胃癌与多肿瘤抑制基因甲基化的研究

目的：探讨抑癌基因ＭＴＳ１　５’端ＣｐＧ岛异常甲基化与原发性胃癌发病机制之间的关系。方法ＰＣＲ－甲基化检测法研究３１例胃癌标本和１９例正常胃组织中ＭＴＳ１基因５’端ＣｐＧ岛异常甲基化情况。结果：有３５．５％（１１／３１）的胃癌标本和５．３％（１／１９）正常胃组织出现ＭＴＳ１基因５’端ＣｐＧ岛异常甲基化,两者之间有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：ＭＴＳ１基因５’端ＣｐＧ岛异常甲基化是其在原发性胃癌中的主要灭活机制,与胃癌的发生发展密切相关。     

原发性肝癌组织中酸性同工铁蛋白和P53的表达

１．资料与方法：（１）对象：３８份原发性肝癌均为武汉市第二医院１９８７年～１９９７年存档的手术活检组织标本。患者年龄２４～７５岁，平均年龄５２岁；男３３例，女５例。其中肝细胞癌３０例、肝胆管上皮癌８例。另外选择３０例非癌肝活检标本（肝硬化、慢性肝炎和正常肝组织各１０例）作为对照病例。（２）方法：酸性同工铁蛋白（ａｃｉｄｉｃｉｓｏｆｅｒｒｉｔｉｎ，ＡＩＦ）和ｐ５３的检测均采用ＬＳＡＢ免疫组织化学法，第一抗体分别为抗人胎盘ＡＩＦＭｃＡｂ（本室制备，工作稀释度为１：２００）和抗…３Ｍｅ＊ｂ（美国Ｓｉｇ…     

胃癌组织中生长抑素Ⅱ型受体基因低表达与淋巴结转移

目的　恶性肿瘤的发生和转移机制尚未完全明确，我们旨在研究胃癌癌灶（Ｃ） 、癌旁组织（Ｐ） 和远处正常组织（ Ｎ） 生长抑素（ＳＳ） 含量及其Ⅱ型受体（ＳＳＲ Ⅱ） 基因的表达情况，及其与腹腔淋巴结转移的关系，探讨ＳＳ 及ＳＳＲⅡ在胃癌发生、发展和转移中的作用．方法　外科手术切除的胃癌标本３６ 例，分为２ 组：腹腔淋巴结转移组（Ａ 组）２０ 例，男１７ 例，女３ 例，年龄５８－４ 岁±１４－８ 岁；Ｂ 组（ 无淋巴结转移）１６ 例，男１４ 例，女２ 例，年龄６０－５ 岁±１４－２ 岁． 大体标本离体后立即取癌灶、癌旁和远处正常组织，应用ＲＩＡ 法检测其ＳＳ 含量、同位素掺入ＲＴＰＣＲ 法检测ＳＳＲⅡ基因表达情况（ 以ｃｐ ｍ 高低间接反映基因的表达强弱） ．结果　Ａ，Ｂ 两组的年龄和性别分布无显著性差异（ Ｐ＞ ０－０５） ．癌灶ＳＳ 含量明显低于癌旁和正常粘膜（ Ｐ＜ ０－０５） ，但Ａ，Ｂ 两组间的差异无统计学差异（ｐ ｍｏｌ／ ｇ ，Ａ 组：Ｃ １５ ±８ ，Ｐ３０ ±８ ， Ｎ３２ ±１１ ；Ｂ 组：Ｃ １６ ±９ ， Ｐ３２ ±１０ ， Ｎ ３６ ±１２） ．Ａ 组癌灶ＳＳＲⅡ基因表达明显低于癌旁和远处粘膜（ Ｐ＜ ０－０１） ，也低于Ｂ 组癌灶的ＳＳＲⅡ的表达（     

小鼠高低转移性肝癌3号染色体微卫星不稳定性的研究

为探讨微卫星不稳定性（ｍｉｃｒｏ－ｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ＭＳＩ）与肝癌发生及转移的关系，我们应用微卫星多态性标记对小鼠高、低转移性肝癌细胞系ＭＳＩ进行了研究。 １．材料与方法：（１）标本收集：小鼠高、低转移性肝癌细胞系Ｈｃａ／１６Ａ３－Ｆ（Ｆ）和Ｈｃａ／Ａ２－Ｐ（Ｐ）由大连医科大学病理学教研室凌茂英教授惠赠，ＳＰＦ级Ｃ３Ｈ小鼠购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。（２）基因组ＤＮＡ的提取：采用常规蛋白酶Ｋ消化，苯酚－氯仿－异戊醇抽提基因组ＤＮＡ，另取正常Ｃ３Ｈ小鼠肝组织作对照…     

c－erbB－2及p53蛋白在原发性肝癌肝组织的表达

目的和方法应用免疫组化ＬＳＡＢ（Ｌａｂｌｌｅｄｓｔｒａｐｔａｖｉｄｉｎ－ｂｉｏｔｍ）法对４５例人原发性肝癌（ＰＨＣ）及其癌周肝组织以及５例正常肝组织进行了ｃ－ｅｒｂＢ－２和突变型ｐ５３癌基因蛋白的表达研究。结果ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白和ｐ５３蛋白在ＰＨＣ及其癌周肝硬变和非肝硬变组织中的阳性表达率分别是７１．１％，２１．４％（６／２８），１１．７％（２／１７）和４６．７％，１４．３％（４／２８），０％（０／１７），在５例非肝脏疾病的正常肝组织中均未见表达。ｃ－ｅｒｂＢ－２和ｐ５３蛋白二者表达强度与ＰＨＣ病理组织学分级具有一定程度相关关系，但与ＰＨＣ的不同组织学类型无显著差别。ｃ－ｅｒｂＢ－２与ｐ５３蛋白在原发性肝癌中的表达二者具有显著的相关性（Ｐ＜０．００５）。结论突变型ｐ５３和癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２在ＰＨＣ中具有独立和协同作用，对肝癌的发展具有重要影响。     

细胞间粘附分子-1在肝硬化及肝癌组织中的表达

对３０例原发性肝癌及２３例肝炎肝硬化组织细胞间粘附分子一１（ＩＣＡＭ－１）的表达进行原位检测,探讨了ＩＣＡＭ－１在肝癌发生免疫逃逸机制中的意义。１．标本收集：肝炎肝硬化标本２３例,为乙肝患者肝穿组织。原发性肝癌标本３０例,为肝穿组织及手术病理存档标本,病理诊断为肝细胞癌,本组病例ＨＢＳＡｇ均阳性,癌旁肝组织呈慢性炎症并伴有不同程度肝硬化改变。标本均进行连续切片分别用于ＨＥ染色及ＩＣＡＭ－ｌ检测。２．主要试剂及方法：ＩＣＡＭ一１单克隆抗体由美国波斯顿血液研究中心馈赠,ＬＳＡＢ试剂盒为ＤａＫｏ公司产…     

MAGE-1基因在肝细胞性肝癌中的表达

目的探讨ＭＡＧＥ－１基因编码的肿瘤相关抗原作为肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）主动免疫治疗攻击靶点的可能性。方法用ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测了３９例ＨＣＣ及癌旁组织、３种人肝癌细胞株和５例非ＨＣＣ病例肝组织中ＭＡＧＥ－１基因的表达。结果ＨＣＣ癌组织中ＭＡＧＥ－１基因表达率明显高于癌分组织中的表达率,５８．９％（２／３９）对１０．３％（４／３９）,Ｐ＜００１。３种细胞株均为阳性表达。结论ＭＡＧＥ－１基因可作为主动免疫治疗的攻击靶点,以进一步研究设计新的ＨＣＣ免疫治疗策略。     

肝癌组织中三种糖基转移酶基因表达水平

一、资料与方法 １．标本：１３例正常肝组织来自尸检标本;１５例ＨＣＣ组织和１５例ＨＣＣ癌旁组织取自手术患者。 ２．方法：Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ｖ（ＧｌｃＮＡｃＴ－Ｖ）、Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ（ＧｌｃＮＡｃＴ－Ⅲ）、（１,６核心岩藻糖转移酶（α１－６ＦｕｃＴ）和β－肌动蛋白（β－ａｃｔｉｎ）四种扩增基因引物由Ｐｒｉｍｅｒ３引物设计程序设计。以β－ａｃｔｉｎ为内标,采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测以上三种基因ｍＲＮＡ的表达情况。ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳后用ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒ ＶＤＳ图像分析系统处理并…     

胃癌组织5q微卫星不稳定性与APC/MCC基因杂合性缺失的研究

目的探讨５ｑ微卫星不稳定性（ＭＳＩ）与ＡＰＣ／ＭＣＣ基因杂合缺失（ＬＯＨ）的关系。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＬＰ及ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术分析５２例手术切除胃癌组织中ＭＳＩ及ＡＰＣ／ＭＭＣ基因ＬＯＨ。结果５ｑＭＳＩ检出率为３４．０％（１６／４７）,ＡＰＣ／ＭＣＣ基因ＬＯＨ率为３１．４％（１１／３５）。早期胃癌５ｑＭＳＩ阳性率为６６．７％（２／３）,ＡＰＣ／ＭＣＣＬＯＨ率为５０％（１／２）;进展期分别为３１．８（１４／４４）,３０．３％（１０／３３）。两组间无显著差别（Ｐ＞０．０５）。ＭＳＩ及杂合缺失与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及临床分期无关。粘液（印戒）细胞癌ＡＰＣ／ＭＣＣＬＯＨ率（５５．６％）显著高于高、中分化管状腺癌（Ｐ＜０．０５）。胃、肠两型胃癌５ｑＭＳＩ及ＡＰＣ／ＭＣＣＬＯＨ差异无显著性及５ｑＭＳＩ与ＡＰＣ／ＭＣＣＬＯＨ无相关性（Ｐ＞０．０５）。结论染色体５ｑＭＳＩ有ＡＰＣ／ＭＣＣ基因ＬＯＨ在两型胃癌的早期发生及发展中起一定作用。染色体５ｑ可能是胃癌的易感部位。     

慢性肝病肝组织中热休克蛋白的表达及意义

应用ＡＢＣ免疫组织化学法研究慢性肝病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ, ＣＬＤ）和原发性肝癌（Ｐｒｉｍａｒｙ ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉ－ｎｏｍａ,ＰＨＣ）组织中热休克蛋白（ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ, ＨＳＰ６０和 ＨＳＰ７０）的表达及意义。 １资料与方法：（１）标本及临床病理资料：收集ＰＨＣ手术切除标本６８例,男４９例,女 １９例;病理类型包括肝细胞性肝癌 ５７例和胆管细胞性肝癌 １１例,分化程度包括高分化１９例、中分化１６例和低分化 ３３例;肿块最大径＜ ５ ｃｍ １５例,＞ ５ ｃｍ ５…     

c—erbB—2及p53蛋白在原发性肝癌肝组织的表达

目的和方法 应用免疫组化ＬＳＡＢ（Ｌａｂｌｌｅｄｓｔｒａｐｔａｖｉｄｉｎ－ｂｉｏｔｉｎ）法对４５例人原发性肝癌（ＰＨＣ）及其癌周肝组织以及５例正常肝组织进行了ｃ－ｅｒｂＢ－２和突变型ｐ５３癌基因蛋白的表达研究。结果 ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白和ｐ５３蛋白在ＰＨＣ及其癌肝硬变非肝硬变组织中的阳性表达率分别为７１．１％，２１．４％，（６／２８），１１．７％（２／１７）和４６．７％，１４．３％（４／２８     

胃癌组织幽门螺杆菌感染与微卫星不稳定性的研究

流行病学研究资料提示，幽门螺杆菌（Ｈｐ）、特别是含ｃａｇＡ基因的Ｈｐ感染与胃癌之间存在因果关系［１］。体外实验证实Ｈｐ培养滤液可诱导胃黏膜细胞ＤＮＡ损伤［２］。分子生物学方面研究亦提示Ｈｐ感染与ｒａｓ基因活化有关［３］。为从分子水平揭示Ｈｐ的致癌机制，我们采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对胃癌组织Ｈｐ进行检测，并对Ｈｐ感染与胃癌组织微卫星不稳定性（ＭＳＩ）之间的关系进行分析。一、材料与方法１－标本：４９例胃癌为我院１９９４年１月～１９９６年７月手术切除标本，手术切下肿瘤后立即收集癌及切缘处正常组织…     

肝癌组织碱性磷酸酶及其同工酶的研究

我们对人肝癌组织ＡＬＰ比活性及同工酶的改变以及手术前后血清中ＡＬＰ及其同工酶的动态变化进行研究,以探讨原发性肝癌时其来源及变化情况。１．资料与方法：ＰＨＣ患者３１例,取手术切除的新鲜肝脏标本分为肿瘤和癌旁组织,分别称取１ｇ湿重组织Ａ和Ｂ两份：Ａ份加５ｍｌ匀浆液（ｐｈ８．６,０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣＩ缓冲液）提取可溶性ＡＬＰ;Ｂ份加５ｍｌ含０．５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００匀浆液,提取总ＡＬＰ。在ＹＱ－３型匀浆机上高速匀浆后,离心留上清液备用。其中４例有肿瘤细胞变性、坏死。其中２２例收集到血清标…     

原发性肝癌中p16基因甲基化的研究

应用ＰＣＲ甲基化分析法检测２５例原发性肝癌（ＨＣＣ）院标本及相应的癌旁组织中Ｐ１６基因甲基化情况。１资料与方法：２５例ＨＣＣ及相应的癌旁组织标本均为手术切除标本,置－８０℃冻存。参照《分子克隆》方法提取基因组Ｄ＼Ａ,测定Ａ２６０／Ａ２８０比值在１．８～２．０之间。分析ｐ１６基因第１外显子的甲基化情况、采用在ｐ１６第１外显子序列内有酶切位点的甲基敏感的限制性内切酶Ｓｍａｌ作为基因组ＤＮＡ的消化酶,以不含Ｓｍａｌ位点的染色体９Ｐ标记点Ｄ９Ｓ１６２作为内对照。ＰＣＲ扩增所用引物序列及合成的片断大小为：…     

肝癌组织IGF－II、IGF－IIR、HBxAg的表达与细胞DNA倍体和S期的关系

为了探讨胰岛素样生长因子ＩＩ（ＩＧＦ－ＩＩ）在肝癌发生发展中的作用，采用免疫组织化学ＰＡＰ法检测了肝癌组织ＩＧＦ－ＩＩ及其受体（ＩＧＦ－ＩＩＲ）、乙型肝炎病毒Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）的表达，并用流式细胞术分析了ＩＧＦ－ＩＩ表达与细胞ＤＮＡ倍体、Ｓ期的关系。结果显示：（１）ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－ＩＩＲ、ＨＢｘＡｇ在血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）标记阳性的癌组织阳性率均为９３％（ｎ＝１５），高于ＨＢＶ标记阴性的癌组织（１／５）（Ｐ＜０．０５）；（２）ＩＧＦ－ＩＩ阳性的癌组织ＤＮＡ异倍体出现率为１００％、Ｓ期比例为２８．８±６．４％，高于ＩＧＦ－ＩＩ阴性的癌组织ＤＮＡ异倍体出现率（６０％）和Ｓ期比例（１２．８±２．４％）（Ｐ＜０．０５）；（３）肝癌组织ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－ＩＩＲ的表达与ＨＢｘＡｇ表达一致。研究结果提示ＩＧＦ－ＩＩ可能在乙型肝炎病毒标志物（ＨＢＶ－Ｍ）阳性的肝细胞癌发生发展中有某种作用，ＨＢｘＡｇ可能是ＩＧＦ－ＩＩ基因的一种激活因子。     

Bcl-xL mRNA在正常肝及肝癌组织中的表达

１．材料与方法：肝癌组织２１例（男１２例，女９例），平均年龄６４岁（范围３３～７６岁），Ⅱ期６例，Ⅲ期１３例，Ⅳ期２例；高分化癌３例，中分化癌９例，低分化癌７例，未分化癌２例。１０例正常肝组织（男６例，女４例），平均年龄５７岁（范围３９～７５岁）。所有组织行Ｂｃｌ－ｘＬ ｍＲＮＡ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析，统计学处理用ｔ检验。 ２．结果：肝癌组织中，ｂｃｆ—ｘＬｍＲＮＡ呈现低表达（３８％），而在正常肝组织中呈高表达。与正常肝组织相比，９５％（２０／２１）的肝癌组织有ｂＣＩ—ｘＬｍＲＮＡ水平下…     

p53基因突变和肿瘤标志物对大肠癌患者预后的影响

进一步了解肿瘤标志物与基因检测在判断结直肠肿瘤患者预后中的价值，我们选用与大肠肿瘤关系甚密的ｐ５３基因，结合术前大肠相关抗原ＣＥＡ，ＣＡ１９－９的检测，对大肠癌患者的预后作一初步评价１材料和方法１．１材料１９９６－０３／１９９７－０６，对５４例结直肠癌患者手术切除的标本，选用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法行ｐ５３基因第５～８外显子检测５４例患者术前取血检测大肠相关抗原血清ＣＥＡ，ＣＡ１９－９水平，术后均行密切随访１．２方法ＣＡ１９－９测定采用法国ＣＩＳ公司的单克隆抗体ＣＡ１９－９ＩＲＭＡ法药盒进行检测，正常…     

肝癌组织中p62~（c－myc）表达及其意义

应用免疫组织化学（ＡＢＣ法）技术对４８例原发性肝癌患者的肝癌及癌旁石蜡包埋组织中ｐ６２~（ｃ－ｍｙｃ）进行检测，结果显示ｐ６２~（ｃ－ｍｙｃ）的阳性率在肝癌中为８３．３％（４０／４８），在癌旁组织为８９．６％（４３／４８），说明ｃ－ｍｙｃ基因的激活与肝癌癌变过程有密切关系。同时对ｐ６２~（ｃ－ｍｙｃ）表达的意义进行了讨论。     

上皮钙粘蛋白（E—cadherin）在高侵袭性肝细胞癌中的表达

目的旨在探讨上皮型钙粘蛋白（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）与肝癌侵袭的关系。方法选择２５例原发性肝细胞癌及相应癌旁组织、２例门静脉癌栓标本和裸鼠高、低转移人肝癌模型（ＬＣＩＤ２０和ＬＣＩＤ２５），Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡ的表达采用半定量逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测。结果Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ在２５例肝细胞癌和相应的癌旁组织中基因表达值为８２．９％±５４．９％和４９．５％±２６．９％，两者差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。２例门静脉癌栓标本均不表达Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ，裸鼠高转移人肝癌模型（ＬＣＩＤ２０）也不表达Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ，而低转移模型（ＬＣＩＤ２５）的表达值为６７．４的±１６．０％。高侵袭性肝癌和低侵袭性肝癌Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达指数分别为４８．９％±３８．０％和７９．１％±１９．１％，两者差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达指数与肿瘤包膜和大小无关。结论肝细胞癌组织Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达低于其相应的癌旁组织，高侵袭性肝癌较低侵袭性肝癌表达更低，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的丧失或低表达是肝癌获得高侵袭转移能力的因素之一。     

纤溶酶原激活物抑制物-1基因短串联重复序列多态性与心肌梗死关系的研究

目的：研究纤溶酶原激活物抑制物－１（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－１,ＰＡＩ－１）基因内含子３中ＣＡ二核苷酸重复序列的多态性,分析其与血浆ＰＡＩ－１活性及急性心肌梗死（ＡＭＩ）发生情况的相互关系。方法：选择ＡＭＩ患９２例,正常对照１０２例,提取外周血ＤＮＡ,进行聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染。结果：检测出存在于汉族人中的１２种ＰＡＩ－１基因ＣＡ二核苷酸重复序列基因型,ＣＡ拷贝数在１８～２９之间;青年（年龄≤４５岁）发病的ＡＭＩ组（５１例）ＰＡＩ－１基因ＣＡ拷贝数ｎ≤２１的例数明显高于对照组（５２例）,中老年（年龄〉４５岁）发病的ＡＭＩ（４１例）与对照组（５０例）间基因型差异无显性。基因型与血浆ＰＡ