药物对增生性玻璃体视网膜病变影响的进展

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是孔源性视网膜脱离、眼内手术和眼穿孔伤等血眼屏障破坏后视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞进入玻璃体,进而引起由多种细胞因素和体液因素共同参与的视网膜的一种超强的修复反应.其中细胞因素包括RPE、神经胶质细胞、巨噬细胞、成纤维细胞等,体液因素包括转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等细胞因子和细胞外基质.     

视网膜色素上皮扫描电镜标本制备的研究

本文介绍一种兔视网膜色素上皮(RPE)扫描电镜取材固定方法,它不影响同一眼球进行视网膜透射电镜的研究。标本较满意地显示了RPE细胞顶部表面形态及微绒毛的情况。在视网膜色素上皮扫描电镜(SEM)标本制备中,往往很难避免人工损害,如何将内层视网膜与RPE层分离是个关     

视网膜前膜发病机制的研究进展

视网膜前膜（ERMs）是一种与多种眼底疾病相关的病变，越来越多的研究表明ERMs的形成是一个复杂的生物学过程，不仅是纤维原细胞、视网膜的神经胶质细胞以及视网膜色素上皮细胞的增生，还包括在形成过程中所涉及的诱发因素对细胞的激活、游走、沉积和收缩等及细胞外基质的合成过程，国外研究报道血小板源性的生长因子PDGF和转化生长因子TGF-β在视网膜增生性疾病中是一种重要的刺激因素，可引起RPE细胞发生去分化为成肌纤维原细胞促使ERM。形成并使其具有收缩特性。     

细胞因子对视网膜色素上皮细胞CD44表达的影响

目的:探讨细胞因子对视网膜色素上皮(RPE)细胞CD44表达的影响及可能的调节机制.方法:取体外培养的第二代兔眼RPE细胞,消化接种于12孔板,分别加入不同浓度(10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L)的碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血小板源生长因子(PDGF)和肝细胞生长因子(HGF,共同培养12 h后,用流式细胞仪观察RPE细胞膜上CD44的表达情况.以不加任何因子的培养液作阴性对照.结果:正常兔RPE细胞可表达少量CD44.经各种细胞因子诱导后, RPE细胞CD44表达均增加,尤其4种细胞因子联合作用时表达上调最明显,表达水平与细胞因子浓度呈剂量依赖关系.结论:细胞因子b-FGF、TNF-α、PDGF、HGF能诱导RPE细胞CD44表达增强,从而可能促进RPE细胞的黏附及迁移.     

孔源性视网膜脱离模型视网膜色素上皮细胞CD44的表达变化

目的 研究兔孔源性视网膜脱离模型视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞CD44的表达,及其与孔源性视网膜脱离病理变化的关系.方法 90只健康有色兔随机分为5组建立不同模型:Ⅰ组:孔源性视网膜脱离组,28只眼;Ⅱ组:孔源性视网膜脱离伴玻璃体积血组,27只眼;Ⅲ组:单纯视网膜裂孔组,18只眼;Ⅳ组:玻璃体切除组,17只眼;Ⅴ组:空白对照组,90只眼.分别于手术后不同时间点(1、3,7、14,21、28 d)摘取各组兔眼眼球,用酶消化和机械分离法分离RPE细胞,制成细胞悬液,荧光免疫法标记CD44,用流式细胞仪检测各组RPE细胞膜上CD44的表达水平.结果 Ⅰ组和Ⅱ组模型眼均发生视网膜脱离,Ⅲ组和iv组模型眼未发生视网膜脱离.Ⅰ、Ⅱ组中RPE细胞CD44的表达明显高于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组,Ⅰ、Ⅱ组RPE细胞CD44表达水平在术后1 d即增高,7 d左右达到高峰,继而下降,Ⅰ、Ⅱ组与V组RPE细胞CD44的表达差异有极显著性意义(均P0.05).结论 孔源性视网膜脱离中RPE细胞CD44表达增强,RPE细胞CD44的表达变化与孔源性视网膜脱离的病理发展关系密切.     

肾上腺素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的实验研究

目的　观察肾上腺素对体外培养人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡的影响 ,探讨细胞凋亡与中心性浆液性脉络膜视网膜病变的关系。方法　通过流式细胞技术 (FCM )、光镜、TUNEL细胞凋亡原位末端标记法检测肾上腺素和 β 受体阻滞剂普萘洛尔对体外培养的人RPE细胞凋亡的作用。 结果　人RPE细胞对低浓度的肾上腺素有一定耐受作用 ,10 pg/ml～ 10 4pg/ml肾上腺素组无明显凋亡的发生 ;10 5pg/ml～ 10 8pg/ml肾上腺素诱导RPE细胞 72h可以检测到凋亡峰 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;加入 10 3 pg/ml普萘洛尔可以提高RPE细胞对肾上腺素毒性作用的耐受 ,未检见RPE细胞凋亡的发生。TUNEL法光镜下观察到细胞核被蓝色染料标记的凋亡细胞。结论　肾上腺素可以诱导培养的人RPE细胞凋亡 ,这可能是中心性浆液性脉络膜视网膜病变早期病理改变的机制之一。     

兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究

目的 用改良的二步酶法制备视网膜色素上皮（RPE）细胞悬液，不做玻璃体切割，直接进行视网膜下间隙的移植。方法 用酶I（含220kU/L)透明质酸酶和0.1%胰蛋白酶）分离视网膜神经上皮层与RPE之间的联系，再用酶Ⅱ（含0.25%胰蛋白酶）将RPE从玻璃膜上分离下来获得悬浮的RPE细胞，用特制的移植针头通过人为造成的局限性视网膜脱离区将其移植入受体视网膜下间隙。结果 术后2周供体RPE细胞呈单层排列于受体视网膜下间隙并存活，未见明显炎症反应。电镜观察术后5周供体RPE细胞位于受体Bruch膜上并与受体感光细胞外节盘膜形成镶嵌关系。结论 改良的内路法可以将供体RPE细胞成功移植在受体眼视网膜下间膜，并至少存活7周。     

人脂肪间充质干细胞体外分化为视网膜细胞观察

目的:研究成人脂肪间充质干细胞(hAD-MSC)体外诱导分化为视网膜色素上皮细胞(RPE)、光感受器细胞和血管内皮细胞的情况.方法:分离、培养和鉴定hAD-MSC,用血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子诱导hAD-MSC向血管内皮细胞分化,并检测血管内皮细胞标志物血管内皮细胞Ⅷ因子(vWF)的表达情况.制备hAD-MSC体外诱导液,用诱导剂和诱导液共同诱导hAD-MSC向视网膜细胞分化,采用免疫荧光法检测hAD-MSC经诱导后表达光感受器细胞标志物视紫红质(Rhodopsin)和RPE细胞标志细胞角蛋白(Pan-CK)的表达情况.结果:免疫荧光法证实,分离培养的hAD-MSC经体外诱导后可表达RPE、光感受器细胞和血管内皮细胞的标志Pan-CK、Rhodopsin和vWF.结论:hAD-MSC经过体外诱导可以向视网膜RPE、光感受器细胞和血管内皮细胞分化.     

生长因子在眼的发育及眼部疾病调控中的作用

生长因子是一类由多种细胞分泌的活性物质,作为信使调控细胞的迁移、增殖和分化。多种生长因子参与眼组织的发育及眼部疾病的生理、病理过程。血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子等介导糖尿病性视网膜病、脉络膜新生血管、白内障、糖尿病性黄斑水肿以及其他视网膜疾病的发生和发展。神经生长因子、睫状神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子、色素上皮衍生因子、粒细胞集落刺激因子等对视神经损伤有较好的修复作用。生长因子还与近视的发病密切相关,成纤维细胞生长因子、转化生长因子-β、胰岛素样生长因子影响巩膜厚度变化并调控近视的发生与发展。本文综述了生长因子参与眼的发育和眼部病理生理过程的研究进展,旨在揭示生长因子与眼部疾病的关联,为生长因子在眼科领域的应用提供思路。     

E2F decoy对培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响

为探讨转录因子E2Fdecoy策略对培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的抑制作用，在阳离子脂质体Lipofectamine^TM2000介导下将1μmol/LE2Fdecoy或无义decoy转入人RPE细胞中，用MTT法检测其对细胞增生活性的影响，RT-PCR检测细胞中PCNAmRNA表达水平的变化。结果显示：转录因子E2Fdecoy能抑制RPE细胞的增生，为增生性玻璃体视网膜病变（PVR）提供了新的基因治疗手段。     

复方血栓通胶囊治疗中心性浆液性脉络膜视网膜病变

中心性浆液性脉络膜视网膜病变(简称中浆)是由于视网膜色素上皮(RPE)屏障功能失常,形成黄斑部视网膜神经上皮浅脱离.笔者近年来以复方血栓通胶囊为主药治疗中心性浆液性脉络膜视网膜病变73例,取得较满意的效果,现报告如下.     

维拉帕米对血清诱导的兔视网膜色素上皮细胞增殖调节作用的研究

目的 :研究维拉帕米 (Verapamrl,Ver)对兔视网膜色素上皮 (RPE)细胞增殖的抑制作用。　 方法 :用流式细胞仪 (FCM )检测Ver对兔RPE细胞增殖周期的影响。　结果 :Ver能明显抑制血清诱导的兔RPE细胞的增殖 ,可使细胞更多地滞留在G1期 ,阻止细胞由G1期进入S期 ,并具有浓度依赖性和时间依赖性。　结论 :Ver能明显抑制血清诱导的兔RPE细胞增殖 ,可望成为新的防治增殖性玻璃体视网膜病 (PVR)的药物之一。     

人视网膜色素上皮细胞原代培养及HGF/c-Met的表达

目的：探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)及其受体c-Met在原代培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞中的表达情况。方法：体外培养人RPE细胞，3—5代细胞用于实验；采用免疫细胞化学和RT-PCR方法检测细胞内HGF及其受体c-Met的表达。结果：人RPE细胞HGF及其受体c-Met免疫细胞化学染色的阳性信号分别位于细胞浆内和细胞膜上；RT-PCR方法可检测到HGF及其受体c-Met mRNA的表达。结论：人RPE细胞自身产生HGF并表达其受体c-Met，提示HGF可能通过自分泌和(或)旁分泌途径作用于RPE细胞，涉及眼内多种疾病过程。     

视网膜增生膜结缔组织生长因子mRNA的表达

目的：观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)mRNA在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜(periretinal membranes，PRM)中的表达，探讨其临床意义。方法：采用原位杂交方法，对玻璃体切割手术获得的12例PVR增生膜进行CTGF mRNA的检测。结果：染色阳性9例，其中弱阳性( )1例，阳性( )3例，强阳性( )5例，阳性率为72％；阳性细胞多是一类胞体为长圆形或多角型，胞核呈圆形或卵圆形，胞质丰富的上皮样细胞；也有少数阳性细胞呈梭形、胞体较大的成纤维细胞样细胞。结论：PVR形成过程中视网膜色素上皮细胞(RPE)、成纤维细胞在TGF-β等生长因子的刺激下，CTGF mRNA表达显上调，表明CT-GF参与了PRM的形成和发展。     

氚-标记胸腺嘧啶核苷掺入法测定转化生长因子β1对视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的：：用氚-标记胸腺嘧啶核苷(3 H-TdR )掺入法观察转化生长因子β1( TGF-β1)对人视网膜色素上皮细胞( retinal pigment epithelium cells,RPE)增殖的影响,探讨TGF-β1和RPE细胞在增殖性玻璃体视网膜病变发病机制中的作用。方法：RPE细胞体外培养,用不同浓度的TGF-β10.1、1.0、5.0、10.0和100.0μg/L对细胞进行处理,3 H-TdR掺入法测定细胞放射性强度。结果：TGF-β10.1、1.0、5.0、10.0μg/L 作用后 RPE 活细胞数增加,细胞3H-TdR 摄入量均较对照组显著增加,TGF-β1100.0μg/L对RPE作用相反,细胞3H-TdR摄入量明显低于对照组(P<0.01)。结论：TGF-β1对人RPE细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF-β1的浓度,其中TGF-β1促RPE细胞增殖作用是诱导增殖性玻璃体视网膜病变发生的可能机制之一。     

中心性浆液性脉络膜视网膜病变发病机制的研究进展

中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)是指脉络膜毛细血管内液体通过视网膜色素上皮(RPE)病变处渗漏造成的局限性视网膜神经上皮脱离。精神压力对CSC发病有明显影响,糖皮质激素增多可加剧血小板聚集、增加微血栓形成和和血黏度。血液流变学改变可导致RPE失代偿和脱离,进而使神经上皮层脱离。此外,孕妇往往同时伴有精神压力和糖皮质激素增高,研究CSC孕妇对了解其发病机制更有意义。该文就CSC的发病机制和治疗方法等进行阐述。     

金雀异黄素对氯化钴诱导的兔视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究氯化钴对体外培养的兔视网膜色素上皮(RPE)细胞血管内皮生长因子(vEGF)表达的诱导作用，以及金雀异黄素(genistein，Gen)对其表达的影响。方法：采用免疫荧光组织化学技术和激光共聚焦显微镜，以荧光比值来表示VEGF的表达，半定量分析氯化钴处理不同时间对体外培养的BPE细胞VEGF蛋白表达的诱导作用，以及Gen对低氧或氯化钴诱导的VEGF表达的影响。结果：对照组有低水平VEGF蛋白的表达，随着低氧或氯化钴处理时间的延长，荧光比值的变化表现为时间依赖性，在6h点达到高峰。Gen(50、100、200μmol/L组)与二甲基亚砜(DMSO)对照组相比，均可明显抑制氯化钴诱导的VEGF的表达，且此种抑制作用呈浓度依赖性。结论：Gen可抑制氯化钴诱导的RPE细胞VEGF表达，提示Gen对视网膜新生血管的形成具有潜在的预防及治疗价值。     

Dispase与RPE细胞联合诱导的小鼠PVR模型的建立

目的 用dispase和同种异体视网膜色素上皮(retina pigment epithelium,RPE)细胞联合作用,诱导C57BL/6J小鼠增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的产生,并评价该模型的有效性.方法 将32只健康的成年C57BL/6J小鼠随机...     

复明片对兔视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的研究复明片对兔实验性视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)增殖的影响。方法用有色家兔96只设正常对照组(A组),制作视网膜脱离模型后分模型组(B组)、西药对照组(C组)、复明片组(D组)。并于造模后7、14、21 d分别取视网膜组织制备细胞悬液,流式细胞仪检测各兔增殖细胞核抗原(PCNA)在视网膜神经上皮层的表达。结果脱离后视网膜神经上皮层PCNA阳性细胞表达均呈上升趋势,7d后开始下降,且复明片组相较其余各组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论复明片通过恢复视网膜色素上皮与神经上皮之间的接触,阻止RPE的增殖即PCNA的表达。     

Trim9调控视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化

目的：青光眼是不可逆性致盲性眼病的主要病因,目前尚无有效疗法逆转青光眼的视觉系统损害。最近发现干细胞疗法有望使受损的视网膜神经元修复和再生,但是在干细胞来源方面仍然存在较大挑战。本研究探寻一种将视网膜Müller细胞去分化为视网膜干细胞,进一步高效定向分化为视网膜神经节细胞的方案,以期为青光眼的干细胞治疗提供新的细胞获取途径。方法：用表皮细胞生长因子和成纤维细胞生长因子2诱导大鼠视网膜Müller细胞去分化为视网膜干细胞。构建Trim9过表达慢病毒(PGC-FU-Trim9-GFP),感染由Müller细胞诱导去分化而来的视网膜干细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞术评估病毒感染效率。用视黄酸和脑源性神经营养因子处理过表达或未过表达Trim9的视网膜干细胞以诱导其分化为神经元和神经胶质细胞。采用免疫荧光、PCR/real-time RT-PCR和蛋白质印迹法检测各细胞标志物(GLAST、GS、rhodopsin、PKC、HPC-1、Calbindin、Thy1.1、Brn-3b、Nestin、Pax6)的表达。结果：表皮细胞生长因子和成纤维细胞生长因子2处理后的大鼠视网膜Müller细胞...