靶肌肉注射睫状神经营养因子促周围神经再生的功能评价

目的　评价靶肌肉注射睫状神经营养因子 (CNTF)对受损周围神经功能恢复的影响。方法　用硅胶管桥接 80只大鼠左侧坐骨神经长 6 m m缺损 ,随机分为两组 ,分别行 CNTF、生理盐水 (NS)靶肌肉注射。术后行坐骨神经功能指数 (SFI)测定、电生理检测、轴突图像分析及霍乱毒素 -辣根过氧化物酶 (CB- HRP)逆行追踪。结果　 CNTF组 SFI恢复率、各项电生理及轴突图像分析指标、CB- HRP标记的脊髓前角运动细胞数明显优于 NS组。结论　靶肌肉注射 CNTF可明显促进周围神经再生和神经功能恢复。     

静电纺纳米聚乳酸己内酮共聚物导管修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨应用同轴静电纺丝技术制备的聚乳酸己内酮共聚物[Poly(1-lactide-co-epsilon-caprolactone),P(LLA-CL)]导管,移植修复大鼠周围神经缺损的效果.方法 选取健康SD大鼠54只,随机分成3组,每组18只.先造成坐骨神经1.5cm缺损段,然后分别采用P(LLA-CL)导管桥接(A组)、硅胶管桥接(B组)、自体神经逆行原位移植(C组).分别在术后4、8、12周对大鼠进行大体观察、坐骨神经功能指数检查、神经电生理检查、肌肉湿重、再生有髓神经纤维计数、电镜观察,评价各组神经再生.结果 术后4周时A组再生神经已部分生长到导管的中部;8周时再生神经已通过神经导管,但再生的神经纤细;12周时再生神经粘连较轻,直径较粗.A组的坐骨神经功能指数、神经电生理、肌肉湿重和组织学观察等各项指标均略差于C组,但明显优于B组.结论 纳米聚乳酸己内酮神经导管具有促进神经轴突再生的作用,有望成为自体神经移植的替代材料应用于周围神经缺损的修复.     

靶肌肉注射睫状神经营养因子促周围神经再生的功能评价

目的 评价靶肌肉注射睫状神经营养因子(Ciliary Neumtrophic Factor，CNTE)对受损周围神经功能恢复的影响。方法 用硅胶管桥接80支大鼠左侧6mm长坐骨神经缺损，随机分为2组。分别行CNTF、生理盐水(NS)靶肌肉注射。术后行坐骨神经功能指数(SFI)测定、电生理检测、轴突图像分析及霍乱毒素-辣根过氧化物酶(CB-HRP)逆行追踪。结果 CNTE组SFI恢复率、各项电生理及轴突图像分析指标、CB-HRP标记的脊髓前角运动细胞数明显优于NS组。结论 靶肌肉注射CNTF可明显促进周围神经再生，提高神经功能恢复。     

人羊膜上皮细胞对大鼠坐骨神经再生影响的实验研究

目的 通过实验研究了解人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对大鼠坐骨神经再生的促进作用.方法 取60只SD大鼠随机分为两组,羊膜细胞组和对照组,各组再分为2周和4周组,每组15只.制作大鼠周围神经损伤再生室模型,HAECs组局部应用培养的HAECs,对照组局部使用等量的生理盐水.术后分别于2周、4周检测神经传导功能和HE染色观察神经纤维形态学变化.结果 术后2周两组的神经电生理及组织学检测比较差异无统计学意义;4周HAECs组的大鼠坐骨神经传导功能明显恢复,HE染色显示术后坐骨神经手术部位出现大量炎性肉芽组织,呈现纤维性修复,吻合口以远HAECs组神经纤维形态结构较对照组完整,神经纤维与髓鞘直径均较对照组大.结论 HAECs移植可加速大鼠坐骨神经损伤后神经传导功能恢复,有助于有髓神经纤维损伤后的轴突与髓鞘的再生修复.     

人羊膜上皮细胞对大鼠坐骨神经再生影响的实验研究

目的 通过实验研究了解人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对大鼠坐骨神经再生的促进作用.方法 取60只SD大鼠随机分为两组,羊膜细胞组和对照组,各组再分为2周和4周组,每组15只.制作大鼠周围神经损伤再生室模型,HAECs组局部应用培养的HAECs,对照组局部使用等量的生理盐水.术后分别于2周、4周检测神经传导功能和HE染色观察神经纤维形态学变化.结果 术后2周两组的神经电生理及组织学检测比较差异无统计学意义;4周HAECs组的大鼠坐骨神经传导功能明显恢复,HE染色显示术后坐骨神经手术部位出现大量炎性肉芽组织,呈现纤维性修复,吻合口以远HAECs组神经纤维形态结构较对照组完整,神经纤维与髓鞘直径均较对照组大.结论 HAECs移植可加速大鼠坐骨神经损伤后神经传导功能恢复,有助于有髓神经纤维损伤后的轴突与髓鞘的再生修复.     

电纺丝壳聚糖/聚乳酸神经导管修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的研究利用电纺丝壳聚糖/聚乳酸(chitosan/polylactic acid,ch/PLA)神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的方法和效果。方法采用电纺丝方法制备ch/PLA神经导管,通过扫描电镜、生物力学测定、表面润湿性测定和体外生物相容性检测,并与纯PLA比较,测试ch/PLA神经导管的性能。选取健康SD大鼠54只,随机分成3组,每组18只,制作右侧坐骨神经10 mm缺损模型,分别利用ch/PLA神经导管(A组)、自体神经(B组)移植修复,并与切除旷置(C组)进行对照。术后4、8、12周,通过大体观察、坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI)、神经电生理、肌肉湿重恢复率、肌细胞横截面积检测和组织学、免疫组织化学染色、透射电镜观察,对大鼠神经再生进行评价。结果随着chitosan的加入,神经导管的均一性、物理性能、亲水性及体外生物相容性均得到了明显改善。术后4周A组再生神经已通过神经缺损。术后A、B组SFI不断改善,两组恢复速度相似,差异无统计学意义(P0.05)。术后8、12周,A、B组可引出神经肌电图表现,且神经传导速度与动作电位波幅均不断恢复(P0.05)。术后12周,A、B组肌肉湿重恢复率与肌细胞截面积优于C组(P0.05),但A、B组间差异无统计学意义(P0.05)。生长相关蛋白43、神经纤维丝蛋白160亚单位、S-100蛋白免疫组织化学染色示,A、B组轴突与髓鞘恢复情况相似。术后12周A、B组再生神经纤维直径相似(P0.05),而A组再生神经髓鞘厚度优于B组,差异有统计学意义(P0.05)。结论电纺丝ch/PLA神经导管具有促进大鼠周围神经再生的作用,有可能成为治疗周围神经缺损的新方法。     

细胞外ATP对周围神经导管中再生轴突诱导作用的实验研究

目的 证实细胞对ATP对坐骨神经损伤后再生轴突的吸引性诱导作用。方法 将SD雌性大鼠制成5nm长坐骨神经缺损的模型,用长双臂“Y”形硅胶管桥接神经,硅胶管单臂端与坐骨神经近端作套入缝合,与左侧坐骨神经缝接的硅胶管两端缝合封闭,硅胶管两臂内注入ATP的为实验组,注入生理盐水的为对照组。与右侧坐肌神经缝接的硅胶管远端管中注入ATP的硅胶管与远端坐骨神经缝接。术后4周,8周取材,肉眼观察神经纤维生长情况;并作光镜,电镜观察及病理图像分析,观察再生神经纤维的数目和形成髓鞘的厚度。结果 再生的神经轴突均长入含ATP的硅胶管内,生理盐水对照组内未见任何神经纤维长入。远端与坐骨神经缝合能增强ATP的轴突诱导作用,并具有促进再生神经轴突成熟的作用。结论 细胞外ATP具有很强的再生神经轴突诱导作用,并具有促进再生轴突成熟的作用。     

兔化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损

目的：以化学去细胞兔神经移植修复大鼠坐骨神经缺损，从而探索化学去细胞异种神经移植修复神经缺损的可能性；方法：以30％TritonX-100和40%脱氧胆酸钠顺序处理新鲜取材的兔神经(直径15nm左右)，移植修复成年wistar大鼠l.0cm坐骨神经缺损．4个月后行电生理及组织学检查，观察神经再生情况；结果：移植神经未被宿主排斥，大量再生的神经纤维长过移植物，并恢复电传导功能；结论：化学去细胞异种神经可以作为修复周围神经缺损的一种很有前途的方法。     

优化法去细胞大鼠神经同种异体移植修复坐骨神经缺损

[目的]以优化法去细胞大鼠神经移植,修复同种异体坐骨神经缺损,观察术后动物的免疫排斥、早期功能恢复及神经再生情况。[方法]以优化去细胞方法处理新鲜取材的成年SD大鼠坐骨神经,移植修复同种异体1.0cm坐骨神经缺损,以自体神经和新鲜异体神经移植为对照,术后1个月行坐骨神经功能指数评价、神经电生理和组织学检查,观察动物在功能恢复、免疫排斥及神经再生方面的情况。[结果]自体神经和去细胞异体神经移植组动物的坐骨神经功能指数无显著差异(P>0.05),大体观察均可见神经连续性良好。电生理检测表明2组动物移植神经均已恢复电传导能力,在传导速度(CV)上无显著差异(P>0.05),但均未达到正常神经水平(P<0.05)。组织学观察则显示2组再生神经纤维均已长入移植段远端。S-100免疫组化显示两者在雪旺氏细胞数、形态和排列等方面无明显差异。2组在CD8 T细胞和巨噬细胞免疫组化染色阳性面积百分比上差异无统计学意义(P>0.05)。计算移植神经中段轴突密度后表明两者无显著差异(P>0.05),但都比正常神经小(P<0.05),比新鲜异体神经移植组大(P<0.05)。[结论]优化去细胞神经移植组与自体神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面无显著差异。优化法去细胞神经在移植修复同种异体神经缺损时,可以达到免疫耐受,其早期功能恢复和神经再生情况良好,在修复周围神经缺损时可以作为自体神经移植的一种替代疗法。     

优化法去细胞神经同种异体及异种移植的比较

目的 分别以优化法去细胞(OA)大鼠坐骨神经及兔臂丛分支移植修复大鼠坐骨神经缺损,观察免疫排斥情况、早期功能恢复及神经再生情况,以比较此优化法处理的同种异体及异种神经移植物修复周围神经缺损的能力. 方法 以新鲜新西兰大白兔臂丛分支、自体坐骨神经、OA处理过的新鲜取材的SD大鼠坐骨神经及新西兰大白兔臂丛分支,移植修复成年SD大鼠坐骨神经1.0 cm缺损,即新鲜异种神经移植组、自体神经移植组、OA异种神经移植和OA异体神经移植组,分别于术后1个月及3个月行功能评价(SFI)、电生理(CV)和组织学检查,观察免疫排斥、功能恢复及神经再生情况. 结果 术后1个月,OA异体和OA异种神经移植组的SFI、CV、轴突密度分别为:61.38±5.59、(32.23±0.91)m/s、(22.26±1.74)m/s和(0.782±0.081)(个/100 μm2),3个月分别为59.00±5.40、(31.80±0.99)m/s、(23.35±2.40)m/s和(0.778±0.046)(个/100μm2);术后1个月,异体和异种神经移植CD8+T细胞和巨噬细胞染色阳性百分比分别为0.17385±0.01805、0.09299±0.01565和0.30223±0.09449、0.19537±0.02010.同种异体神经移植组与异种神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面差异无统计学意义(P＞0.05),且都明显优于未处理新鲜神经移植组(P＜0.05).3个月时的神经再生及功能恢复情况优于1个月组(P＜0.05). 结论 优化去细胞法处理的同种异体及异种神经移植物在修复周围神经缺损时,均可以达到免疫耐受,移植动物早期功能恢复和神经再生情况良好.     

Enhanced rat sciatic nerve regeneration through silicon tubes implanted with valproic acid

Valproic acid (VPA) is an effective antiepileptic drug and mood stabilizer. It has recently been demonstrated that VPA could promote neurite outgrowth, activate the extracellular signal-regulated kinase pathway, and increase B-cell lymphoma/leukemia-2 (bcl-2)and growth cone-associated protein 43 (GAP-43) levels in spinal cord. We hypothesized that VPA could enhance axonal regeneration in the rat. In the present research, we demonstrate the effect of VPA on peripheral nerve regeneration and recovery of motor function through a silicon tube implanted with VPA. The left sciatic nerves were exposed through dorsal-splitting incisions, and 8-mm nerve sections were excised at the middle of the thigh. Then, a 1.0-cm-long silicone tube (internal diameter,1.0 mm; exterior diameter, 2.0 mm) was used to bridge the nerve deficit, anchored to the proximal and distal terminals of the excised deficit of sciatic nerves with 9-0 nylon epineural suture. Sterile petroleum jelly was used to seal the ends of the tubes to avoid leakage. The rats in the VPA group and control group were locally delivered 10 muL VPA injection (400 mg/5 mL) and normal saline, respectively, after the operation. The sciatic nerve index (SFI) was observed in each animal at 2-week intervals and electrophysiology was studied at 4-week intervals for 12 weeks. Histological and morphometrical analyses were performed at the end of the experiment (12 weeks after the operation). Using the digital image-analysis system, the thickness of the myelin sheath was measured, and total numbers of regenerated axons were counted. There was a significant difference in SFI, electrophysiological index (motor-nerve conduct velocity, amplitude of activity potential), and morphometrical results (regenerated axon number and thickness of myelin sheath) in nerve regeneration between the VPA group and controls ( P < 0.05). The results demonstrated that VPA is able to enhance sciatic nerve regeneration in rats, suggesting the potential clinical application of VPA for the treatment of peripheral nerve injury in humans.     

Enhanced rat sciatic nerve regeneration through silicon tubes filled with pyrroloquinoline quinone

Pyrroloquinoline quinone (PQQ) is an antioxidant that also stimulates nerve growth factor (NGF) synthesis and secretion. In an earlier pilot study in our laboratory, Schwann cell growth was accelerated, and NGF mRNA expression and NGF secretion were promoted. The present study was designed to explore the possible nerve-inducing effect of PQQ on a nerve tube model over a 1-cm segmental deficit. An 8-mm sciatic nerve deficit was created in a rat model and bridged by a 1-cm silicone tube. Then,10 mul of 0.03 mmol/l PQQ were perfused into the silicone chamber in the PQQ group. The same volume of normal saline was delivered in the control group. Each animal underwent functional observation (SFI) at 2-week intervals and electrophysiological studies at 4-week intervals for 12 weeks. Histological and morphometrical analyses were performed at the end of the experiment, 12 weeks after tube implantation. Using a digital image-analysis system, thickness of the myelin sheath was measured, and total numbers of regenerated axons were counted. There was a significant difference in SFI, electrophysiological index (motor-nerve conduct velocity and amplitude of activity potential), and morphometrical results (regenerated axon number and thickness of myelin sheath) in nerve regeneration between the PQQ group and controls (P < 0.05). More mature, high-density, newly regenerated nerve was observed in the PQQ group. We conclude that PQQ is a potent enhancer for the regeneration of peripheral nerves.     

细胞外ATP对外周神经再生作用的实验研究

目的：研究细胞外ATP对外周神经再生的影响。方法：采用大鼠坐骨神经硅胶管再生室模型,左侧再生室中加入1mmol/LATP作为实验组,右侧再生室中加入生理盐水对照。术后1、2、4、6和12周取材,每次取材除作肉眼观察外,第6、12地行光镜及电镜观察,并采用图像分析检测再生轴突数目和髓鞘厚度。结果：ATP实验组再生神经干的直径,神经干内有髓纤维的数目以及髓鞘的厚度同对照组相比 ,差异非常显著。电镜观察表明,实验组再生随鞘的厚度及成熟情况明显优于对照组。结论：细胞外ATP具有较强的促进神经再生的作用。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的雪旺氏细胞修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的　从转基因角度探讨治疗周围神经损伤的有效方法。方法　成年Wister大鼠 4 8只 ,平均分为 3组。切断大鼠坐骨神经并形成 10mm长缺损 ,用硅胶管桥接两侧断端 ,管腔内植入胶质细胞源性神经营养因子 (glialcell linederivedneurotrophicfactor,GDNF)修饰的雪旺氏细胞 (schwanncells,SCs) ,正常SCs修复组和单纯硅胶管修复组作为对照 ,分别于术后 4、8、12和 16周对各组动物进行大体观察 ,肌电图测量 ,组织学切片观察 ,再生神经的神经电生理检测 ,GDNF免疫组化检测 ,组织学切片 ,观察和图像分析。结果　GDNF SCs组动物的神经传导速度、有髓神经纤维密度、神经组织面积、髓鞘厚度均显著优于SCs组和硅胶管组。结论　将GDNF基因修饰的雪旺氏细胞移植修复周围神经缺损 ,使局部释放的GDNF维持神经元存活 ,加快轴突再生速度以促进周围神经再生 ,此方法为将来治疗周围神经损伤提供了线索。     

甲壳质套管桥接周围神经长度极限的研究

目的 通过采用不同间隙套接修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究,探讨甲壳质套管桥接修复周围神经损伤的长度极限.方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠24只,于大鼠右侧坐骨神经分叉处以上5 mm建立坐骨神经离断伤模型,部分切除坐骨神经后使用甲壳质套管桥接修复,使神经断端间留有2、5、8和10 mm间隙.8周后常规锇酸染色,镜下观察套管远端有髓神经纤维数目、轴突平均面积、髓鞘平均厚度及腓肠肌平均湿重,并进行定量组织学分析.结果 术后8周显示2 mm小间隙组神经纤维已有80%再生,再生效果最佳,与其他组相比差异有统计学意义(P＜0.01).随着间隙距离逐渐增加,神经纤维再生效果逐渐变差;5 mm间隙组再生约60%,效果优于8 mm间隙组(P＜0.01);8 mm间隙组再生约20%,优于10 mm间隙组(P＜0.01);10 mm间隙组只有1%有髓神经纤维成功长入远端,肌肉湿重降至正常的42.9%.结论 使用甲壳质套管桥接修复大鼠坐骨神经损伤时,2 mm左右小间隙套接修复效果最佳,5 mm间隙是修复后周围神经功能得到恢复的极限间隙,10 mm是神经单靠趋化性、营养作用再生的最大间隙.     

硫酸肝素复合胶原蛋白支架材料桥接大鼠坐骨神经的形态学研究

目的以形态学方法观测硫酸肝素复合胶原蛋白支架材料桥接大鼠坐骨神经10mm缺损的疗效。方法以硫酸肝素复合胶原蛋白经冷冻干燥技术制备新型神经组织支架材料,并用此材料桥接修复SD大鼠坐骨神经缺损10mm,术后36周分别以辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪,HE、甲苯氨蓝和镀银染色法,S100、生长相关蛋白43(GAP-43)、神经丝蛋白(NF)免疫组化染色法、MBP免疫荧光染色法及透射电镜等形态学方法观测其引导神经再生的疗效。结果硫酸肝素复合胶原蛋白支架材料在移植术后36周已神经化。除再生有髓神经纤维的密度低于自体移植,有髓神经纤维的面积和髓鞘厚度与自体移植组无明显差异。结论以硫酸肝素复合胶原蛋白制备的神经组织工程支架材料,可以引导神经再生。     

外源性表皮生长因子促进鼠坐骨神经再生的实验研究

目的 评价外源性表皮生长因子（exogenous epidemal growth factor,EGF）对神经再生的影响。方法 雄性SD大鼠48只,建立成鼠坐骨神经挤压伤模型。按术后注射药物的不同成分2组,每组24只鼠。损伤对照组：在神经损伤处注射生理盐水5μl;EGF组：注射EGF／生理盐水液（10μg/5μl）。于术后2、4、6周3个时间点测定坐骨神经功能指数、CMAP的潜伏期、最大语诱发电位的恢复率、组织学检测、电镜超微结构观察。结果 坐骨神经功能指数恢复率在各时间点,EGF组无明显优于对照组（P＜0．01）。CMAP潜伏期的延迟率,EGF组明显小于对照组（P＜0．01）;诱发电位恢复率EGF组明显好于对照组（P＜0．01）。组织学检查：有髓神经纤维数在术后2、4周时EGF组明显多于对照组（P＜0．01）;各时间点有髓神经纤维直径及截面积,EGF组明显优于对照组（P＜0．01）。超微结构观察：EGF组再生神经的有髓纤维数,髓鞘厚度,髓鞘的成熟度明显好于对照组。结论 外源性EGF对神经的再生和功能恢复有一定的作用。     

新型纤维素导管桥接周围神经缺损的研究

目的运用一种新型纤维素材料导管桥接周围神经缺损。方法将原代培养、纯化的Schwann细胞种植入新型复合纤维素导管作为移植物，于大鼠模型上桥接1．0cm坐骨神经缺损。术后1周，扫描电镜观察Schwann细胞在导管内壁的生长情况；术后12周，取桥接物中段,行半薄切片光镜观察及超薄切片电镜观察神经纤维再生状况。结果桥接物植入后1周,Schwann细胞贴附于导管内壁良好生长。植入后12周，管内有大量排列整齐、结构成熟的再生神经纤维。结论新型纤维素组织工程化神经可有效桥接周围神经缺损，该导管材料在医疗中具有广阔的应用前景。