐消毒剂基因qacA/B.结果 40株葡萄球菌中36株mecA基因阳性,占90.0%(36/40);11株检出qacA/B基因者均为mecA阳性葡萄球菌,其中10株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),1株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS),qacA/B阳性率为27.5%(11/40).结论 含qacA/B基因的葡萄球菌全部为mecA基因阳性,提示对临床常用消毒剂耐药的金黄色葡萄球菌同时也对甲氧西林耐药.因此检测葡萄球菌耐消毒剂基因,对合理选用消毒剂,控制葡萄球菌感染传播具有临床意义.     

乳胶结合试验快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的：评价乳胶结合试验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试验方法。方法：收集81株金黄色葡萄球菌临床分离株，通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和对甲氧西林敏感的金葡菌（MSSA），应用乳胶结合试验和基因扩增分别检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a)和mecA基因。结果：33株mecA基因扩增阳性菌株中的28株PBP2a检测呈阳性，5株为阴性，46株MSSA中，meca基因扩增及PBP2a检测全部为阴性。与聚合酶链反应检测mecA基因相比，乳胶结合试验检测MRSA的特异性和敏感性分别为100％和91．3％（74／81）。结论：乳胶结合试验是一种简便、快速、准确地检测MRSA的方法，适于在普通临床微生物实验室开展。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌产色培养基临床应用评估

目的通过头孢西丁纸片法、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产色筛选平板法和聚合酶链反应(PCR)检测MRSA,评估MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。方法收集仁济医院2008年8月至9月临床分离的金黄色葡萄球菌68株,分别采用头孢西丁纸片法、MRSA产色筛选平板法和PCR检测MRSA,以PCR检测femA基因和mecA基因结果为金标准,比较MRSA产色筛选平板的敏感性和特异性。结果甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)除万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺外,对其他11种抗菌药物的敏感率明显高于MRSA。68株金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法筛选出50株MRSA,产色平板法筛选出51株MRSA,PCR检测到51株mecA基因阳性,MRSA产色筛选平板结果和mecA基因检测结果符合率为100%。结论MRSA产色筛选平板可用于临床快速检测MRSA。     

一种简单的筛选耐甲氧西林葡萄球菌方法

目的推荐美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)关于6ug／ml苯唑西林 4％NaCl盐平板(以下简称盐平板法)检测甲氧西林耐药葡萄球菌。方法使用NCCLS推荐的盐平板法检测华山医院临床分离的葡萄球菌共894株。结果(1)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)苯唑西林纸片法的检出率为84．2％(538／639)，盐平板法的检出率为86．4％(552／639)，而耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率2种方法分别为82．0(209／255)、90．6％(231／255)；(2)有14株纸片法测定为中介的金黄色葡萄球菌和22株纸片法检测为甲氧西林敏感(MS)的凝固酶阴性葡萄球菌，盐平板检测均为甲氧西林耐药(MR)，经聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因结果均为阳性，显示PCR检测与盐平板检测结果一致；(3)随机取上述纸片法和盐平板2种方法检测均为MS者9株、MR者15株，同时进行mecA基因的PCR检测，结果显示全部与盐平板法和苯唑西林纸片法检测结果符合。结论在临床微生物实验室应该采用NCCLS推荐的6ug／ml苯唑西林 4％NaCl盐平板对MRSA和MRCNS进行检测，以供临床诊断和选用抗生素。     

表型和基因扩增方法在耐甲氧西林葡萄球菌检测中的应用

目的比较研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的试验检测特性。方法按临床和实验室标准协会的标准分别测定和判断1μg苯唑西林纸片和30μg头孢西丁纸片在30℃和35℃时对金黄色葡萄球菌（138株）和凝固酶阴性葡萄球菌（128株）的抑菌环直径。苯唑西林盐平板采用点种法，mecA基因的检测采用PCR。结果苯唑西林和头孢西丁纸片在30℃孵育时对MRSA检测的敏感性均可达到100％，而在35℃孵育时，头孢西丁纸片对MRSA检出敏感性（94．7％）略高于苯唑西林纸片（93．3％）。苯唑西林和头孢西丁纸片在30℃和35℃对MRCNS检测的敏感性为100％。苯唑西林盐平板法对MRSA检测的敏感性和特异性与苯唑西林和头孢西丁纸片在30℃检测的敏感性和特异性相同，但对MRCNS检测的敏感性低于纸片法。结论利用头孢西丁纸片可提高对耐甲氧西林葡萄球菌的检测。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因(mecA基因法)为标准，评价头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌的灵敏度和特异性。方法PCR扩增葡萄球菌的特异性mecA基因片段，头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和苯唑西林盐平板法检测葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准K—B(Kirby-Bauer)法进行。结果在190株临床分离的葡萄球菌中金黄色葡萄球菌(金葡菌)138株，表皮葡萄球菌30株，溶血葡萄球菌22株，经。PCR法检测mecA基因，金葡菌中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为81.2％(112／138)、96．1％(50／52)。头孢西丁纸片扩散法检测金葡菌中MRSA和CNS中MRCNS的发生率分别为81.2％(112／138)、94．2％(49／52)，与mecA基因法结果相比较，头孢西丁纸片扩散法检测葡萄球菌中MRS的灵敏度和特异度分别为99．4％(161／162)、100．0％(28／28)，两者符合率为99．5％(189／190)。2种方法所获得的结果经统计学处理，两者差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度和特异度，适合在临床微生物实验室中进行推广。     

实时荧光PCR在检测MRSA引起血流感染中的研究

目的建立检测引起血流感染中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）mecA基因的实时荧光PCR法。方法设计mecA引物,优化荧光实时PCR实验条件,并用该法检测临床分离的78株金黄色葡萄球菌引起血流感染标本,其结果与头孢西丁纸片扩散法的结果进行比较。结果 78株金黄色葡萄球菌中,荧光实时PCR法检测出mecA基因阳性38株、阴性40株;头孢西丁纸片扩散法检测出MRSA 27株、MSSA 51株,经配对卡方检验,荧光实时PCR法检出率显著高于头孢西丁纸片扩散法（P〈0.01）。结论荧光实时PCR法能敏感、特异检测MRSA引起的血流感染,比一般MRSA表型检测更加简便、快速。     

葡萄球菌对克林霉素的诱导性耐药研究和分析

目的了解葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药情况及对克林霉素诱导性耐药的发生率。方法K—B法检测葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性，头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌，D试验检测克林霉素诱导型耐药。结果在152株红霉素耐药、克林霉素敏感的葡萄球菌中，85株为诱导型耐药，检出率为55．92％（85／152），其在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、甲氧西林敏感凝固酶阳性金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌和甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌中所占比例分别为57．14％（8／14）、76．47％（26／34）、50．70％（36／71）和45．45％（15／33）。结论葡萄球菌诱导克林霉素耐药的发生率处于相对较高水平，临床细菌室应重视D试验以指导临床合理选择抗生素。     

新生儿血培养中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的耐药基因及细胞间黏附基因A和D的研究

目的探讨新生儿血培养中耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的耐药基因状况,并对分离株的细胞间黏附基因A和D在菌血症诊断中的意义进行了研究。方法对新生儿血培养中分离到的耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌进行抗生素药敏试验及菌株鉴定,采用PCR法进行mecA、icaA及icaD基因的检测。结果 100株耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的分离株中mecA、icaA及icaD基因阳性检出率分别54株(58.7%)、62株(67.4%)、13株(14.1%)。在11例icaA和icaD同时阳性的病例中,有10例被诊断为新生儿菌血症。结论新生儿败血症感染耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌携带耐药基因十分严重,应重视对其监测与控制。icaA和icaD基因同时阳性是临床诊断凝固酶阴性葡萄球菌败血症的一种潜在实验室方法。     

头孢西丁纸片法筛查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价

目的评价头孢西丁纸片法筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法.方法采用NCCLS推荐的30μg头孢西丁纸片法和苯唑西林纸片法检测MRSA,以PCR方法检测mecA基因为金标准.同时做头孢西丁对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC).结果用PCR方法检测145株金黄色葡萄球菌,其中mecA基因阳性83株,阴性62株.用头孢西丁纸片法筛查MRSA阳性82株,阴性63株.敏感性为98.8%,特异性为100%.而苯唑西林纸片法检测MRSA敏感性为95.2%,特异性为96.8%.结论头孢西丁纸片法筛查MRSA与mecA基因检测具有很好的一致性,该方法可在常规工作中推广使用.     

双重PCR反向杂交快速检测及鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 研究以非培养法为基础的快速检测和鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法 将金黄色葡萄球菌mecA基因特异性探针固定在尼龙膜上,双重聚合酶链反应(PCR)同时扩增待检DNA片段,在扩增中用bio-11-dUTP标记扩增产物,然后与探针膜杂交。结果 50株金黄色葡萄球菌sa442特异性基因片段检测结果为100％阳性,mecA基因结果阳性占72％。结论 该方法灵敏度高、特异性强,适用于临床快速检测和鉴定MRSA。     

应用MRSA ID产色琼脂培养基等四种方法检测和鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的比较MRSAID产色琼脂培养基及其他3种方法检测和鉴定甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法选择临床118株葡萄球菌用（118株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌108株，凝固酶阴性葡萄球菌10株）细菌鉴定仪鉴定到种，用MRSAID琼脂筛选法、苯唑西林平板筛选法、头孢西丁纸片法比较MRSA的检测情况，同时检测金黄色葡萄球菌的mecA基因作为金标准，同时用大肠埃希菌ATCC25922，金黄色葡萄球菌ATCC25923，铜绿假单胞菌ATCC27853和粪肠球菌ATCC29212做干扰试验。结果金黄色葡萄球菌用PCR检测其meeA基因，共检测到80株阳性菌株；用MRSAID琼脂筛选法符合率为100％，苯唑西林平板筛选法符合率为97．5％，头孢西丁纸片法符合率为100％；有1株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）和1株凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）对MRSAID琼脂的显色有干扰，出现了浅绿色的细小菌落。用标准菌株做对照均没有生长。结论MRSAID琼脂平板可以对MRSA进行主动快速监测。     

葡萄球菌的耐药性调查分析

目的 了解和调查临床分离出的葡萄球菌的致病性及药敏情况，为临床治疗提供依据。方法 从医院住院患者的标本中分离出来600株葡萄球菌，用法国生物梅里埃公司ATB自动细菌分析仪鉴定菌种及做药敏试验，并进行耐甲氧西林葡萄球菌检测、β-内酰胺酶试验。结果 住院患者4980例分离葡萄球菌600株，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）145株，甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌110株，甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌220株，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRSCN）125株；β-内酰胺酶检测，600株葡萄球菌中，β-内酰胺酶阳性者435株，占72．5％；β-内酰胺酶阴性者165株，占27．5％；其中凝固酶阳性的葡萄球菌产酶率高，为80．5％。葡萄球菌的耐药性均比较强，特别是MRSA和MRSCN，但所有葡萄球菌皆对万古霉素敏感。结论 葡萄球菌是造成医院感染的主要病原菌之一，合理使用抗生素对于有效治疗疾病和控制医院感染的发生至关重要，强调葡萄球菌耐药性监测对指导临床用药的必要性。     

聚合酶链反应检测mecA和mecI及其对葡萄球菌甲氧西林耐药的影响

目的了解葡萄球菌甲氧西林耐药基因mecA和调节基因mecR中的抑制基因mecI在葡萄球菌中的分布,探讨mecA、mecI和β-内酰胺酶对甲氧西林耐药性的影响。方法琼脂稀释法测定158株葡萄球菌苯唑西林MIC;聚合酶链反应检测mecA和mecI;用内切酶TrulⅠ进行mecI酶切分型。结果 158株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌(SA)66株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)92株,葡萄球菌对苯唑西林的总耐药率达44.3%(70/158)。158株葡萄球菌中,检出mecA阳性70株,其中SA 8株,CNS 62株。70株mecA阳性葡萄球菌中,检出mecI阳性12株,其中SA7株,CNS 5株;88株mecA阴性葡萄球菌中未检出mecI。对mecA阴性、苯唑西林MIC≥4μg/mL的菌株进行抑制实验后,再测定苯唑西林MIC,抑制后MIC下降8倍以上。结论耐甲氧西林葡萄球菌以mecA为其主要的甲氧西林耐药决定子;β-内酰胺酶和mecI基因对葡萄球菌甲氧西林耐药有一定的影响。     

金黄色葡萄球菌耐药基因及致病毒素基因的相关性研究

目的研究携带TSST-1和PVL基因的金黄色葡萄球菌耐药特点、分布特征及与致病性的关系。方法临床收集74株金黄色葡萄球菌,采用PCR法检测TSST-1、PVL和mecA基因,纸片扩散法进行17种抗菌剂的耐药性检测。结果 74株金黄色葡萄球菌中mecA基因检出率为55.4%,其中22株检出PVL基因(30.3%),PVL阳性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为15株(36.6%),甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)为7株(21.2%),两者间差异无统计学意义(P>0.05)。5株金黄色葡萄球菌中检出TSST-1基因(6.3%),均为MRSA。MRSA耐药性严重,并呈多重耐药性,携带基因PVL和TSST-1的MRSA除对万古霉素敏感外,对其他抗菌剂均耐药。结论携带基因TSST-1和PVL的金黄色葡萄球菌耐药性及致病力更强,增加了临床抗感染治疗的难度。     

头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌的临床应用评价

目的用PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为参比方法,评价头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的临床应用价值。方法临床分离的163株葡萄球菌,分别用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、PCR法检测mecA基因,以PCR扩增法检测mecA基因作为参比方法进行比较。结果163株临床分离的葡萄球菌经PCR法检测mecA基因,阳性率为81.0%,其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为74.1%和83.8%。头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法用于检测MRSA与PCR法检测mecA基因有很好的一致性,其敏感性和特异性均为100.0%,而对于凝固酶阴性葡萄球菌,头孢西丁纸片扩散法比苯唑西林纸片扩散法检测MRS的敏感性和特异性高,敏感性分别为100.0%和94.3%,特异性分别为96.0%和88.0%。结论头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌具有很高的灵敏度,但对于mecA基因阴性的凝固酶阴性葡萄球菌,用头孢西丁纸片法检测,约有5%菌株要误报为MRCNS。由于头孢西丁纸片扩散法操作简单,较苯唑西林纸片扩散法检出MRS的敏感度和特异性高,结果与PCR法检测mecA基因有很好的相关性,不需特殊仪器设备,可在临床微生物实验室常规开展。     

头孢西丁纸片扩散法筛选耐甲氧西林葡萄球菌

目的:评价头孢西丁纸片法筛选耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的方法.方法:采用2004年NCCLS推荐的30μg/片头孢西丁纸片法检测MRS,以PCR方法检测mecA基因为"金标准".结果:在60株临床分离的葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌36株,凝固酶阴性葡萄球菌24株.用PCR方法检测mecA基因阳性43株(金黄色葡萄球菌25株,凝固酶阴性葡萄球菌18株),阴性17株(金黄色葡萄球菌11株,凝固酶阴性葡萄球菌6株);用头孢西丁纸片法筛查MRS耐药(+)41株(金黄色葡萄球菌23株,凝固酶阴性葡萄球菌18株),敏感(-)19株(金黄色葡萄球菌13株,凝固酶阴性葡萄球菌6株).以PCR检测mecA基因法为"金标准",头孢西丁纸片法的敏感度和特异度分别为95.3%(41/43)、100%(17/17).准确度为96.7%(58/60).结论:头孢西丁纸片法筛查MRS与mecA基因检测法具有很好的一致性,该方法适合在临床微生物实验室中推广使用.