HpaII—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法（ＨａｐⅡ－ＰＣＲ）检测７８例急性白血病（ＡＬ）患者降钙素（ＣＴ）基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｄ特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率６８．８％（３３／４８），急性非淋巴细胞白血病７３．３％（２２／３０），敏感性达１０＾－３。证明ＣＴ基因５＇高度     

急性白血病钙素基因甲基化的PCR检测

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１０例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）和２２例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）降钙素（ＣＴ）基因的甲基化程度。结果表明,７例ＡＬＬ与１６例ＡＭＬ的ＣＴ基因都发生了高度甲基化。临床完全缓解的３例ＡＭＬ和２例ＡＬＬ中有１例ＡＬＬ为阳性,另有１例阴性的ＡＭＬ于１个月后转为阳性,随后出现临床复发。提示急性白血病ＣＴ基因高度甲基化的ＰＣＲ检测,对ＡＬＬ与ＡＭＬ微小残留病有很重要的诊断价值,特别为缺乏恒定肿瘤细胞标志的ＡＭＬ提供了一个新的分子基因标志。     

急性淋巴细胞白血病微量残留病的PCR监测

①目的探讨急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）微量残留病（ＭＲＤ）检测的临床意义。②方法应用筑巢式多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）对３２例ＡＬＬ进行Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖδ２Ｄδ３基因重排检测。③结果１８例Ｂ系ＡＬＬ中有１５例（７２．２％）、４例Ｔ系ＡＬＬ中有１例（２５．０％）存在ＴＣＲＶδ２Ｄδ３基因重排。同时对１６例进行３９例次微量残留病动态监测，其中６例ＭＲＤ－ＰＣＲ阴性病人随访５．１７～１６．１７年，无１例复发；１０例ＭＲＤ－ＰＣＲ阳性者，２例分别于阳性后０．２５，１．００年骨髓复发，１例有复发倾向，余７例随访４．３３～６．２５年无复发。④结论ＭＲＤ－ＰＣＲ阴性者预后良好，可望长期生存，治疗时应以ＭＲＤ－ＰＣＲ转阴为停止化疗的可靠指标，对ＭＲＤ－ＰＣＲ阳性者应定期监测ＭＲＤ变化，结合病人情况进行综合评价。     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化的研究

目的 探讨降钙素（CT）基因高度甲基化在恶性血液病中的临床意义。方法 采用限制性内切酶（HPaⅡ）消化DNA和聚合酶链反应技术检测73例恶性血液病、6例正常人以及24例非恶性血液病的CT基因的基化程度。结果 12/14例（85.7%)急性淋巴细胞白血病、9/15例（60%）急性非淋巴细胞白血病、8/10例（80%）慢性粒细胞白血病、5/15（33.3%)淋巴瘤、2例（2/5）骨髓增生异常综合征、1例（1/2）恶性组织细胞病、1例（1/3）慢性淋巴细胞白轿病和1例（1/9）多发性骨髓瘤的病人出现CT基因高度甲基化阳性,而6例正常人和24例非恶性血液病无一例阳性。结论 CT基因高度甲基化可作为恶性血液病恶性克隆增殖的分子基因标志,从而为恶性血液病的诊断、微小残留病的监测及疾病的发展预测提供了一种有用手段。     

急性髓性白血病降钙素基因甲基化定量研究

为探讨降钙素（ＣＴ）基因高甲基化能否作为急性髓性白血病（ＡＭＬ）微小残留病（ＭＲＤ）的检测指标。采用设有内、外参照的聚合酶链反应（ＰＣＲ），结合限制内切酶和激光扫描技术，检测了４０例ＡＭＬ患者骨髓细胞的ＣＴ基因５′端甲基化率（ＣＴＭＲ）。结果：初发ＡＭＬ患者ＣＴＭＲ为５２５％±１９３７％，显著高于对照组（８１％±３７３％；Ｐ＜００００５），部分缓解（ＰＲ）组显著高于对照组而显著低于初发组；完全缓解（ＣＲ）组显著高于对照组而与ＰＲ组差别无显著性；ＡＭＬ患者的ＣＴＭＲ与骨髓白血病细胞数呈显著正相关（ｒ＝０．７１５，Ｐ＜０００１），ＣＲ组１６例中４例ＣＴＭＲ在５０％以上，分别于２、４、４５和９个月后复发。结果提示：ＣＴＭＲ有可能成为检测ＡＭＬ微小残留病的有用指标     

多聚酶链反应检测急淋白血病微量残留病灶及其临床应用

应用多聚酶链反应 (PCR)扩增IgH重排产生的CDR -Ⅲ序列和TcRr基因的重排序列 ,检测 2 2例急淋白血病 2 3份骨髓标本 ,其中 1例初治急淋白血病标本检出IgH重排和TcRr重排 ,2 1例获缓解的患儿骨髓标本有 4例检出残留白血病细胞。阳性病例在 1周至半年不等出现白血病复发或死亡。本方法MRLC检测敏感性为 10 -4 。     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化的研究

目的　探讨降钙素 ( CT)基因高度甲基化在恶性血液病中的临床意义。方法　采用限制性内切酶 ( HPa )消化 DNA和聚合酶链反应技术检测 73例恶性血液病、6例正常人以及 2 4例非恶性血液病的 CT基因的甲基化程度。结果　 12 / 14例 ( 85 .7% )急性淋巴细胞白血病、9/ 15例 ( 6 0 % )急性非淋巴细胞白血病、8/ 10例( 80 % )慢性粒细胞白血病、5 / 15例 ( 33.3% )淋巴瘤、2例 ( 2 / 5 )骨髓增生异常综合征、1例 ( 1/ 2 )恶性组织细胞病、1例 ( 1/ 3)慢性淋巴细胞白血病和 1例 ( 1/ 9)多发性骨髓瘤的病人出现 CT基因高度甲基化阳性。而 6例正常人和 2 4例非恶性血液病无一例阳性。结论　 CT基因高度甲基化可作为恶性血液病恶性克隆增殖的分子基因标志 ,从而为恶性血液病的诊断、微小残留病的监测及疾病的发展预测提供了一种有用手段     

急性白血病钙素基因甲基化的PCR检测

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１０例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）和２２例急性随细胞白血病（ＡＭＬ）降钙素（ＣＴ）基因的甲基化程度。结果表明，７例ＡＩＬ与１６例ＡＭＬ的ＣＴ基因都发生了高度甲基化。临床完全缓解的３例ＡＭＬ和２例ＡＩＬ中有１例ＡＬＬ为阳性，另有１例阴性的ＡＭＬ于１个月后转为阳性，随后出现临床复发。     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化的研究

目的探讨降钙素（ＣＴ）基因高度基化在恶性血液病中的临床意义。方法，用限制性内切酶（ＨＰａⅡ）消化ＤＮＡ，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了７３例恶性血液病和对照组６例正常人以及２４例非恶性血液病的ＣＴ基因的甲基化程度。结果８５．７％（１２／１４）急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）、６０％（９／１５）急性非淋巴细胞白病（ＡＮＬＬ）、８０％（８／１０）慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）、３３．３％（５／１５）淋巴     

肿瘤病人降钙素基因高度甲基化检测的临床意义

①目的探讨降钙素(CT)基因的高度甲基化与肿瘤发生、发展的关系及其对肿瘤诊断、鉴别诊断及预后判断的价值。②方法从肿瘤组织和癌旁组织中提取微量DNA,采用限制性内切酶HapⅡ和多聚酶链反应技术,测定了103例肿瘤病人肿瘤组织和其中30例病人的癌旁组织CT基因的甲基化程度。③结果30例癌旁组织无1例检测到CT基因高度甲基化,而77.50%(31/40)的结直肠癌、56.25%的(27/48)肺癌和26.67%(4/15)的甲状腺腺瘤病人检测出CT基因高度甲基化,与癌旁组织比较,差异均有显著性(χ2=5.796~46.015,P<0.05、0.01);不同类型的肺癌病人,CT基因高度甲基化的阳性率不同,小细胞肺癌病人的阳性率明显高于鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌病人(P=0.030、0.010、0.011)。随访4例高度甲基化阳性的甲状腺腺瘤病人,有2例分别在之后的8、14个月发生了恶变,而11例CT基因高度甲基化阴性的甲状腺腺瘤病人同期内无1例发生恶变。④结论CT基因的高度甲基化与肿瘤的发生、发展密切相关,可作为恶性肿瘤恶性克隆增殖的标志,为肿瘤的诊断、鉴别诊断及预后判断开辟了新的途径。     

半重叠PCR检测急性淋巴细胞白血病微小残留病的临床意义

目的 用半重叠多聚酶链反应（PCR）检测免疫球蛋白重链（Ign）、T细胞受体γ链（TCR7）克隆性基因重排，研究急性淋巴细胞白血病（ALL）微小残留白血病（MRD）的动态变化和消长规律，预测复发，判断预后。方法 选择14例完全缓解（CR）的AI上患者，采集CR后不同时期骨髓标本，用半重叠PCR检测Ign、TCR7克隆性基因重排。结果 经过正规化疗的14例ALL患者在CR后不同时期，MRD水平不同；MRD的消长规律为波浪式7例，呈直线下降3例，持续阴性2例，复发2例中1例为MRD持续阳性、1例MRD由阴性转为阳性。结论 一次MRD-PCR检测不足以说明体内残留白血病细胞水平，连续PCR检测及动态观察对于预测复发、判断预后、评价骨髓移植（BMT）效果、研究白血病化疗方案及停药时间更有临床价值。     

肿瘤特异基因跟踪检测小儿微量残留白血病的研究

应用ＰＣＲ技术，以ＳＩＬ－ＴＡＬ－１，ＨＲＸ基因相合的，和ｂｃｒ／ａｂ１以及ＰＭＬ－ＲＡＲα４融合基因作为肿瘤特异标志，对７例小儿急性淋巴细胞白血病和１６例小儿急性早幼粒细胞白血病在完全缓解后的微量残留病作系统的跟踪检测。     

骨髓增生性疾病降钙素基因高度甲基化的检测

①目的探讨骨髓增生性疾病（ＭＰＤ）与降钙素（ＣＴ）基因高度甲基化的关系。②方法采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了５０例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）、６例原发性骨髓纤维化（ＭＦ）及１例真性红细胞增多症（ＰＶ）病人的ＣＴ基因高度甲基化的阳性程度。③结果４２．００％的ＣＭＬ和６６．６７％的ＭＦ病人发生了ＣＴ基因高度甲基化；１例ＰＶ病人为阴性。ＣＭＬ病人阳性率分别为慢性期２０．６９％，加速期为６６．６７％，急变期为７７．７８％，慢性期比加速期和急变期的阳性率均明显降低（χ２＝９．６７７１，Ｐ＜０．０１）。④结论ＣＴ基因的高度甲基化与ＣＭＬ，ＭＦ病人的病程进展有关，它可作为ＣＭＬ，ＭＦ病人判断预后的一个有临床应用价值的分子标志     

PCR扩增IgH和TCR_β基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残留病中的应用

利用ＩｇＨ和ＴＣＲ＿β克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ．ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于移植后２个月时ＰＣＲ检测又重新出现阳性，但临床无复发现象。４例对照者ＰＣＲ均为阴性。结果表明ＰＣＲ技术具有简便、快速、敏感、特异性强等优点，在检测微小残留（ＭＲＤ）中具有广阔前景。     

PCR检测降钙素基因高甲基化在监测慢性髓细胞白血病恶化？…

目的 观察慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）病情恶化与降钙素（ＣＴ）基因高甲基化程度之间的关系，方法 用内切酶酶切和ＰＣＲ技术研究４５例ＣＭＬ患者（其中慢性期３３例，加速期２例，急变期１０例）的ＣＴ基因高甲基化程度，ＣＴ基因未高甲基化，则能被相应的内切酶断，无法扩增出的特异ＤＮＡ片断，否则，能扩增出特异ＤＮＡ片断，据此推断ＤＮＡ的甲基化程度。结果 ３例慢性期，２例加速期及８例急变期患者呈现降钙素基因高甲基     

白血病细胞诱导分化过程中降钙素基因异常甲基化的研究

采用ＰＣＲ检测技术，观察白血病细胞诱导分化前后ＣＴ基因甲基化型的变化和检测本方法的灵敏度及对检测白血病ＭＲＤ的意义。结果发现随着ＨＬ－６０细胞以及人早纪粒白血病体外诱导分化成熟，该基因由收藏 化状态转变为正常，２例缓解期的ＡＰＬ病人，其甲基化正常，本方法的度为１／１０００白血病细胞，如进一步提高敏感性，将有助于ＭＲＤ的检测。     

筑巢式PCR等多项指标对小儿急性白血病微量残留病的监测

①目的 探讨采用筑巢式聚合酶链反应（Ｎest-ＰＣＲ）等多项指标监测小儿急性白血病（ ＡＬ）微量残留病（ＭＲＤ）的临床意义。②方法对１５２例ＡＬ在形态学、免疫学和细胞遗传学（ＭＩＣ）分型诊断的基础上,结合Ｎest-ＰＣＲ,姐妹染色单体交换（ＳＣＥ）、染色体核型分析法进行ＭＲＤ监测。③结果对５８例急性淋巴细胞白现（ＡＬＬ）进行了Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖㄜ２Ｄㄜ３基因重排监测,其中８３％的Ｂ－ＡＬＬ和２５％的Ｔ－     

PCR检测降钙素基因高甲基化在监测慢性髓细胞白血病恶化中的价值

目的观察慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）病情恶化与降钙素（ＣＴ）基因高甲基化程度之间的关系。方法用内切酶酶切和ＰＣＲ技术研究４５例ＣＭＬ患者（其中慢性期３３例，加速期２例，急变期１０例）的ＣＴ基因高甲基化程度。ＣＴ基因未高甲基化，则能被相应内切酶切断，无法扩增出特异ＤＮＡ片断，否则，能扩增出特异ＤＮＡ片断，据此推断ＤＮＡ的甲基化程度。结果３例慢性期，２例加速期及８例急变期患者呈现降钙素基因高甲基化；急变期组（包括加速期）甲基化率明显高于慢性期组，两组有显著性差别（Ｐ＜０．０１）；１例在慢性期呈现ＣＴ基因高甲基化者于１０个月后发生急粒变。结论该方法有助于监测ＣＭＬ的恶化     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化PCR方法检测

最遑研究发现，大部分淋巴瘤及白血病降钙素基因５’端可发生高度甲基化。异常的ＤＮＡ片段经ＨＰａⅡ消化后可以测到。笔者建立了ＰＣＲ法可敏感地检测各种恶性血液病降钙素基因的高度甲基化，用以阐明ＰＣＲ半定量甲基化的量与存在的白血病细胞数之间的关系。