miR-27b基因对病毒性心肌炎细胞凋亡的影响研究

目的探讨抑制miR-27b基因表达对病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将40只健康BALB/c小鼠随机分为对照组:小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的柯萨奇病毒B3(CVB3); miR-27b抑制剂组(抑制组):小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的CVB3,次日,通过尾静脉注射miR-27b抑制剂(10μg/10 g); miR-27b NC组(NC组):小鼠一次性腹腔注射0. 1 ml的CVB3,次日,通过尾静脉注射miR-27b NC(10μg/10 g)每组10只。于接种CVB3病毒后第7天,采集血清及心脏组织。肌酸激酶(CK)试剂盒检测血清CK含量; qRT-PCR检测心肌组织miR-27b表达;TUNEL试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、髓过氧化物酶(MPO)试剂盒及细胞内活性氧(ROS)试剂盒分别检测心肌细胞凋亡率、心肌组织SOD活力、MPO活性及ROS含量。Western blotting检测NF-κBp65、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果小鼠感染CVB3后第7天体重减轻率及血清CK活性明显高于对照组小鼠(P 0. 05)。与对照组比较,模型组SOD活力、Bcl-2蛋白表达明显降低,miR-27b mRNA表达、细胞凋亡率、MPO活性、ROS含量及NF-κBp65和Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),与模型组比较,抑制组SOD活力、Bcl-2蛋白表达明显升高,miR-27b mRNA表达、细胞凋亡率、MPO活性、ROS含量及NF-κBp65和Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05)。结论抑制miR-27b基因表达可降低病毒性心肌炎心肌细胞凋亡率及氧化应激反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 探讨Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1(PPI1)对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 用PPI1野生型和活化型突变体表达质粒分别转染乳鼠心肌细胞,并建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧H/R模型,测定各组心肌细胞的存活率、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量、caspase-3活性及超氧化物歧化酶(SOD)活力,此外用流式细胞术测定各组心肌细胞凋亡率,Western blot分析PPI1对凋亡相关蛋白表达及PI3K/Akt信号通路的影响.结果 与正常组比较,模型组LDH、MDA含量、caspase-3活性及细胞凋亡率增高(P<0.05),细胞存活率和SOD活性降低(P<0.05);PPI1活化型突变体转染组细胞的LDH、MDA含量、caspase-3活性和细胞凋亡率则降低,细胞存活率和SOD活性升高,与缺氧/复氧组比较各实验指标差异均具有统计学意义(P<0.05).Western blot表明该组细胞P53、Bax 表达下调,pAkt表达上调.结论 PPI1活化型突变体对H/R造成的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与稳定心肌细胞膜、减轻氧自由基损伤及减少细胞凋亡有关.     

色满卡林对培养乳鼠心肌细胞H/R损伤的保护作用研究

目的观察色满卡林(CRK)对培养的大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法采用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为5组:正常对照组:不施加任何处理因素正常培养;H/R组:缺氧2h,复氧30min;CRK各浓度组:分别加入终浓度为2.5、5、10μmol/L的CRK后均即刻缺氧2h、复氧30min。各组细胞采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测培养液中LDH的活性;AV-PI双标记后应用流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡率;Western blot方法检测caspase-3蛋白的表达。结果 H/R组培养液中LDH活性、心肌细胞凋亡率较正常对照组明显升高,caspase-3蛋白表达水平上调。CRK各浓度组培养液中LDH活性和心肌细胞凋亡率较H/R组降低,caspase-3蛋白表达水平下调。结论 CRK对缺氧复氧致培养大鼠乳鼠心肌细胞的损伤具有保护作用,其机制可能为CRK维持细胞膜完整性与稳定性,下调caspase-3活性蛋白表达水平,减少心肌细胞凋亡率。     

氢吗啡酮后处理经PI3K/Akt通路减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡

目的:探讨PI3K/Akt信号通路在氢吗啡酮后处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只,按照随机数表法随机分为5组,每组8只,假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I/R组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮组（I/R+H组）、缺血-再灌注+PI3K抑制剂组（I/R+W组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮+ PI3K抑制剂组（I/R+ H+ W组）。采用左冠状动脉前降支结扎30 min、再灌注120 min的方法建立心肌缺血-再灌注损伤模型。实验结束后,用TTC染色法测心肌梗死面积;用比色法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡;Western blot法检测p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达。采用SPSS 13.0软件行统计分析。采用单因素方差分析进行组间比较。结果:与Sham组比较,I/R组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bax表达上调,Bcl-2表达下调（ P<0.05）;与I/R组比较,I/R+H组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡减少,心肌p-Akt及Bcl-2表达上调,Bax表达下调（ P<0.05）;与I/R+H组比较,I/R+H+W组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多,p-Akt表达和Bcl-2表达下调,Bax表达上调（ P<0.05）。 结论:氢吗啡酮后处理可减轻心肌缺血-再灌注引起的心肌细胞凋亡,其心肌保护机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

夏枯草提取物对缺氧/复氧诱导心肌细胞氧化应激损伤保护作用及抗凋亡的机制

目的:观察不同浓度的夏枯草提取物(Prunellae Spica extract,PSE)对心肌细胞H9c2缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:体外培养心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R模型。实验分为对照组、H/R组、H/R+PSE 20μg/mL组、H/R+PSE 40μg/mL组和H/R+PSE 80μg/mL组。采用CCK-8法检测H9c2心肌细胞存活率。检测天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、磷酸肌酸激酶(creatine phosphate kinase,CPK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,H/R组H9c2细胞的存活率显著降低(P<0.05),凋亡率显著增加,AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平显著增加,SOD水平显著降低(均P<0.05)。与H/R组相比,PSE能够显著促进细胞存活,抑制细胞凋亡,降低AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平,提高SOD水平(均P<0.05),并呈浓度依赖性。蛋白质印迹法检测显示:与对照组相比,H/R组H9c2细胞Bax和cleavedcaspase-3蛋白的表达显著增加(均P<0.05),Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达显著降低(均P<0.05);与H/R组相比,PSE能够显著抑制Bax和cleaved-caspase-3蛋白的表达(均P<0.05),促进Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达(均P<0.05)。结论:PSE对H9c2心肌细胞的H/R损伤具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

载脂蛋白M在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的表达差异及其作用

目的:探讨载脂蛋白M(apolipoprotein M,ApoM)在大鼠H9C2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的表达差异及作用。方法:利用安宁包缺氧体系构建大鼠H9C2心肌细胞H/R损伤模型,采用CCK-8、细胞凋亡检测试剂盒、caspase-3活性检测试剂盒检测H9C2细胞H/R后细胞增殖、凋亡的差异,同时检测ApoM和1-磷酸鞘氨醇受体1(sphingosine-1-phosphate receptor1,S1PR1)在H/R条件下的表达情况。建立体外过表达ApoM(apoM overexpression,ApoM-OE)的H9C2细胞,采用CCK-8检测心肌细胞存活率,比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,蛋白质印迹法检测心肌细胞cleaved caspase-3、caspase-3表达情况,分析ApoM在H/R诱导的心肌细胞损伤中的可能作用。结果:在H/R处理后,H9C2心肌细胞活力逐渐降低,细胞凋亡率、ca...     

花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨花旗松素通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法将H9c2细胞分为A组、B组、C组、D组、E组,A组于37℃、5%CO_2恒温箱中培养30 h; B组缺氧(O_2浓度6%的厌氧培养箱)培养24 h,再复氧(37℃、5%CO_2恒温箱)培养6 h; C组加入1μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; D组加入10μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h; E组加入100μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h。比较各组H9c2细胞形态学变化、存活率、凋亡率、NF-κB蛋白表达量、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达量。结果 HE染色显示,A组细胞形态结构正常,B组H9c2细胞形态结构异常,横纹模糊,可见大量点状坏死灶,间质水肿明显,炎性细胞浸润明显; C、D、E组H9c2细胞病理改变较B组显著改善,随着花旗松素剂量增大,H9c2细胞病理改善越明显。B组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较A组明显下降(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较B组明显升高(P 0. 05),呈剂量依赖性。B组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较A组明显升高(P 0. 05); C、D、E组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较B组明显下降(P 0. 05),呈剂量依赖性。结论花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤起到保护作用,并这种作用呈剂量依赖性,这可为心肌缺血再灌注损伤的防治提供新的方向。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

miR-30c-2-3p调控X-box结合蛋白-1对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的探讨miR-30c-2-3p调控X-box结合蛋白-1(X box-binding protein-1,XBP1)对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法制备新生大鼠心肌细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组和miR-30c-2-3p处理组。对照组心肌细胞正常培养,缺氧/复氧组和miR-30c-2-3p处理组心肌细胞进行缺氧3h/复氧6h处理;miR-30c-2-3p处理组心肌细胞于缺氧前48h采用miR-30c-2-3p抑制剂转染慢病毒,对照组和缺氧/复氧组感染慢病毒包装的无义寡核苷酸序列。复氧6h后,采用比色法检测3组心肌细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率,流式细胞术检测正常心肌细胞比率及凋亡水平,实时荧光定量PCR法检测miR-30c-2-3p和XBP1mRNA表达水平,Western blot法检测XBP1蛋白表达情况,双荧光素酶基因检测验证miR-30c-2-3p和XBP1的靶向关系。结果缺氧/复氧组和miR-30c-2-3p处理组心肌细胞LDH漏出率[(28.8±4.9)%、(22.2±3.0)%]、细胞凋亡率[(28.5±3.9)%、(19.2±2.6)%]、miR-30c-2-3p(2.87±0.57、1.57±0.21)、XBP1mRNA(1.68±0.68、3.96±0.69)和XBP1蛋白(1.96±0.40、2.73±0.61)表达均高于对照组[(4.6±1.1)%、(6.5±1.2)%、1、1、1],正常心肌细胞比率[(63.8±4.2)%、(71.6±4.0)%]低于对照组[(91.4±2.4)%](P0.05);miR-30c-2-3p处理组心肌细胞LDH漏出率、细胞凋亡率及miR-30c-2-3p表达低于缺氧/复氧组,正常心肌细胞比率、XBP1mRNA和XBP1蛋白表达高于缺氧/复氧组(P0.05);双荧光素酶基因检测结果证实,XBP1为miR-30c-2-3p的靶基因。结论在大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,miR-30c-2-3p、XBP1及XBP1蛋白呈高表达,抑制miR-30c-2-3p可通过上调XBP1表达来减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

研究Cyp2j3基因对H9C2大鼠心肌细胞保护作用以及相关机制

目的探讨Cyp2j3基因通过STAT3信号通路对H9C2心肌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法 H9C2大鼠心肌细胞分为正常对照组(对照组,常氧条件下培养)、pc DNA3.1组(转染空载体pcDNA3.1)、单纯缺氧复氧组(I/R+pcDNA3.1组,转染pc DNA3.1后,缺氧10 h后复氧2 h)和单纯缺氧复氧+pc DNA3.1-Cyp2j3组转染Cyp2j3的过表达载体后,缺氧10 h后复氧2 h)。Western bloting检测过表达Cyp2j3的效果;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞的LDH活性;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;Western bloting检测增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路STAT3和磷酸化的STAT3的蛋白表达。结果转染pc DNA3.1-Cyp2j3后的H9C2细胞Cyp2j3的蛋白表达显著升高;I/R+pc DNA3.1组和I/R+pcDNA3.1-Cyp2j3组细胞的OD值及Ki67、Bcl-2和pSTAT3的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1组,LDH活性、细胞凋亡率及Caspase3蛋白表达均显著高于pcDNA3.1组(P0.05),而I/R+pc DNA3.1-Cyp2j3组细胞的OD值及Ki67、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达均显著高于I/R+pc DNA3.1组,LDH活性、细胞凋亡率及Caspase3蛋白表达均显著低于I/R+pcDNA3.1组(P0.05)。结论过表达Cyp2j3基因可通过激活STAT3信号减弱缺氧复氧引起的H9C2细胞增殖降低、LDH活性和凋亡增加,从而对心肌细胞起保护作用。     

慢性盆腔炎模型大鼠中miR-29 及炎症信号通路分子的表达水平及其作用机制研究

目的 探究微小核糖核酸(micro RNA,miR)-29 对大鼠慢性盆腔炎模型的作用并探究其作用机制。方法 将80 只SPF 级SD 大鼠随机分为四组,分别为对照组(n=20)、模型组(n=20)、阴性对照组(n=20)和试验组(n=20)。模型组、阴性对照组和试验组通过机械损伤及接种混合菌构建大鼠慢性盆腔炎模型,阴性对照组和试验组造模后通过尾静脉注射5nmol 阴性对照(negative control, NC)antagomiR 和miR-29 antagomiR。HE 染色检测大鼠子宫组织病理特性;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组大鼠外周血炎症相关指标:白细胞介素(interleukin,IL)-1β,白细胞介素(IL)-6,白细胞介素(IL)-8 和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α 水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测子宫组织miR-29,Toll 样受体4(Toll-like receptors,TLR)4,核因子κB(nuclear factor,NF-κB)及NK-κB 抑制蛋白α(IκB α)表达水平;WesternBlot 检测子宫组织TLR4,NF-κB 和IκB α 蛋白表达水平。结果 HE 染色结果表明,与对照组相比,模型组、阴性对照组和试验组大鼠出现明显慢性盆腔炎症状,试验组子宫组织损伤显著缓解;ELISA 结果表明:模型组大鼠外周血IL-1β,IL-6,IL-8 和TNF-α 水平显著高于对照组,与模型组和阴性对照组相比,试验组炎症因子IL-1β,IL-6,IL-8 和TNF-α 释放显著降低,差异有统计学意义(t=3.021 ～ 6.878,均P ＜ 0.05);qPCR 结果表明,与对照组相比,模型组miR-29,TLR4,NF-κB 和IκB α 的mRNA 表达显著上升,与模型组和阴性对照组相比,试验组miR-29 ,TLR4,NF-κB 和IκB α的 mRNA 表达显著降低,差异有统计学意义(t=3.917 ～ 8.095,均P ＜ 0.05)。Western Blot 结果表明:与对照组相比,模型组TLR4,NF-κB 和IκB α 蛋白表达显著上升,与模型组和阴性对照组相比,试验组TLR4,NF-κB 和IκBα 蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(t=2.987 ～ 8.045,均P ＜ 0.05)。结论 慢性盆腔炎模型大鼠子宫组织中miR-29 显著高表达,下调miR-29 具有对大鼠子宫的保护作用,其机制可能与抑制炎症因子释放及TLR4/NF-κB 信号通路的调控相关。     

重度脑外伤患者血清miR-146a水平与继发性癫痫的相关性分析

目的探讨重度脑外伤患者血清微小RNA-146a(miR-146a)水平与继发性癫痫的相关性。方法选取2018年1月至2020年2月该院重度脑外伤住院患者104例为研究对象,按照是否继发癫痫分为重度脑外伤继发性癫痫组61例,单一重度脑外伤组43例,同期选择该院体检健康者70例为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定miR-146a水平,Pearson相关分析miR-146a与TNF-α、IL-6、IL-1β相关性,对影响继发性癫痫的相关因素进行Logistic回归分析。结果与对照组相比,重度脑外伤继发性癫痫组、单一重度脑外伤组患者血清miR-146a、TNF-α、IL-6、IL-1β水平较高(P<0.05),与单一重度脑外伤组相比,重度脑外伤继发性癫痫组患者血清miR-146a、TNF-α、IL-6、IL-1β水平较高(P<0.05)。Pearson相关分析显示重度脑外伤继发性癫痫患者血清miR-146a与TNF-α、IL-6、IL-1β水平呈正相关(r=0.580、0.505、0.474,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示miR-146a、TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高是重度脑外伤继发性癫痫的危险因素。结论重度脑外伤继发性癫痫患者血清miR-146a水平上调,检测血清miR-146a水平有助于诊断重度脑外伤继发性癫痫的发生。     

白介素-10对内毒素诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB活化及肿瘤坏死因子释放的调节

目的 探讨白介素-10对内毒素(LPS)诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的调节,为临床运用白介素-10提供理论依据。方法 用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、IL-10＋LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量。结果 LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4h明显高于正常对照组;IL-10＋LPS组NF-κB活性和TNF-α含量均显著低于LPS组。结论 LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;白介素-10可抑制NF-κB活化而减少TNF-α的释放。     

miR-146a controls the resolution of T cell responses in mice

T cell responses in mammals must be tightly regulated to both provide effective immune protection and avoid inflammation-induced pathology. NF-κB activation is a key signaling event induced by T cell receptor (TCR) stimulation. Dysregulation of NF-κB is associated with T cell-mediated inflammatory diseases and malignancies, highlighting the importance of negative feedback control of TCR-induced NF-κB activity. In this study we show that in mice, T cells lacking miR-146a are hyperactive in both acute antigenic responses and chronic inflammatory autoimmune responses. TCR-driven NF-κB activation up-regulates the expression of miR-146a, which in turn down-regulates NF-κB activity, at least partly through repressing the NF-κB signaling transducers TRAF6 and IRAK1. Thus, our results identify miR-146a as an important new member of the negative feedback loop that controls TCR signaling to NF-κB. Our findings also add microRNA to the list of regulators that control the resolution of T cell responses.     

阻断toll样受体对脂多糖致急性肺损伤的保护作用

目的：本文旨在探讨阻断toll样受体（TRL4）对脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法将60只健康雄性清洁级SD大鼠分为正常组、损伤组和阻断组,每组20只。损伤组大鼠采用尾静脉注射LPS（6mg/kg）复制ALI模型;阻断组同时注射TLR4抗体（10mg/mL）;正常组给予等容积生理盐水。3h后处死大鼠,采用凝胶滞留法检测核因子-κB（NF-κB）活性;Westernblot印记分析法检测抑制蛋白（IκB-α）水平;检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α细胞因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-10（IL-10）水平。结果与正常组相比,损伤组和阻断组肺组织湿质量/干质量比值增高,NF-κB活性升高,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平升高（P＜0．05）,而IL-10水平降低（P＜0．05）。而比较损伤组与阻断组发现,阻断组肺组织湿质量/干质量比值降低,NF-κB活性降低,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平明显低于损伤组（P＜0．05）,IL-10水平高于损伤组（P＜0．05）。结论采用抗TLR4单克隆抗体阻断TLR4介导的信号传导可明显降低NF-κB活性和IκB-α、TNF-α、IL-1β水平,同时提高IL-10水平阻断TLR4,对LPS致ALI有一定的保护作用。     

白细胞介素-6/糖蛋白130/转录激活因子3通路在百草枯诱导小鼠急性肺损伤中的作用机制

目的基于肺特异性白细胞介素-6(IL-6)敲除小鼠研究IL-6/糖蛋白130(gp130)/转录激活因子3(STAT3)通路在百草枯(PQ)诱导急性肺损伤(ALI)中的作用。方法野生型C57BL/6J小鼠分为IL-6野生型(IL-6 WT)组、IL-6 WT+PQ组,采用Sftpc(肺表面活性蛋白C基因)-Cre⁺小鼠与IL-6^FLOX/FLOX小鼠交配的方式得到肺特异性IL-6敲除小鼠并分为IL-6 KO组、IL-6 KO+PQ组,单次腹腔注射PQ诱导ALI,比较四组小鼠肺组织病理改变、肺泡动脉氧分压差(PA-aO₂)、肺组织湿/干质量比值(W/D)、IL-6/gp130/STAT3通路、核转录因子-κB(NF-κB) p65、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的差异。结果与IL-6 WT组比较,IL-6 WT+PQ组小鼠肺组织出现了典型的ALI病理改变,肺组织胞浆蛋白中IL-6、gp130、p-STAT3、TNF-α、IL-1β表达水平及胞核蛋白中NF-κB p65的表达水平、PA-aO₂、W/D明显增加(P <0.05);与IL-6 WT+PQ组比较,IL-6 KO+PQ组小鼠肺组织病理改变明显改善,肺组织胞浆蛋白中IL-6、gp130、p-STAT3、TNF-α、IL-1β的表达水平及胞核蛋白中NF-κB p65的表达水平、PA-aO₂、W/D明显降低(P <0.05)。结论 IL-6/gp130/STAT3通路激活与PQ诱导ALI有关。     

microRNA 20a通过核因子-κB信号通路影响肺炎模型幼鼠炎症水平的机制研究

目的 探讨microRNA 20a通过核因子-κB信号通路影响肺炎模型幼鼠炎症反应和T细胞亚群分型的机制。方法 30只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为两组:肺炎组和健康组,每组各15只。肺炎模型组采用刺破鼻黏膜后,从鼻腔滴入50μl链球菌液法制备小鼠链球菌性肺炎模型;健康组刺破鼻黏膜后,从鼻腔滴入50μl生理盐水。将肺炎细胞分成4组:对照组、脂多糖(LSP)组、LPS+miR-20a组、LSP+miR-20a+PDTC组,分别用模拟对照物、脂多糖、mir-20a模拟物转染细胞,过表达miR-20A的细胞在37℃时用NF-κB抑制剂PDTC(100μg/L)处理30 min。用逆转录定量聚合酶链反应检测miR-20a的血清表达水平。用酶联免疫吸附(ELISA)法检测临床血清和组织细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)α和C-反应蛋白(CRP)的浓度。用Western blotting法检测核因子(NF)-κBα(iκbα)和磷酸化p-NF-κB的蛋白表达水平。分析NF-κB抑制剂PDTC对miR-20a诱导的细胞炎症反应的影响。结果 肺炎组miR-20a的表达水平510. 75±50. 21,高于健康组202. 36±39. 58(P <0. 05)。肺炎组血清IL-6、TNF-α、CRP水平均高于健康组,差异有统计学意义(F <0. 05)。与对照组相比,LPS组的炎症因子IL-6、TNF-α和CRP浓度增加(F <0. 05),IκBα和p-NF-κB蛋白表达水平升高(P <0. 05)。与LPS组相比,LPS+miR-20a组细胞IL-6、TNF-α和CRP的表达水平,IκBα和p-NF-κB蛋白的表达水进一步升高(P <0. 05)。与LPS+miR-20a组比较,NF-κB抑制剂PDTC对炎症因子表达有抑制作用(P <0. 05)。结论 miR-20a在肺炎小鼠模型中表达上调,miR-20a的过表达可能通过激活NF-κB信号通路促进炎症反应。     

miR-146 调控TLR4/NF-κB 通路减少卵泡颗粒细胞凋亡及干预卵巢早衰中的机制研究

目的 探究miR-146 通过调控Toll 样受体4（TLR4）/ 核因子-κB（NF-κB）减少卵泡颗粒细胞凋亡和干预卵巢早衰（premature ovarian failure,,POF ）的机制。方法 野生小鼠实验:60 只SPF 级C57BL/6 小鼠随机分为对照组（n=30）和POF 组（n=30）。POF 组建立卵巢早衰模型,造模后15 天qPCR 检测2 组小鼠卵巢组织中miRNA-146表达水平;基因敲除鼠实验:40 只C57BL/6 小鼠和20 只miR-146 敲除小鼠分为三组:对照组（n=20）、野生型POF组（n=20）和miR-146 敲除POF 组（n=20）,野生型POF 组和miR-146 敲除POF 组建立POF 模型,建模后15 天HE染色分析各组小鼠卵巢组织病理情况及原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和闭锁卵泡数,ELISA 检测各组小鼠卵巢组织炎症信号通路分子TLR,NF-κB, 肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的表达水平;Western blot 检测卵巢组织凋亡蛋白BCL2-Associated X 蛋白（Bax）,B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl2）和TLR4 信号通路蛋白TLR4,NF-κB表达水平。结果 野生鼠实验表明与对照组相比,POF 组小鼠卵泡中miR-146 表达水平下调（0.51±0.14 vs 1.52±0.21）,差异具有统计学意义（t=7.338,P<0.01）;基因敲除鼠实验表明:与对照组相比,野生型POF 组和miR-146 敲除POF组原始卵泡（9.43±2.03,6.43±1.60 vs 16.82±2.11）、初级卵泡（6.15±1.11,5.01±1.10 vs 8.88±1.12）、次级卵泡（5.11±1.71,4.01±1.26 vs 7.11±1.34）均降低,闭锁卵泡（10.17±1.41,11.46±1.96 vs 7.18±1.64）升高,差异具有统计学意义（F=7.787, 8.214, 9.726, 7.811, 均P<0.01）。与对照组相比,野生鼠POF 组和miR-146 敲除POF 组小鼠卵巢组织TLR4（68.18±5.92pg/ml,91.11±16.34 pg/ml vs 24.81±2.81 pg/ml）,NF-κB（74.19±8.11 pg/ml,88.11±16.71pg/ml vs 68.18±5.92 pg/ml）,TNF-α（72.81±2.10 pg/ml,94.31±2.26 pg/ml vs 28.07±3.67 pg/ml）和IL-6（69.19±7.11,81.11±16.34 vs 19.43±10.81 pg/ml）分泌显著升高,差异均有统计学意义（F=6.281, 7.264, 8.724, 6.817, 均P <0.01）;与对照组相比,野生鼠POF 组和miR-146 敲除POF 组小鼠卵巢组织Bax 蛋白表达水平降低（1.18±0.19. 0.61±0.14 vs1.81±0.21）,Bcl2 蛋白表达升高（0.59±0.05, 0.91±0.05 vs 0.58±0.02）,TLR4（1.10±0.12, 0.41±0.04 vs 1.13±0.11）和NF-κB（0.81±0.02, 0.31±0.06 vs 0.87±0.27）降低,差异均有显著性统计学意义（F=7.235, 6.714, 7.612 ,7.737, 均P<0.01）。结论 miR-146 具有减少卵泡颗粒细胞凋亡的作用,其机制可能与TLR4/NF-κB 信号通路的调控和抑制炎症因子的释放相关。     

miR-499-5p上调对动脉粥样硬化大鼠心肌细胞凋亡的影响及作用机制

目的研究微小核糖核酸(micoroRNA,miR)-499-5p上调对动脉粥样硬化大鼠心肌细胞凋亡影响及作用机制。方法选取30只健康Wistar大鼠,经腹腔注射维生素D3和高脂饲料喂养方法建立动脉粥样硬化模型,分为模型组、竞争性短核糖核苷酸阴性对照序列(scramble-NC)组和miR-499-5p上调组各10只,另选10只健康Wistar大鼠为正常组。构建miR-499-5p表达载体,检测血清氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)、髓过氧化物酶(MPO)]、炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-10]水平。HE染色观察心肌细胞凋亡,Western blot法检测心肌细胞凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-xl(Bcl-xl)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的表达。结果模型组、scramble-NC组、miR-499-5p上调组较正常组血清CK、MDA、MPO、IL-1β、TNF-α水平和心肌细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,SOD、IL-10水平和Bcl-xl蛋白表达降低(P均<0.05);miR-499-5p上调组较模型组及scramble-NC组血清CK、MDA、MPO、IL-1β、TNF-α水平和心肌细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,SOD、IL-10水平和Bcl-xl蛋白表达升高(P均<0.05)。结论miR-499-5p上调可逆转动脉粥样硬化所致氧化应激、血管炎症反应,抑制大鼠动脉粥样硬化发展,可能通过调控Bax、Bcl-xl蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡。