MiR-144-3p靶向SGK3通过Hippo信号通路抑制卵巢癌的生长和侵袭

目的:探讨miR-144-3p对卵巢癌生长和侵袭的作用及机制。方法:RT-qPCR检测正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞miR-144-3p与SGK3mRNA的表达,双荧光素酶报告检测靶向关系,将卵巢癌SKOV3细胞分为对照组(Control组)、模拟物对照组(mimic-NC组)、miR-144-3p高表达组(miR-144-3p mimic组)、SGK3高表达组(pc-SGK3组)、miR-144-3p和SGK3都高表达组(miR-144-3p+SGK3组),CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞生长,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,蛋白质印迹分析检测p-MST,p-LATS,p-YAP,MST,LATS,YAP蛋白表达水平;裸鼠后肢腹侧皮下注射SKOV3细胞悬液构建移植瘤,每周检测移植瘤体积,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,完整取出皮下肿瘤,电子天平称重,蛋白质印迹分析检测SGK3,p-MST,p-LATS,p-YAP,MST,LATS,YAP蛋白表达水平。结果:MiR-144-3p在卵巢癌细胞中低表达,而SGK3高表达;miR-144-3p靶向负调控SGK3;miR-144-3p过表达能够明显减弱卵巢癌细胞增殖、减少每视野中卵巢癌细胞克隆数目,减短细胞周期,增加细胞凋亡率,减少侵袭细胞数目、上调p-MST/MST,p-LATS/LATS,p-YAP/YAP蛋白表达(P0.01),再加入SGK3高表达和Hippo信号通路抑制剂XMU-MP-1后均能逆转上述反应。结论:MiR-144-3p靶向SGK3通过Hippo信号通路抑制卵巢癌的生长和侵袭。     

MiR-325-3p通过靶向PBOV1抑制人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-325-3p抑制肝癌细胞增殖和转移的作用以及其作用靶点。方法:通过qRT-PCR方法研究肝癌组织以及肝癌细胞中miR-325-3p的表达情况。肝癌细胞HepG2转染miR-325-3p mimic后,通过CCK-8和Transwell法研究miR-325-3p对肝癌细胞HepG2增殖和转移的影响。通过双荧光素实验研究miR-325-3p的作用靶点。通过CCK-8和Transwell实验验证miR-325-3p与PBOV1相互作用调控HepG2细胞增殖与迁移。结果:肝癌组织和肝癌细胞中miR-325-3p表达量明显低于癌旁正常组织或正常肝细胞。miR-325-3p-mimic可显著抑制HepG2细胞增殖、侵袭和迁移。PBOV1是miR-325-3p的靶基因。与转染miR-325-3p-mimic+Lenti-Con比较,转染miR-325-3p-mimic+Lenti-PBOV1的HepG2细胞增殖、迁移与侵袭增强。结论:MiR-325-3p通过靶向结合PBOV1来抑制肝癌细胞增殖和转移。     

miR-490-3p通过抑制TGFβR1基因表达进而抑制结肠癌细胞的转移和侵袭

目的:研究miR-490-3p在结肠癌细胞(colorectal cance rcell,CRC)转移中的表现和生物功能,及其调控作用机制。方法:通过荧光定量PCR测定miR-490-3p在CRC细胞系的表达水平。细胞转染miR-490-3p以及shmiR-490-3p,观察miR-490-3p的过表达或基因沉默对结肠癌细胞的转移能力是否有影响。miR-490-3p的分子靶标由双荧光素酶报告基因分析和免疫印迹技术进行实验认定。通过划痕实验,Transwell小室基质渗透实验对细胞迁移和侵袭能力进行鉴定。结果:miR-490-3p在CRC细胞系中显著低表达(P0.05,P0.01,P0.001,n3)。过表达miR-490-3p显著降低CRC细胞株的细胞迁移和侵袭能力(P0.01,n3)。miR-490-3p的基因沉默显著增加CRC细胞株的细胞迁移和侵袭能力(P0.01,n3)。结肠癌细胞细胞系中过表达miR-490-3p显著降低TGFβR1的基因表达(P0.001,n3),miR-490-3p基因沉默显著上调TGFβR1的基因表达(P0.001,n3)。过表达miR-490-3p抑制TGFβR1的萤光素酶活性(P0.001,n3),miR-490-3p基因沉默促进TGFβR1的萤光素酶活性(P0.001,n3)。TGFβR1基因沉默减弱shmiR-490介导的细胞迁移和侵袭促进效应(P0.01,n3)。结论:miR-490-3p通过抑制TGFβR1的基因表达从而抑制CRC细胞的转移。     

miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p 表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法 利用实时荧光定量PCR 实验（qRT-PCR）检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p 相对表达;构建miR-505-3p 过表达、c-MYC 过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8 法,克隆斑点形成实验、Transwell 侵袭/ 迁移实验检测miR-505-3p 和c-MYC 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p 对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p 和c-MYC 的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot 检测miR-505-3p 和c-MYC 对Wnt/β-catenin 通路关键蛋白表达的影响。结果 临床胃癌组织中miR-505-3p 表达水平较正常癌旁组织显著下调（0.92±0.37 vs 1.74±0.59）,差异有统计学意义（t=3.723,P ＜ 0.01）。胃癌细胞系MGC803（1.12±0.35）,AZ521（2.31±0.24）和HGC-27（2.28±0.43）中miR-505-3p 相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1（4.62±0.79）明显降低,差异有统计学意义（F=26.109,P ＜ 0.001）。miR-505-3p 过表达组细胞增殖（0.92±0.27）、克隆形成（51.67±21.75）、迁移（43.25±15.47 ）、侵袭（38.53±14.76）能力较NC组（1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.131 ～ 7.166,均P ＜ 0.05）;miR-505-3p 过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC 是miR-505-3p 的靶基因,miR-505-3p 靶向负调控c-MYC。c-MYC 过表达组细胞增殖（2.72±0.68）、迁移（147.15±20.36）、侵袭（145.46±22.73）能力较NC 组（1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94）明显增高,差异均有统计学意义（t=2.455 ～ 4.456,均P ＜ 0.05）;c-MYC 过表达可逆转miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p 过表达组Wnt（0.46±0.07 ）,β-catenin（0.50±0.05）蛋白相对表达水平明显低于NC 组（1.01±0.02,1.02±0.02）,差异均有统计学意义（t=8.139,7.342,均P ＜ 0.001）;过表达c-MYC 能够逆转miR-505-3p 对Wnt 和β-catenin 蛋白表达的抑制作用。结论 胃癌中miR-505-3p 显著低表达,其可通过靶向调控c-MYC 表达介导Wnt/β-catenin 信号通路激活进而发挥作用参与胃癌的发生发展过程。     

MiRNA-92a靶向PTEN通过PI3K/AKT信号通路促进卵巢癌细胞转移

目的:探讨miRNA-92a对卵巢癌细胞侵袭与迁移能力变化的影响和可能的作用机制。方法:RTqPCR检测卵巢癌组织和卵巢癌细胞miRNA-92a的表达水平;转染miRNA-92ainhibitor/mimic后,Transwell小室法检测SKOV3与A2780细胞的侵袭与迁移能力;蛋白质印迹法检测SKOV3与A2780细胞中p-PI3k,p-Akt和PTEN蛋白水平的变化;预测miRNA-92a靶基因并经双荧光素酶报告基因验证。结果:MiRNA-92a在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中高表达(P0.05);转染miRNA-92a inhibitor后,SKOV3与A2780细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制,同时p-PI3k和p-Akt蛋白水平均显著降低,PTEN蛋白水平显著升高(均P0.05);转染miRNA-92a mimic后,以上指标相反;miRNA-92a靶基因为PTEN,且过表达PTEN能逆转过表达miRNA-92a诱导的侵袭转移与p-PI3k,p-Akt表达(均P0.05)。结论:MiRNA-92a直接结合靶基因PTEN,通过激活PI3k/Akt通路活性,促进卵巢癌细胞SKOV3的侵袭与迁移能力。     

MiR-17-5p在子宫内膜异位症间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2的影响

目的:探讨miR-17-5p在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的影响。方法:MiRNA芯片筛选EMs异位子宫内膜组织中差异表达的miRNA,qRT-PCR验证EMs异位、在位子宫内膜组织和子宫肌瘤正常子宫内膜组织(对照组)中miR-17-5p的表达;提取以上各组组织中原代间质细胞,免疫荧光鉴定表面标志物;qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组间质细胞中miR-17-5p和MMP-2的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-17-5p和MMP-2的靶向关系;EMs异位间质细胞中转染miR-17-5p mimic和inhibitor,qRT-PCR、蛋白质印迹法和明胶酶谱法检测MMP-2的表达,克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwel l实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果:EMs异位子宫内膜组织中miR-17-5p、miR-200b、miR-106b、miR-15b、miR-141、miR-22显著下降,miR-202、miR-150、miR-365表达显著上升;与对照组相比,miR-17-5p在EMs异位、在位子宫内膜组织和间质细胞中表达均显著下降(P<0.05),而MMP-2在EMs异位、在位子宫内膜间质细胞中表达均显著升高(P<0.05);与阴性对照组(negative control,NC)相比,过表达miR-17-5p抑制MMP-2的表达并显著抑制细胞克隆形成数,细胞侵袭数及细胞迁移率(P<0.05),敲低miR-17-5p,结果相反。结论:MiR-17-5p在EMs间质细胞中表达下降,抑制miR-17-5p的表达能够促进MMP-2表达升高同时增强细胞增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-199a-3p抑制卵巢癌SK0V3细胞增殖侵袭能力及其机制

目的探讨miR-199a-3p对卵巢癌SK0V3细胞增殖、侵袭能力的影响及其作用机制。方法以卵巢癌SK0V3细胞系为研究对象,将进入对数生长期的细胞按照生长情况分为miR-199a-3p过表达组、miR-199a-3p抑制组和对照组,观察miR-199a-3p过表达和抑制效率及其对卵巢癌SK0V3细胞增殖、侵袭及c-Met、MMP-2和CD44蛋白表达的影响。结果与对照组比较,miR-199a-3p过表达组SK0V3细胞中miR-199a-3p呈高表达状态,且SK0V3细胞与细胞克隆数量、侵袭细胞数量、c-Met及其下游蛋白MMP-2和CD44的表达水平均降低,而miR-199a-3p抑制组SK0V3细胞中miR-199a-3p表达下降,SK0V3细胞与细胞克隆数量、侵袭细胞数量、c-Met及其下游蛋白MMP-2和CD44的表达水平均显著增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 miR-199a-3p可能通过抑制c-Met、MMP-2和CD44蛋白的表达进而影响卵巢癌SK0V3细胞的侵袭和迁移,可能成为治疗卵巢癌的新方法。     

MicroRNA-197调控上皮-间充质转化对乳腺癌侵袭和迁移的影响

目的:探讨微小RNA-197(miR-197)抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的能力,以及阻断上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的机制。方法:构建miR-197过表达载体(miR-197mimics),分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,并设对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-197的表达水平变化;利用Transwell实验和划痕实验对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力进行检测;Western印迹法检测过表达miR-197后对EMT相关标志物E-cadherin,snail和vimentin表达的影响。结果:MiR-197可以抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的迁移和侵袭能力;转染miR-197mimics后,E-cadherin表达降低,snail和vimentin表达增加。结论:MiR-197有可能作为乳腺癌临床治疗的新靶点。     

LncRNA FoxD2-AS1靶向miR-324-5p对结肠癌SW480细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) FoxD2-AS1是否通过靶向miR-324-5p影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭。方法 RT-qPCR检测人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460及结肠癌细胞株SW480、HCT116和HT29中FoxD2-AS1和miR-324-5p表达水平; MTT法检测FoxD2-AS1和miR-324-5p表达对结肠癌SW480细胞增殖活力的影响; Transwell小室实验检测FoxD2-AS1和miR-324-5p表达对结肠癌SW480细胞迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因实验检测FoxD2-AS1是否靶向miR-324-5p。结果与NCM460细胞相比,结肠癌各细胞株中FoxD2-AS1表达明显上调(P 0. 05),miR-324-5p表达明显下调(P 0. 05);双荧光素酶报告基因实验证实FoxD2-AS1靶向抑制miR-324-5p的表达; MTT和Transwell小室实验结果表明,干扰FOXD2-AS1和过表达miR-324-5p后结肠癌SW480细胞增殖活力均明显降低,细胞迁移和侵袭能力均明显减弱;与干扰FOXD2-AS1相比,同时干扰FOXD2-AS1和miR-324-5p后细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强(P 0. 05)。结论 lncRNA FOXD2-AS1通过靶向负调控miR-324-5p的表达影响结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

circERBB2在卵巢癌中的表达及作用机制研究

目的 探讨circERBB2在卵巢癌中的表达及作用机制。方法 基于GEO数据库筛选卵巢癌差异表达环状RNA(circRNA),并查找circRNA相关靶基因,绘制韦恩图得到GSE79572数据集中差异表达基因与Targetscan 7.1预测所得微小RNA-187-3p(miR-187-3p)靶基因的交叉基因。收集20例卵巢癌患者的卵巢癌组织和癌旁正常组织,培养人正常卵巢细胞系HOSEpiC和人卵巢癌细胞系OVCAR-3、SKOV-3、3AO、OV90,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circERBB2、miR-187-3p、BCL6表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验和RNA下拉实验验证circERBB2、miR-187-3p、BCL6三者间的相互作用。通过多项细胞实验分析circERBB2、miR-187-3p、BCL6对卵巢癌细胞侵袭、迁移、增殖及细胞周期的影响。结果 数据库分析结果显示,卵巢癌中差异表达circRNA为circERBB2, circERBB2靶向的miRNA为miR-187-3p,绘制韦恩图取交集后得到BCL6等7个交叉基因,circERBB2与m...     

Retracted Article: MiR-182-5p and miR-96-5p increased hepatocellular carcinoma cell mobility,proliferation and cisplatin resistance partially by targeting RND3

We investigated whether miR-182-5p or miR-96-5p could increase hepatocellular carcinoma (HCC) development by targeting Rho Family GTPase 3 (RND3) gene expression. The expression levels of miR-182-5p, miR-96-5p and mRNA/protein of RND3 in non-HCC liver tissue, HCC tissue and adjacent tissue specimens were evaluated by RT-qPCR and western blot. Patient-derived HCC cell culture was established, and miR-182-5p or miR-96-5p agomir or antagomir treatment was performed to mimic the overexpression or knockdown of the two miRNAs. HCC cell mobility in vitro was monitored by trans-well migration and invasion assay, while HCC cell growth in vitro was evaluated by cell viability, proliferation and apoptosis assay. HCC cell apoptosis was further investigated by caspase-3/-8/-9 activity assay. MiR-182-5p and miR-96-5p were significantly upregulated in HCC tissue specimens compared with non-HCC or adjacent tissue specimens, inversely correlating to RND3 mRNA expression level. Treatment with miR-182-5p or miR-96-5p agomir significantly reduced RND3 mRNA/protein expression level in HCC cells. MiR-182-5p- or miR-96-5p-targeting RND3 mRNA was verified by luciferase reporter assay and AGO2-RNA immunoprecipitation assay. MiR-182-5p or miR-96-5p agomir treatment significantly rescued HCC cell migration and invasion in vitro that were repressed by RND3 overexpression, during which ROCK1 and ROCK2 inhibition were involved. MiR-182-5p or miR-96-5p agomir treatment also increased HCC cell proliferation and cisplatin resistance in vitro, which could be antagonized by RND3 overexpression or ROCK inhibition. Thus, miR-182-5p and miR-96-5p increased HCC cell mobility, proliferation and cisplatin resistance in vitro partially by targeting RND3.

We investigated whether miR-182-5p or miR-96-5p could increase hepatocellular carcinoma (HCC) development by targeting Rho Family GTPase 3 (RND3) gene expression.     

微小RNA在叉头转录因子M1激活非小细胞肺癌上皮向间质转化中的作用

目的:探讨微小RNA(microRNA)在叉头转录因子M_1(Fox M_1)激活非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞上皮向间质转化(epithelial-mesenehymal transition,EMT)中的作用。方法:将Fox M_1过表达质粒,Fox M_1-shRNA,miR-539、miR-485-5p模拟物及其抑制物转染至人NSCLC细胞株中,应用Western印迹和real-time PCR检测细胞株中Fox M_1蛋白和mRNA及miR-539、miR-485-5p的表达。同时应用CCK-8和细胞迁移实验观察Fox M_1、miR-539和miR-485-5p对NSCLC细胞的增殖和侵袭功能的影响。应用荧光素酶报告基因实验检测miR-539和miR-485-5p与EMT调控蛋白ZEB_1和Snail_1的关系。结果:Fox M_1过表达下调NSCLC细胞中miR-539、miR-485-5p,转染Fox M_1-shRNA后NSCLC细胞中miR-539、miR-485-5p升高。MiR-539和miR-485-5p抑制Fox M_1对NSCLC细胞增殖和侵袭的促进作用。NSCLC细胞中miR-539对EMT调控蛋白ZEB_1,miR-485-5p对EMT调控蛋白Snail_1的表达有抑制作用。结论:miR-539和miR-485-5p能抑制NSCLC细胞中Fox M_1-EMT通路,从而影响NSCLC细胞的增殖和侵袭,抑制NSCLC的远处转移。     

lncRNA RPL34-AS1调控miR-670-5p/SMAD4对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨lncRNA RPL34-AS1对胃癌细胞生物学行为的影响及其对miR-670-5p/SMAD4分子轴的调控作用。方法回顾性收集2018年5月至2019年6月期间临沂市肿瘤医院收治的33例胃癌患者的癌组织及其癌旁组织标本。QRT-PCR检测RPL34-AS1、miR-670-5p的表达量,蛋白质印迹法检测SMAD4表达。体外培养人胃癌细胞HGC-27,实验分组:pc DNA组(转染RPL34-AS1过表达载体的阴性对照)、pc DNA-RPL34-AS1组(转染RPL34-AS1过表达载体)、anti-miR-NC组(转染miR-670-5p特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照)、anti-miR-670-5p组(转染miR-670-5p特异性寡核苷酸抑制剂)、pc DNA-RPL34-AS1+miR-NC组(共转染pc DNA-RPL34-AS1与阴性对照mimic NC序列)、pc DNA-RPL34-AS1+miR-670-5p组(共转染pc DNA-RPL34-AS1与miR-670-5p寡核苷酸模拟物)。MTT与平板克隆形成实验检测细胞增殖与克隆形成数,流式细胞术检测细胞凋...     

CircKRT17与miR-485-5p互作调控Wnt/β-catenin通路影响胃癌发生发展的机制研究

目的探讨circ KRT17在胃癌中的表达水平,并对circ KRT17在胃癌中的临床意义、生物学功能及内在机制进行评价。方法 2013年5月至2018年3月获得67例临床胃癌样本和对应的癌旁正常组织标本,并采用qRTPCR检测circ KRT17在胃癌组织和不同胃癌细胞株中的表达情况;分析circ KRT17的表达与胃癌患者临床病理学特征之间的关系;CKK-8法和平板克隆实验检测circ KRT17对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测circ KRT17对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响;裸鼠成瘤实验检测circ KRT17对胃癌细胞肿瘤异种移植的影响;荧光素酶报告基因检测circ KRT17与miR-485-5p以及miR-485-5p与Wnt3a之间的相互作用。结果 circ KRT17在胃癌组织中表达上调,与肿瘤分期、转移及患者预后不良密切相关。此外,降低circ KRT17表达显著抑制了胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导了细胞凋亡。体内实验显示,敲低circ KRT17表达抑制肿瘤生长。机制上,研究发现circ KRT17作为miR-485-5p的海绵,增加Wnt3a的表达,从而激活Wnt/β-catenin信号。结论 circ KRT17/miR-485-5p/Wnt3a/β-catenin信号对胃癌的发生、发展至关重要。     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

Retracted Article: Long noncoding RNA PTPRG-AS1 regulates growth of glioma cells by sponging miR-185-5p

Previous studies have found that long noncoding RNA (lncRNA) protein tyrosine phosphatase, receptor type, G, antisense (PTPRG-AS1) was upregulated in glioma cells. Our study aimed to explore the detailed molecular mechanisms of PTPRG-AS1 involved in glioma progression. qRT-PCR assay was performed to measure the expressions of PTPRG-AS1 and microRNA-185-5p (miR-185-5p). Cell viability, migration, invasion, and apoptosis were determined by CCK-8 assay, colony formation assay, transwell assay, and flow cytometry assay. Autophagy was evaluated using GFP-LC3 puncta analysis and western blot. Luciferase reporter and RIP assays were employed to explore the association between PTPRG-AS1 and miR-185-5p. Our data showed PTPRG-AS1 was upregulated in glioma cells and tissues. Besides, high expression of PTPRG-AS1 was positively associated with a low survival rate. Upregulation of PTPRG-AS1 promoted proliferation, migration, invasion, colony formations, and autophagy, and inhibited cell apoptosis in U373-MG cells. By contrast, PTPRG-AS1 downregulation had the inverse effect in SHG44 cells. PTPRG-AS1 negatively regulated the expression of miR-185-5p in U373-MG and SHG44 cells and the expression of miR-185-5p was decreased in glioma tissues and cells. In addition, miR-185-5p overexpression suppressed proliferation, metastasis, colony formations, and autophagy, while inducing cell apoptosis in SHG44 cells. As expected, miR-185-5p depletion exhibited the inverse effect in U373-MG cells. Enhanced expression of miR-185-5p attenuated the effect of PTPRG-AS1 upregulation on U373-MG cells, while silencing of miR-185-5p undermined the effect of downregulation of PTPRG-AS1 on SHG44 cells. Our data disclosed that LncRNA PTPRG-AS1 was upregulated in glioma cells and tissues. PTPRG-AS1 regulated glioma proliferation, invasion, migration, apoptosis and autophagy by sponging miR-185-5p in vitro. A new signaling pathway PTPRG-AS1/miR-185-5p was first observed in glioma.

Previous studies have found that long noncoding RNA (lncRNA) protein tyrosine phosphatase, receptor type, G, antisense (PTPRG-AS1) was upregulated in glioma cells.