不同生长年限霍山石斛高效液相指纹图谱研究

目的建立霍山石斛Dendrobium huoshanense的HPLC指纹图谱,同时测定不同生长年限霍山石斛中丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素含量,为霍山石斛药材质量的评价提供依据。方法采用Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长240 nm,柱温30℃;将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1),对不同年限的霍山石斛样品进行相似度分析;峰面积导入SPSS软件进行聚类分析,从树状图上判断聚类效果。结果本方法建立的指纹图谱共有13个共有峰,指认了其中4个共有峰,分别为丁香酸、芦丁、石斛酚、柚皮素;不同年限的栽培霍山石斛相似度结果小于0.900,不同年限的仿野生霍山石斛相似度结果大于0.900。结论HPLC指纹图谱结合化学计量学方法能够评价和鉴别不同年限的霍山石斛,为霍山石斛药材的采收、开发、评价等提供参考。     

霍山石斛与美花石斛多糖柱前衍生HPLC特征图谱比较

目的 研究比较霍山石斛与美花石斛多糖柱前衍生高效液相色谱（HPLC）特征图谱的差异。方法 以盐酸水解石斛多糖,水解产物加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）进行衍生化,采用HPLC法分析单糖的衍生物。色谱柱为Kromasil 100-5 C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为乙腈-0.02 mol·L-1的乙酸铵溶液（冰乙酸调pH=6.7）,梯度洗脱;检测波长为250 nm;柱温为30 ℃;流速为1 mL·min-1。采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A版）生成对照图谱。结果 10批霍山石斛多糖柱前衍生特征图谱标示出6个特征峰,主要由D-甘露糖（71.8 %）与D-葡萄糖（27.2 %）组成,D-甘露糖与D-葡萄糖峰面积比值为2.05～3.71,此外含微量的D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。10批美花石斛多糖柱前衍生特征图谱亦标示出6个特征峰,主要为D-甘露糖（42.9 %）与D-葡萄糖（54.0 %）组成,D-甘露糖与D-葡萄糖峰面积比值为0.67～0.98,此外含微量的D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。与对照图谱比较,10批霍山石斛、美花石斛的相似度分别为0.994～1.000,0.934～1.000,霍山石斛与美花石斛共有模式之间的相似度为0.871。结论 该方法准确可靠,重复性好;两种石斛多糖构成差异较大,不宜混用。     

霍山石斛不同部位总黄酮的含量比较及黄酮类成分分析

目的 比较霍山石斛不同部位的总黄酮含量，并对其叶中黄酮类成分进行定性鉴别，明确霍山石斛黄酮积累部位及黄酮化合物组成。方法 采用AlCl₃比色法测定霍山石斛不同部位的总黄酮含量；应用超高效液相色谱-四级杆/飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)技术鉴定其不同部位的黄酮类化合物，使用Altima UHPLC C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；以0.4%甲酸(A)-甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱，流速0.9 m L·min^-1，柱温35℃。采用加热电喷雾离子化源(H-ESI)，负离子模式下采集数据，使用MassLynx V4.1软件处理数据。结果 霍山石斛不同部位中总黄酮含量比较：叶>茎>根，分别为2.06、0.630、0.477 mg·g^-1，三者存在显著性差异；在霍山石斛根、茎、叶中分别鉴定出53、61、68种黄酮类化合物。其化合物的类型主要以双碳糖苷为主，苷元主要是芹菜素。结论 霍山石斛中黄酮类化合物主要在叶中积累，其化学组成类型丰富，该研究结果可为霍山石斛的...     

柱前衍生化HPCE法测定不同种源石斛中多糖的单糖组成北大核心CSCD

目的:采用PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生化-HPCE法测定多糖的单糖组成,探讨不同种源霍山石斛、铜皮石斛及野生河南石斛药效物质基础的相似性。方法:采用石英毛细管柱(100 cm×50μm),350mmol/L硼酸溶液(以1.0 mol/L Na OH溶液调至p H 10)为缓冲液,运行电压20 k V,柱温为25℃,检测波长250 nm,运行时间34 min。结果:5种石斛样品共检出木糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸和核糖6种单糖。相似度评价显示,同一种源石斛样品10个批次间的相似度均在0.98以上,但不同种源的霍山石斛、铜皮石斛及野生河南石斛单糖组成及含量明显不同。结论:多糖部位PMP柱前衍生化-HPCE法具有简单、快速、准确、重现性好等优点,为不同种源的霍山石斛、铜皮石斛与野生河南石斛的定性鉴别及药材内在质量评价提供新的参考依据。     

柱前衍生化HPCE法测定不同种源石斛中多糖的单糖组成

目的:采用PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生化-HPCE法测定多糖的单糖组成,探讨不同种源霍山石斛、铜皮石斛及野生河南石斛药效物质基础的相似性。方法:采用石英毛细管柱(100 cm×50μm),350mmol/L硼酸溶液(以1.0 mol/L Na OH溶液调至p H 10)为缓冲液,运行电压20 k V,柱温为25℃,检测波长250 nm,运行时间34 min。结果:5种石斛样品共检出木糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸和核糖6种单糖。相似度评价显示,同一种源石斛样品10个批次间的相似度均在0.98以上,但不同种源的霍山石斛、铜皮石斛及野生河南石斛单糖组成及含量明显不同。结论:多糖部位PMP柱前衍生化-HPCE法具有简单、快速、准确、重现性好等优点,为不同种源的霍山石斛、铜皮石斛与野生河南石斛的定性鉴别及药材内在质量评价提供新的参考依据。     

美花石斛的质量研究及其与近似种石斛的比较

目的建立美花石斛生物碱、联苄类、黄酮类成分的TLC鉴别方法,以及石斛酚、甘露糖与葡萄糖含量测定方法,并与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛、铁皮石斛进行比较,为其质量控制提供科学依据。方法采用TLC法鉴别生物碱、联苄类、黄酮类成分;石斛酚含量测定:采用HPLC法,色谱柱为Kromasil 100-5C_(18);流动相为乙腈-水(36∶64);检测波长为210 nm;流速为0.5 m L·min~(-1);柱温为30℃。甘露糖与葡萄糖的含量测定:采用酸水解柱前衍生HPLC方法,色谱柱为Kromasil 100-5 C_(18);流动相为乙腈-0.02 mol·L~(-1)乙酸铵溶液(20∶80);检测波长为250 nm;流速为1.0 m L·min~(-1);柱温为30℃。结果 TLC鉴别中美花石斛分别检出2个生物碱主斑点、包括石斛酚在内的2个联苄类成分主斑点、包括柚皮素在内的5个荧光主斑点,与霍山石斛、金钗石斛、流苏石斛或铁皮石斛有一定区别。石斛酚、甘露糖、葡萄糖线的性关系良好(r=0.999 9);平均加样回收率分别为101.5%(RSD为1.95%)、97.9%(RSD为1.94%)、100.0%(RSD为1.36%);10批美花石斛的石斛酚含量为0.0739~0.171 mg·g~(-1);7批美花石斛的甘露糖与葡萄糖含量分别为5.07%~9.42%、8.43%~13.71%,甘露糖和葡萄糖含量之和为13.50%~22.61%。结论 TLC鉴别方法具有一定专属性,可作为美花石斛的鉴别方法之一;含量测定方法准确可靠,重复性好,可作为美花石斛的定量指标。     

有瓜石斛HPLC特征图谱研究

目的建立有瓜石斛HPLC特征图谱分析方法。方法采用ZORBAX SB C18色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱);检测波长分别为220 nm和340 nm;柱温为35℃;流速为1.0 m L·min-1。结果在220 nm检测波长下,12批有瓜石斛分为4类,共标示出16~26个特征峰,有14个特征共同峰。其中第Ⅰ类5批有16个共有峰,相似度为0.950~0.988;第Ⅱ类3批有26个峰,相似度为0.943~0.987;第Ⅲ类3批有23个峰,相似度为0.977~0.988;第Ⅳ类1批与第Ⅲ类相比,多一个特征峰,差异较大。同类样品的相似度为0.943~0.998,相似度较高;不同类样品共有模式间的相似度仅为0.568~0.882,有明显差异。在340 nm检测波长下,12批有瓜石斛可分2类,共标示出7~8个黄酮类特征峰,其中第Ⅰ’类11批标示出7个共有峰,相似度为0.966~0.988;第Ⅱ’类1批,比第Ⅰ’类多1特征峰,以11批模式为对照,其相似度仅为0.671。结论该方法准确可靠,重复性好,在340 nm检测波长下,黄酮类成分特征峰比较稳定,样品差异较小;在220 nm检测波长下,特征峰信息丰富,可为有瓜石斛的质量控制及鉴别提供方法学依据。     

美花石斛HPLC特征图谱研究及其与水煎液相关性分析

目的建立美花石斛HPLC特征图谱分析方法,研究美花石斛及其水煎液指纹图谱的相关性。方法采用Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱;流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长为280 nm;柱温为35℃;流速为0.8 mL·min~(-1)。结果 16批美花石斛药材样品,标示出22个特征共有峰,相似度为0.854~0.969;10批美花石斛水煎液样品,标示出药材中的16个共有峰,相似度均在0.909以上。经对照品保留时间定位及特征峰紫外光谱分析,鉴别了2个特征峰(峰14为柚皮素、峰16为石斛酚)。每批药材与其水煎液间的相似度为0.815~0.910。结论方法准确可靠稳定,重复性好,为美花石斛质量控制和物质基础研究提供参考。     

兜唇石斛HPLC特征图谱研究

目的 建立兜唇石斛HPLC特征图谱.方法 采用Zorbax SB C18色谱柱;流动相为乙腈-0.1％甲酸溶液(梯度洗脱);检测波长为270 nm;柱温为35℃;流速为1.0 mL·min-1.结果 兜唇石斛标示出42个共有峰;10批样品的相似度为0.901～0.961;兜唇石斛鲜品与兜唇石斛干品(水草枫斗)特征峰基本一致.结论 此方法准确可靠,重复性好,为兜唇石斛的质量控制提供了方法依据.     

鲜铁皮石斛HPLC特征图谱研究

目的研究不同产地鲜铁皮石斛HPLC特征图谱。方法采用Zorbax SB C18色谱柱;流动相为乙腈-0.2%的甲酸溶液梯度洗脱;检测波长为270 nm;柱温为35℃;体积流量为1.0 mL/min。结果鲜铁皮石斛标示出35个特征共有峰,10批样品的相似度为0.900～0.956。主要特征峰紫外光谱可分成四类,第Ⅰ类在202、265 nm附近有最大吸收;第Ⅱ类在207、270 nm附近有最大吸收;第Ⅲ类在200、220及280 nm附近有最大吸收;第Ⅳ类在220、270及340 nm附近有最大吸收,为黄酮类成分。结论方法准确可靠,重复性好。     

玫瑰石斛HPLC特征图谱研究

目的：建立玫瑰石斛HPLC特征图谱。方法：采用ZORBAX SB-Aq色谱柱,流动相为乙腈-0.2%甲酸,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,检测波长270 nm。结果：建立了12批玫瑰石斛HPLC特征图谱,标记出41个共有峰,相似度为0.901~0.986。结论：该法稳定可靠、重复性好,为玫瑰石斛的鉴别提供依据。     

铁皮石斛与霍山石斛中甘露糖、葡萄糖及柚皮素的含量比较

目的:优化铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖的柱前衍生HPLC含量测定方法以及柚皮素HPLC含量测定方法,比较铁皮石斛与霍山石斛中这3种成分的含量差异。方法:在2015年版《中国药典》铁皮石斛甘露糖柱前衍生HPLC含量测定项下色谱条件基础上,选择乙腈-0. 02 mol·L~(-1)乙酸铵溶液为流动相系统梯度洗脱,同时测定甘露糖与葡萄糖的含量,并分析甘露糖与葡萄糖的峰面积比值;采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);检测波长250 nm;流速1. 0 mL·min~(-1);柱温30℃。柚皮素HPLC含量测定采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-0. 4%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长290 nm;流速0. 8 mL·min~(-1);柱温40℃。结果:甘露糖与葡萄糖在0. 15~3. 0,0. 075~2. 25μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率分别为99. 01%(RSD 2. 1%),101. 69%(RSD 2. 0%),重复性、耐用性等其他方法学研究符合要求。43批不同产区铁皮石斛中甘露糖、葡萄糖以及两者的含量之和分别在12. 75%~36. 40%,2. 93%~18. 39%,19. 23%~54. 58%,除极少数样品外,基本符合2015年版《中国药典》甘露糖含量限度要求,甘露糖与葡萄糖含量之和也接近总多糖含量限度要求;含量与产区相关性不显著。12批霍山石斛的总糖则分别在14. 33%~29. 47%,6. 64%~15. 20%,25. 73%~44. 37%,其含量以及峰面积比值基本落在铁皮石斛范围期间,多批次的平均含量也基本与铁皮石斛一致(约33%左右)。柚皮素在0. 020 8~0. 832 0μg线性关系良好(r=0. 999 9),平均加样回收率为101. 96%(RSD 1. 8%)。11批铁皮石斛与7批霍山石斛的柚皮素含量分别为0. 053 2~0. 122 4 mg·g~(-1)(均值为0. 081 0 mg·g~(-1)),0. 040 3~0. 090 0 mg·g~(-1)(均值为0. 068 3 mg·g~(-1)),铁皮石斛含量稍高于霍山石斛,但含量均亦未达到0. 02%的质量标准下限的常规要求。结论:铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖HPLC含量测定方法重复性较好,用两者含量之和替代具有较大误差的总多糖含量作为测定指标具有可行性;单糖含量测定可应用于霍山石斛的定量质控指标;但依据2种石斛的总多糖含量、水解后的单糖含量与峰面积比值以及柚皮素含量,无法区分铁皮石斛与霍山石斛,需结合其他专属性方法方能对两种石斛进行区别。     

霍山石斛细胞悬浮培养及条件优化

目的利用细胞悬浮培养技术生产霍山石斛单细胞,解决石斛药用植物资源短缺问题。方法以霍山石斛叶片等外植体为实验材料,通过不同的制备方法获得霍山石斛单细胞,研究霍山石斛细胞培养的多种影响因素,应用正交设计优化霍山石斛细胞悬浮培养的条件。结果在蔗糖35 g/L,NH4NO3 1.3 g/L,pH 5.6,激素IAA 0.4 mg/L,6-BA 1.0 mg/L,培养时间14～18 d,在此条件下培养的霍山石斛细胞数为9.42×105个/mL。结论经过4次继代培养后石斛细胞多为圆状或椭圆状,细胞碎片减少。应用优化的细胞悬浮培养条件,能获得较大量的霍山石斛细胞。     

霍山石斛产业发展的现状与对策分析

本文从地理分布、形态特征、遗传特征、药理活性、化学成分五个方面论述霍山石斛是区别于其它石斛的特有种,指出在霍山石斛产业发展中必须明确其不同于其它石斛的独立地理分布、独有内在品质、独特养生文化的地位。分析霍山石斛产业发展中所具备的优势及产业发展中存在的问题,提出霍山石斛产业发展应该以健全霍山石斛产业链为基础、以打造霍山石斛品牌为核心、以构建政产学研协同创新为保障的发展对策,共同推动霍山石斛产业的持续快速发展。     

不同产地罗布麻叶UPLC特征图谱及黄酮类成分含量测定

目的:建立不同产地罗布麻叶药材超高效液相色谱法(UPLC)特征图谱,并测定2个黄酮类成分的含量。方法:采用Waters CORTECS T3型色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.6μm),乙腈-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min~(-1),进样量为1μL,柱温为35℃,检测波长为360 nm,建立16批罗布麻叶UPLC特征图谱,并进行相似度、聚类分析和主成分分析;同法测定药材中2种黄酮类成分(金丝桃苷、异槲皮苷)的含量。结果:建立的16批罗布麻叶药材特征图谱共标定16个共有峰,相似度为0.986～0.999;聚类分析结合主成分分析结果表明,不同产地药材整体质量不太稳定;对金丝桃苷和异槲皮苷进行了含量测定,结果16批药材中2个成分的总含量差异不大,以安徽省阜阳市和河南省驻马店市产罗布麻叶药材黄酮类成分含量较高。结论:建立的UPLC特征图谱结合含量测定及相似度评价、聚类分析和主成分分析评价方法,能全面地用于罗布麻叶药材的质量评价。     

铁皮石斛HPLC特征图谱研究

目的:建立铁皮石斛HPLC特征图谱,为铁皮石斛鉴别提供可靠方法.方法:采用Ultimate XB C18(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.2％磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长280nm,柱温30℃.运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会)进行分析.结果:以柚皮素为参照峰,初步构建了由6个特征峰组成的铁皮石斛乙醚部位HPLC特征图谱.结论:该法建立的特征图谱可为铁皮石斛鉴别提供参考.     

鸡骨草叶黄酮类成分HPLC指纹图谱研究

目的建立鸡骨草叶黄酮类HPLC指纹图谱,分析鸡骨草叶及饮片品质,为鸡骨草质控提供依据。方法采用RP-HPLC法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.2%乙酸,梯度洗脱;检测波长:330 nm;流速:1.0 mL·min~(-1)。建立鸡骨草叶黄酮类HPLC指纹图谱,进行相似度和聚类分析,并对鸡骨草饮片品质进行评价。结果建立了15批鸡骨草叶黄酮类HPLC指纹图谱,标记出10个特征共有峰,峰面积总和95%。不同样品相似度存在一定差异,第Ⅰ类鸡骨草叶,产地较近,相似度96;第Ⅱ类鸡骨草叶,产地较远,相似度0.32~0.84;第Ⅲ类为毛鸡骨草叶,产地接近第Ⅰ类,相似度0.85~1.00;20批饮片样品HPLC指纹图谱相似度在0.58~0.96之间。结论产地、基源和部位均影响着鸡骨草品质;所建黄酮类HPLC指纹图谱法符合指纹图谱的要求,可用于鸡骨草叶、鸡骨草饮片的质量评价。     

稀土元素镧、铈对霍山石斛试管苗离体生长的影响

目的:研究不同浓度稀土元素镧(La)、铈(Ce)对霍山石斛试管苗生长和生理特性的影响。方法:以霍山石斛试管苗为研究对象,采用植物组织培养技术在基本培养基中添加不同浓度的稀土元素La、Ce,90 d后统计各项生长指标并对超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(CAT)活性进行测定。结果:在基本培养基中添加15 mg/L La处理组的霍山石斛与对照组长势相当,随着La浓度增加,对霍山石斛侧芽高度和侧芽增殖倍数呈现抑制作用,浓度为25 mg/L时抑制作用最强,但各处理浓度对SOD活性均有一定促进作用;添加5~25 mg/L Ce均有利于霍山石斛侧芽生长,促进作用随浓度增加逐渐增强,浓度为25 mg/L时效果最明显,且各处理浓度对SOD活性均有一定促进作用,对CAT活性先抑制后促进;当添加浓度组合分别为15 mg/L La+25 mg/L Ce或25 mg/L La+25 mg/L Ce时,有利于霍山石斛试管苗生长。结论:La和Ce对霍山石斛试管苗的生长影响较大,并影响其SOD和CAT活性。     

不同生长年限霍山石斛的主要成分分析及其对急性肝损伤保护作用的比较研究

通过研究不同生长年限霍山石斛主要成分与对小鼠急性肝损伤的保护作用的差异,为霍山石斛的适时采收提供科学依据。采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定3种不同生长年限霍山石斛多糖、总黄酮、总生物碱和石斛酚的含量。将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型组和分别给予3种不同生长年限霍山石斛高(7.5 g·kg^-1)、低(1.25 g·kg^-1)剂量组,各组连续每日给药14 d。末次给药2 h后,除空白对照组腹腔注射生理盐水外,其余各组腹腔注射500 mg·kg^-1对乙酰氨基酚。12 h后采集小鼠血清及肝组织,检测小鼠血清中ALT和AST活性,肝组织SOD和MDA的水平,并观察肝脏病理变化。结果显示,不同生长年限霍山石斛主要成分含量差异显著(P<0.05),二年生霍山石斛多糖和石斛酚含量均为最高。总黄酮和总生物碱含量均为三年生霍山石斛最高,二年生次之,一年生最低。肝损伤保护作用研究发现,与模型组比较,各给药组均能降低血清中ALT,AST含量,升高肝组织中SOD活性并降低MDA水平,减轻对乙酰氨基酚对肝脏的病理损伤,但不同生长年限的霍山石斛保肝效果不同。结合不同生长年限霍山石斛成分进行多成分SPSS配对检验的结果表明,多糖和石斛酚很可能在小鼠急性肝损伤保护作用中起主导作用,二年生霍山石斛药效最佳,霍山石斛适宜采收期为二年生。     

药用霍山石斛原球茎的液体悬浮培养

目的:考察霍山石斛原球茎在液体培养中增殖、水溶性多糖与总生物碱积累的特征。方法:在霍山石斛试管苗茎段原球茎诱导与继代培养的基础上,进行原球茎的液体悬浮培养,分析原球茎生长动态,用比色法测定水溶性多糖与总生物碱的含量。结果:霍山石斛茎段在NAA或NAA与KT组合的MS培养基上可诱导出原球茎,MS基本培养基最适合原球茎继代培养增殖;原球茎在液体悬浮培养中最大比生长速率0.044·d^-1,倍增时间15.8 d,最适生长周期为4周,水溶性多糖和总生物碱含量分别是3.75％和0.0261％。结论:霍山石斛原球茎液体培养生长良好,具有目的化学成分的合成能力,为发酵培养开发霍山石斛资源提供可能。